1. Reactivo - de Color - Conservar entre 2-8 ºC. 2. Estándar - - 5,0 mg/dl - Conservar entre 2-8 ºC. FOSFORO UV Liquiform Instrucciones de Uso

Transcripción

1 FOSFORO UV Liquiform Instrucciones de Uso Ref.:12 Finalidad. Sistema para la determinación del Fósforo inorgánico por fotometría en ultravioleta, con reacción de punto final. Uso profesional. [Solamente para uso diagnóstico in vitro.] Principio. El Fósforo inorgánico reacciona con el molibdato de amonio en presencia de ácido sulfúrico, resultando la formación de un complejo fosfomolíbdico no reducido. La absorbancia a 340 nm del complejo formado es proporcional a la concentración de fósforo en la muestra. Fósforo inorgánico + H SO + Molibdato de Amonio 2 4 Complejo Fosfomolibdato no reducido Caracteristicas del sistema. El método directo para la determinación del fósforo inorgánico en el suero y la orina desarrollado por Daly y Ertinghausen y modificado por Labtest, supone un avance metodológico eficiente y confiable. El sistema es compuesto de un reactivo único listo para uso, con estabilidad que garantiza el desempeño consistente en su forma liquida original y mantenimiento de las condiciones óptimas de la reacción. Se utilizan solamente 0,01 ml de muestra y el sistema permite la obtención de resultados en tan sólo 5 minutos, por el método manual. Los datos de repetitividad y de la reproducibilidad demuestran que el sistema Fosforo UV Liquiform posee una robustez extremamente deseable y valiosa para un sistema analítico. El método es fácilmente aplicable en analizadores automáticos capaces de medir una reacción de punto final a 340 nm. Metodologia. Daly y Ertingshausen modificado. Reactivos 1. Reactivo - de Color - Conservar entre 2-8 ºC. Contiene ácido sulfúrico 600 mmol/l; molibdato de amonio 2,0 mmol/l; y surfactante. 2. Estándar - - 5,0 mg/dl - Conservar entre 2-8 ºC. Los reactivos no abiertos, conservados en las condiciones especificadas, son estables hasta la fecha de expiración impresa en su rótulo. Durante el manipuleo, los reactivos están sujetos a contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden provocar disminución de la estabilidad. Precauciones y cuidados especiales Se deben aplicar los cuidados habituales de seguridad en la manipulación de los Reactivos. El Reactivo de Color es cáustico y puede producir quemaduras. En caso de contacto con los ojos y piel, se debe lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y buscar auxilio médico. Se deben utilizar los equipos de protección adecuados para el manejo de reactivos cáusticos. La vidriería debe ser adecuadamente lavada y enjuagada porque el fósforo inorgánico es un componente común de la mayoría de los detergentes. Un fuerte indicio de deterioro se indica por una absorbancia mayor a 1,500 cuando el Reactivo de Color es medido a 340 nm contra agua destilada. Materiales necesarios y no suministrados 1. Fotómetro capaz de medir con exactitud la absorbancia a 340 nm; 2. Pipetas para dispensar muestras y reactivos; 3. Baño-Maria o incubador para mantener temperatura constante a 37 ºC. 4. Cronómetro. Muestra Cada laboratorio debe crear un Procedimiento Operacional Estándar (POE) que establezca procedimientos adecuados para la toma, preparación y almacenamiento de las muestras. Destacamos que los errores debidos a la muestra pueden ser mayores que los errores ocurridos durante el procedimiento analítico. Como la ingestión de glucosa reduce el valor del fósforo inorgánico, se debe obtener la muestra de sangre después de un ayuno de 8 horas. Se puede utilizar suero, plasma (heparina) y orina. Plasmas citratados, oxalatados, fluorados o con EDTA dan resultados falsamente disminuidos. La concentración del fósforo en suero o plasma es estable por 2 días entre ºC, por 1 semana entre 2-8ºCypor3semanas cuando congelado. En orinas acidificadas con HCl, el fósforo es estable hasta 6 meses entre 2-8ºC. El fósforo inorgánico en muestras de sangre total puede aumentar o disminuir con el tiempo dependiendo del tipo de muestra, temperatura, y duración de almacenamiento. Valores en el plasma o en el suero aumentan debido al contacto prolongado con las células a temperatura ambiente o a 37 º C. 01 Español - Ref.: 12

2 Es importante separar suero o plasma hasta una hora después de la recogida. Cuando el contacto del suero o plasma con los hematíes es prologado, se libera fósforo del interior de los mismos, aumentando así su concentración. Separar el suero o plasma hasta 1 hora después de la toma de muestra. Muestras hemolisadas producen resultados falsamente elevados debido a la contaminación del plasma o suero con el fósforo de los hematíes. Esta interferencia no se corrige utilizando el Blanco de Muestra, ya que no es solamente una interferencia fotométrica. La orina debe recogerse en un frasco conteniendo ml de HCl 6 M (50% v/v) y centrifugarse antes de su uso. Durante la recolección la muestra debe ser bien homogeneizada para evitar la precipitación de complejos de fosfato. Como ningún test conocido puede assegurar que muestras de sangre no transmiten infecciones, todas ellas deben ser consideradas como potencialmente infectivas. Así siendo, deberán ser manipuladas siguiendo las normativas establecidas para biosseguridad. Para deshacerse de los reactivos y del material biológico sugerimos aplicar las normativas locales, regionales o nacionales de protección ambiental. Interferencias Muestras con concentraciones de bilirrubina por encima de 4 mg/dl y triglicéridos por encima de 400 mg/dl, producen resultados falsamente elevados. La acción de estos interferentes puede ser mitigada con el uso del Blanco de muestra, que es aplicable para valores de bilirrubina hasta 32 mg/dl y triglicéridos hasta 900 mg/dl. Blanco de muestra. Mezclar 1,0 ml de NaCl (0,85%) con 0,01 ml de la muestra. Medir la absorbancia a 340 nm, ajustando el cero con agua destilada o desionizada. Restar la absorbancia obtenida de esa manera de la absorbancia de la prueba y calcular la concentración. Este sistema de corrección sólo se puede aplicar en los casos en que la muestra produce una interferencia fotométrica. Procedimiento Dosaje de la orina. Cuando la muestra de 24 horas no fuera acidificada durante su recolección, adicionar ml de HCl 6 M, mezclar, esperar 60 minutos y tomar una alícuota para el ensayo. La muestra previamente acidificada debe ser bien mezclada y diluida 1:10 (0,1 ml de muestra + 0,9 ml de agua desionizada) antes de la utilización. Multiplicar el resultado obtenido por 10. Disponer de 3 tubos de ensayo y proceder como se detalla: Muestra (suero o orina) Estándar Reactivo de Color Blanco Prueba 0,01 ml 1,0 ml 1,0 ml Estándar 0,01 ml 1,0 ml Mezclar e incubar en baño de agua a 37 ºC durante 5 minutos. Medir las absorbancias de la Prueba y del Estándar a 340 nm, ajustando el cero con el Blanco. La absorbancia es estable por 30 minutos. El procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros cuyo volumen mínimo de lectura es igual o mayor que 1,0 ml. Se debe hacer una verificación de la necesidad de ajuste del volumen para el fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente, sin perjuicio para el desempeño de la prueba, manteniéndose inalterado el procedimiento de cálculo. En caso de reducción de los volúmenes, es fundamental que se observe el volumen mínimo necesario para la lectura fotométrica. Volúmenes de la muestra menores a 0,01 ml son críticos en aplicaciones manuales y se deben utilizar con cautela porque aumentan la imprecisión de la medición. Calculos Abs de la Prueba Fósforo (mg/dl) = x 5,0 Abs del Estándar Ejemplo Abs de la Prueba = 0,190 Abs del Estándar = 0,247 0,190 Fósforo (mg/dl) = x 5,0 = 3,8 0,247 Orina (mg/24 horas) = mg/dl x Vol. Urinario (ml) 100 Debido a la gran reproducibilidad que puede ser obtenida con la metodología, se puede utilizar el método del factor: Factor de calibración = 5,0 Factor = =,2 0,247 5,0 Absorbancia del Estándar Fósforo (mg/dl) = Abs. de la Prueba x Factor = 0,190 x,2 = 3,8 Calibración. El Estándar es trazable al Standard Reference Material (SRM) 186 I del National Institute of Standards and Technology (NIST). Calibraciones manuales Obtener el factor de calibración al usar nuevo lote de reactivos o cuando el control interno de la calidad indicar. 02 Español - Ref.: 12

3 Sistemas automáticos Branco de reactivos: água o solución de cloreto de sódio 150 mmol/l (0,85%); Estándar: usar calibradores proteicos. Las concentraciones de fósforo en los productos de la línea Calibra de Labtest son trazables al SRM 186 I del NIST. Intervalo de calibraciones: Calibración de 2 o 3 puntos al cambiar de lote; Calibración de 2 o 3 puntos cuando el control interno de la calidad indicar. Linealidad El resultado de la medición es lineal hasta mg/dl. Para valores más altos, diluir la muestra con NaCl 0,85% realizar una nueva medición y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución. Diluir la muestra de modo tal que el valor encontrado se sitúe entre 4,0 y 8,0 mg/dl. Se sugiere la verificación de la linealidad metodológica y fotométrica como mínimo semestralmente, utilizando muestras con valores de hasta,0 mg/dl. Control interno de la calidad. El laboratorio debe mantener un programa de control interno de calidad que defina con claridad los reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados para evaluar la imprecisión e desviaciones de calibración. Se sugiere que las especificaciones para el coeficiente de variación máximo y el error 8,9 total sean basados en los componentes de la variación biológica (VB). Se sugiere utilizar las preparaciones estabilizadas de la línea Qualitrol de Labtest para el control interno de la calidad en ensayos del laboratorio clínico. 9 Intervalo de referencia. Estos valores deben ser utilizados únicamente a modo de orientación. Se recomienda que cada laboratorio estabelezca, en la población atendida, su propia banda de valores de referencia. Suero (mg/dl) Niños Adultos Orina: 400 a 1300 mg/24 horas. La excreción de fosfato urinário cambia con la edad, masa muscular, dieta, función renal, concentración de paratohormona y hora del dia. Conversión: Unidades Convencionales (mg/dl) x 0,323 = Unidades SI (mmol/l). Características del desempeño 7 4,0 a 7,0 2,5 a 4,5 Exactitud. En dos muestras con concentraciones de fósforo inorgánico en los niveles de decisión, se añadieron cantidades diferentes de analitos, obteniéndose recuperaciones de entre el 96 y el 106%. El error sistemático proporcional medio, obtenido en un valor de 4,0 mg/dl, fue igual a 0,04 mg/dl ó 1,0%. Especificidad. El método propuesto fue comparado con un método similar, utilizando 40 muestras con valores situados entre 2,5 y 10,0 mg/dl. La comparación resultó en la ecuación de regresión y = 1,013x - 0,135 con un coeficiente de correlación r = 0,995. El error sistemático total (constante y proporcional) verificado en el nivel de decisión (5,0 mg/dl) fue igual a 0,0 mg/dl ó 4,0 %. Como las muestras fueron seleccionadas aleatoriamente en pacientes ambulatorios y paciente hospitalizados, se puede inferir que el método tiene una especificidad metodológica adecuada. Repetitividad - imprecisión intra-ensayo Muestra 1 Muestra 2 N Valor Medio 3,0 7,7 Reproducibilidad - imprecisión total Muestra 1 Muestra 2 N Valor Medio 3,2 7,7 DE 0,06 0,12 DE 0,15 0,16 CV (%) 2,1 1,6 CV (%) 4,7 2,1 Sensibilidad metodológica. Una muestra proteica que no contenía fósforo inorgánico fue utilizada para calcular el límite de detección del ensayo, habiendo sido encontrado un valor igual a 0,14 mg/dl, equivalente a la media de ensayos más dos desviaciones estándar. Utilizándose la absorbancia del Patrón como parámetro, se verificó que el límite de detección fotométrica es 0,02 mg/dl, correspondiendo a una absorbancia igual a 0,001. Efectos de la dilución de la matriz. Dos muestras con valores iguales a 11 y 15 mg/dl fueron utilizadas para evaluar la respuesta del sistema en las diluciones de la matriz con solución fisiológica. Usando factores de dilución que variaron de 2 a 8, se hallaron recuperaciones del 93 al 100%. Significado clinico. Aunque la insuficiencia renal crónica y el hipoparatiroidismo sean las dos causas más comunes de hiperfosfatemia, varias condiciones pueden causar hiperfosfatemia transitoria y asintomática. Como el músculo contiene mucho fosfato, es evidente que la rabdomiólisis produce hiperfosfatemia grave. Otras condiciones que promueven la liberación del fosfato intracelular y conllevan a la hiperfosfatemia incluyen la hipertermia maligna y la quimioterapia antiblástica. La hiperfosfatemia puede ocurrir después de la administración repetida de enemas de retención o laxantes conteniendo fosfato. Niveles disminuidos de fósforo se encuentran en el hiperparatiroidismo, en la intoxicación por plomo y en la alimentación parenteral. La excreción urinaria varía con la dieta y es esencialmente equivalente a la ingesta dietética. 03 Español - Ref.: 12

4 Observaciones: 1. La limpieza y secado del material utilizado son factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de resultados correctos. 2. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada a cada aplicación. Así siendo, para preparar reactivos y usarla en las mediciones, debe tener resistividad 1 megaohm.cm o conductividad 1 microsiemens/cm y concentración de silicatos <0.1 mg/l (agua tipo II). Para el enjuague del material de vidrio, el agua puede ser del tipo III, con resistividad 0.1 megaohms o conductividad 10 microsiemens. En el enjuague final utilizar agua tipo II. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad saturada ocurre la producción de agua alcalina con liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los resultados de modo imprevisible. Por ello, es fundamental establecer un programa de control de la calidad del agua. 3. El uso de detergente iónico para la limpieza del material puede ser una fuente de contaminación con iones fosfato. 4. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas de interferencia en los resultados y en la metodología se sugiere consultar: < Referencias 1. Balon M, Fernández C, Muñoz MA.: Direct Determination of Inorganic Phosphorus in Serum with a Single Reagent. Clin Chem 1983; 29: Daly JA, Ertingshausen G.: Direct method for determining phosphate in serum with the "Centrifichem". Clin Chem 1972; 18: Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest Diagnóstica 05. Presentación Producto Fosforo UV Liquiform Fosforo UV Liquiform Labmax 560/400 Referencia /23 El número de tests en aplicaciones para sistemas automáticos depende de los parámetros de programación. Informaciones al consumidor [Términos y Condiciones de Garantía] Contenido 2 X 100 ml 1 X 5,0 ml 4 X 100 ml 1 X 5,0 ml 4 X 23 ml 1 X 5,0 ml Labtest garantiza la correcta performance del equipo hasta su fecha de vencimento si há sido conservado de acuerdo a las instrucciones que figuram em el rótulo. Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Customer Service customerservice@labtest.com.br Inmetro: Boas Práticas de Laboratório Clínico e Listas de Verificacao para Avaliacao, Qualitymarks eds, Rio de Janeiro, Revisión: Septiembre, 12 Ref.: Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reproducción bajo previa autorización 4. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott Laboratories, Diagnostics Reagents Division, Scarborough, Canadá, Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T: Clin Chem 1981; 27: Young DS, Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests. AACC Press, Washington, Labtest: Datos de Archivo. 8. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular, Base de Datos de Variación Biológica. Disponível em:< (acceso en 04/06). 9. Burtis CA, Ashwood ER. Textbook of Clinical Chemistry, 4ª. Edição, Philadelphia: W.B. Saunders, 06: Español - Ref.: 12

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6 06 Español - Ref.: 12