CREATININA ENZIMÁTICA Instrucciones de Uso
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- Belén Hidalgo Suárez
- hace 7 años
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1 CREATININA ENZIMÁTICA Instrucciones de Uso Ref.:17 Finalidad. Sistema para la determinación de la creatinina en suero, plasma y orina por reacción de punto final. [Solamente para uso diagnóstico in vitro.] Princípio. La creatinina presente en la muestra es convertida a creatina por acción de la enzima creatinina amidohidrolasa. La creatina producida es hidrolisada a sarcosina y urea por acción de la enzima creatina amidinohidrolasa. A continuación, la enzima sarcosina oxidasa promueve la desmetilación oxidativa de la sarcosina, llevando a la producción de glicina, formaldehído y peróxido de hidrógeno. En presencia de peroxidasa, el peróxido de hidrógeno formado reacciona con el N-ethyl-N-sulfopropyl-m-toluidina (ESPMT) y 4-aminoantipirina, produciendo una quinoneimina que posee un máximo de absorbancia en 546 nm. La intensidad del color del producto de la reacción es directamente proporcional a la concentración de creatinina en la muestra. + H O Creatina + H O amidohidrolasa Creatina amidinohidrolasa Creatina Sarcosina + Urea Sarcosina oxidasa Sarcosina + H O + O Glicina + Formaldehído + H O Peroxidasa HO + ESPMT + 4-aminoantipirina Quinoneimina + 4 HO Características del sistema. El sistema Enzimática de Labtest utiliza las enzimas creatinina amidohidrolasa, creatina amidinohidrolasa y sarcosina oxidasa en conjunto con la reacción de Trinder, para determinar la concentración de creatinina en muestras de suero, plasma y orina. La metodología enzimática confiere gran especificidad a la determinación del analito, eliminando la interferencia de proteínas plasmáticas y otros cromógenos, comumente observada en 1 los métodos directos que utilizan la reacción de Jaffé. El material calibrador indicado es calibrado con el SRM 914 de NIST (National Institute of Standards and Technology) y transforma los resultados trazables al método definitivo IDMS (dilución isotópica, espectrometría de masa), cumpliendo con las recomendaciones del National Kidney Disease Education Program (NKDEP) para estandarización de la dosificación de la creatinina en el suero. Metodología. Enzimático -Trinder Reactivo Reactivo 1 - Almacenar entre - 8 ºC. Contiene tampón ph 7,4, creatina amidinohidrolasa 60 UI/mL, sarcosina oxidasa 17 UI/mL, ascorbato oxidasa 7 UI/mL y N-ethyl-N- (3-sulfopropyl)-3 m-toluidina 0,1 mg/ml.. - Reactivo - Almacenar entre - 8 ºC. Contiene tampón ph 7,3, creatinina amidohidrolasa 670 UI/mL, peroxidasa 91 UI/mL, 4 aminoantipirina 0,9 mg/ml y azida sódica <0,1%. Los reactivos deben permanecer fuera de la temperatura de almacenamiento solamente por el tiempo necesario para obtenerse el volumen a ser utilizado. Se debe evitar la exposición directa a la luz solar. Los reactivos no abiertos, almacenados en las condiciones indicadas, son estables hasta la fecha de caducidad impresa en el rótulo. Durante la manipulación, los reactivos y el calibrador están sujetos a contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden causar reducción de su estabilidad. Precauciones y cuidados especiales Los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados en la manipulación de los reactivos, los que no deben ser pipeteados con la boca. Se debe tener cuidado para evitar la ingestión y en caso de contacto con los ojos, lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y buscar auxilio médico. El Reactivo contiene azida sódica que es tóxica. Se debe tener cuidado para evitar la ingestión y en caso de contacto con los ojos lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y buscar auxilio médico. La azida sódica puede formar compuestos altamente explosivos con las cañerias de plomo y de cobre. Por lo tanto, utilizar grandes volúmenes de agua para descartar el reactivo. Materiales necesarios y no provistos 1. Analizador capaz de medir con exactitud absorbancia a 546 nm (540 a 550 nm).. Calibrador de la línea Calibra H - Labtest. 3. Pipetas para medir muestras y reactivos 01 Español - Ref.: 17
2 Muestra Se debe crear un Procedimiento Operacional Estándar (POE) para la recolección, preparación y almacenamiento de la muestra. Destacamos que los errores debidos a la muestra pueden ser mucho mayores que los errores ocurridos durante el procedimiento analítico. Suero o plasma (heparina, EDTA, fluoruro, oxalato y citrato). El analito es estable 7 días entre - 8 ºC. El anticoagulante Glistab - Labtest (Ref. 9) permite la recolección de solamente una muestra de sangre para las dosificaciones de creatinina, glucosa y urea. Orina de 4 horas debe ser centrifugada. La muestra de orina no debe recibir preservativos o conservantes y debe ser refrigerada durante el periodo de la recolección y después de recebida en el laboratório. Como ningún ensayo conocido puede asegurar que las muestras de sangre no transmitan infecciones, todas ellas deben ser consideradas como potencialmente infectivas. Por lo tanto, al manipularlas se debe seguir las normas establecidas para bioseguridad. Para descartar los reactivos y el material biológico, sugerimos aplicar las normas locales, estatales o federales de protección ambiental. Interferencias Concentraciones de triglicéridos hasta 1000 mg/dl, bilirrubina (libre y conjugada) hasta 16 mg/dl, hemoglobina hasta 400 mg/dl, ácido ascórbico hasta 40 mg/dl, creatina hasta 0 mg/dl, cefpiramida hasta 100 mg/dl, cefotaxima hasta 100 mg/dl y ceftriaxona hasta 100 mg/dl no interfieren significativamente en la reacción. Dobutamina y metildopa interfieren negativamente en la reacción. Muestras con bilirrubina, hemoglobina y triglicéridos en concentraciones mayores de las citadas por encima deben ser diluidas en NaCl 150 mmol/l (0,85%) antes de realizarse los ensayos. Multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución. Muestras que contienen azida pueden presentar resultados inexactos para la concentración de creatinina, provocados por la conversión insuficiente de creatina. Para evaluar la concentración aproximada de hemoglobina en una muestra, proceder de la siguiente forma: diluir 0,05 ml de la muestra en,0 ml de NaCl 150 mmol/l (0,85%) y medir la absorbancia en 405 o 415 nm, ajustando el cero con agua desionizada o destilada. Hemoglobina (mg/dl) Absorbancia405 x 601 Hemoglobina (mg/dl) Absorbancia415 x 467 Parámetros para realización de la prueba. Para la dosificación de creatinina en la orina, diluir la muestra 1:5 (0, ml de orina + 0,8 ml de NaCl 150 mmol/l). Multiplicar el resultado obtenido por 5. Parâmetros *Los volúmenes de muestra y reactivos pueden ser cambiados proporcionalmente sin perjuicio para el desempeño de la prueba. En caso de reducción de los volúmenes es fundamental que se observe el volumen mínimo necesario para la medición fotométrica. Calibración Calibración de puntos Punto 0: Blanco de reactivo - agua desionizada o cloruro de sódio 150 mmol/l (0,85%). Punto 1: Calibrador - usar calibrador de la línea Calibra H - Labtest La concentración de creatinina en el Calibra H es trazable al Standard Reference Material (SRM) 914 de National Institute of Standards and Technology (NIST). Intervalo de calibraciones: Cuando el control de calidad lo indique; Cuando se utilice un nuevo lote de reactivos; Cuando se utilicen nuevos frascos de reactivos de un mismo lote, en caso de que una nueva calibración haya sido realizada durante la utilización del frasco anterior Cálculos. Según recomendaciones del NKDEP los resultados deben ser informados con dos cifras decimales para evitarse errores sistemáticos causados por redondeos, que pueden alcanzar a 6%. Abs del test o calibrador = Abs - Abs 1 Aplicación Birreactivo Tipo de Reacción Punto final Dirección de la Reacción Crecente de Onda primario 546 nm de Onda secundario 800 nm Temperatura 37 ºC Calibración puntos Punto 0: Blanco (NaCl 0,85% o agua desionizada) Punto 1: Calibra H Modelo de la Calibración Lineal Volumen de Muestra* 6 L Volumen de R1* 70 L Lectura 1 (Absorbancia 1) Después de 300 segundos de incubación a 37 ºC de R1 + muestra Volumen de Reactivo * 90 L Lectura (Absorbancia ) Después de 300 segundos de incubación a 37 ºC de R1 + muestra + R Abs del test (mg/dl) = x Concentración del Calibrador mg/dl Abs del calibrador 0 Español - Ref.: 17
3 urinaria urinaria (mg/dl) Urinaria = x Volumen de orina (mg/4 h) 100 (ml/4 h) mg/kg peso = mg/4 horas dividido por el peso corporal. Depuración de la creatinina endógena. Instruir al paciente para que haga correctamente la toma de orina de 4 horas. Dosificar la creatinina en el suero y en la orina. El suero puede ser obtenido en cualquier momento durante el periodo de recolección de la orina. Aplicar los resultados obtenidos en la ecuación abajo: Depuración = U S x VM (ml/minuto) U: creatinina en la orina (mg/dl) S: creatinina en el suero (mg/dl) VM: volumen minuto (Volumen urinario de 4 horas, en ml, dividido por 1440). OBS.: La depuración tendrá que ser corregida para la superficie corporal del paciente, que es obtenida a través de nomograma correlacionando peso y altura, o usando la ecuación abajo: 0,45 0,75 A = P x H x 0, A = superficie corporal (m ) P = peso (kg) H = altura (cm) Multiplicar el valor de la depuración por 1,73 y dividir por la superficie corporal del paciente. Índice de filtración glomerular. El NKDEP recomienda enfáticamente que los laboratorios reporten la estimativa del índice de filtración glomerular (egfr en inglés) en todos los informes analíticos que contengan resultados de creatinina. Cuando los resultados de la creatinina plasmática son trazables al método IDMS, se utilizan las siguientes ecuaciones que involucran creatinina (CREA), edad (18 a 70 años) y sexo. Mujeres egfr ( ml/min/1,73m) = 175 * (CREA) * (Edad) -0,03 * 0,74-1,1154 Hombres egfr ( ml/min/1,73m) = 175 * (CREA) * (Edad) -0,03-1,1154 De acuerdo con las recomendaciones del NKDEP, el egfr debe ser reportado conforme al valor calculado, cuando el resultado fuera igual o menor a 60 ml/min/1,73m. Cuando el valor calculado fuera mayor de 60, debe ser reportado de la siguiente forma: Mayor de 60 ml/min/1,73m o >60 ml/min/1,73m. Intervalo operativo. La reacción es lineal entre 0,0 mg/dl y 150 mg/dl. Para valores mayores, diluir la muestra con NaCl 150 mmol/l (0,85%) y repetir la determinación. Multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución. interno de calidad. El laboratorio debe mantener un programa de control interno de calidad que defina claramente los reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para especificaciones de calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de las actividades. Se debe utilizar materiales de control para monitorear la imprecisión de la medición y las desviaciones de la calibración. Se recomienda utilizar los productos de la línea Qualitrol H - Labtest para control interno de calidad de ensayos de química clínica. Se sugiere buscar cumplir las especificaciones propuestas por NKDEP para el coeficiente de variación 4% y error sistemático (bias) 5%. Intervalos de referência. Estos intervalos deben ser utilizados 1,3,4 sólo como orientativos. Se recomienda que cada laboratorio establezca en la población atendida su propio intervalo de referencia. Suero/Plasma (mg/dl)* Recién-nacido 0,31-0,9 semanas - 1 año 0,16-0, <3 años 0,17-0, <5 años 0,6-0,4 5 - <7 años 0,9-0, <9 años 0,34-0, <11 años 0,3-0, <13 años 0,4-0, <15 años 0,46-0,81 Adultos (mujeres) años 0,53-1,00 Adultos (hombres) años 0,70-1,0 * Intervalos establecidos para resultados trazables al método IDMS. No existe intervalos establecidos para edades entre 15 - <18 años. Se sugiere utilizar los intervalos de mujeres y hombres adultos. Conversión de mg/dl para Unidad SI: mol/l = mg/dl x 88,4 Orina (mg/kg/4 horas) - 3 años 6 - > 3 años 1-30 Adulto (mujeres) 16 - Adulto (hombres) 1-6 Depuración de la (ml/min/1,73m )** Niños Adulto (mujeres) Adulto (hombres) ** Intervalos establecidos para resultados no trazables al método IDMS. El NKDEP recomienda calcular el índice de filtración glomerular (egfr) en reemplazo de la Depuración de la, utilizando el resultado de la creatinina trazable al método IDMS. 03 Español - Ref.: 17
4 Características de desempeño 5 Estudios de recuperación. En dos muestras con concentraciones de creatinina iguales a 0,3 mg/dl y 40,64 mg/dl, se añadió 0,3 mg/dl del analito, obteniéndose recuperaciones entre 99,5 y 100,3%. El error sistemático proporcional promedio estimado en el nivel de decisión (1,0 mg/dl) es igual a 0,001 mg/dl o 0,1%. Estudios de comparación de métodos. El método Enzimática fue comparado con otro método enzimático, habiéndose obtenido los siguientes resultados: Para muestras de suero: Método comparativo Enzimática Naturaleza de la muestra Suero Número de muestras Intervalo de concentraciones (mg/dl) 0,47-4,4 0,46-4,4 Promedio de las estimativas (mg/dl) 1,0 1,0 Ecuación de regresión Enzimática = 0,9974* Comparativo + 0,0055 Coeficiente de correlacióncorrelação 0,9996 Utilizando la ecuación de regresión fueron encontrados los siguientes errores sistemáticos para el método Enzimática: Niveles de decisión para evaluación de la creatinina estimada con ecuación Errores sistemáticos estimados en los niveles de decisión de la creatinina mg/dl mg/dl mg/dl % ,05 0, ,333 0, ,093 0,419 Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo N Promédio DE CV (%) Muestra 1 0 1,10 0,0144 1,31 Muestra 0 4,66 0,0397 0,85 Reproducibilidad - Imprecisión total N Promédio DE CV (%) Muestra 1 1 0,56 0,0053 0,96 Muestra 1 1,19 0,0146 1,3 Muestra 3 1 5,66 0,0339 0,60 Utilizando la ecuación de regresión fueron encontrados los siguientes errores sistemáticos para el método Enzimática: Niveles de decisión para evaluación de la creatinina Para muestras de orina: estimada con ecuación Errores sistemáticos estimados en los niveles de decisión de la creatinina mg/dl mg/dl mg/dl % 1,00 1,00 0,009 0,9 1,0 1,0 0,004 0,0,00,00 0,0003 0,015 Sensibilidad metodológica. Una muestra que no contiene creatinina fue utilizada para calcular el límite de detección del ensayo, habiéndose encontrado un valor igual a 0,19 mg/dl, equivalente al promedio de 09 ensayos más dos desviaciones estándar. Utilizándose la absorbancia del patrón como parámetro se verificó que el límite de detección fotométrica fue 0,04 mg/dl, correspondiendo a una diferencia de absorbancia igual a 0,001. Efectos de la dilución de la matriz. Una muestra con valor igual a 101,60 mg/dl fue utilizada para evaluar la respuesta del sistema en las diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/l (0,85%). Utilizando factores de dilución que variaron de 1,5 a 5 fueron encontradas recuperaciones entre 99,5 y 100,7%. Método comparativo Enzimática Naturaleza de la muestra Urina Número de muestras Intervalo de concentraciones (mg/dl) 11,73-146,6 11,79-146, Promedio de las estimativas (mg/dl) 134,87 134,41 Ecuación de regresión Enzimática = 0,9956* Comparativo + 0,1070 Coeficiente de correlación 0,9998 Significado clínico. La constancia en la formación y excreción de la creatinina hace de ella un marcador muy útil de la función renal, principalmente de la filtración glomerular, en virtud de su relativa independencia de factores como la dieta, grado de hidratación y metabolismo proteico. La determinación de la creatinina plasmática es un ensayo de función renal más seguro que el de la urea. En las enfermedades renales la creatinina se eleva más lentamente que la urea y se reduce más lentamente con la hemodiálisis. Factores extra renales como insuficiencia cardíaca congestiva, shock, obstrucción mecánica del tracto urinario, provocan elevación de la creatinina plasmática. 04 Español - Ref.: 17
5 Observaciones 1. La limpieza y el secado adecuados del material utilizado son factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de resultados correctos.. El laboratorio clínico tiene por objetivo proveer resultados exactos y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa potencial de errores analíticos. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así, para preparar reactivos, utilizar en mediciones y para el uso en el enjuague final de la vidriería, el agua debe tener resistividad 1 megaohm.cm o conductividad 1 microsiemens/cm y concentración de silicatos <0,1 mg/l. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad saturada ocurre liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran capacidad de oxidación y reducción que deterioran los reactivos en pocos días o incluso en horas, modificando los resultados de forma imprevisible. Por ello es fundamental establecer un programa de control de calidad del agua. Referencias 1. JUNGE, W. et. al. Determination of reference intervals for serum creatinine, creatinine excretion and creatinine clearance with an enzymatic and a modified Jaffé method. Clinica Chimica Acta, v. 344, n. 1-, p , MYERS. G. L. et al. Recommendations for Improving Serum Creatinine Measurement: A Report from the Laboratory Working Group of the National Kidney Disease Education Program. Clinical Chemistry, v. 5, n. 1, p. 5-18, 006. Apresentasión Producto Referencia Contenido Enzimática Están disponibles aplicaciones para sistemas automáticos y semiautomáticos. Informaciones al consumidor [Términos y Condiciones de Garantía] Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto dentro de las especificaciones hasta la fecha de caducidad indicada en los rótulos, siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en los rótulos y en estas instrucciones sean seguidos correctamente. Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Servicio de Apoyo al Consumidor Revisión: Octubre, 01 Ref.: /16 17-/7 sac@labtest.com.br X 16 ml 1 X 54 ml X 54 ml X 18 ml Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reproducción bajo previa autorización 3. MARTENSSON, A. et. al. Creatininium reference intervals for corrected methods. Scandinavian Journal of Clinical and Laboratory Investigation, v. 64, p , CERIOTTI, F. et. al. Reference Intervals for serum Creatinine Concentrations: Assessment of Available Data for Global Application. Clinical Chemistry, v.54, n. 3, p , Labtest: Datos de Archivo. 05 Español - Ref.: 17
6 Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro Symbols used with ivd devices Conteúdo suficiente para < n > testes Contenido suficiente para < n > tests Contains sufficient for < n > tests Risco biológico Riesgo biológico Biological risk Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa) Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa) Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy) Marca CE Marcado CE CE Mark Calibrator Material Tóxico Tóxico Poison Calibrator Material Reagente Reactivo Reagent Limite de temperatura (conservar a) Temperatura limite (conservar a) Temperature limitation (store at) Fabricado por Elaborado por Manufactured by Representante Autorizado na Comunidade Europeia Representante autorizado en la Comunidad Europea Authorized Representative in the European Community Número do lote Denominación de lote Batch code Consultar instruções de uso Consultar instrucciones de uso Consult instructions for use e Número do catálogo Número de catálogo Catalog Number e negativo negativo Negative control Adições ou alterações significativas Cambios o suplementos significativos Significant additions or changes e positivo positivo Positive control Produto diagnóstico in vitro Dispositivo de diagnóstico in vitro In vitro diagnostic device e Liofilizado Liofilizado Lyophilized Corrosivo Corrosivo Corrosive Período após abertura Período post-abertura Period after-opening Uso veterinário Uso veterinario Veterinary use Instalar até Instalar hasta Install before Ref.: Español - Ref.: 17
01 Español - Ref.: 35. Finalidad Princípio Caracteristicas del sistema. Precauciones y cuidados especiales
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