1. Baño-maría mantenido a temperatura constante (37ºC). 2. Fotómetro capaz de medir con exactitud la absorbancia entre 540 y 580 nm.

Transcripción

1 IBC Liquiform Instrucciones de Uso Capacidad de fijación de hierro Finalidad. istema bi-reactivo para la determinación de la capacidad de fijación de hierro en muestras de sangre con reacción de punto final. Uso Profesional. [olamente para uso diagnóstico in vitro.] Principio. Los iones férricos contenidos en el Reactivo 1 saturan los sitios disponibles para la unión del hierro de la proteína transportadora transferrina. l exceso de hierro no unido forma con la Ferrozina presente en el Reactivo un complejo magenta brillante cuya absorbancia se mide entre 40 y 80 nm. La diferencia entre esta cantidad de hierro y aquélla contenida en el Reactivo 1 es la Capacidad Latente de Fijación de Hierro (CLFH). Midiendo la concentración de hierro sérico y sumando este valor a la CLFH se obtiene la Capacidad Total de Fijación de Hierro (CTFH). Características del sistema. l sistema de reactivos de Labtest consiste de un ensayo homogéneo directo, que permite la medición de la CLFH. Junto con el valor del hierro sérico, se puede obtener la CTFH y el Índice de aturación de la Transferrina (IT), que son importantes en la evaluación de los disturbios del metabolismo del hierro. l método es muy preciso, presenta especificidad y exactitud adecuadas, siendo trazable al método propuesto por el NCCL para la determinación de la CTFH. Además de eso, el sistema no tiene interferencias significativas por bilirrubina (hasta 0 mg/dl) y por triglicéridos (hasta 1000 mg/dl). l desarrollo del método fue dirigido para la automatización, tornándolo fácilmente aplicable a la mayoría de los analisadores automáticos capaces de medir con exactitud una reacción de punto final entre 40 y 80 nm. l sistema IBC Liquiform también se puede utilizar con éxito en usos manuales usando los fotómetros o los instrumentos semiautomáticos. Metodologia. Labtest-Ferrozina. Reactivos 1. Reactivo Almacenar entre -8ºC. Contiene: Tampón 300 mmol/l, ph 8,4; cloruro férrico 3 mol/l; bicarbonato de sodio 10 mmol/l; azida sódica 7,7 mmol/l y surfactantes.. Reactivo - - Almacenar entre -8ºC. Contiene: Tampón 0 mmol/l, ph 4,0; Ferrozina 10 mmol/l; ácido ascórbico 3,6 mmol/l. Ref.: Concentración en la etiqueta del frasco - Almacenar entre -8ºC. Preparado de suero bovino liofilizado con valor de CLFH trazable al método de referencia del CLI. espués de su uso se sugiere conservarlo bien cerrado para evitar la evaporación. Los reactivos no abiertos, conservados en las condiciones indicadas, son estables hasta la fecha de expiración impresa en el rótulo. urante su manipulación, los reactivos están sujetos a contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden provocar reducción de su estabilidad. Precauciones y cuidados especiales l material de vidrio almacenado puede acumular residuos que conducen a la obtención de resultados falsamente elevados. l material usado en el procedimiento debe estar libre de contaminación con hierro para evitar la obtención de resultados incorretos de CLFH. Los cuidados habituales de seguridad deben se aplicados en la manipulación de los reactivos. No utilizar los reactivos cuando se presenten turbios o con señales de contaminación. l reactivo 1 contiene azida sódica que es tóxica. No ingerir y, en el caso de contacto con los ojos, lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y procurar auxilio médico. La azida puede formar compuestos altamente explosivos con las cañerías de plomo y cobre. Por lo tanto, utilizar grandes volúmenes de agua para descartar los reactivos. Material necesario y no provisto 1. Baño-maría mantenido a temperatura constante (37ºC).. Fotómetro capaz de medir con exactitud la absorbancia entre 40 y 80 nm. 3. Pipetas para medir muestras y reactivos. 4. Cronómetro. Influencias pre-analíticas. Los factores pre-analíticos son hoy la causa más importante de determinaciones incorrectas de capacidad de fijación de hierro. La contaminación puede ocurrir en la toma, en el transporte y en procesamiento de la muestra. studios indican que el 60 % de los errores ocurridos en el ensayo son debidos a errores preanalíticos. 01 spañol - Ref.: 9

2 La muestra debe ser tomada por la mañana tratando de evitar las variaciones diurnas del hierro que pueden producir reducciones de hasta el 30 % en los resultados de hierro sérico, pudiendo interferir en la determinación de la capacidad de fijación de hierro. dad, sexo, período de gestación, uso de anticonceptivos orales y estrógeno alteran las concentraciones de hierro y pueden interferir en la determinación de la capacidad de fijación de hierro. l uso de detergente iónico para la limpieza del material es otra fuente de contaminación con hierro que puede conducir a resultados inconsistentes en la determinación de la capacidad de fijación del hierro. Muestra e debe crear un Procedimiento Operacional stándar (PO) que establezca procedimientos adecuados para la toma, preparación y conservación de la muestra. Resaltamos que los errores debidos a la muestra pueden ser mucho mayores que los errores ocurridos durante el procedimiento analítico. Usar suero obtenido en ayunas. l analito es estable 4 días entre 1-ºC y 6 días entre -8ºC. ejar en reposos durante 30 minutos. Mezclar por inversión suave evitando la formación de espuma. stable días entre -8ºC y 30 días a temperatura igual o menor que 8ºC negativos (congelador de heladera duplex, o freezer) en frasco herméticamente cerrado. Para evitar congelamientos o descongelamientos repetidos, sugerimos fraccionar el en alícuotas de 0, a 1,0 ml y almacenar en recipiente apropiado antes de congelar. Procedimiento Ver Observaciones 1, e 3. l material usado en el procedimiento debe estar libre de contaminación con hierro para evitar la obtención de resultados incorretos de CLFH. l agua desionizada debe tener una resistividad 1 megaohm.cm o una conductividad 1 microsiemens/cm y concentración de silicatos <0,1 mg/l. ste procedimiento no si aplica a analisadores semi-automáticos que utilizan únicamente cubeta de flujo. stán disponibles aplicaciones para sistemas automáticos. Como ningún ensayo conocido puede asegurar que muestras de sangre no transmitan infecciones, todas ellas deben ser consideradas como potencialmente infecciosas. Por lo tanto, al manipularlas se deben seguir las normas establecidas para bioseguridad. Para descartar los reactivos y el material biológico sugerimos aplicar las normas locales, regionales o federales de protección ambiental. Tomar 3 cubetas del fotómetro y proceder como sigue: Reactivo 1 uero Agua desionizada Blanco 0,7 ml 0,1 ml Test 0,7 ml 0,1 ml 0,7 ml 0,1 ml Interferencias Concentraciones de bilirrubina (Conjugada o No Conjugada) de hasta 0 mg/dl, triglicéridos hasta 1000 mg/dl y hemoglobina hasta 00 mg/dl no producen interferencias significativas. l uso de muestras con heparina o de pacientes sometidos al procedimiento de hemodiálisis no presenta interferencia significativa en la determinación de la capacidad de fijación de hierro con el sistema Labtest. Para evaluar la concentración aproximada de la hemoglobina en una muestra hemolisada se puede proceder como expuesto a continuación: iluir 0,0 ml de la muestra en,0 ml de NaCL 10 mmol/l (0,8 %) y medir la absorbancia en 40 ó 41 nm, ajustando el cero con agua desionizada o destilada. Hemoglobina (mg/dl) Absorbancia x Hemoglobina (mg/dl) Absorbancia41 x 467 Preparación de los reactivos Reactivo 1 y Reactivo : Listos para su uso. : Utilizando una pipeta volumétrica, añadir 3,0 ml de agua calidad reactivo al contenido del frasco del. Mezclar e incubar a baño-maría a 37ºC durante minutos. eterminar la absorbancia de Blanco, Test y a 60 nm (40 a 80 nm), ajustando a cero con agua desionizada. e obtiene así la absorbancia A. 1 Reactivo Blanco 0, ml Test 0, ml 0, ml Mezclar e incubar a baño-maría a 37ºC durante minutos. l nivel del agua en el baño debe ser superior al nivel de los reactivos en los tubos de ensayo. eterminar las absorbancias de Blanco, Test y a 60 nm (40 a 80 nm), ajustando a cero con agua desionizada. e obtiene así la absorbancia A. l color es estable por 30 minutos. l procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros cuyo volumen mínimo de solución para la lectura es igual o menor que 0,8 ml. e debe hacer una verificación de la necesidad de ajuste del volumen en el fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente sin perjuicio para el desempeño del test, y el procedimiento se mantiene inalterado. n caso de reducción de los volúmenes es fundamental que se observe el volumen mínimo necesario para la lectura fotométrica. Volúmenes de muestra menores que 0,01 ml son críticos en aplicaciones manuales y deben usarse con cautela porque aumentan la imprecisión de la medición. 0 spañol - Ref.: 9

3 Cálculos. Ver Linealidad. La primera lectura de la absorbancia (A ) del Test, y Blanco 1 deben ser corregidas al volumen final de la reacción obteniéndose A 1cor antes de realizar el cálculo de la CLFH. A =A x 0,809 1cor 1 Para obtener las absorbancias del Test y del, hacer la corrección con las lecturas del blanco del reactivo: Absorbancia del Test = Blanco (A - A ) - Test (A - A ) 1cor 1cor Absorbancia del = Blanco (A - A 1cor) - (A - A 1cor) Absorbancia del Test CLFH ( g/dl) = x CCal Absorbancia del CCal: Concentración del jemplo Blanco: A 1 = 0,003 A 1cor = 0,003 x 0,809 = 0,00 A = 0,71 Test: A = 0,037 A = 0,037 x 0,809 = 0, cor A = 0,668 Abs. del Test: (0,71-0,00) - (0,668-0,030) = 0,07 CCal: 9 g/dl A = 0,030 A = 0,030 x 0,809 = 0,04 1 1cor A = 0,61 Abs. del : (0,71-0,00) - (0,61-0,04) = 0,119 0,07 CLFH ( g/dl) = x 9 = 17 0,119 ebido a la gran reproducibilidad que se puede obtener con la metodología, es posible utilizar el método del factor. FACTOR = Ccal Absorbancia del CLFH ( g/dl) = Absorbancia del Test x Factor jemplo 9 Factor = = 176 0,119 CLFH ( g/dl) = 0,07 x 176 = 17 CTFH ( g/dl) = Hierro érico + CLFH Hierro érico IT (%) = x 100 CTFH Transferrina (mg/dl) = CTFH x 0,70 Calibración. La concentración del es trazable al método de referencia del CLI. Calibraciones manuales Obtener el factor de calibración al usar un nuevo lote de reactivos o cuando el control interno de calidad lo indique. istemas automáticos Blanco de reactivos: agua desionizada. Patrones: usar calibradores proteicos. Intervalo de calibraciones Calibración de o 3 puntos al cambiar de lote; Calibración de o 3 puntos cuando el control interno de calidad lo indique. Linealidad l resultado de la medición es lineal hasta 00 g/dl. Para valores mayores de CLFH, diluir la muestra con agua desionizada, realizar una nueva medición y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución. Control interno de la calidad. l laboratorio debe mantener un programa de control interno de calidad que defina con claridad los reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados para evaluar la imprecisión e desviaciones de calibración. e sugiere que las especificaciones para el coeficiente de variación máximo y el error 6,7 total sean basados en los componentes de la variación biológica (VB). Intervalo de referencia. stos valores deben ser usados solo como orientación. e recomienda que cada laboratório establezca en lá población atendida, su propio intervalo de valores de referencia. Capacidad de Fijación de Hierro ( g/dl) CLFH: Adultos: 140 a 80 g/dl CTFH: 8,9 Niños : 10 a 400 g/dl Adultos: 0 a 40 g/dl IT: 0 a 0% Transferrina: 00 a 300 mg/dl Conversión: Unidades Convencionales ( g/dl) x 0,179= Unidades I ( mol/l). 03 spañol - Ref.: 9

4 Características de desempeño 10 xactitud. La exactitud del método fue demostrada en un estudio de recuperación utilizando muestras con valores de CLFH iguales a 19 y 418 g/dl, obteniéndose recuperaciones de entre 101 y 104 %. l error sistemático proporcional medio fue igual a 1,48 % y 4,34 % en concentraciones de 0 y 410 g/dl, respectivamente. specificidad. l método propuesto fue comparado con el método de referencia del CLI utilizando 80 muestras con valores situados entre 4 y 437 g/dl. La comparación resultó en una ecuación de regresión: y = 0,971 x + 4,980 con un coeficiente de correlación (r) igual a 0,9917. l error sistemático total (constante y proporcional) fue igual a,7 % y 8,4 % en concentraciones 0 y 410 g/dl, respectivamente, mostrando una correlación positiva entre los dos métodos. Repetitividad - imprecisión intra-ensayo Muestra 1 Muestra N 0 0 Media 389 Reproducibilidad - imprecisión total Muestra 1 Muestra N 0 0 Media 389 4,70,89 6,36 7,09 CV (%),34 0,7 CV (%) 3,06,06 ensibilidad metodológica. Una muestra proteica sin contenido de transferrina fue utilizada para calcular el límite de detección del ensayo, habiéndose encontrado un valor igual a,67 g/dl, equivalente al promedio de 0 ensayos más dos desviaciones estándar. Finalmente, el aumento de la demanda es característico del embarazo y de los niños en los primeros años de vida. Menstruación abundante, hemorragias gastro-intestinales, hemorroides, carcinoma de colon y parasitosis son causas comunes de la deficiencia de hierro por pérdida sanguínea en el adulto. Transfusiones repetidas, idiopática hemocromatosis, cirrosis, talasemia y anemia sideroblástica son las causas más comunes de aumento de hierro. La tabla a continuación muestra el comportamiento del hierro sérico, la capacidad total de fijación de hierro (CTFH), índice de saturación de la transferrina (IT) y la Reserva de hierro medular (RH), evaluada por la coloración específica del frotis de la médula ósea, en diversas situaciones relacionadas con la alteración del metabolismo del hierro. eficiencia de Hierro Infecciones Crónicas nfermedades malignas Atransferrinemia Período menstrual mbarazo (3º trimestre) Hemosiderosis pulmonar Nefrosis Kwashiokor Anticonceptivos orales Intoxicación por hierro Anemia hemolítica Hemocromatosis eficiencia de Piridoxina Anemia sideroblástica Talasemia Mayor Hierro érico / Alteraciones CTFH IT RH / / / A A Utilizándose la absorbancia del patrón como parámetro, se verificó que el límite de detección fotométrica es de,3 g/dl, correspondiendo a una absorbancia igual a 0,001. = disminuido = sin alteración = elevado A = ausente fectos de la dilución de la matriz. os muestras con valores iguales a 434 e 13 g/dl fueron utilizadas para evaluar la respuesta del sistema en las diluciones de la matriz con agua desionizada. Usando factores de dilución que variaron de a 8 fueron encontradas recuperaciones de entre 100 y 101 %. ignificado clínico. l hierro es esencial para la mayoría de los organismos vivos, pues participa de numerosos procesos vitales, dede los procesos oxidativos celulares hasta el transporte de oxígeno hacia los tejidos. La hemostasia del hierro está regulada principalmente por la absorción y no por la excreción. l hierro es transportado en la sangre por una proteína, la transferrina, y almacenado en los tejidos unido a otra proteína llamada ferritina. La deficiencia de hierro es consecuencia del aporte insuficiente, aumento de demanda, pérdida sanguíneao la combinación de estos fatores. l suplemento inadecuado es característico de los niños alimentados exclusivamente con leche. Observaciones 1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y la obtención de resultados correctos.. l laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa potencial de errores analíticos. l agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así, para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad 1 megaohm.cm o conductividad 1 microsiemens/cm y concentración de silicatos <0,1 mg/l. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer un programa de control de la calidad del agua. 04 spañol - Ref.: 9

5 3. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas de interferencia en los resultados y en la metodología, se sugiere consultar: Presentación Producto Referencia Contenido Referencias IBC Liquiform 9-/6C 1 X 0 ml X 1 ml 1. Goodwin J, Murphy B, Guillemette M. Clin Chem 1966; 1:47.. Henry RJ, Cannon C, Winkelman JW. Clinical Chemistry, Principles and Technics, nd ed. New York, Harper & Row, IBC Liquiform Labmax 60/400 9-/3 1 1 X 3 ml X 6 ml X 9 ml 1 X 3 ml 3. tookey L. Anal Chem 1970;4: Tonks B. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott Laboratories, iagnostic Reagents ivision, carborough, Canada, NCCL, etermination of erum Iron, Total Iron-Binding Capacity and Percent Transferrin aturation; Approved tandard, NCCL document H17-A, Vol 19 No. 19, Westgard J O, Barry PL, Hunt MR. Clin Chem 1981;7: ociedad spañola de Bioquímica Clínica y Patología Molecular, Base de atos de Variación Biológica. isponible en:< (acceso en 04/006). 8. Burtis CA, Ashwood R. Textbook of Clinical Chemistry, a. edição, Philadelphia: W.B. aunders, 1986: stán disponibles aplicaciones para sistemas automáticos. l numero de tests en aplicaciones automáticas depende de los parámetros de programacíon. Algunas presentaciones pueden estar disponibles solamente mediante consulta. Informaciones al consumidor [Términos y Condiciones de Garantía] Labtest iagnóstica garantiza el desempeño de este producto dentro de las especificaciones hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos, siempre que los cuidados de utilización y conservación indicados en los rótulos y en estas instrucciones sean seguidos correctamente. 9. oldin J, Brugnara C, Wong C: Pediatric Reference Intervals, a. edição, Washington. 10. Labtest: atos de Archivo. Labtest iagnóstica.a. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CP Lagoa anta. Minas Gerais Brasil - Customer ervice customerservice@labtest.com.br Revisión: Agosto, 013 Ref.: Copyright by Labtest iagnóstica.a. Reproducción bajo previa autorización 0 spañol - Ref.: 9

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