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- Carmelo Aranda Velázquez
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3 Liofilchem A.F. Genital System (Ref ) rev A.F. GENITAL SYSTEM ESPAÑOL Sistem para búsqueda, cálculo y antibiograma gérmenes patógenos urogenitales DESCRIPCIÓN A.F. GENITAL SYSTEM es un sistema de 24 pozos que contienen substratos bioquímicos y antibióticos desecados para la búsqueda, identificación presuntiva y el antibiograma de microorganismos procedentes de muestras urogenitales. El sistema facilita también una evaluación semicuantitativa de la presencia de micoplasmas urogenitales (Mycoplasma hominis y Ureaplasma urealyticum). El sistema se inocula con la suspensión de la muestra clínica e incubada a 36 ± 1 C por horas. Los tests para la búsqueda, cálculo, identificación presuntiva de los microorganismos y para el antibiograma de los micoplasmas urogenitales presentes en la muestra se interpretan evaluando el viraje de color de los distintos pozos y efectúan un examen microscópico. CONTENIDO DE LOS ESTUCHES El estuche contiene: 20 A.F.GENITAL SYSTEM 20 Ampollas de Solución Fisiológica (7.0 ml/ampolla) Hoja instrucciones PRODUCTOS NECESARIOS NO CONTENIDOS 1 Plantilla TEST RESULTS FORM A.F. GENITAL SYSTEM Reagent (Ref ) Mycoplasma Transport Broth (Ref ) Tapón de saca Platinas cubreobjeto y portaobjeto Microscopio STREPTO B latex KIT (Ref ) CONFIGURACIÓN El sistema presenta la configuración indicada en tabla n 1. Tabla n 1 Pozo CÁLCULO E IDENTIFICACIÓN DE LOS MICOPLASMAS / UREAPLASMAS 1-GR+ Crecimiento micoplasmas (10 2 < título < 10 4 UFC/mL) 2-GR++ Crecimiento micoplasmas (10 4 < título < 10 5 UFC/mL) 3-GR+++ Crecimiento micoplasmas (título > 10 5 UFC/mL) 4-ADC Test Arginina 5-UR Test Urea Pozo BÚSQUEDA DE T. VAGINALIS Y CANDIDA Spp. 6-TR/YE Trichomonas vaginalis / Candida spp. Pozo ANTIBIOGRAMA DE LOS MICOPLASMAS / UREAPLASMAS (*) 7-TE 8-PEF 9-OFX 10-DO Tetraciclina - 8 μg/ml Pefloxacina - 16 μg/ml Ofloxacina - 4 μg/ml Doxiciclina - 8 μg/ml 11-E Eritromicina - 16 μg/ml 12-CLA 13-MN 14-JOS 15-CD Pozo 16-ESC 17-PRO 18-PSE 19-GAR 20-STF 21-STR 22-NES Claritromicina - 16 μg/ml Minociclina - 8 μg/ml Josamicina - 8 μg/ml Clindamicina - 8 μg/ml BÚSQUEDA E IDENTIFICACIÓN PRESUNTIVA DE OTROS MICROORGANISMOS Escherichia coli Proteus spp. / Providencia spp. Pseudomonas spp. Gardnerella vaginalis Staphylococcus aureus Enterococcus faecalis Neisseria gonorrhoeae 23-STG Streptococcus agalactiae (Grupo B) 24-CAN Candida spp. (*): La concentración de cada antibiótico está referida a la normativa actualizada NCCLS Enero 2004;Vol 24 Nº1 (1) 25
4 Liofilchem A.F. Genital System (Ref ) rev PRINCIPIO DEL MÉTODO A.F. GENITAL SYSTEM permite la búsqueda, el cálculo semicuantitativo, la identificación presuntiva y el antibiograma de Mycoplasma hominis y Ureaplasma urealiticum, la búsqueda y la identificación presuntiva de los microorganismos más frecuentemente aislados por tapones vaginales, uretrales y líquido seminal como: Trichomonas vaginalis, Escherichia coli, Proteus spp./providencia spp., Pseudomonas spp., Gardnerella vaginalis, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Neisseria gonorrhoeae, Streptococcus agalactiae (Grupo B) y Candida spp. El cálculo semicuantitativo de los micoplasmas urogenitales (Mycoplasma hominis y Ureaplasma urealyticum) se evidencia a través del viraje de color del amarillo al rojo de los pozos 1-GR+, 2-GR++, 3-GR+++. La presencia de Mycoplasma hominis se evidencia a través del viraje de color del amarillo al rojo del pozo Test Arginina 4-ADC. La presencia de Ureaplasma urealyticum se evidencia a través del viraje de color del amarillo al rojo del pozo Test Urea 5-UR. La presencia de Trichomonas vaginalis y Candida spp. se evidencia de la observación microscópica (40x) de una gota de líquido de cultivo sacado del pozo 6-TR/YE evaluando la presencia de trofozoítos ciliados móviles para la identificación Trichomonas vaginalis y/o presencia de clamidósporas e hifas para la identificación de Candida spp. El antibiograma de los micoplasmas urogenitales se evalúa observando el viraje de color de los pozos 7-TE, 8-PEF, 9-OFX, 10-DO, 11-E, 12-CLA, 13-MN, 14-JOS, 15-CD, como indicado en la tabla n 3. La presencia de Escherichia coli se evidencia a través del viraje de color del gris-rojizo al azul del pozo 16-ESC. Confirmar la presencia de Escherichia coli añadiendo dos gotas de reactivo de KOVACS al pozo 17-PRO; esperar a que aparezca un anillo rosa-rojizo. La presencia de Proteus spp. / Providencia spp. es evidenciada por el viraje de color del amarillo al marrón-negro del pozo 17-PRO. La presencia de Pseudomonas spp. es evidenciada por el viraje de color del amarillo al verde turbio del pozo 18-PSE. Confirmar mediante test de las oxidasis (A.F. GENITAL SYSTEM REAGENT Ref ). La presencia de Gardnerella vaginalis es evidenciada por el viraje de color del rojo al amarillo-anaranjado del pozo 19-GAR. Confirmar mediante aislamiento en terrenos selectivos (GARDNERELLA VAG.AGAR Ref.11054) y tests bioquímicos (INTEGRAL SYSTEM GARDENERELLA Ref.71724). La presencia de Staphylococcus aureus es evidenciada por la aparición de un anillo negro en el fondo del pozo 20-STF. Confirmar mediante test de la coagulasa (COAGULASE TEST Ref ). La presencia de Enterococcus faecalis es evidenciada por el viraje de color del amarillo al negro del pozo 21-STR. La presencia de Neisseria gonorrhoeae en el pozo 22-NES es evidenciada con el test positivo de la oxidasis (A.F. GENITAL SYSTEM REAGENT Ref ). Confirmar la positividad del test con los siguientes métodos: - aislamiento en terrenos selectivos (Thayer Martin Agar Ref ), tests bioquímicos y pruebas suerológicas). La presencia de Streptococcus agalactiae (Grupo B) se evidencia a través del viraje de color de amarillo a verde en el pozo 23-STG. Confirmar la presencia de Streptococcus agalactiae con los métodos siguientes: a) - Test de aglutinación STREPTO B latex KIT (Ref ). b) - Aislamiento del cultivo con métodos tradicionales. La presencia de Candida spp. es evidenciada por el viraje de color del verde al amarillo del pozo 24-CAN. Observar al microscopio la presencia de clamidósporas e hifas. 26
5 Liofilchem A.F. Genital System (Ref ) rev COMPOSICIÓN Tabla n 2 Pozo 1-GR+ 2-GR++ 3-GR+++ 4-ADC 5-UR 6-TR/YE 7-TE 8-PEF 9-OFX 10-DO Contenido Terreno de cultivo para crecimiento micoplasmas Terreno de cultivo para crecimiento micoplasmas Terreno de cultivo para crecimiento micoplasmas Terreno de cultivo con substrato para descarboxilación arginina Terreno de cultivo con substrato para hidrólisis urea Terreno de cultivo con substrato para aislamiento Trichomonas vaginalis y Candida spp. Terreno de cultivo que contiene Tetraciclina - 8 μg/ml Terreno de cultivo que contiene Pefloxacina - 16 μg/ml Terreno de cultivo que contiene Ofloxacina - 4 μg/ml Terreno de cultivo que contiene Oxiciclina - 8 μg/ml 11-E Terreno de cultivo que contiene Eritromicina - 16 μg/ml 12-CLA 13-MN 14-JOS 15-CD 16-ESC 17-PRO 18-PSE 19-GAR 20-STF 21-STR 22-NES 23-STG 24-CAN Terreno de cultivo que contiene Claritromicina - 16 μg/ml Terreno de cultivo que contiene Minociclina - 8 μg/ml Terreno de cultivo que contiene Josamicina - 8 μg/ml Terreno de cultivo que contiene Clindamicina - 8 μg/ml Terreno de cultivo con substrato para aislamiento Escherichia coli Terreno de cultivo con substrato para aislamiento Proteus spp./providencia spp. Terreno de cultivo con substrato para aislamiento Pseudomonas spp. Terreno de cultivo con substrato para aislamiento Gardnerella vaginalis Terreno de cultivo con substrato para aislamiento Staphylococcus aureus Terreno de cultivo con substrato para aislamiento Enterococcus faecalis Terreno de cultivo con substrato para aislamiento Neisseria gonorrhoeae Terreno de cultivo con substrato cromogénico para el aislamiento de Streptococcus agalactiae Terreno de cultivo con substrato para aislamiento Candida spp. Solución Fisiológica (g\l): Sodio cloruro 9 g; Agua destilada 1000 ml; ph 6.8 ± 0.2 RECOLECCIÓN Y CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS Sacar la secreción vaginal o uretral con tapones en fibra sintética. Sacar el líquido seminal de acuerdo con la técnica prevista para el examen microbiológico de cultivo. Las muestras se tienen que enviar al laboratorio para la siembra en el sistema A.F. GENITAL SYSTEM enseguida después de la saca. Evitar la conservación en frigorífico aunque sea por poco tiempo ya que las bajas temperaturas pueden dañar la vitalidad de algunos microorganismos particularmente sensibles como Trichomonas vaginalis, Neisseria gonorrhoeae etc. perjudicando el resultado final. 27
6 Liofilchem A.F. Genital System (Ref ) rev PROCEDIMIENTO DEL TEST PREPARACIÓN DE LAS MUESTRA CLÍNICO Abrir un ampolla de Solución Fisiológica contenida en el kit. 1. TAPÓN VAGINAL TAPÓN URETRAL Sumergir el tapón (después de la saca del material clínico) en la ampolla de Solución Fisiológica y esperar 5 min. Estrujar cuidado el tapón contra la pared del frasco de modo que el material clínico resulte homogéneamente dispersado en la Solución Fisiológica. Conserve el tampón, sumergido en el terreno nutritivo líquido hasta que termine la prueba. 2. LÍQUIDO SEMINAL Dispensar 0.2 ml de muestra en el frasco de Solución Fisiológica, agitar y esperar 5 minutos antes de la siembra. 3. MATERIAL CLÍNICO DE Mycoplasma Transport Broth (Ref ) Dispensar 1 ml de Mycoplasma Transport Broth, que contiene la muestra en examen, en ampolla de Solución Fisiológica, agitar delicadamente y esperar 5 minutos antes de la siembra. Conservar la muestra en Mycoplasma Transport Broth, hasta que termine la prueba INOCULACIÓN DEL SISTEMA 1. Sacar un sistema de su envoltorio y llevarlo a temperatura ambiente. 2. Anotar nombre del paciente, fecha de inicio examen y tipo de material clínico. 3. Transferir 0.2 ml de suspensión de la muestra clínico en cada pozo del sistema. 4. Cubrir con una gota de aceite de vaselina para uso microbiológico todos los pozos, incluido 19-GAR pozo, excepto los pozos 6, 16, 17, 18, 20, 21, 22, Cubrir el sistema con la tapa al efecto e incubar a 36 ± 1 C por horas. En caso de sospecha presencia de Mycoplasma hominis, incubar a 36 ± 1 C por 24 horas más. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Al término de la incubación: Observar el viraje de color de los pozos de 1-GR+ a 5-UR e interpretar los resultados sirviéndose de la tabla n 3 (CÁLCULO E IDENTIFICACIÓN DE LOS MICOPLASMAS / UREAPLASMAS). Sacar una gota de líquido del pozo 6-TR/YE, depositarla en una platina portaobjeto y, después de dejar la platina cubreobjeto, observar al microscopio (40x) la presencia de Trichomonas vaginalis y Candida spp. Interpretar como indicado en tabla n 3. (BÚSQUEDA DE T. VAGINALIS Y CANDIDA Spp.). Observar el viraje de color de los pozos de 7-TE a 15-CD e interpretar los resultados sirviéndose de la tabla n 3 (ANTIBIOGRAMA DE LOS MICOPLASMAS / UREAPLASMAS). Observar el viraje de color del pozo 16-ESC e interpretar los resultados sirviéndose de la tabla n 3. Confirmar la presencia de Escherichia coli añadiendo dos gotas de reactivo de KOVACS al pozo 17-PRO; esperar a que aparezca un anillo rosarojizo. Tome una gota de líquido del pozo 22-NES, deposítela en oxidase test stick y observe el desarrollo inmediato (~ 10 segundos) de una coloración azul de Neisseria gonorrhoeae con los siguientes métodos: - aislamento en terrenos selectivos; rozar el tampón vaginal o uretral, conservado en presedencia en caldo nutritivo (procedura del test, punto 1), directamente en la superficie de la placa selectiva. Incube la placa a 36±1 C en microaerofilia y en las colonias cultivadas ejecute pruebas bioquímica y pruebas de suero. Observar el viraje de color del pozo 23-STG e interpretar los resultados sirviéndose de la tabla n 3. Confirmar la presencia de Streptococcus agalactiae con los métodos siguientes: a) - Test de aglutinación STREPTO B latex KIT (Ref ). b) - Aislamiento del cultivo con métodos tradicionales. Observar el viraje de color de los pozos de 16 a 24 e interpretar los resultados sirviéndose de la tabla n 3 (BÚSQUEDA E IDENTIFICACIÓN PRESUNTIVA DE OTROS MICROORGANISMOS). Anotar los resultados en la plantilla TEST RESULTS FORM (fotocopiar el número necesario de plantillas). 28
7 Tabla n 3 Pozo CÁLCULO E IDENTIFICACIÓN DE LOS MICOPLASMAS / UREAPLASMAS Color pozo Reacción positiva Reacción negativa 1-GR+ Crecimiento micoplasmas (10 2 < título < 10 4 UFC/mL) (1) rojo amarillo 2-GR++ Crecimiento micoplasmas (10 4 < título < 10 5 UFC/mL) (2) rojo amarillo 3-GR+++ Crecimiento micoplasmas (título > 10 5 UFC/mL) (3) rojo amarillo 4-ADC Test Arginina: identifica Mycoplasma hominis rojo amarillo 5-UR Test Urea: identifica Ureaplasma urealyticum rojo amarillo UFC: Unidad que forman Colonias Pozo BÚSQUEDA DE T. VAGINALIS Y CANDIDA spp. Observación microscópica(40x) 6-TR/YE Trichomonas vaginalis / Candida spp. Liofilchem A.F. Genital System (Ref ) rev T. vaginalis: protozooítos ciliados móviles Candida spp.: clamidósporas e hifas Pozo ANTIBIOGRAMA DE LOS MICOPLASMAS / UREAPLASMAS Color pozo S I R 7-TE Tetraciclina - 8 μg/ml amarillo anaranjado rojo 8-PEF Pefloxacina - 16 μg/ml amarillo anaranjado rojo 9-OFX Ofloxacina - 4 μg/ml amarillo anaranjado rojo 10-DO Doxiciclina - 8 μg/ml amarillo anaranjado rojo 11-E Eritromicina - 16 μg/ml amarillo anaranjado rojo 12-CLA Claritromicina - 16 μg/ml amarillo anaranjado rojo 13-MN Minociclina - 8 μg/ml amarillo anaranjado rojo 14-JOS Josamicina - 8 μg/ml amarillo anaranjado rojo 15-CD Clindamicina - 8 μg/ml amarillo anaranjado rojo S = Sensible I = Sensibilidad intermedia R = Resistente Pozo BÚSQUEDA E IDENTIFICACIÓN PRESUNTIVA Color pozo DE OTROS MICROORGANISMOS Reacción positiva Reacción negativa 16-ESC Escherichia coli azul marino gris-rojo 17-PRO Proteus spp. / Providencia spp. marrón-negro amarillo 18-PSE Pseudomonas spp. verde turbio amarillo-azul 19-GAR Gardnerella vaginalis amarillo-anaranjado rojo 20-STF Staphylococcus aureus anillo negro amarillo 21-STR Enterococcus faecalis negro amarillo 22-NES Neisseria gonorrhoeae azul marino (4) incoloro (4) 23-STG Streptococcus agalactiae (Grupo B) verde amarillo 24-CAN Candida spp. amarillo turbio verde LEYENDA (1) = equivalente a 5-20 colonias crecidas en Mycoplasma Agar A7 (2) = equivalente a colonias crecidas en Mycoplasma Agar A7 (3) = superior a 50 colonias crecidas en Mycoplasma Agar A7 (4) = después de Test oxidasis 29
8 Liofilchem A.F. Genital System (Ref ) rev CONTROL CALIDAD Cada lote de A.F. GENITAL SYSTEM es sometido al control calidad utilizando los microrganismos de referencia siguientes: Mycoplasma hominis ATCC Gardnerella vaginalis ATCC Ureaplasma urealiticum ATCC Staphylococcus aureus ATCC Candida albicans ATCC Streptococcus faecalis ATCC Escherichia coli ATCC Neisseria gonorrhoeae ATCC Proteus mirabilis ATCC Streptococcus agalactiae ATCC Pseudomonas aeruginosa ATCC Trichomonas vaginalis ATCC FACTORES QUE PUEDEN INVALIDAR LOS RESULTADOS Imprecisa estandarización de la inoculación; material clínico no idóneo; uso de sistemas y reactivos suplementales caducados; temperatura y tiempos de incubación no respetados. LÍMITES Y ADVERTENCIAS La presencia de Neisseria gonorrhoeae, Streptococcus agalactiae y Gardnerella vaginalis se tiene que confirmar utilizando terrenos de cultivo adecuados, test bioquímicos y sierológicos. Para la identificación definitiva de los microorganismos es necesario recurrir a tests suplementales de confirmación. PERFORMANCE Los resultados obtenidos con el sistema A.F. GENITAL SYSTEM concuerdan con los de los métodos de cultivo tradicionales. La aplicación del test estadístico no paramétrico de Wilcoxon, demuestra que para cada material clínico, los grupos de valores estándar y el obtenido con A.F. GENITAL SYSTEM, no son significativamente discordes: P! 0.05 (2). PRECAUCIONES El producto, A.F. GENITAL SYSTEM, no está clasificado como peligroso según la legislación vigente; en todo caso para su empleo se aconseja consultar la Ficha de Seguridad. A.F. GENITAL SYSTEM es un dispositivo desechable sólo para uso diagnóstico in vitro, está destinado a un ámbito profesional y tiene que ser utilizado en laboratorio por operadores adecuadamente formados, con métodos aprobados de asepsia y seguridad con respecto a los agentes patógenos. CONSERVACIÓN Conservar a 2-8 C en su estuche original. No conservar cerca de fuentes de calor y evitar excesivas variaciones de temperatura. En estas condiciones el producto es válido hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. No utilizar después de esta fecha. Eliminar si hay signos de deterioro. ELIMINACIÓN DEL MATERIAL UTILIZADO Después de la utilización A.F. GENITAL SYSTEM y el material que ha entrado en contacto con la muestra tienen que ser descontaminados y eliminados de acuerdo con las técnicas en uso en laboratorio para la descontaminación y la eliminación de material potencialmente infecto. PRESENTACIÓN Producto Ref. Estuche A.F. GENITAL SYSTEM tests TABLA DE LOS SÍMBOLOS IVD Dispositivo médico diagnóstico in vitro No reutilizar Fabricante Contenido suficiente para <n> pruebas Límites de temperatura REF Número de catálogo Frágil, manipular con cuidado Utilizar antes de Attenzione, vedere le istruzioni per l uso LOT Código del lote IVD 30
9 !"!#"$%&'("')*)!"!#"$%&'+,-)*)!"!#"$%&'+,".)!"!#"$%&'(".)*)!"!#"$%&'(/')*!"#"$#%&'()*(!+!,-,.-/ MNNOI)P9C)MO)2Q01 M1 Y1 VD77;FI)!;79<I)+8;CC67I)G6<976S);<?)-9C[6<!"#$%&$'"()"*'+%+,$'"#+,-(.+('(/0" \1.?]A<),1#6<6>>6!"#$%&$'"()"*'+%+,$'"#+,-(.+('(/0"1233;45!!"#$%&"%'%()*+$%,-#./ #"$("#3,.V^)4171C1
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