Determinación del estado físico y carga viral de vph-16 en cáncer cervicouterino y lecciones precursoras en mujeres guerrerenses.

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1 Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 1, Septiembre er. Encuentro de Jóvenes en la Investigación de Bachillerato-CONACYT Acapulco, Guerrero de Septiembre 2016 Memorias Determinación del estado físico y carga viral de vph-16 en cáncer cervicouterino y lecciones precursoras en mujeres guerrerenses. Laura Chávez Chávez (Becaria) chavezchavezlaurafabiel@hotmail.com Unidad Académica Preparatoria No. 15 emperador Cuauhtémoc, Universidad Autónoma de Guerrero. Dr. Marco Antonio Leyva Vázquez (Asesor) leyvamarco13@gmail.com Unidad Académica de Ciencias Químico Biológico, Universidad Autónoma de Guerrero. Introducción Cáncer cervicouterino El cáncer cervicouterino (CaCU) es una de las neoplasias malignas de mayor incidencia y mortalidad en mujeres a nivel mundial, generalmente surge en la zona unión escamo-columnar del epitelio cervical (Warren et al., 2009). Factores asociados a (CaCU) Se ha descrito que a nivel mundial hay una gran cantidad de factores asociado al CaCU tales como. Inicio temprano de la actividad sexual en 692 enfermas equivalente a un 57%, Multiparidad en 772 (63%) y el no realizarse estudio citológicos ( El Virus del Papiloma Humano Es la infección de transmisión sexual más frecuente en el mundo y el principal agente causal del cáncer cérvico-uterino, encontrándose en 99,7% de los casos al género Papillomavirus, 555

2 Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 1, 2016 son un grupo de virus de ADN de doble banda que pertenecen a la familia Papovaviridae, no poseen envoltura, y tienen un diámetro aproximado de nm (Schiffman et al., 2007). Clasificación del Virus del Papiloma Humano Se han descrito 40 tipos diferentes de VPH, agrupados en VPH de bajo riesgo (BR) que incluyen los tipos 6, 11, 42, 43 y 44, y alto riesgo (AR) oncogénico. De ellos, los más importantes son los tipos 6 y 11, que producen verrugas genitales tanto en hombres Como en mujeres ya que producen verrugas genitales. Los VPH de AR son los tipos 16, 18,31, 33, 34, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 y 70 (Bernard, 2005). El genoma del VPH, lo conforman dos tipos de genes, aquellos que son codificados en las etapas tempranas de la infección, conocidos como genes E (del inglés Early = temprano), y aquellos que son codificados durante las etapas tardías del ciclo replicativo del mismo, conocidos como L (del inglés Late = tardío) (Hart et al., 2001). Su contenido genético posee un ADN circular de doble hebra con pares de bases, que se encuentra asociado con histonas formando un complejo similar a la cromatina (Ault, 2006). Estado físico del Virus del Papiloma Humano El estado físico viral de VPH para los tipos 16 ocurre desde estadios tempranos de la patología como neoplasia intraepitelial cervical I e incluso en diagnóstico histopatológico negativo, para este tipo viral 16 se encontraron rupturas en el gen E1 solo y en la región de unión de los genes E1 y E2, El sitio más frecuente de integración de VPH16 fue en el gen E1 (nt a 2.609), seguido por el rompimiento en la región de unión entre los genes E1 y E2 (nt a 3.246) (Damay et al., 2009). Carga viral del Virus del Papiloma Humano Se concluye que la carga viral de VPH puede utilizarse como un indicador del riesgo de progresión de la enfermedad cervical y desarrollo de cánceres en las mujeres que viven con VIH, también la carga viral significativamente más alta de VPH es detectada en las mujeres con displasia de grado elevado, y el espectacular descenso de la carga viral tras la extracción quirúrgica de la lesión sugieren que la carga viral del VPH es un posible indicador de la posible aparición de lesiones intraepiteliales escamosas de grado elevado (Lillo et al., 2005). Se han realizado múltiples estudios en donde se observa que la carga viral aumenta, a medida que incrementa el grado de la lesión cervical, se encontró una alta carga viral de LEIBG 556

3 Memorias del 3 er Encuentro de Jóvenes en la Investigación de Bachillerato-CONACYT Acapulco, Guerrero de Septiembre 2016 en comparación con LEIAG, esto podría deberse a que la mayoría de las mujeres con LEIBG tenían infección con el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) (Damay et al., 2009). Objetivos General Determinar el estado físico y carga viral de VPH-16 en muestras de citología normal y cáncer cervicouterino Específicos Identificar el estado físico de VPH 16 en muestras de citología normal y cáncer Establecer el promedio de la carga viral en cada uno de los grupos en estudio Asociar el estado físico del VPH-16 con la carga viral en cada una de las muestras Metodología a) Tipo de estudio Se realizó un estudio de Tipo transversal analítico b) Poblacion de estudio La poblacion de estudió bases fueron muestras de mujeres del estado de guerrero sin lesión, con LEIBG y CACU, almacenada en el Biobanco de DNA del Laboratorio de Medicina Molecular de la Unidad Académica de Ciencias Químicas Biológicas de la UAGro. c) Tamaño de la muestra Se procesaron 10 muestras 5 muestras de citología normal con infección por VHP -16 y 5 muestras con cáncer cervicouterino con infección por VPH -16 d) Tipo de muestreo Por conveniencia e) Criterios de selección Criterios de inclusión: muestras con diagnóstico cito e histopatológico y positivas a una infección por VPH 16. Criterios de exclusión: muestras con diagnóstico cito e histopatológico o muestras de mujeres que no radicaban en el estado de guerrero. Criterios de eliminación: muestras mal conservadas o con DNA insuficiente y muestras de PCR negativas a E6 de VPH

4 f) Variables Variables dependientes: tipos de lesión Variables independientes: estado físico, carga viral Resultados Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 1, 2016 Se procesaron un total de 25 muestras, 2 con diagnostico citológico sin lesión, 18 con lesión escamosa intraepitelial de bajo grado, 3 con lesión escamosa intraepitelial de alto grado y 2 muestras con diagnóstico de cáncer; después de realizar la identificación del estado físico, se obtuvieron las siguientes frecuencias: encontrando 14 integrados, 10 mixtos y 1 episomal (tabla 1). Tabla1: Número de copias virales por diagnostico citológico DX citológico Estado físico Copias por célula Episomal mixto integrado CN 1 (50) 1 (50) 0(0) 4,77875 LEIBG 0 (0) 8(45) 10(55) 23, LEIAG 0(0) 1(33) 2(67) 0,1539 Cáncer 0(0) 0(0) 2(100) 354,66965 Grafica1: Estado físico encontrados en diferentes DX citológico. Grafica 2: Representación de la carga viral por grupo de lesión 558

5 Memorias del 3 er Encuentro de Jóvenes en la Investigación de Bachillerato-CONACYT Acapulco, Guerrero de Septiembre Data CN LEIBG LEIAG Cáncer Conclusiones El estado físico más frecuente fue el integrado, esto debido a la utilización de dos sondas para E2, lo que le confiere mayor sensibilidad a la técnica. El grupo de cáncer presenta una mayor carga viral en relación al resto de muestras analizadas. Referencias bibliográficas WARREN, J. B., GULLETT, H. & KING, V. J. (2009) Cervical cancer screening and updated Pap guidelines. Prim Care, 36, , ix. SCHIFFMAN, M., CASTLE, P. E., JERONIMO, J., RODRIGUEZ, A. C. & WACHOLDER, S. (2007) Human papillomavirus and cervical cancer. Lancet, 370, BERNARD, H. U. (2005) The clinical importance of the nomenclature, evolution and taxonomy of human papillomaviruses. J Clin Virol, 32 Suppl 1, S1-6. HART, K. W., WILLIAMS, O. M., THELWELL, N., FIANDER, A. N., BROWN, T., BORYSIEWICZ, L. K. & GELDER, C. M. (2001) Novel method for detection, typing, and quantification of human papillomaviruses in clinical samples. J Clin Microbiol, 39, AULT, K. A. (2006) Epidemiology and natural history of human papillomavirus infections in the female genital tract. Infect Dis Obstet Gynecol, 2006 Suppl,

6 Tlamati Sabiduría Volumen 7 Número Especial 1, 2016 DAMAY, A., DIDELOT-ROUSSEAU, M. N., COSTES, V., KONATE, I., OUEDRAOGO, A., NAGOT, N., FOULONGNE, V., VAN DE PERRE, P., MAYAUD, P. & SEGONDY, M. (2009) Viral load and physical status of human papillomavirus (HPV) 18 in cervical samples from female sex LILLO, F. B., LODINI, S., FERRARI, D., STAYTON, C., TACCAGNI, G., GALLI, L., LAZZARIN, A. & UBERTI-FOPPA, C. (2005) Determination of human papillomavirus (HPV) load and type in high-grade cervical lesions surgically resected from HIV-infected women during follow-up of HPV infection. Clin Infect Dis, 40,