Manual Toma de Muestras Exámenes Genéticos por PCR Herpesvirus Bioingentech Ltd. Teléfono (56)-(41)

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1 Manual Toma de Muestras Exámenes Genéticos por PCR Herpesvirus Bioingentech Ltd. Teléfono (56)-(41)

2 Muestras Herpesvirus 1. Introducción Los herpesvirus son miembros de la familia Herpesviridae, capaces de causar enfermedades en múltiples animales, incluido el hombre. Se encuentran ampliamente diseminados en el mundo, pudiendo establecer latencia en las células de los individuos infectados. Al estar latentes no se detectan partículas virales, pero su ADN se encuentra en el núcleo celular. La reactivación de los virus latentes se ha relacionado con ciertas patologías. En ciertas condiciones puede reactivarse, replicándose y formando nuevos virus, a menudo con resultado de muerte celular. 2. Herpesvirus humano 1 y herpesvirus humano 2 a) Sangre obtenida a través de punción periférica Realizar lavado de manos quirúrgico. Mantener técnica aséptica durante todo el procedimiento. Utilizar campo estéril para evitar tener contacto con áreas circundantes que ofrezca el riesgo de contaminación. Colocar mascarilla al paciente. Realizar antisepsia de la zona a puncionar; no palpe la vena sin guantes estériles una vez preparada la piel. Utilizar otros guantes estériles para cada punción. POR ÉSTE MÉTODO NO PUEDEN SER PROCESADAS MUESTRAS CON HEPARINA. En pacientes heparinizados, la toma de muestra debe realizarse en el momento más alejado de la administración del medicamento. La toma deberá hacerse en un lugar perfectamente iluminado y con el paciente cómodamente sentado. Localizar una vena adecuada en la cara anterior del codo y colocar el torniquete en la parte media del brazo. Desinfectar el área con un algodón humedecido con alcohol al 70% e introducir la aguja con el bisel hacia arriba. Si la sangre no fluye espontáneamente y se está utilizando una jeringa, jalar el émbolo y aspirar con suavidad; si se está empleando equipo al vacío presionar el tubo de ensaye hacia arriba. Al empezar a fluir la sangre retirar el torniquete. Una vez que se haya obtenido entre 5-8 ml de sangre, retirar la aguja y colocar una tórula con alcohol sobre el sitio de punción ejerciendo presión para detener la hemorragia. 2

3 a) Sangre obtenida a través de punción periférica En recién nacidos y lactantes, donde no es fácil obtener tanta cantidad de muestra, debe enviarse como mínimo 1 ml de sangre completa. Si la toma se hizo con jeringa, retirar la aguja y verter la sangre a un tubo estéril, dejándola resbalar lentamente por la pared para evitar hemólisis. Tapar el tubo cuidadosamente. Si la muestra necesaria es sangre total utilizar un tubo de hematología con EDTA (venoject ó vacutainer TAPA MORADA). Bata y campos estériles. Gorro y mascarilla con protección ocular. Guantes estériles. Equipo de asepsia (antiséptico, gasas y guantes estériles). Tubo de hematología con EDTA. Jeringas estériles. La muestra debe ser analizada dentro de las 24 hrs. siguientes, en caso contrario puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta una semana. Se recomienda no congelar. b) Líquido pleural, pericárdico, peritoneal,, culdocentesis, amniótico La recolección de muestras de este origen está reservada estrictamente al médico especialista. No se recomienda usar tórulas, la muestra debe ser obtenida por aspirado o drenaje quirúrgico. Los líquidos susceptibles de formar coágulo deben ser colectados en tubos con anticoagulante EDTA (ácido etilendiaminotetracético). En el líquido amniótico los virus que causan infección en el útero son CMV, Parvovirus B-19 y VIH, menos frecuentemente observados virus herpes simplex (HSV) y virus Zoster (VZV). Realice preparación de la piel con técnica aséptica. Puncionar con jeringa y aguja estéril, y recoger entre 1 y 5 ml de líquido. Recolectar en frasco seco. 3

4 b) Líquido pleural, pericárdico, peritoneal, culdocentesis, amniótico Equipo de preparación de piel y anestesia local. Jeringa y aguja estéril. Tubo estéril seco. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 48 horas y refrigerada hasta por 2 semanas. En el caso del líquido amniótico puede almacenarse a temperatura ambiente por 8 horas y refrigerado a 4ºC hasta por 1 semana. c) Líquido cefalorraquídeo (LCR) Enviar con resumen de historia clínica. Procedimiento realizado por personal médico. Preparación aséptica de la piel: el paciente debe estar recostado sobre un costado con el torso doblado hacia delante. Bajo anestesia local se introduce una aguja larga en el conducto espinal; no necesita ser aspirado, fluye por presión en individuos sanos. Obtener mínimo 3 ml de LCR en tubo estéril tapa rosca. Equipo de asepsia: mascarilla, guantes y campo estériles. Equipo de punción lumbar. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 8 horas. Puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por 1 semana. 3

5 d) Secreción de área nasofaríngea La persona que obtiene la muestra debe usar barreras de protección (mascarilla, protección ocular). No hacer gárgaras ni limpieza con ninguna solución bucofaríngea. Tomar la muestra preferiblemente en ayunas. Colocar al paciente bajo una buena fuente de luz. Introducir la tórula flexible hasta la nasofaringe posterior evitando trauma. Rotar la tórula por 10 a 15 segundos para permitir la impregnación del hisopo y retirar lentamente. Barreras de protección (mascarilla y protección ocular). Guantes no estériles. Tórulas estériles flexibles. Tubo estéril. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 48 horas. Puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por dos semanas. e) Aspirado nasofaringe La persona que obtiene la muestra debe usar barreras de protección (mascarilla, protección ocular). No hacer gárgaras ni limpieza con ninguna solución bucofaríngea. Tomar la muestra preferiblemente en ayunas. 4

6 e) Aspirado nasofaringe Es colectado mediante el paso de una sonda nelaton de un calibre apropiado dentro de la nasofaringe. Aspirar luego el material con una jeringa estéril u otro mecanismo de succión y colocarlo en tubo estéril seco. En caso de no poder recolectar la muestra en la jeringa, envíe el extremo distal de la sonda con el material aspirado en el tubo estéril seco. Barreras de protección (mascarilla y protección ocular). Guantes no estériles. Tubo estéril seco o medio de transporte para virus. Sonda nelaton. Jeringa estéril. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 48 horas. Puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por dos semanas. f) Secreción de la faringe No contaminar la tórula con secreción de cavidad oral o dientes. El hisopado de garganta está contraindicado en pacientes con diagnóstico de epiglotitis. No hacer gárgaras ni limpieza con ninguna solución bucofaríngea. Colocar al paciente bajo una buena fuente de luz. Con un bajalenguas, presionar la lengua hacia abajo para visualizar los pilares de la faringe y del área tonsilar para localizar el área de inflamación y exudado. Rotar la tórula estéril sobre el área. 5

7 f) Secreción de la faringe Guantes. Tórulas estériles. temperatura ambiente durante 48 horas. Puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por dos semanas. g) Esputo por expectoración espontánea El esputo no es la muestra ideal para el diagnóstico de neumonía; se recomienda preferiblemente el lavado broncoalveolar. Recolectar la muestra en la mañana, en ayunas preferiblemente. Instruir al paciente para realizar cepillado de dientes y lavado de la lengua sólo con agua para remover el exceso de flora oral y retirar prótesis dental en pacientes de edad. Para pacientes pediátricos incapaces de producir un esputo, la terapeuta respiratoria debe obtener la muestra a través de succión. En pacientes ambulatorios sintomáticos respiratorios con sospecha de tuberculosis, la primera muestra se toma el día de la consulta médica y las otras dos al día siguiente, cumpliendo las recomendaciones descritas para paciente hospitalizado. Instruir al paciente para que tosa con fuerza y profundamente, con el fin de obtener una muestra que provenga del tracto respiratorio inferior, libre de saliva contenida en la cavidad oral, la cual debe expectorar directamente en un recipiente estéril de boca ancha de tapa rosca. Frasco estéril de boca ancha, de 5 cm de diámetro, de tapa rosca, con capacidad de 30 a 50 ml, de material fácil de rotular. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 48 horas. Puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por dos semanas. 6

8 h) Esputo inducido Instruir al paciente para realizar cepillado de dientes y lavado de lengua solo con agua. Realizar nebulización con solución salina normal. Para pacientes pediátricos incapaces de producir un esputo, la terapeuta respiratoria debe obtener la muestra a través de succión. Instruir al paciente para que tosa con fuerza y profundamente, con el fin de obtener una muestra que provenga del tracto respiratorio inferior, libre de saliva contenida en la cavidad oral, la cual debe expectorar directamente en un recipiente estéril de boca ancha de tapa rosca. Frasco estéril de boca ancha de tapa rosca de 5 cm de diámetro, con una capacidad de 30 a 50 ml y material fácil de rotular. Nebulizador. Solución salina normal. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 48 horas. Puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por dos semanas. i) Secreción traqueal Realice el procedimiento con técnica aséptica. De acuerdo con las características de las secreciones, irrigar con solución salina normal previo a realizar el procedimiento. 7

9 i) Secreción traqueal Introducir la sonda sin hacer succión a través del tubo endotraqueal o cánula de traquestomía, hasta ubicarla en el espacio traqueal. Ocluya el orificio distal de la sonda y comience a succionar, retire la sonda lentamente mientras la va limpiando externamente con una gasa estéril. Tenga precaución de suspender la succión, retirando la oclusión de la sonda para que se conserve la muestra obtenida en el trayecto de la misma. Coloque la muestra obtenida en frasco estéril cortando el segmento distal de la sonda, si no es posible el depósito de la muestra sola, para lo cual retira la presión en el orificio de la sonda lo que permitirá la expulsión de la muestra en el recipiente. Guantes estériles. Mascarilla con protección ocular. Sonda de nelaton. Hoja de bisturí. Solución salina normal. Gasas estériles. Frasco de boca ancha estéril o trampa recolectora. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 48 horas. Puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por dos semanas. j) Lavado o cepillado broncoalveolar El paciente debe estar en ayunas para realizar el procedimiento, ya que se requiere de sedación. 8

10 j) Lavado o cepillado broncoalveolar A través de técnica de fibrobroncoscopia. Conecte una trampa de Lukens al fibrobroncoscopio. Irrigar con 10 ml de solución salina a través del canal abierto. Succione para obtener la muestra en dos frascos estériles de boca ancha. Equipos de fibrobroncoscopia. Sistema de succión. Recipiente de boca ancha estéril de tapa rosca. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 48 horas. Puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por dos semanas. k) Muestras obtenidas por abordaje percutáneo Son todos procedimientos médicos. Dentro de las técnicas invasivas son las que permiten la obtención de muestras más representativas del parénquima pulmonar, no obstante, sólo deben emplearse cuando fracasen otros métodos menos invasivos o cuando la situación del enfermo haga imprescindible conocer el diagnóstico etiológico. Técnica a realizar por personal entrenado. Pueden emplearse las siguientes: 9

11 k) Muestras obtenidas por abordaje percutáneo i. Punción pulmonar aspirativa transtorácica: Obtención del exudado de las lesiones pulmonares a través de una punción transtorácica con aguja ultrafina con control radioscópico o ecográfico. Debe aplicarse ante infiltraciones densas (no intersticiales) y sobre todo si son periféricas. Contraindicado en pacientes con bullas, trastornos de coagulación y sospecha de hidatidosis. Posibles complicaciones, como neumotórax y hemoptisis. Es una muestra ideal para estudio en infección anaerobia grave en niños, especialmente en edades tempranas. ii. Punción biópsica pulmonar: Biopsia transtorácica con trocar. Sólo en casos excepcionales y en caso de lesiones muy periféricas debido al alto riesgo de neumotórax. iii. Biopsia pulmonar por toracotomía: Permite la selección visual del área neumónica a cielo abierto. : La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 48 horas. Puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por dos semanas. L) Orina de micción espontánea Realizar higiene de genitales: en mujeres, es necesario lavar el vestíbulo vaginal y la entrada de la uretra con agua jabonosa, enjuagar con abundante agua. Secar y separar los labios e iniciar la micción. En el hombre se debe hacer retracción del prepucio y lavar el meato urinario con agua jabonosa, enjuagar con abundante agua y secar. Con el prepucio retraído iniciar la recolección de la orina. En pacientes ambulatorios es ideal recoger la muestra de la primera micción del día. 10

12 L) Orina de micción espontánea Instruir al paciente para que inicie la micción, desechar la primera parte de la orina. Introducir el frasco colector, recoger la parte media de la orina sin detener el flujo urinario (5-10 ml) Terminar de eliminar en el sanitario o pato. Tapar el frasco sin contaminar la muestra. Frasco recolector estéril de boca ancha de tapa rosca. Equipo de higiene: jabón, gasas. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 24 horas. Posteriormente debe mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por una semana. m) Secreción conjuntival m) Secreción conjuntival No usar gotas oftálmicas 18 a 24 horas antes de la muestra. Ausencia de cualquier cosmético. No tomar antibióticos 24 a 48 horas antes. No usar anestésicos que posean actividad antimicrobiana. Deberá utilizarse una tórula para cada ojo. Tome una muestra por cada ojo con tórula previamente humedecidas con suero fisiológico. Obtener la secreción con tórula estéril frotando la conjuntiva tarsal inferior y el fórnix de afuera hacia adentro. Rotar la tórula suavemente para que toda la superficie del algodón se empape de la secreción purulenta. 11

13 m) Secreción conjuntival Guantes estériles Tórula estéril, jeringa y aguja estériles. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 48 horas. Posteriormente debe mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por dos semanas. 3. Herpesvirus humano tipo 3 a) Sangre obtenida a través de punción periférica Realizar lavado de manos quirúrgico. Mantener técnica aséptica durante todo el procedimiento. Utilizar campo estéril para evitar tener contacto con áreas circundantes que ofrezca el riesgo de contaminación. Colocar mascarilla al paciente. Realizar antisepsia de la zona a puncionar; no palpe la vena sin guantes estériles una vez preparada la piel. Utilizar otros guantes estériles para cada punción. POR ÉSTE MÉTODO NO PUEDEN SER PROCESADAS MUESTRAS CON HEPARINA. En pacientes heparinizados, la toma de muestra debe realizarse en el momento más alejado de la administración del medicamento. 12

14 a) Sangre obtenida a través de punción periférica La toma deberá hacerse en un lugar perfectamente iluminado y con el paciente cómodamente sentado. Localizar una vena adecuada en la cara anterior del codo y colocar el torniquete en la parte media del brazo. Desinfectar el área con un algodón humedecido con alcohol al 70% e introducir la aguja con el bisel hacia arriba. Si la sangre no fluye espontáneamente y se está utilizando una jeringa, jalar el émbolo y aspirar con suavidad; si se está empleando equipo al vacío presionar el tubo de ensaye hacia arriba. Al empezar a fluir la sangre retirar el torniquete. Una vez que se haya obtenido entre 5-8 ml de sangre, retirar la aguja y colocar una tórula con alcohol sobre el sitio de punción ejerciendo presión para detener la hemorragia. En recién nacidos y lactantes, donde no es fácil obtener tanta cantidad de muestra, debe enviarse como mínimo 1 ml de sangre completa. Si la toma se hizo con jeringa, retirar la aguja y verter la sangre a un tubo estéril, dejándola resbalar lentamente por la pared para evitar hemólisis. Tapar el tubo cuidadosamente. Si la muestra necesaria es sangre total utilizar un tubo de hematología con EDTA (venoject ó vacutainer TAPA MORADA). Bata y campos estériles. Gorro y mascarilla con protección ocular. Guantes estériles. Equipo de asepsia (antiséptico, gasas y guantes estériles). Tubo de hematología con EDTA. Jeringas estériles. La muestra debe ser analizada dentro de las 24 hrs. siguientes, en caso contrario puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta una semana. Se recomienda no congelar. 13

15 b) Líquido cefalorraquídeo (LCR) Enviar con resumen de historia clínica. Procedimiento realizado por personal médico. Preparación aséptica de la piel: el paciente debe estar recostado sobre un costado con el torso doblado hacia delante. Bajo anestesia local se introduce una aguja larga en el conducto espinal; no necesita ser aspirado, fluye por presión en individuos sanos. Obtener mínimo 3 ml de LCR en tubo estéril tapa rosca. Equipo de asepsia: mascarilla, guantes y campo estériles. Equipo de punción lumbar. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 8 horas. Posteriormente debe mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por una semana. 4. Herpesvirus humano tipo 4 a) Líquido cefalorraquídeo (LCR) Enviar con resumen de historia clínica. Procedimiento realizado por personal médico. 14

16 a) Líquido cefalorraquídeo (LCR) Preparación aséptica de la piel: el paciente debe estar recostado sobre un costado con el torso doblado hacia delante. Bajo anestesia local se introduce una aguja larga en el conducto espinal; no necesita ser aspirado, fluye por presión en individuos sanos. Obtener mínimo 3 ml de LCR en tubo estéril tapa rosca. Equipo de asepsia: mascarilla, guantes y campo estériles. Equipo de punción lumbar. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 8 horas. Posteriormente debe mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por una semana. 5. Herpesvirus humano tipo 5 a) Sangre obtenida a través de punción periférica Realizar lavado de manos quirúrgico. Mantener técnica aséptica durante todo el procedimiento. Utilizar campo estéril para evitar tener contacto con áreas circundantes que ofrezca el riesgo de contaminación. Colocar mascarilla al paciente. Realizar antisepsia de la zona a puncionar; no palpe la vena sin guantes estériles una vez preparada la piel. Utilizar otros guantes estériles para cada punción. POR ÉSTE MÉTODO NO PUEDEN SER PROCESADAS MUESTRAS CON HEPARINA. En pacientes heparinizados, la toma de muestra debe realizarse en el momento más alejado de la administración del medicamento. 15

17 a) Sangre obtenida a través de punción periférica La toma deberá hacerse en un lugar perfectamente iluminado y con el paciente cómodamente sentado. Localizar una vena adecuada en la cara anterior del codo y colocar el torniquete en la parte media del brazo. Desinfectar el área con un algodón humedecido con alcohol al 70% e introducir la aguja con el bisel hacia arriba. Si la sangre no fluye espontáneamente y se está utilizando una jeringa, jalar el émbolo y aspirar con suavidad; si se está empleando equipo al vacío presionar el tubo de ensaye hacia arriba. Al empezar a fluir la sangre retirar el torniquete. Una vez que se haya obtenido entre 5-8 ml de sangre, retirar la aguja y colocar una tórula con alcohol sobre el sitio de punción ejerciendo presión para detener la hemorragia. En recién nacidos y lactantes, donde no es fácil obtener tanta cantidad de muestra, debe enviarse como mínimo 1 ml de sangre completa. Si la toma se hizo con jeringa, retirar la aguja y verter la sangre a un tubo estéril, dejándola resbalar lentamente por la pared para evitar hemólisis. Tapar el tubo cuidadosamente. Si la muestra necesaria es sangre total utilizar un tubo de hematología con EDTA (venoject ó vacutainer TAPA MORADA). Bata y campos estériles. Gorro y mascarilla con protección ocular. Guantes estériles. Equipo de asepsia (antiséptico, gasas y guantes estériles). Tubo de hematología con EDTA. Jeringas estériles. La muestra debe ser analizada dentro de las 24 hrs. siguientes, en caso contrario puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta una semana. Se recomienda no congelar. 16

18 b) Biopsia de tejido de cualquier sitio anatómico Realizar preparación antiséptica del área de donde se va a tomar la biopsia. Conservar la esterilidad de la muestra hasta su recepción en el laboratorio clínico o de patología. Se recomienda tomar biopsia de tejido para lesiones relacionadas con úlceras de presión, úlceras varicosas, quemaduras y pie diabético, realizar limpieza previa con solución salina estéril. Si la biopsia de tejido no es posible de realizar, aspire material inflamatorio de la base de la lesión. Este procedimiento debe ser realizado por el médico. Seccionar la muestra en fresco para enviar al laboratorio clínico. Equipo para preparación de piel. Frasco estéril para la muestra microbiológica. La muestra debe ser analizada dentro de las 24 hrs. siguientes, en caso contrario puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta una semana. Se recomienda no congelar. 17

19 6. Herpesvirus humano tipo 6 a) Sangre obtenida a través de punción periférica Realizar lavado de manos quirúrgico. Mantener técnica aséptica durante todo el procedimiento. Utilizar campo estéril para evitar tener contacto con áreas circundantes que ofrezca el riesgo de contaminación. Colocar mascarilla al paciente. Realizar antisepsia de la zona a puncionar; no palpe la vena sin guantes estériles una vez preparada la piel. Utilizar otros guantes estériles para cada punción. POR ÉSTE MÉTODO NO PUEDEN SER PROCESADAS MUESTRAS CON HEPARINA. En pacientes heparinizados, la toma de muestra debe realizarse en el momento más alejado de la administración del medicamento. La toma deberá hacerse en un lugar perfectamente iluminado y con el paciente cómodamente sentado. Localizar una vena adecuada en la cara anterior del codo y colocar el torniquete en la parte media del brazo. Desinfectar el área con un algodón humedecido con alcohol al 70% e introducir la aguja con el bisel hacia arriba. Si la sangre no fluye espontáneamente y se está utilizando una jeringa, jalar el émbolo y aspirar con suavidad; si se está empleando equipo al vacío presionar el tubo de ensaye hacia arriba. Al empezar a fluir la sangre retirar el torniquete. Una vez que se haya obtenido entre 5-8 ml de sangre, retirar la aguja y colocar una tórula con alcohol sobre el sitio de punción ejerciendo presión para detener la hemorragia. En recién nacidos y lactantes, donde no es fácil obtener tanta cantidad de muestra, debe enviarse como mínimo 1 ml de sangre completa. Si la toma se hizo con jeringa, retirar la aguja y verter la sangre a un tubo estéril, dejándola resbalar lentamente por la pared para evitar hemólisis. Tapar el tubo cuidadosamente. Si la muestra necesaria es sangre total utilizar un tubo de hematología con EDTA (venoject ó vacutainer TAPA MORADA). 18

20 a) Sangre obtenida a través de punción periférica Equipo de asepsia (antiséptico, gasas y guantes estériles). Tubo de hematología con EDTA. Jeringas estériles. b) Líquido cefalorraquídeo (LCR) Enviar con resumen de historia clínica. Procedimiento realizado por personal médico. Preparación aséptica de la piel: el paciente debe estar recostado sobre un costado con el torso doblado hacia delante. Bajo anestesia local se introduce una aguja larga en el conducto espinal; no necesita ser aspirado, fluye por presión en individuos sanos. Obtener mínimo 3 ml de LCR en tubo estéril tapa rosca. Equipo de asepsia: mascarilla, guantes y campo estériles. Equipo de punción lumbar. Equipo de asepsia (antiséptico, gasas y guantes estériles). Tubo de hematología con EDTA. Jeringas estériles. La muestra debe ser analizada dentro de las 24 hrs. siguientes, en caso contrario puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta una semana. Se recomienda no congelar. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 8 horas. Posteriormente debe mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por una semana. 19

21 c) Lavado o cepillado broncoalveolar El paciente debe estar en ayunas para realizar el procedimiento, ya que se requiere de sedación. A través de técnica de fibrobroncoscopia. Conecte una trampa de Lukens al fibrobroncoscopio. Irrigar con 10 ml de solución salina a través del canal abierto. Succione para obtener la muestra en dos frascos estériles de boca ancha. Equipos de fibrobroncoscopia. Sistema de succión. Recipiente de boca ancha estéril de tapa rosca. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 48 horas. Posteriormente debe mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por dos semanas. d) Líquido pleural La recolección de muestras de este origen está reservada estrictamente al médico especialista. No se recomienda usar tórulas, la muestra debe ser obtenida por aspirado o drenaje quirúrgico. Los líquidos susceptibles de formar coágulo deben ser colectados en tubos con anticoagulante EDTA (ácido etilendiaminotetracético). En el líquido amniótico los virus que causan infección en el útero son CMV, Parvovirus B-19 y VIH, menos frecuentemente observados virus herpes simplex (HSV) y virus Zoster (VZV). 20

22 d) Líquido pleural Realice preparación de la piel con técnica aséptica. Puncionar con jeringa y aguja estéril, y recoger entre 1 y 5 ml de líquido. Recolectar en frasco seco. Equipo de preparación de piel y anestesia local. Jeringa y aguja estéril. Tubo estéril seco. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 4 horas. Posteriormente debe mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por una semana. 7. Herpesvirus humano tipo 7 a) Sangre obtenida a través de punción periférica Realizar lavado de manos quirúrgico. Mantener técnica aséptica durante todo el procedimiento. Utilizar campo estéril para evitar tener contacto con áreas circundantes que ofrezca el riesgo de contaminación. Colocar mascarilla al paciente. Realizar antisepsia de la zona a puncionar; no palpe la vena sin guantes estériles una vez preparada la piel. Utilizar otros guantes estériles para cada punción. POR ÉSTE MÉTODO NO PUEDEN SER PROCESADAS MUESTRAS CON HEPARINA. En pacientes heparinizados, la toma de muestra debe realizarse en el momento más alejado de la administración del medicamento. 21

23 a) Sangre obtenida a través de punción periférica La toma deberá hacerse en un lugar perfectamente iluminado y con el paciente cómodamente sentado. Localizar una vena adecuada en la cara anterior del codo y colocar el torniquete en la parte media del brazo. Desinfectar el área con un algodón humedecido con alcohol al 70% e introducir la aguja con el bisel hacia arriba. Si la sangre no fluye espontáneamente y se está utilizando una jeringa, jalar el émbolo y aspirar con suavidad; si se está empleando equipo al vacío presionar el tubo de ensaye hacia arriba. Al empezar a fluir la sangre retirar el torniquete. Una vez que se haya obtenido entre 5-8 ml de sangre, retirar la aguja y colocar una tórula con alcohol sobre el sitio de punción ejerciendo presión para detener la hemorragia. En recién nacidos y lactantes, donde no es fácil obtener tanta cantidad de muestra, debe enviarse como mínimo 1 ml de sangre completa. Si la toma se hizo con jeringa, retirar la aguja y verter la sangre a un tubo estéril, dejándola resbalar lentamente por la pared para evitar hemólisis. Tapar el tubo cuidadosamente. Si la muestra necesaria es sangre total utilizar un tubo de hematología con EDTA (venoject ó vacutainer TAPA MORADA). Bata y campos estériles. Gorro y mascarilla con protección ocular. Guantes estériles. Equipo de asepsia (antiséptico, gasas y guantes estériles). Tubo de hematología con EDTA. Jeringas estériles. La muestra debe ser analizada dentro de las 24 hrs. siguientes, en caso contrario puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta una semana. Se recomienda no congelar. 22

24 b) Líquido cefalorraquídeo (LCR) Enviar con resumen de historia clínica. Procedimiento realizado por personal médico. Preparación aséptica de la piel: el paciente debe estar recostado sobre un costado con el torso doblado hacia delante. Bajo anestesia local se introduce una aguja larga en el conducto espinal; no necesita ser aspirado, fluye por presión en individuos sanos. Obtener mínimo 3 ml de LCR en tubo estéril tapa rosca. Equipo de asepsia: mascarilla, guantes y campo estériles. Equipo de punción lumbar. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 8 horas. Posteriormente debe mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por una semana. c) Lavado o cepillado broncoalveolar El paciente debe estar en ayunas para realizar el procedimiento, ya que se requiere de sedación. A través de técnica de fibrobroncoscopia. Conecte una trampa de Lukens al fibrobroncoscopio. Irrigar con 10 ml de solución salina a través del canal abierto. Succione para obtener la muestra en dos frascos estériles de boca ancha. 23

25 c) Lavado o cepillado broncoalveolar Equipos de fibrobroncoscopia. Sistema de succión. Recipiente de boca ancha estéril de tapa rosca. Se recomienda en los primeros 15 minutos de la recolección, no exceder de dos horas y a temperatura ambiente. d) Líquido pleural La recolección de muestras de este origen está reservada estrictamente al médico especialista. No se recomienda usar tórulas, la muestra debe ser obtenida por aspirado o drenaje quirúrgico. Los líquidos susceptibles de formar coágulo deben ser colectados en tubos con anticoagulante EDTA (ácido etilendiaminotetracético). En el líquido amniótico los virus que causan infección en el útero son CMV, Parvovirus B-19 y VIH, menos frecuentemente observados virus herpes simplex (HSV) y virus Zoster (VZV). Realice preparación de la piel con técnica aséptica. Puncionar con jeringa y aguja estéril, y recoger entre 1 y 5 ml de líquido. Recolectar en frasco seco. Equipo de preparación de piel y anestesia local. Jeringa y aguja estéril. Tubo estéril seco. 24

26 d) Líquido pleural La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 48 horas. Posteriormente debe mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por dos semanas. 8. Herpesvirus humano tipo 8 a) Sangre obtenida a través de punción periférica Realizar lavado de manos quirúrgico. Mantener técnica aséptica durante todo el procedimiento. Utilizar campo estéril para evitar tener contacto con áreas circundantes que ofrezca el riesgo de contaminación. Colocar mascarilla al paciente. Realizar antisepsia de la zona a puncionar; no palpe la vena sin guantes estériles una vez preparada la piel. Utilizar otros guantes estériles para cada punción. POR ÉSTE MÉTODO NO PUEDEN SER PROCESADAS MUESTRAS CON HEPARINA. En pacientes heparinizados, la toma de muestra debe realizarse en el momento más alejado de la administración del medicamento. La toma deberá hacerse en un lugar perfectamente iluminado y con el paciente cómodamente sentado. Localizar una vena adecuada en la cara anterior del codo y colocar el torniquete en la parte media del brazo. Desinfectar el área con un algodón humedecido con alcohol al 70% e introducir la aguja con el bisel hacia arriba. Si la sangre no fluye espontáneamente y se está utilizando una jeringa, jalar el émbolo y aspirar con suavidad; si se está empleando equipo al vacío presionar el tubo de ensaye hacia arriba. Al empezar a fluir la sangre retirar el torniquete. 25

27 a) Sangre obtenida a través de punción periférica Una vez que se haya obtenido entre 5-8 ml de sangre, retirar la aguja y colocar una tórula con alcohol sobre el sitio de punción ejerciendo presión para detener la hemorragia. En recién nacidos y lactantes, donde no es fácil obtener tanta cantidad de muestra, debe enviarse como mínimo 1 ml de sangre completa. Si la toma se hizo con jeringa, retirar la aguja y verter la sangre a un tubo estéril, dejándola resbalar lentamente por la pared para evitar hemólisis. Tapar el tubo cuidadosamente. Si la muestra necesaria es sangre total utilizar un tubo de hematología con EDTA (venoject ó vacutainer TAPA MORADA). Bata y campos estériles. Gorro y mascarilla con protección ocular. Guantes estériles. Equipo de asepsia (antiséptico, gasas y guantes estériles). Tubo de hematología con EDTA. Jeringas estériles. La muestra debe ser analizada dentro de las 24 hrs. siguientes, en caso contrario puede mantenerse refrigerada a 4ºC hasta una semana. Se recomienda no congelar. b) Líquido cefalorraquídeo (LCR) Enviar con resumen de historia clínica. Procedimiento realizado por personal médico. 26

28 b) Líquido cefalorraquídeo (LCR) Preparación aséptica de la piel: el paciente debe estar recostado sobre un costado con el torso doblado hacia delante. Bajo anestesia local se introduce una aguja larga en el conducto espinal; no necesita ser aspirado, fluye por presión en individuos sanos. Obtener mínimo 3 ml de LCR en tubo estéril tapa rosca. Equipo de asepsia: mascarilla, guantes y campo estériles. Equipo de punción lumbar. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 8 horas. Posteriormente debe mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por una semana. c) Lavado o cepillado broncoalveolar El paciente debe estar en ayunas para realizar el procedimiento, ya que se requiere de sedación. A través de técnica de fibrobroncoscopia. Conecte una trampa de Lukens al fibrobroncoscopio. Irrigar con 10 ml de solución salina a través del canal abierto. Succione para obtener la muestra en dos frascos estériles de boca ancha. Equipos de fibrobroncoscopia. Recipiente de boca ancha estéril de tapa rosca. Sistema de succión. 27

29 c) Lavado o cepillado broncoalveolar La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 48 horas. Posteriormente debe mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por dos semanas. d) Líquido pleural La recolección de muestras de este origen está reservada estrictamente al médico especialista. No se recomienda usar torulas, la muestra debe ser obtenida por aspirado o drenaje quirúrgico. Los líquidos susceptibles de formar coágulo deben ser colectados en tubos con anticoagulante EDTA (ácido etilendiaminotetracético). En el líquido amniótico los virus que causan infección en el útero son CMV, Parvovirus B-19 y VIH, menos frecuentemente observados virus herpes simplex (HSV) y virus Zoster (VZV). Realice preparación de la piel con técnica aséptica. Puncionar con jeringa y aguja estéril, y recoger entre 1 y 5 ml de líquido. Recolectar en frasco seco. Equipo de preparación de piel y anestesia local. Jeringa y aguja estéril. Tubo estéril seco. La muestra puede ser almacenada a temperatura ambiente durante 48 horas. Posteriormente debe mantenerse refrigerada a 4ºC hasta por dos semanas. 28

30 9. Bibliografía Carlberg, D. Cleanroom microbiology for the non microbiologist. Interpharm Press. INC. Buffalo Grove, Illinois Collins CH, Lyne PM, Grange JM. Microbiological methods. 7ma edition. Oxford Forman MS, Valsamakis A, Specimen collection, transport, and processing: Virology. En Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, Pfaller MA, Yolken RH, editors. Manual of clinical microbiology. 8th ed. Washington: ASM Press; Guerrero Gómez C; Sánchez Carrillo C. Procedimientos en microbiología clínica. Recogida, transporte y procesamientos general de las muestras en el laboratorio de microbiología, Miller JM, Holmes HT. General principles in specimen collection, transport and storage. En Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, Pfaller MA, Yolken RH, editors. Manual of clinical microbiology. 8th ed. Washington: ASM Press; Organización Mundial de la Salud. Guía para transporte seguro de sustancias infecciosas y especímenes. Ginebra (Suiza): WHO/EM- C/97.3; Procedimientos en microbiología clínica. Emilia Cercenado y Rafael Cantón SEIMC. España. Thomson BR (JR.), and Miller M. Specimen collection, transport, and processing: Bacteriology. En Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, Pfaller MA, Yolken RH, editors. Manual of clinical microbiology. 8th ed. Washington: ASM Press;