CREATININA. Instrucciones de Uso
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- Adrián Medina Luna
- hace 5 años
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1 Instrucciones de Uso CREATININA Ref. 35 FINALIDAD Sistema colorimétrico para la determinación de creatinina en muestras de sangre y orina por reacción de punto final. Solamente para uso diagnóstico in vitro. PRINCÍPIO La creatinina y otros componentes de la muestra reaccionan con la solución de picrato en medio alcalino formando un complejo de color rojo que es medido fotométricamente. La añadidura de un acidificante baja el ph para 5,0, promoviendo la descomposición del picrato de creatinina, permaneciendo inalterado el color derivado de los cromógenos, que también se mide fotométricamente. La diferencia entre las dos lecturas ofrece el valor de la creatinina (no corregida). CARACTERISTICAS DEL SISTEMA La Creatinina utiliza un procedimiento de punto final con el objetivo de perfeccionar la especificidad del método y minimizar la susceptibilidad a sustancias interferentes 1-3,5. El procedimiento de medición es calibrado con el SRM 91 del NIST y toma los resultados rastreables al método definitivo IDMS (dilución isotópica, espectrometría de masas), siguiendo las recomendaciones del National Kidney Disease Education Program (NKDEP) para la estandarización del dosaje de la creatinina en suero. Todos los métodos directos que utilizan la reacción de Jaffe están sujetos a un error sistemático constante, introducido por la interferencia de proteínas plasmáticas y otros cromógenos. Para minimizar ese error y aumentar significativamente la exactitud de los resultados de la Creatinina, Labtest recomienda el uso del índice de 8,11 corrección (ver el ítem Cálculos) el que debe ser aplicado cualquiera sean los resultados encontrados. Diversos estudios demostraron que es posible minimizar significativamente las interferencias provocadas por la 3 bilirrubina y la lipemia en la medición de la creatinina. El procedimiento de medición diferencial con la acidificación minimiza interferencia negativa de bilirrubina, mientras la desproteinización reduce la interferencia de la lipemia en las 11 concentraciones de triglicéridos entre 50 y 1800 mg/dl. El procedimiento de medición es aplicable a sistemas manuales y semi-automáticos capaces de medir con exactitud, absorbancias a 510 nm. METODOLOGIA Labtest. REACTIVOS 1. Ácido Pícrico - Conservar entre 15-5 C. Contiene ácido pícrico, mmol/l.. Tampón - Conservar entre 15-5 C. Contiene hidróxido de sodio 08 mmol/l, tetraborato de sodio 1,7 mmol/ly surfactante. El Reactivo se puede precipitar a temperaturas inferiores a 15 C. En este caso, calentar a 37 C y mezclar hasta la disolución. 3. Patrón,0 mg/dl - Conservar entre 15-5 C, bien cerrado para evitar evaporación.. Acidificante - Conservar entre 15-5 C. Contiene ácido acético 11, mol/l. Los reactivos no abiertos, conservados en las condiciones indicadas, son estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo. Durante su manipulación, los reactivos están sujetos a contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden provocar reducción de su estabilidad. PRECAUCIONES Y CUIDADOS ESPECIALES Se deben aplicar los cuidados habituales de seguridad en la manipulación de los reactivos, los cuales no deben ser pipeteados con la boca. Los reactivos Tampón yacidificante son corrosivos. En caso de contacto con la piel, mucosas y ojos, se debe lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y buscar auxilio médico. El Tampón puede producir ulceraciones cuando ingerido. En caso de ingestión ofrecer gran cantidad de agua con jugo de limón o vinagre. No provocar vómito. Buscar auxilio médico. Caso ocurra ingestión del Ácido Pícrico, ofrecer vasos de agua y, si el individuo estuviera consciente, provocar vómitos y buscar auxilio médico. MATERIAL NECESARIO Y NO SUMINISTRADO Baño maría mantenido a temperatura constante (37 C) Fotómetro capaz de medir, con exactitud, la absorbancia entre 500 y 50 nm. Pipetas para medir muestras y reactivos. Cronómetro. INFLUENCIAS PREANALITICAS Para control terapéutico, se aconseja recoger la muestra siempre al mismo horario, debido a las variaciones circadianas de la creatinina. La aspirina en dosis de acción antiinflamatoria produce aumento del valor de la creatinina en muestras de sangre. El ejercicio físico eleva los valores de la creatinina. Los valores de la creatinina son más bajos en individuos con dieta vegetariana. MUESTRA Se debe crear um Procedimiento Operacional Estándar (POE) que establezca procedimientos adecuados para toma, preparación y almacenamiento de la muestra. Subrayamos que los errores debidos a la muestra pueden ser bastante mayores que los errores acaecidos durante el procedimiento analítico. Usar suero o plasma (Heparina, EDTA, fluoruro, oxalato y citrato). El analito es estable 7 días entre - 8 C.
2 El anticoagulante Glistab - Labtest (Ref. 9) permite la recogida de una sola muestra de sangre para las dosificaciones de creatinina, glucosa y urea. La orina de horas y el líquido amniótico deben de ser centrifugados. La muestra de orina de horas debe ser conservada entre - 8 C durante el período de recogida y hasta el momento de la dosificación. Como ningún ensayo conocido puede asegurar que muestras de sangre no transmitan infecciones, todas ellas deben ser consideradas como potencialmente infecciosas. Por lo tanto, al manipularlas, se deben seguir las normas establecidas para bioseguridad. Para deshacerse de los reactivos y el material biológico sugerimos aplicar las normativas locales, regionales o nacionales de protección ambiental. INTERFERENCIAS Las proteínas presentes en la muestra producen una interferencia positiva introduciendo un error sistemático constante. Este error puede ser minimizado aplicando un índice de corrección. Como la orina no contiene proteínas que pueden producir interferencias, el índice de corrección no es aplicado en el cálculo de la concentración en muestras de orina. Vea la aplicación del índice de corrección en el ítem Cálculos. La determinación puede ser afectada por la presencia de grandes cantidades de sustancias reductoras presentes en los casos de cetoacidosis. El hervir la muestra de orina por 1 minuto elimina parcialmente la interferencia de esas substancias. La interferencia remaneciente es excluida en la medición diferencial. Concentraciones de bilirrubina hasta 5 mg/dl, hemoglobina hasta 180 mg/dl y triglicéridos hasta 50 mg/dl no producen interferencias significativas. Concentraciones de bilirrubina mayores que 5 mg/dl interfieren negativamente en la reacción. Concentraciones de triglicéridos mayores que 50 mg/dl producen resultados falsamente elevados. Para evaluar la concentración aproximada de la hemoglobina en una muestra hemolizada se puede proceder del modo expuesto a diluir 0,05 ml de la muestra en,0 mlde NaCl 150 mmol/l (0,85%) y medir la absorbancia en 05 ó 15 nm, marcando el cero con agua desionizada o destilada. Hemoglobina (mg/dl) Absorbancia05 x 601 Hemoglobina (mg/dl) Absorbancia x 67 PROCEDIMIENTO DE ENSAYOS DIRECTO Vea Observaciones 1, y 3. Para la dosificación en la orina, diluir la muestra 1:5 (0, ml de orina +,8 ml de agua destilada o desionizada). Multiplicar el resultado obtenido por 5. El agua debe tener una resistividad 1 megaohms o una conductividad 1 microsiemens y concentración de silicatos <0,1 mg/l. 15 Disponer de 3 tubos de ensayo y proceder como expuesto a Tampón (No. ) Muestra Água destilada o desionizada Patrón (No. 3) Ácido Pícrico (No. 1) Mezclar y incubar en baño maría a 37 C durante 10 minutos. El nivel del agua en el baño debe de ser superior al nivel de los reactivos en los tubos de ensayo. Determinar las absorbancias del test y patrón en 510 nm o filtro verde (500 a 50), marcando el cero con el blanco. Mezclar y dejar a temperatura ambiente durante 5 minutos. Determinar la absorbancia del test en 510 nm o filtro verde (500 a 50), marcando el cero con el blanco. 1 El procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros cuyo volumen mínimo de solución para lectura es igual o menor que,5 ml. Se debe hacer una verificación de la necesidad de ajuste del volumen para el fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente, sin perjuicio para el desempeño del test y el procedimiento de cálculo se mantiene inalterado. En caso de reducción de los volúmenes, es fundamental que se observe el volumen mínimo necesario para la lectura fotométrica. Volúmenes de la muestra menores que 0,01 ml son críticos en aplicaciones manuales y se deben usar con cautela porque aumentan la imprecisión de la medición. CALCULOS A-A 1 Creatinina (no corregida) =,00 mg/dl Absorbancia del Patrón De acuerdo a las recomendaciones del NKDEP los resultados deben ser reportados con dos cifras decimales para evitar errores sistemáticos provocados por redondeos, que pueden llegar a ±6,0%. Aplicación del índice de corrección La interferencia de las proteínas plasmáticas que se da en la 8 reacción de Jaffe introduce un error constante en la medición, la que es minimizada por la utilización de los índices de corrección (0,5 mg/dl). Los resultados obtenidos con la calibración y corrección son rastreables al método IDMS y siguen las recomendaciones del NKDEP. Creatinina = Creatinina - índice de corrección (corregida) (no corregida) (0,5mg/dL) Ejemplo A1 test = 0,106 Absorbancia del Patrón = 0,6 A test = 0,03 Blanco Test Patrón,0 ml,0 ml,0 ml --- 0,5 ml ,5 ml ,5 ml 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml Acidificante (No. ) 0,1 ml 0,1 ml ----
3 0,106-0,03 Creatinina (no corregida) = x,00 = 0,95 mg/dl 0,6 Debido a la gran reproducibilidad que puede ser obtenida con la metodología, se puede emplear el método del factor. Factor de Calibración =,00 Absorbancia del Patrón Creatinina (no corregida) = (A - A ) x Fator (mg/dl) Ejemplo,00 Factor de Calibración = = 15,15 0,6 Creatinina (orina) = 100 mg/dl Volumen (orina de horas) = 1350 ml Creatinina Urinaria = 100 x = 1350 mg/h mg/kg peso = mg/ horas dividido por el peso corporal. PROCEDIMIENTO CON DESPROTEINIZACION Se deben emplear en muestras ictéricas y turbias. Mezclar 0,5 ml de suero a 1,0 ml de Ácido Pícrico (No. 1), agitar y centrifugar durante 10 minutos. Tomar 3 tubos de ensayo y proceder como expuesto a Mezclar y incubar en baño maría a 37 C durante 10 minutos. El nivel del agua en el baño debe de ser superior al nivel de los reactivos en los tubos de ensayo. Determinar las absorbancias del test y patrón en 510 nm o filtro verde (500 a 50), marcando el cero con el blanco. 1 Creatinina (no corregida) = (0,106-0,03) x 15,15 = 0,95 mg/dl Creatinina (corregida) = 0,95 mg/dl - 0,5 mg/dl= 0,70 mg/dl Creatinina Urinaria Creatinina Urinaria (mg/dl) Creatinina (mg/ h) = x Volumen (ml/ h) Urinaria 100 Tampón (No. ) Sobrenadante Água destilada o desionizada Patrón (No. 3) Ácido Pícrico (No. 1) 1 Blanco Test Patrón,0 ml,0 ml,0 ml --- 0,75 ml ,5 ml ,5 ml 0,5 ml ,5 ml Acidificante (No. ) 0,1 ml 0,1 ml ---- Mezclar y dejar a temperatura ambiente durante 5 minutos. Determinar la absorbancia del test en 510 nm o filtro verde (500 a 50), marcando el cero con el blanco. Utilizar los mismos cálculos propuestos en Procedimiento de Ensayo Directo. NO APLICAR EL ÍNDICE DE CORRECCIÓN. En muestras muy lechosas no es posible obtener sobrenadante claro en el procedimiento con desproteinización. En estos casos no es posible dosificar la creatinina. CALIBRACIÓN El Patrón es trazable al Standard Reference Material (SRM) 91 del National Institute of Standards and Technology (NIST). Calibraciones manuales Obtener el factor de calibración al usar un nuevo lote de reactivos o cuando el control interno de calidad lo indique. DEPURACION DE LACREATININAENDOGENA Instruir al paciente que haga una recogida correcta de la orina de horas. Dosificar la creatinina del suero y de la orina utilizando las metodologías propuestas. Aplicar los resultados obtenidos en la ecuación expuesta a Depuración (ml/minuto) = U S x VM U: creatinina en la orina (mg/dl) S: creatinina en el suero (mg/l) VM: volumen minuto (volumen de la orina de horas, en ml, dividido por 10). OBS.: La depuración deberá ser corregida para la superficie corporal del paciente, que es obtenida a través de nomograma, correlacionando peso y altura o usando la ecuación expuesta a 0,5 0,75 A=P xh x0,00718 A= Superficie corporal (m ) P = Peso (kilos) H =Altura (centímetros) Multiplicar el valor de la depuración por 1,73 y dividir por la superficie corporal del paciente. Ejemplo Creatinina en la orina = 80 mg/dl Creatinina (corregida) en el suero = 0,75 mg/dl Volumen de horas = 150 ml Volumen minuto = 150/10 = 1,055 ml/min Depuración = 80 0,75 Peso=60Kg Altura = 165 cm Superficie corporal = 1,66 m x 1,055 = 11 ml/min
4 11 x 1,73 Depuración (corregida) = = 117 ml/min/1,73 m 1,66 ÍNDICE DE FILTRACIÓN GLOMERULAR El NKDEP recomienda enfáticamente que los laboratorios reporten la estimación del índice de filtración glomerular (egfr en inglés) en todos los informes analíticos que contengan resultados de creatinina. Cuando los resultados de la creatinina plasmática son rastreables al método IDMS y corregidos, se utilizan las siguientes ecuaciones que involucran creatinina (CREA), edad (18 a 70 años) y sexo. Mujeres egfr ( ml/min/1,73 m ) = 175 * (CREA) -1,15 * (Edad) -0,03 *0,7 Hombres egfr ( ml/min/1,73 m ) = 175 * (CREA) * (Edad) -1,15-0,03 De acuerdo a las recomendaciones del NKDEP, el erfg debe ser reportado conforme al valor calculado, cuando el resultado fuera igual o menor a 60 ml/min/1,73m. Cuando el valor calculado fuera mayor a 60, debe ser reportado de la siguiente forma: Mayor a 60 ml/min/1,73m, o bien, >60 ml/min/1,73m. LINEALIDAD El resultado de la medición es lineal entre 0, mg/dl y 1 mg/dl. Para valores mayores, diluir la muestra con NaCl 150 mmol/l (0,85%), realizar nueva medición y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución. Diluir la muestra de tal modo que el valor encontrado se sitúe entre,0 y 6,0 mg/dl. Sugerimos la verificación de la linealidad metodológica y fotométrica, como mínimo semestralmente, utilizando muestras con valores de hasta 1 mg/dl. CONTROL INTERNO DE LACALIDAD El laboratorio debe mantener un programa de control interno de la calidad que defina con claridad los reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados para evaluar la imprecisión e desviaciones de calibración. Se sugiere procurar atender a las especificaciones propuestas por el NKDEP para el coeficiente de variación,0% y error sistemático (bias) ± 5,0%. Se sugiere utilizar los preparaciones estabilizadas de la línea Qualitrol - Labtest para el control interno de la calidad en ensayos de química clínica. INTERVALOS DE REFERENCIA 8-10 Estos intervalos deben ser utilizados sólo como orientativos. Se recomienda que cada laboratorio establezca en la población atendida su propio intervalo de referencia. Suero/Plasma (mg/dl)* Recién-nacido 0,31-0,9 semanas-1año 0,16-0, <3 años 0,17-0, <5 años 0,6-0, 5 - <7 años 0,9-0,8 7 - <9 años 0,3-0, <11 años 0,3-0, <13 años 0, - 0, <15 años 0,6-0,81 Adulto (mujeres) 18-7 años 0,53-1,00 Adulto (hombres) 18-7 años 0,70-1,0 *Intervalos establecidos para resultados corregidos y rastreables al método IDMS. No existe intervalo establecido para edades entre 15 - <18 años. Se sugiere utilizar los intervalos de mujeres e hombres adultos. Conversión de mg/dlpara Unidades SI: mol/l= mg/dlx 88, Orina (mg/kg/ horas) -3años 6- >3 años 1-30 Adulto (mujeres) 16- Adulto (hombres) 1-6 Depuración de Creatinina (ml/minuto/1,73 m )** Niños Adulto (mujeres) Adulto (hombres) **Intervalos establecidos para resultados no corregidos y no rastreables al método IDMS. El NKDEP recomienda calcular el índice de filtración glomerular (egfr) en reemplazo de la Depuración de la Creatinina, utilizando el resultado de la creatinina rastreable al método IDMS después de la aplicación del índice de corrección. CARACTERISTICAS DEL DESEMPEÑO Estudios de Recuperación En dos muestras con concentraciones de creatinina iguales a 1, y 3, mg/dl se añadieron cantidades diferentes del analito obteniéndose recuperaciones de entre 93 y 98%. El error sistemático proporcional medio obtenido en un valor de 3,0 mg/dl fue igual a 0,1 ó 3,7%. 11
5 Estudios de Comparación de Métodos El método Creatinina fue comparado con el método Creatinina K rastreable al método IDMS, obteniéndose los siguientes resultados: Creatinina K Número de muestra 0 Intervalo de concentración (mg/dl) Média de las estimaciones (mg/dl) Ecuación da regresión Coeficiente de correlación Utilizando la ecuación de regresión se hallaron los siguientes errores sistemáticos para el método Creatinina: Níveles de decisión para avaluación de la creatinina (mg/dl) 1,00 1,0,00 Creatinina estimada conlaecuación (mg/dl) 1,003 1,00 1,006 0,5a,17 1,56 Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo Reproducibilidade - Imprecisión total Creatinina N MÉDIA DE CV(%) Muestra 1 0,0 0,0,0 Muestra 0,8 0,0 1,3 N MÉDIA DE CV(%) Muestra 1 0,0 0,05,5 Muestra 0,8 0,06,3 Sensibilidad metodológica Una muestra proteica no conteniendo creatinina fue utilizada para calcular el límite de detección del ensayo habiendo sido encontrado un valor igual a 0,3 mg/dl, equivalente a la media de 0 ensayos más dos desviaciones estándares. Utilizándose la absorbancia del Patrón como parámetro, el límite de detección fotométrica es 0,0 mg/dl, correspondiendo a una absorbancia igual a 0,001. Efectos de la dilución de la matriz Dos muestras con valores iguales a 16,5 e 18,6 mg/dl fueron utilizadas para evaluar la respuesta del sistema en diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/l (0,85%). Usando factores de dilución que variaron de a fueron encontradas recuperaciones de entre 103 y 10 %. 0 0,59a,0 1,56 Creatinina = 1,003*Creatinina K+0,00 0,995 Erros sistemáticos estimados en los niveles de decisión de la creatinina mg/dl % 0,003 0,30 0,00 0,30 0,006 0,30. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Asi, para preparar reactivos y usar en las mediciones, debe tener resistividad 1 megaohm o conductividad 1 microsiemens y concentración de silicatos <0,1 mg/l (agua tipo II). Para el enjuague del material de vidrio el agua puede ser del tipo III, con resistividad 0,1 megaohms o conductividad 10 microsiemens. En el enjuague final utilizar agua tipo II. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad saturada produce agua alcalina con liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que deterioran los reactivos en pocos días ó horas, alternado los resultados de modo imprevisible. Por eso es fundamental establecer un programa de control de calidad del agua. 3. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas de interferencia en los resultados y en la metodología, se sugiere consultar: REFERÊNCIAS 1. Cook JGH. Clin ChimActa 1971;3: Yatzidis H. Clin Chem 197;0: Spencer K.Ann Clin Biochem 1986;3:1-5.. Meyers GL, Miller WG, Coresh J et al. Clin Chem 006;5: Heinegard D, Tiderström G. Clin ChimActa 1973;3: Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular, Base de Datos de Variación Biológica. Disponible en:< (acceso 0/006). 7. Basques JC. Especificações da QualidadeAnalítica. Labtest Diagnóstica Junge W, Wilke B, Halabi A, Klein G. Clin Chim Acta 00;3: Martensson A, Rustad P, Lund H, Ossowicki H. Scand J Clin Lab Invest. 00;6: Ceriotti F, Boyd JC, Klein G et al. Clin Chem 008; 5: Labtest: Datos de archivo. PRESENTACIÓN REF Ácido Pícrico Tampón Patrón Acidificante E-500 1x50mL 1x00mL 1x10mL 1x10mL 1x50mL 1x1000mL 1x30mL 1x50mL OBSERVACIONES 1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y la obtención de resultados correctos.
6 INFORMACIONESAL CONSUMIDOR Términos y Condiciones de Garantía Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto dentro de las especificaciones hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos, siempre que los cuidados de utilización y conservación indicados en los rótulos y en estas instrucciones sean seguidos correctamente. Servicio deapoyo al Cliente sac@labtest.com.br Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, VistaAlegre Lagoa Santa - Minas Gerais - Brasil Revisión: Abril, 00. Ref.: Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reproducción bajo previa autorización
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