2. - Estándar - Cloruros 100 meq/l - Almacenar entre 2-30 ºC. 1. Fotómetro capaz de medir con exactitud, absorbancias entre 450 y 505 nm.

Transcripción

1 CLORUROS Liquiform Instrucciones de Uso Ref.:115 Finalidad. Sistema colorimétrico para la determinación cuantitativa de la concentración de cloruros en muestras de suero, plasma (Heparina), orina y líquido cefalorraquídeo por medio de una reacción de punto final. [Solamente para uso diagnóstico in vitro.] 1,2 Principio. Los iones cloruro presentes en la muestra reaccionan con tiocianato de mercurio formando cloruro mercúrico y iones tiocianato. Los iones tiocianato al combinarse con los iones férricos forman el tiocianato férrico, de acuerdo a la ecuación: _ Cl + Hg(SCN) _ 3+ (SCN) + Fe 2 2 HgCl + 2 (SCN) Fe (SCN) 3 El tiocianato férrico es de color amarillo y la intensidad del color formado, medida entre 450 y 505 nm, es proporcional a la concentración de cloruros en la muestra. 1,2,8,9 Características del sistema. El método Cloruros de Labtest es un procedimiento simple y rápido para la determinación colorimétrica de cloruros en los líquidos biológicos. El sistema es lineal hasta 130 meq/l. Los datos de repetitividad y reproducibilidad demuestran que el método provee resultados que cumplen las especificaciones deseables de error máximo, basados en las especificaciones CLIA. El método no sufre interferencias por bilirrubina en concentraciones de hasta 38 mg/dl, hemoglobina hasta 180 mg/dl y triglicéridos hasta 1000 mg/dl, obteniéndose excelente correlación con las determinaciones por electrodo de ión selectivo (ISE). El método es fácilmente aplicable en analizadores automáticos capaces de medir con exactitud una reacción de punto final entre 405 y 505 nm. El sistema Cloruros Liquiform también puede ser utilizado en aplicaciones manuales utilizando fotómetros o instrumentos semi-automáticos. 2 Metodologia. Tiocianato de mercurio. Reactivos Reactivo 1 - Almacenar entre 2-30 ºC. Manipular con cautela: reactivo tóxico. No pipetear con la boca. Contiene Tiocianato de mercurio 2,0 mmol/l, Cloruro de mercurio >0,8 mmol/l, Nitrato férrico > mmol/l, Ácido nítrico 28 mmol/l y estabilizador. _ 2. - Estándar - Cloruros 100 meq/l - Almacenar entre 2-30 ºC. Después de su manipulación se sugiere almacenar bien cerrado para evitar la evaporación. Los reactivos no abiertos cuando almacenados en las condiciones indicadas, son estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo. Durante la manipulación, los reactivos están sujetos a contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden provocar una reducción de la estabilidad. Precauciones y cuidados especiales No utilizar el Reactivo 1 o el Estándar cuando haya señales de contaminación (turbidez, formación de precipitados o cambio en la coloración). Los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados en la manipulación del reactivo. El Reactivo 1 contiene tiocianato de mercurio, que es tóxico. Se debe tener cuidado para evitar la ingestión y, en caso de contacto con los ojos, lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y procurar auxilio médico. Materiales necesarios y no provistos 1. Fotómetro capaz de medir con exactitud, absorbancias entre 450 y 505 nm. 2. Pipetas para medir muestras y reactivos. 3. Cronómetro. Muestra 3 Usar suero, plasma (Heparina), orina y líquido cefalorraquídeo (LCR). Importante. Plasmas recogidos en citrato y EDTA proveen resultados de cloruros falsamente disminuidos. Para evitar el pasaje del cloruro hacia los hematíes, el plasma o el suero deben ser separados hasta 1 hora después de la toma de la muestra. El analito es estable en el suero o en el plasma durante 7 días si es almacenado entre 15 y 25 ºC, 4 semanas entre 2 y 8 ºC y varios meses a 10 ºC negativos. Para el dosaje en el LCR o en la orina, utilizar muestras centrifugadas. Para el dosaje en el sudor sugerimos utilizar la metodología del Electrodo Ión Selectivo (ISE). Se debe crear un Procedimiento Operativo Estándar (POE) que establezca procedimientos adecuados para recolección, preparación y almacenamiento de la muestra. Destacamos que los errores debidos a la muestra pueden ser mucho mayores que los errores ocurridos durante el procedimiento analítico. 01 Español - Ref.: 115

2 Como ningún test conocido puede asegurar que las muestras de sangre no transmitan infecciones, todas ellas deben ser consideradas como potencialmente infecciosas. Por lo tanto, al manipularlas se deben seguir las normas establecidas para Bioseguridad. Para descartar los reactivos y el material biológico, sugerimos aplicar las normas locales, estatales o federales de protección ambiental. Interferencias 1,9 Concentraciones de bilirrubina de hasta 38 mg/dl, hemoglobina hasta 180 mg/dl y triglicéridos hasta 1000 mg/dl no producen interferencias significativas. Concentraciones de triglicéridos por encima de 1000 mg/dl producen resultados falsamente elevados. En ese caso se debe utilizar un blanco de la muestra. Para evaluar la concentración aproximada de hemoglobina en una muestra hemolisada se puede proceder del siguiente modo: Diluir 0,05 ml de la muestra en 2,0 ml de NaCl 150 mmol/l (0,85%) y medir la absorbancia a 405 ó 415 nm, ajustando el cero con agua desionizada o destilada. Hemoglobina (mg/dl) Absorbancia405 x 601 Hemoglobina (mg/dl) Absorbancia415 x 467 Procedimiento Ver Linealidad y Observación 1. Suero, plasma (Heparina) y LCR. Orina: diluir la muestra 1:2 con agua deionizada. Multiplicar el resultado obtenido por 2. Identificar 3 tubos de ensayos y proceder como se describe a seguir: Reactivo 1 Muestra Estándar Blanco 1 ml Test Estándar 1 ml 1 ml 0,01 ml 0,01 ml Homogeneizar e incubar a temperatura ambiente durante 2 minutos. Determinar las absorbancias de la Muestra (test) y del Estándar a 450 nm (450 a 505 nm) o con un filtro verde-azul, ajustando el cero con el blanco. El color es estable por 2 horas. El procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros cuyo volumen mínimo de solución para la lectura es igual o menor a 1 ml. Se debe hacer una verificación de la necesidad de ajuste del volumen según el fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y de reactivo pueden ser modificados proporcionalmente sin perjuicio para el desempeño del ensayo, y el procedimiento de cálculos se mantiene inalterado. En el caso de reducción de los volúmenes es fundamental que se observe el volumen mínimo necesario para la lectura fotométrica. Volúmenes de muestras menores a 10 microlitros son críticos en aplicaciones manuales y deben ser usados con cautela porque aumentan la imprecisión de la medición. Cálculos. Ver Linealidad. Absorbancia del Test Cloruros (meq/l) = x 100 Absorbancia del Estándar El resultado también puede ser obtenido utilizando el factor de calibración: Factor de calibración = 100 Absorbancia del Estándar Cloruros (meq/l) = Absorbancia del Test x Factor de calibración Ejemplos Los datos presentados seguidamente son ilustrativos y no deben ser utilizados para calcular resultados en el laboratorio. Absorbancia del Test (Muestra): 0,562 Absorbancia del Estándar: 0,524 0,562 Cloruros (meq/l) = x 100 = 107 0,524 o: 100 Factor de calibración = = 190 0,524 Cloruros (meq/l) = 0,562 x 190 = 107 Calibración Calibraciones manuales Obtener el factor de calibración al usar un nuevo lote de reactivos o cuando el control interno de calidad lo indique. Sistemas automáticos Blanco de reactivo: agua deionizada. Usar calibrador de la Línea Calibra - Labtest. Intervalos de calibración Calibración en 2 puntos (Blanco y Calibrador) al cambiar de lote de reactivo. Calibración en 2 puntos (Blanco y Calibrador) cuando el control de calidad lo indique. Intervalo operacional. El resultado de la medición es lineal hasta 130 meq/l. Para valores mayores, diluir la muestra con agua destilada o deionizada, realizar una nueva medición y multiplicar el resultado obtenidos por el factor de dilución. 4,6,7,8 interno de calidad. El laboratorio debe mantener un programa de control interno de calidad que defina con claridad las normas aplicables, los objetivos, los procedimientos, los criterios para las especificaciones de calidad y límites de tolerancia, las acciones correctivas y los registros de las actividades. 02 Español - Ref.: 115

3 Deben ser utilizados materiales de control para monitorear la imprecisión de la medición y desvíos de la calibración. Se sugiere que las especificaciones para el coeficiente de variación y el error total se basen en las especificaciones CLIA. Se sugiere utilizar los productos de la línea Qualitrol - Labtest para el control interno de calidad en ensayos de química clínica. 1 Intervalo de referencia. Estos valores deben ser usados sólo como orientativos. Se recomienda que cada laboratorio establezca en su población atendida, su propio rango de valores de referencia. Suero o plasma (todas las edades). 98 a 110 meq/l. Orina. 110 a 250 meq/24 horas. LCR. 113 a 127 meq/l. Conversión: Unidades Convencionales (meq/l) x 1,0 = Unidades SI (mmol/l) Características de desempeño 7,8,9 Estudios de recuperación. En una muestra con concentración de cloruros igual a 84 meq/l le fueron adicionadas cantidades diferentes del analito, obteniéndose una recuperación entre 100 y 103%. Estudios de comparación de métodos. El método propuesto fue comparado con el método ISE utilizando muestras con valores situados entre 90 y 140 meq/l. La comparación resultó en la ecuación de regresión y = 0,7997x + 19,125 y un coeficiente de correlación (r) igual a 0,998. El error sistemático total (constante y proporcional) verificado en el nivel de decisión 94 meq/l fue igual a 0,32% y en el nivel de decisión 112 fue del 2,9%. Como las muestras fueron seleccionadas aleatoriamente, se puede inferir que el método tiene una especificidad metodológica adecuada. Estudios de precisión Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo Muestra 1 Muestra 2 N Media Reproducibilidad - Imprecisión total Muestra 1 Muestra 2 N Media DE 0,39 0,70 DE 0,97 1,17 CV (%) 0,42 0,63 CV (%) 1,03 1,04 El error total (error aleatorio + error sistemático) estimado es del 2,3% para el nivel de 94 meq/l y de 4,9% para el nivel de 112 meq/l. Los resultados indican que el método cumple con la especificación deseable para el error total (< 5%) basada en las especificaciones CLIA. Límite de detección. Una muestra no conteniendo cloruros fue utilizada para calcular el límite de detección del ensayo, habiéndose encontrado un valor igual a 0,44 meq/l, equivalente a la media de réplicas más tres desvíos estándar. Efectos de la dilución de la matriz. Tres muestras con concentraciones iguales a 130, 118 y 105 meq/l fueron utilizadas para evaluar la respuesta del sistema en la dilución de la matriz con agua deionizada. Usando factor de dilución de 2 a 4 fueron encontradas recuperaciones entre 101 y 105%. 5 Significancia clínico. Los cloruros son los aniones más abundantes del líquido extracelular y, junto con el sodio, desempeñan un importante papel en el mantenimiento de la distribución de agua en el organismo, de la presión osmótica del plasma y en la neutralidad eléctrica. Un adulto ingiere normalmente cerca de 150 mmol de iones cloruro por día. Esa cantidad es casi totalmente absorbida por el sistema digestivo. El exceso de cloruros es excretado en la orina y el sudor. El sudor excesivo estimula la secreción de aldosterona que actúa sobre las glándulas sudoríparas para reabsorber más sodio y cloruros. La hipocloremia (reducción de los niveles de cloruro plasmático) es observada en algunas situaciones, tales como: - Déficit digestivo, como falta de ingestión de sal, diarrea intensa, aspiración naso-gástrica o vómitos intensos; - Nefritis con pérdida de sal, probablemente por deficiencia en la reabsorción tubular (pielonefritis crónica); - Abuso de diuréticos; - Enfermedad de Addison, donde los pacientes en crisis Addisoniana presentan niveles de cloruros séricos disminuidos; - Acidosis metabólica causada por la excesiva producción o disminuida excreción de ácidos orgánicos, como los casos de cetoacidosis diabética o insuficiencia renal. En esos casos, el cloruro es parcialmente sustituido por el exceso de aniones, como el b-hidroxibutirato, acetoacetato, lactato y fosfato; - Alcalosis metabólica en decurrencia de déficit de cloruro en ausencia de déficit de sodio; - Exceso de mineralocorticoides (Aldelsteronismo); - Intoxicación por bromo; - Condiciones asociadas con la expansión del volumen del líquido extracelular. Ya, la hipercloremia (aumento de los niveles de cloruros plasmáticos) está generalmente asociada con la hipernatremia (desequilibrio de la concentración de sodio en sangre) y también: - Acidosis metabólica, incluyendo aquellas secundarias a la pérdida de gran cantidad de bicarbonato, como en las diarreas prolongadas y en las ureteroenterostomías; - Fibrosis quística. En individuos portadores de esta patología, la concentración de cloruros en el sudor se encuentra elevada, siendo este un fenómeno útil para el diagnóstico de la dolencia. - Gammapatías mono y policlonales; - Hiperparatiroidismo; - Nefropatías; - Diabetes mellitus; - Intoxicación por salicilato; 03 Español - Ref.: 115

4 La excreción urinaria de cloruro se encuentra aumentada delante de diuresis macizas por varias causas, como se observa en la depleción de potasio y en la insuficiencia adrenocortical. Por lo contrario, la excreción urinaria de cloruro disminuye cuando hay pérdida aumentada por otras vías, como en la hiperfunción adrenocortical y en la reacción de estrés pos-operatorio. Observaciones 1. El laboratorio clínico tiene como objetivo entregar resultados exactos y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa potencial de errores analíticos. El agua desionizada o destilada utilizada en el laboratorio debe tener una calidad adecuada a cada aplicación. Así, para preparar reactivos, usar en las mediciones y para uso en el enjuague final de los materiales de vidrio, debe tener resistividad 1 megaohm.cm o conductividad 1 microsiemens/cm y concentración de silicatos <0,1 mg/l. Cuando la columna deionizadora está con su capacidad saturada hay producción de agua alcalina con liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que deterioran los reactivos en pocos días o aún en horas, alterando los resultados de modo imprevisible. Por ello, es fundamental establecer un programa de control de calidad del agua. 2. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas de interferencia en los resultados y en la metodología se sugiere consultar Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 3ª edición, Washington: AACC Press, Referencias 1. Burtis C.A, Ashwood E.R. Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 4th edition, Elsevier Saunders Company 06; Toffaletti, J.G. Electrolytes In: Bishop, M.L., Duben-Engelkirk, J.L., Fody, E. P. Clinical Chemistry: principles, procedures, correlations. 3 ed. Philadelphia. Lippincott, p Tonks DB. Quality in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott Laboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarborough, Canada, Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Growth T.1981; 27: CLIA Requirements for Analytical Quality - Westgard QC - Federal Register February 28, 1992;57(40): Acesso em 18/02/ Labtest: Datos de Archivo. Presentación Producto Referencia Contenido Cloruros Liquiform 115-1/50 Están disponibles aplicaciones para sistemas automáticos. El número de tests en aplicaciones automáticas depende de los parámetros de la programación. Informaciones al consumidor [Términos y Condiciones de Garantía] Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto dentro de las especificaciones, hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos, siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en los rótulos y en estas instrucciones sean seguidos correctamente. 1 1 X 50 ml 1 X 3 ml 2. Zall D.M., Fisher D., Garner M.Q. Photometric determination of chloride in water. Anal Chem, 28, (1956). 3.Chronolab - The Quality of Diagnostic samples - Acceso desde el 25/02/ Inmetro - Boas Práticas de Laboratório Clínico e Listas de Verificação para Avaliação, Qualitymark eds, Rio de Janeiro, Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Servicio de Apoyo al Consumidor sac@labtest.com.br Revisión: Abril, 11 Ref.: Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reproducción bajo previa autorización 04 Español - Ref.: 115

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6 Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro Symbols used with ivd devices Conteúdo suficiente para < n > testes Contenido suficiente para < n > tests Contains sufficient for < n > tests Risco biológico Riesgo biológico Biological risk Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa) Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa) Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy) Marca CE Marcado CE CE Mark Calibrator Material Tóxico Tóxico Poison Calibrator Material Reagente Reactivo Reagent Limite de temperatura (conservar a) Temperatura limite (conservar a) Temperature limitation (store at) Fabricado por Elaborado por Manufactured by Representante Autorizado na Comunidade Europeia Representante autorizado en la Comunidad Europea Authorized Representative in the European Community Número do lote Denominación de lote Batch code Consultar instruções de uso Consultar instrucciones de uso Consult instructions for use e Número do catálogo Número de catálogo Catalog Number e negativo negativo Negative control Adições ou alterações significativas Cambios o suplementos significativos Significant additions or changes e positivo positivo Positive control Produto diagnóstico in vitro Dispositivo de diagnóstico in vitro In vitro diagnostic device e Liofilizado Liofilizado Lyophilized Corrosivo Corrosivo Corrosive Período após abertura Período post-abertura Period after-opening Uso veterinário Uso veterinario Veterinary use Instalar até Instalar hasta Install before Ref.: Español - Ref.: 115