HDL LE. 01 Espanhol - Ref.: 98. Ref.:98. Instrucciones de Uso. Finalidad. Principio. Metodologia. Reactivo Características del sistema.
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- Montserrat Duarte Ortiz
- hace 7 años
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1 HDL LE Instrucciones de Uso Ref.:98 Finalidad. Sistema para la determinación homogénea directa del colesterol HDL en suero y plasma. [Solamente para uso diagnóstico in vitro.] Principio. La selectividad del método está basada en las tecnologías de aceleración de la reacción de la colesterol oxidasa (CO) con el colesterol libre de las lipoproteínas no-hdl y la solubilización selectiva de las partículas HDL por acción de un detergente específico. En la primera fase de la reacción, el colesterol libre de las partículas no-hdl es sometido a una reacción enzimática catalizada por la colesterol oxidasa (CO) en presencia del Acelerador. El peróxido de hidrógeno producido es consumido por la reacción de la peroxidasa con la disulfobutilmetatoluidina sódica (DSBmT) formando un producto incoloro. La segunda reacción utiliza un detergente capaz de solubilizar específicamente el colesterol HDL. Con la acción de las enzimas colesterol esterasa (CE) y colesterol oxidasa y acoplamiento con la 4-aminoantipirina y el cromógeno DSBmT, en reacción catalizada por la peroxidasa, hay un desarrollo de color proporcional a la concentración de colesterol HDL en la muestra. HDL, LDL, VLDL Acelerador + CO y Quilomicrones DSBmT + Peroxidasa HDL Detergente selectivo Colesterol HDL solubilizado Características del sistema. LDL, Quilomicrones + HDL y VLDL no reactivos Colesterol HDL solubilizado Colesterol esterasa Colesterol oxidasa Colestenona + H O Peroxidasa H O + DSBmT + 4-aminoantipirina Antipirilquinonimina + 4 H O Debido a la importancia de la medición exacta del Colesterol HDL, es deseable utilizar un método de referencia. El método de referencia que combina la ultracentrifugación con la precipitación química para separar las HDL, dosando el colesterol con el método de Abell-Kendall, lleva mucho tiempo y operaciones, y 6 tiene aplicación limitada en el laboratorio clínico. El sistema HDL LE de Labtest Diagnóstica es un método homogéneo líquido para la medición directa del colesterol HDL siendo un proceso simple y bien definido que brinda confianza por la exactitud de la metodología. El método posee excelente correlación con el Método 3 Designado de Comparación (MDC) y presenta características de precisión y exactitud que superan significativamente los requisitos mínimos de desempeño propuestos por el Programa Nacional de Educación en Colesterol (NCEP), en vigencia desde La especificidad deseada es conseguida por la acción del detergente presente en el reactivo 2 que posee la propiedad de solubilizar solamente al colesterol HDL. Concetraciones de triglicéridos de hasta 800 mg/dl, bilirrubina hasta 60 mg/dl, hemoglobina hasta 000 mg/dl y ácido ascórbico hasta 00 mg/dl no interfieren significativamente en la reacción. El sistema de calibración está referenciado al SRM 95 del National Institute of Standards and Technology (NIST), lo que le garantiza característica única de rastreabilidad. La flexibilidad del método lo torna fácilmente aplicable a analizadores automáticos capaces de procesar reacciones de punto final con dos reactivos y mediciones a 600 nm. Metodologia. Reactivo. - Acelerador-Detergente Selectivo. Reactivo - Almacenar entre 2-8 ºC. Contiene tampón ph 6,0; colesterol oxidasa <000 U/L, peroxidasa <300 U/L, DSBmT < mmol/l, acelerador < mmol/l y azida sódica <0,06% Reactivo 2 - Almacenar entre 2-8 ºC. Contiene tampón ph 6,0; colesterol esterasa <500 U/L, 4-aminoantipirina < mmol/l, ascorbato oxidasa <3000 U/L, detergente <2% y azida sódica 0,06% Calibrador - Concentración en el rótulo del frasco. Almacenar entre 2-8 ºC. Reactivo Liofilizado. Preparación conteniendo HDL humano, tampón 50 mm, Cloruro de sódio >50 nm y estabilizadores <5%. Los reactivos no abiertos, almacenados en las condiciones indicadas son estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo. Los reactivos y 2, cuando mantenidos en bandeja refrigerada en el equipo, son estables hasta 4 semanas. Este período de estabilidad puede ser cambiado debido a las características y condiciones de manutención del equipo. Por lo tanto, sugerimos que el control de la calidad sea utilizado para monitorear el desempeño de los reactivos. Los reactivos después de abiertos cuando almacenados bien vedados entre 2 y 8 ºC y no sometidos a contaminaciones química o microbiana, son estables hasta la fecha de expiración indicada en el rótulo. Precauciones y cuidados especiales Los cuidados habituales de seguridad se deben aplicar en la manipulación de los reactivos, los cuales no deben ser pipeteados con la boca. 0 Espanhol - Ref.: 98
2 El calibrador contiene derivados de sangre humana y presentó resultados negativos para la presencia de HBsAg y anticuerpos HCV y HIV empleando ensayos aprobados. Sin embargo, ningún test conocido puede asegurar que productos derivados de sangre humana no transmitan enfermedades infecciosas. Por lo tanto, se recomienda manipularlas como siendo potencialmente infecciosas, siguiendo las normas establecidas para bioseguridad. Los reactivos contienen azida sódica, que es tóxica. Se deben tomar precauciones para evitar la ingestión y en caso de contacto con los ojos, se deben lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y procurar auxilio médico. La azida puede formar compuestos altamente explosivos con las cañerías de plomo y cobre. Por lo tanto, utilizar grandes volúmenes de agua para descartar los reactivos. Material necesario y no provisto Fotómetro capaz de medir con exactitud absorbancias a 600 nm. Incubador o baño-maria a 37 ºC. Pipetas para medir muestra y reactivos. Cronómetro. Muestra Usa suero o plasma (heparina, litio y EDTA). Las muestras con citrato u oxalato no deben ser usadas porque dan resultados falsamente disminuidos. Las muestras de suero o plasma no deben permanecer entre 5-30 ºC por más de 4 horas. Cuando las determinaciones no serán realizadas dentro de las 4 horas, las muestras pueden ser almacenadas entre 2-8 ºC por 7 días y por 30 días a 20 ºC negativos. Se deben almacenar a temperaturas 70 ºC negativos cuando hubiera necesidad de preservación por períodos mayores de tiempo. Evitar congelamientos y descongelamientos repetidos. Las muestras descongeladas deben ser bien homogeneizadas antes de su utilización. No usar vórtex o similar. No usar muestras con señales de contaminación microbiana. Como ningún test conocido puede assegurar que muestras de sangre no transmiten infecciones, todas ellas deben ser consideradas como potencialmente infectivas. Así siendo, deberán ser manipuladas siguiendo las normativas establecidas para biosseguridad. Para descartar los reactivos y el material biológico sugerimos aplicar las normas locales, estatales o federales de protección ambiental. Preparación del calibrador. Adicionar,0mL de agua, calidad reactivo (ver Observación Nº 2), al contenido del frasco de calibrador. Dejar en reposo durante 5 minutos. Mezclar por inversión suave evitando la formación de espuma. Estable 7 días entre 2-8 ºC y 30 días a 20 ºC negativos en un recipiente herméticamente cerrado para evitar la evaporación del solvente. Para evitar congelamientos y descongelamientos repetidos, sugerimos separar el calibrador en alícuotas antes de congelar. Después de descongelar, homogeneizar bien antes de su utilización. No usar vórtex o similar. Procedimiento Este procedimiento no se aplica a analizadores semi-automáticos que utilizan únicamente cubeta de flujo. Están disponibles aplicaciones para sistemas automáticos y semi-automáticos. Rotular 2 tubos de ensayo y proceder como sigue: Muestra Calibrador Reactivo Mezclar e incubar a 37 ºC durante 5 minutos. El nivel del agua en el baño debe ser superior al nivel de los reactivos en los tubos de ensayo. Determinar las absorbancias A de la muestra y del calibrador a 600 nm, ajustando el cero con agua desionizada. Reactivo 2 Mantener a 37 ºC durante 5 minutos. Determinar las absorbancias A2 del test y del calibrador a 600 nm, ajustando el cero con agua desionizada. Las absorbancias son estables por 60 minutos. Si el fotómetro utilizado posee recursos para lectura bicromática, utilizar un filtro primario con emisión a 600 nm y un filtro secundario con emisión entre 660 y 700 nm. Cálculos. Ver Linealidad. Test Calibrador 0,0 ml 0,0 ml 0,75 ml 0,75 ml 0,25 ml 0,25 ml La primera lectura de la absorbancia (A ) debe ser corregida al volumen final de la reacción obteniéndose A cor, antes de realizar el cálculo de la concentración de HDL. Interferencias Concentraciones de bilirrubina total de hasta 60 mg/dl, hemoglobina hasta 000 mg/dl, ácido ascórbico hasta 00 mg/dl, gammaglobulinas hasta 5000 mg/dl y triglicéridos hasta 800 mg/dl no interfieren significativamente en la reacción. Las muestras que contienen concentraciones de los interferentes mayores que los arriba referidos deben ser diluidas con NaCl 50 mmol/l (0,85%) antes de realizar los ensayos. Multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución. A = A x 0,75 cor Colesterol HDL (mg/dl) = CC: concentración del calibrador Test (A -A ) 2 cor Calibrador (A -A ) 2 cor x CC 02 Espanhol - Ref.: 98
3 Ejemplo Los datos fueron obtenidos con lecturas bicromáticas 600/700 nm: Test: A = 0,004 A cor = 0,003 A 2 = 0,080 Calibrador: A = 0,002 A = 0,005 A = 0,085 Concentración del Calibrador: 45,7 mg/dl 0,080-0,003 Colesterol HDL (mg/dl) = x 45,7 = 42, 0,085-0,005 Debido a la gran reproducibilidad que puede ser obtenida con la metodología, puede ser empleado el método del factor. FACTOR = cor 2 CC Calibrador (A - A ) 2 cor Se sugiere utilizar las preparaciones estabilizadas de la línea Qualitrol y Qualitrol H de Labtest para el control interno de la calidad en ensayos de química clínica. Valores deseables o recomendados. Los valores siguientes sustituyen los valores de referencia y fueron determinados a partir de datos epidemiológicos tratados estadísticamente, que relacionan las concentraciones del colesterol con la prevalencia de dolencia coronaria isquémica (DCI). Adultos 2.Clasificación ATPIII - Colesterol Total, LDL y HDL ( mg/ dl) Colesterol Total Deseable <200 Umbral elevado Elevado 240 Colesterol HDL (mg/dl) = Muestra (A -A Ejemplo 45,7 Factor = = 547 0,085-0,005 2 cor ) x Factor Colesterol HDL (mg/dl) = (0,080-0,003) x 547 = 42, Colesterol LDL (mg/dl) Óptimo Umbral óptimo Umbral elevado Elevado Muy elevado < Calibración El calibrador es rastreable al Standard Reference Material (SRM) 95 do National Institute of Standards and Technology (NIST). Calibraciones manuales Obtener el factor de calibración al usar un nuevo lote de reactivos o cuando el control de calidad lo indique. Sistemas automáticos Blanco de reactivo: agua o solución de cloruro de sodio 50 mmol/l (0,85%); Estándar: usar el calibrador del producto; Intervalos de calibración; Calibración de 2 puntos al cambiar de lote; Calibración de 2 puntos cuando el control de calidad lo indique. Linealidad La reacción es lineal entre 2,5 y 200 mg/dl. En casos raros de valores mayores a 200 mg/dl, diluir la muestra con NaCl 50 mmol/l (0,85%), realizar una nueva determinación y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución. interno de calidad. El laboratorio debe mantener un programa de control interno de calidad que defina con claridad los reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de las actividades. es deben ser utilizados para evaluar la imprecisión y desviaciones de calibración. Recomiéndase utilizar un sistema de reglas de control para verificar la estabilidad del 7 sistema de medición. Colesterol HDL (mg/dl) Bajo <40 Elevado ( deseable) 60 Niños y adolescentes 9 Colesterol Total (mg/dl) Edad: 2 a 9 años Deseable <70 Limíte Elevado 200 Colesterol LDL (mg/dl) Edad: 2 a 9 años Deseable <0 Limíte 0-29 Elevado 30 Colesterol HDL (mg/dl) Edad: <0 años Edad: 0 a 9 años Características de desempeño Exactitud. Deseable Deseable La exactitud del método fue verificada por comparación 3 con el MDC obteniéndose los siguientes resultados: Espanhol - Ref.: 98
4 El error total (aleatorio + sistemático), estimado en un nivel de decisión de 40 mg/dl, es igual a 4,39 mg/dl o,0%. Especificidad. Para evaluar la especificidad del método en muestras con triglicéridos elevados, se realizó un estudio utilizando muestras con concentraciones de triglicéridos mayores a 400 mg/dl (43 a 2807 mg/dl), obteniéndose los siguientes resultados en comparación 6 con el método de referencia del CDC : Número de muestras Intervalo (mg/dl) 4 26,0-47,0 4 23,7-47,4 Media (mg/dl) 37,9 35,6 Ecuación de regresión HDL LE =,0* ( MR) - 2,48 mg/ dl Coeficiente de correlación 0,968 El error total (aleatorio + sistemático), estimado en un nivel de decisión de 40 mg/dl, es igual a 4,06 mg/dl o 0,2%. Sensibilidad metodológica. Método Referencia (MR) Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo Muestra Muestra 2 Muestra 3 Muestra Muestra 2 Muestra 3 N N Método Designado de Comparación (MDC) Media 32,9 50,6 0,4 Reproducibilidad - Imprecisión total Media 32,8 50,0 00, Utilizando la absorbancia del calibrador como parámetro, la sensibilidad fotométrica es 0,57 mg/dl, correspondiendo a una absorbancia igual a 0,00. Efectos de la dilución de la matriz. DP 0,3 0,2 0,7 DP 0,4 0,7, HDL LE Número de muestras Intervalo (mg/dl) 52 32,0-33, ,6-33,0 Media (mg/dl) 56,3 58,3 Ecuación de regresión HDL LE = 0, 99* ( MDC) + 2, 8 mg/ dl Coeficiente de correlación 0,996 HDL LE CV (%) 0,9 0,4 0,7 CV (%),2,4, Una muestra con valor igual a 200 mg/dl fue utilizada para evaluar la respuesta del sistema a las diluciones de la matriz con NaCl 50 mmol/l (0,85%). Los desvíos máximos encontrados con relación a la línea de linealidad fueron iguales o menores al 5%. Significancia clínica. Existen fuertes evidencias de que el colesterol es un factor de riesgo directo para la Dolencia Coronaria Isquémica (DCI). Estudios retrospectivos y prospectivos demuestran claramente una interrelación curvilineal entre los niveles del colesterol sérico, más específicamente el colesterol LDL, y la prevalencia de DCI. En 977 se demostró que el colesterol HDL tiene un efecto protector contra la prevalencia de la DCI. Los estudios de Framinghan muestran de modo inequívoco que los niveles del colesterol HDL son inversamente proporcionales a la prevalencia de la DCI. Esta relación inversa es claramente percibida en la tabla de valores deseables o recomendados. Las concentraciones del colesterol en las fracciones LDL y VLDL y en la fracción HDL dependen de metabolismos distintos y no se debe intentar buscar una correlación entre sus valores de concentración. Observaciones. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de resultados correctos. 2. El laboratorio clínico tiene por objetivo proveer resultados exactos y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa potencial de errores analíticos. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así, para preparar reactivos, utilizar en mediciones y para el uso en el enjuague final de la vidriería, el agua debe tener resistividad megaohm.cm o conductividad microsiemens/cm y concentración de silicatos <0, mg/l. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad saturada ocurre liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran capacidad de oxidación y reducción que deterioran los reactivos en pocos días o incluso en horas, modificando los resultados de forma imprevisible. Por ello es fundamental establecer un programa de control de calidad del agua. 3. Varios factores alteran los resultados obtenidos con el calibrador. Estos factores incluyen los errores en la reconstitución, homogeneización, la contaminación del agua o materiales de vidrio, control inadecuado de la temperatura o errores técnicos relacionados con el instrumento. Sugerimos que el cumplimiento de buenas prácticas de laboratorio y la verificación de las instrucciones del fabricante del instrumento y de los reactivos utilizados, relacionadas con las limitaciones del procedimiento. 4. El valor del calibrador fue establecido mediante utilizándose el producto HDL LE (Ref. 98) y procedimiento como se describe en las instrucciones de uso. Por el efecto de la matriz, la calibración podrá no ser adecuada cuando fueron utilizados reactivos de otros fabricantes. Referencias. Bachorik PS, Ross JW. Clin Chem 995;4: Executive Summary of the Third report of the National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III). JAMA 200;285: Espanhol - Ref.: 98
5 3. Kimberly MM, Leary ET, Waymack PP. Clin Chem 999;45: Pesce AJ, Kaplan LA. Methods in Clinical Chemistry, St. Louis: The C.V. Mosby Co., 987: Virella MFL, Stone P, Ellis S, Colwell G. Clin Chem 977;23: Warnick RG, Wood PD. Clin Chem 995; 4: Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 98; 27: Labtest: Datos de Archivo. 9. Leite PF, Martinez TLR, Halpern A, Cendoroglo MS, Novazzi JP, Fonseca FAH, Dias JCA. Risco cardiovascular: fatores metabólicos e nutricionais: diagnóstico e tratamento. São Paulo: Loyola, 994. p.56. Presentación Producto HDL LE Referencia Contenido X 60 ml X 20 ml X,0 ml X 240 ml X 80 ml X,0 ml 3 X 2000 ml X 2000 ml X,0 ml Están disponibles aplicaciones para sistemas automáticos. El número de ensayos en aplicaciones automáticas depende de los parámetros de la programación. Informaciones al consumidor [Términos y Condiciones de Garantía] Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto, dentro de las especificaciones, hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos, siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en los rótulos y en estas instrucciones, sean seguidos correctamente. Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Servicio de Apoyo al Consumidor Revisión: Marzo, 203 Ref.: sac@labtest.com.br Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reproducción bajo previa autorización 05 Espanhol - Ref.: 98
6 Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro Symbols used with ivd devices Conteúdo suficiente para < n > testes Contenido suficiente para < n > tests Contains sufficient for < n > tests Risco biológico Riesgo biológico Biological risk Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa) Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa) Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy) Marca CE Marcado CE CE Mark Calibrator Material Tóxico Tóxico Poison Calibrator Material Reagente Reactivo Reagent Limite de temperatura (conservar a) Temperatura limite (conservar a) Temperature limitation (store at) Fabricado por Elaborado por Manufactured by Representante Autorizado na Comunidade Europeia Representante autorizado en la Comunidad Europea Authorized Representative in the European Community Número do lote Denominación de lote Batch code Consultar instruções de uso Consultar instrucciones de uso Consult instructions for use e Número do catálogo Número de catálogo Catalog Number e negativo negativo Negative control Adições ou alterações significativas Cambios o suplementos significativos Significant additions or changes e positivo positivo Positive control Produto diagnóstico in vitro Dispositivo de diagnóstico in vitro In vitro diagnostic device e Liofilizado Liofilizado Lyophilized Corrosivo Corrosivo Corrosive Período após abertura Período post-abertura Period after-opening Ref.: Espanhol - Ref.: 98
1. Baño María o incubador para mantener temperatura constante de 37 ºC.
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