COLESTEROL HDL Instrucciones de Uso
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- Carmelo Segura Rey
- hace 6 años
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1 COLESTEROL HDL Instrucciones de Uso Ref.:13 Finalidad. Sistema para determinación del colesterol HDL a través de la precipitación selectiva de las lipoproteínas de baja densidad (LDL y VLDL) por reacción de punto final. Uso profesional. [Solamente para uso diagnóstico in Vitro.] Principio. Las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y las lipoproteínas de baja densidad (LDL) son cuantitativamente precipitadas y después de centrifugación, el colesterol ligado a las lipoproteínas de alta densidad (Colesterol HDL) es determinado en el sobrenadante. Caracteristicas del sistema. En la selección de un sistema para dosificar el Colesterol HDL, Labtest optó por el ácido fosfotúngstico y el cloruro de magnesio, que precipitando selectiva y cuantitativamente las VLDL y LDL, permiten la obtención de resultados comparables al del método de referencia. Después de la centrifugación, el Colesterol HDL se determina en el sobrenadante utilizando el sistema enzimático Colesterol Liquiform - Labtest (Ref. 76). El sistema de medida colorimétrica es fácilmente adaptable a la mayoría de los analizadores automáticos capaces de medir una reacción de punto final en 500 nm. Metodologia. Labtest Reactivos 1. - Precipitante 2. - Estándar mg/dl - Almacenar entre 2-30 ºC. - Almacenar entre 2-8 ºC. Contiene ácido fosfotúngstico 1,5 mmol/l y cloruro de magnesio 54 mmol/l. Contiene colesterol 0,52 mmol/l y azida sódica 14,6 mmol/l. Almacenar bien cerrado para evitar evaporación. Los reactivos no abiertos, conservados en las condiciones especificadas, son estables hasta la fecha de expiración impresa en su rótulo. Durante el manipuleo, los reactivos están sujetos a contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden provocar disminución de la estabilidad. Precauciones y cuidados especiales No utilizar el Reactivo 1 - Colesterol Liquiform - Labtest (Ref. 76) cuando su absorbancia, medida contra agua a 500 nm, fuera igual o mayor que 0,300 o cuando se muestre turbio o con señales de contaminación. El Estándar contiene azida sódica que es tóxica. Se debe tener cuidado para evitar la ingestión y en caso de contacto con los ojos lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y procurar auxilio médico. La azida puede formar compuestos altamente explosivos con las cañerías de plomo y de cobre. Por lo tanto, utilizar grandes volúmenes de agua para descartar los reactivos. Se deben de aplicar los cuidados habituales de seguridad en la manipulación del reactivo. Material necesario y no suministrado 1. Baño María o incubador para mantener temperatura constante de 37 ºC. 2. Fotómetro capaz de medir, con exactitud, la absorbancia entre 490 y 5 nm. 3. Pipetas para dispensar muestras y reactivo. 4. Cronómetro. 5. Centrífuga con capacidad superior a 3500 rpm. 6. Reactivo para la determinación de Colesterol. Influencias preanaliticas. Las concentraciones del colesterol HDL medidas en un mismo individuo y en distintas ocasiones pueden fluctuar considerablemente debido a las variaciones biológicas y también a las variaciones del método analítico. Las concentraciones en la sangre son fuertemente influenciadas por factores tales como dieta reciente, ingestión de alcohol, variaciones del peso corporal, actividades físicas y hábito tabaquista. Las hormonas y otras medicaciones también producen variaciones en la concentración del colesterol HDL. Se considera que la variación biológica sea alrededor del 7,5%. Por lo cual, en una serie de repeticiones de la dosificación en un mismo individuo, dos tercios de los resultados estarán entre 7,5% del valor medio. Siendo así, la variación biológica supone el factor más importante de la variación total del colesterol HDL. Los efectos de la variación biológica pueden ser controlados hasta cierto punto através de la estandarización de las condiciones de preparación del paciente y de la toma de la muestra, pero el colesterol HDL no puede ser estimado con confianza a través de un ensayo de una única muestra. Se deben obtener varias muestras y el promedio de los resultados puede ser considerado como la concentración usual del colesterol HDL o, más exactamente, puede ser considerada el rango usual para el individuo. Muestra Se debe de crear un Procedimiento Operacional Estándar (POE) que establezca procedimientos adecuados para toma, preparación y almacenamiento de las muestras. Destacamos que los errores debidos a un mal POE pueden ser mayores que los errores ocurridos durante el procedimiento analítico. 01 Español - Ref.: 13
2 Usa suero o plasma (heparina-litio y EDTA). Las muestras con citrato u oxalato no deben ser usadas porque dan resultados falsamente disminuidos. Las muestras de suero o plasma no deben permanecer entre ºC por más de 14 horas. Cuando las determinaciones no serán realizadas dentro de las 14 horas, las muestras deben ser almacenadas entre 2-8 ºC por 7 días y por 30 días a ºC negativos. Se deben almacenar a temperaturas 70 ºC negativos cuando hubiera necesidad de preservación por períodos mayores de tiempo. Evitar congelamientos y descongelamientos repetidos. Las muestras descongeladas deben ser bien homogeneizadas antes de su utilización. No usar vórtex o similar. No usar muestras con señales de contaminación microbiana. Como ningún test conocido puede asegurar que muestras de sangre no transmiten infecciones, todas se deben considerar como potencialmente infectantes. Así siendo, al manejarlas, se debe seguir las normativas establecidas para bioseguridad. Para descartar los reactivos y el material biológico, deberán aplicarse las normativas locales, regionales o nacionales de protección ambiental. Interferencias Concentraciones de bilirrubina de hasta 5 mg/dl, hemoglobina hasta 180 mg/dl y triglicéridos hasta 750 mg/dl no producen interferencias significativas. Concentraciones de bilirrubina por encima de 5 mg/dl producen resultados falsamente disminuidos. Concentraciones de triglicéridos por encima de 750 mg/dl producen resultados falsamente elevados. Para evaluar la concentración aproximada de la hemoglobina en una muestra hemolisada se puede proceder a lo siguiente: diluir 0,05 ml de la muestra en 2,0 ml de NaCl 150 mmol/l (0,85%) y medir la absorbancia a 5 o 415 nm, ajustando el cero con agua desionizada o destilada: Hemoglobina(mg/dL) Absorbancia x Hemoglobina(mg/dL) Absorbancia x Limitaciones del método. Mantener siempre la relación Muestra/Precipitante igual a 1:1. Después de la centrifugación, remover el sobrenadante limpio dentro de 15 minutos, para evitar resultados falsamente elevados. Muestras lipémicas y ocasionalmente muestras no lipémicas pueden presentar el sobrenadante turbio. En este caso, diluir la muestra 1:2 con NaCI 150 mmol/l y repetir la precipitación. Multiplicar el resultado final por 2. En caso de que el sobrenadante permanezca todavía turbio, la muestra no puede ser utilizada para determinar el colesterol HDL. Algunas muestras, principalmente lipémicas, pueden presentar el sobrenadante limpio con una camada en su superficie que no debe ser pipeteado, para evitar resultados falsamente elevados. Procedimiento Ver limitaciones del metodo. Precipitación de las VLDL y LDL En un tubo 12 x 75 colocar: Suero: Precipitante: 0,25 ml 0,25 ml Agitar vigorosamente durante 30 segundos. La agitación sugerida es fundamental para la obtención de resultados consistentes. Centrifugar a rpm por lo menos durante 15 minutos para obtener un sobrenadante límpido. Pipetear el sobrenadante límpido inmediatamente después de la centrifugación, tomando el cuidado de no resuspender el precipitado al objeto de evitar resultados falsamente elevados. Colorimetria. Ver observaciones 1,2 y 3. Utilizar con el Reactivo 1 - Colesterol Liquiform - Labtest (Ref. 76). Disponer de tres tubos de ensayo y proceder como se expone a continuación: Sobrenadante Estándar (nº2) Reactivo 1 Mezclar e incubar a 37 ºC, durante 10 minutos. El nivel del agua en el baño debe ser superior al nivel del reactivo en los tubos de ensayo. Determinar las absorbancias del Test y del Estándar a 500 nm (490 a 5 nm), ajustando el cero con el Blanco. El color es estable por 60 minutos. El procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros cuyo volumen mínimo de solución para lectura es igual o menor que 1,0 ml. Se debe hacer una verificación de la necesidad de ajuste del volumen para el fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente, sin perjuicio para el desempeño de la prueba manténiendose los cálculos inalterados. Volúmenes de muestra menores a 0,01 ml son críticos en aplicaciones manuales y se deben ser utilizados con cuidado porque aumentan la imprecisión de la medición. Calculos Debido a la dilución 1:2 aplicada a las muestras durante el procedimiento de precipitación de las VLDL y LDL, el valor del Estándar, para cálculo de los resultados, debe ser corregido para mg/dl. Absorbancia del Test Colesterol HDL (mg/dl) = x Absorbancia del Estándar Ejemplo Absorbancia del Test = 0,290 Absorbancia del Estándar = 0,3 Blanco Test Estándar 0,1 ml 0,1 ml 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml 02 Español - Ref.: 13
3 0,290 Colesterol HDL (mg/dl) = x = 36 0,3 Debido a la gran reproducibilidad que puede ser obtenida con la metodología, se puede utilizar el método del factor. Factor de Calibración = Absorbancia del Estándar Colesterol HDL(mg/dL) = Absorbancia del Test x Factor Ejemplo Factor = =125 0,3 Colesterol HDL (mg/dl) = 0,290 x 125 = 36 Unidades Convencionales: mg/dl Unidades SI (mmol/l) = Unidades Convencionales x 0,026 Trazabilidad del sistema. La calibración del sistema es trazable al Standard Reference Material (SRM) 911 del National Instituite of Standards and Technology (NIST). Linealidad El resultado de la medición es lineal hasta 0 mg/dl. Para valores más altos, diluir la muestra 1:2 con solución fisiológica, realizar una nueva medición y multiplicar el resultado obtenido por 2. Control interno de la calidad. El laboratorio debe mantener un programa de control interno de calidad que defina con claridad las normas aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para especificaciones de calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de actividades. Deben ser utilizados materiales de control para monitorear la imprecisión de la medición y los desvíos de la calibración. Se sugiere buscar atender como límites máximos de control las especificaciones propuestas por 10 National Cholesterol Education Program (NCEP) para el coeficiente de variación 4,00%, error sistemático (bias) 5,00% y error total 12,8%. Valores deseables o recomendados. Estos valores se deben usar únicamente como orientación. Se recomienda que cada laboratorio establezca, en la población atendida, su propia franja de valores de referencia. Los valores deseables o recomendados sustituyen los valores de referencia y son determinados a partir de dados epidemiológicos, calculados estadísticamente que relacionan los niveles del colesterol con predomonio de la Enfermedad Coronaria Isquémica (ECI), tambiém llamada Dollencia Arterial Coronaria (DAC). Classificación ATP III de Colesterol Total, LDL y HDL (mg/dl): Niños y adolescentes 9 Colesterol Total (mg/dl) Edad: 2 a 19 años Deseable <170 Limítrofe Elevado 0 Colesterol LDL (mg/dl) Edad: 2 a 19 años Deseable <110 Limítrofe Elevado 130 Colesterol HDL (mg/dl) <10 años 10 a 19 años Adultos 10 Deseable Deseable Colesterol Total (mg/dl) Deseable <0 Limiar elevado Elevado 2 Colesterol LDL (mg/dl) Óptimo Limiar óptimo Limiar elevado Elevado Mucho Elevado Colesterol HDL (mg/dl) Bajo < Elevado ( deseable) 60 Caracteristicas del desempeño < Exactitud. En dos muestras con concentraciones de colesterol HDL iguales a 28 y 54 mg/dl se añadieron cantidades diferentes de analitos, obteniéndose recuperaciones de entre el 95 y el 100%. El error sistemático proporcional medio, obtenido en un valor de 60 mg/dl fue igual a 1,2 mg/dl ó 2,0%. Especificidad. El método propuesto fue comparado con un método similar, utilizando 80 muestras con valores situados entre 7 y 86 mg/dl. La comparación resultó en la ecuación de regresión: y = 1, ,932x y un coeficiente de correlación (r) igual a 0,993. El error sistemático total (constante y proporcional) verificado en el nivel de decisión (60 mg/dl), fue igual a 2,74 mg/dl ó 4,5%. 03 Español - Ref.: 13
4 Como las muestras fueron seleccionadas aleatoriamente se puede inferir que el método tiene especificidad metodológica adecuada. Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo Muestra 1 Muestra 2 Muestra 1 Muestra 2 N N Media 59 Reproducibilidad - Imprecisión total Media 58 Sensibilidad metodológica. Una muestra proteica que no contenía Colesterol HDL fue utilizada para calcular el límite de detección del ensayo, habiendo sido encontrado un valor igual a 0, mg/dl, equivalente a la media de ensayos más dos desviaciones estándar. Utilizándose la absorbancia del Estándar como parámetro, se verificó que el límite de detección fotométrica es 0,12 mg/dl, correspondiendo a una absorbancia igual a 0,001. Efectos de la dilución de la matriz. Una muestra con valor igual a 92 mg/dl fueron utilizadas para evaluar la respuesta del sistema en las diluciones de la matriz con solución fisiológica. Usando factores de dilución que variaron de 1,2 a 2,0, se encontraron recuperaciones entre el 93 y 103%. Como calcular la concentración del colesterol VLDL Y LDL. Las concentraciones del Colesterol VLDL y LDL pueden ser calculadas utilizando la ecuación de Friedewald, que es exacta para muestras cuyas concentraciones de triglicéridos no ultrapasen 0 mg/dl y no pertenezcan a pacientes portadores de lipoproteinemia do Tipo III. Ecuácion de Friedewald Colesterol VLDL = Trigliceridos / 5 Colesterol LDL = Colesterol Total - (HDL + VLDL) DE 0,60 0,49 DE 0,83 0,99 CV (%) 1,5 0,8 CV (%) 2,0 1,7 Significado clínico. No hay dudas que el colesterol es un factor de riesgo para ECI (Enfermedad Coronaria Isquémica) y que él marcha - junto con el tabaco, hipertensión e intolerancia a la glucosa - como uno de los cuatro grandes factores de ECI. Estudios prospectivos y retrospectivos no dejan dudas acerca de la existencia de una interrelación curvilínea entre los niveles de colesterol sérico, más específicamente LDL y VLDL y la incidencia de ECI. En 1977 quedó demostrado que el colesterol HDL tiene un efecto protector contra la ECI. Los estudios de Framinghan revelaron que los niveles del colesterol HDL son inversamente proporcionales a la prevalencia de ECI. Está bien establecido que niveles elevados de colesterol LDL están asociados al riesgo aumentado de ECI. También no hay dudas de que no sólo el colesterol total, sino que también las fracciones LDL y VLDL pueden ser disminuidas con dieta y medicación. La reducción del 1 % del valor del colesterol total disminuye el predominio de ECI en aproximadamente en un 2%. Las concentraciones del colesterol total y del HDL dependen de metabolismos distintos y no se debe hacer ningún intento por buscar una correlación entre sus niveles de concentración. Observaciones 1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de resultados correctos. 2. El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa potencial de errores analíticos. El agua deionizada o destilada utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así, para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad 1 megaohm.cm o conductividad 1 microsiemens/cm y concentración de silicatos <0,1 mg/l. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer un programa de control de la calidad del agua. 3. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas de interferencia en los resultados y en la metodología, se sugiere consultar < Referencias 1. III Diretrizes Brasileiras sobre Dislipidemias e Diretriz de Prevenção da Aterosclerose. Sociedade Brasileira de Cardiologia. Arq Bras Cardiol 01;77(suppl III): Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott Laboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarborough, Canada, Virella MFL, Stone P, Ellis S, Colwell G. Clin Chem 1977; 23: Warnick RG, Naguyent T, Albers AA. Clin Chem 1985; 2: Warnick RJ. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC Press, Warnick RG, Wood PD. Clin Chem 1995; 41: NCEP - Detection, evaluation and treatment of high blood cholesterol in adults (Adult Treatment Panel III). NIH Publication , Bethesda, MD, Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Growth T.1981;27: Leite PF, Martinez TLR, Halpern A, Cendoroglo MS, Novazzi JP, Fonseca FAH, Dias JCA. Risco cardiovascular: fatores metabólicos e nutricionais: diagnóstico e tratamento. São Paulo: Loyola, p Español - Ref.: 13
5 10. Executive Summary of the Third report of the National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III). JAMA 01;285: Labtest. Datos de Archivo. Presentación Informaciones al consumidor [Términos y Condiciones de Garantía] Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto, dentro de las especificaciones, hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos, siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en los rótulos y en estas instrucciones, sean seguidos correctamente. Producto Colesterol HDL Referencia Contenido 1 X 25 ml 1 X 5 ml 1 X 50 ml 1 X 5 ml Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Customer Service customerservice@labtest.com.br Revisión: Marzo, 14 Ref.: Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reproducción bajo previa autorización 05 Español - Ref.: 13
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