INDICE. Introducción 3. Casos de células linfoides anormales 5. Casos de células inmaduras de tipo mieloide 25

Transcripción

1

2 INDICE Introducción 3 Casos de células linfoides anormales 5 Casos de células inmaduras de tipo mieloide 25 Casos de células de apariencia específica 45

3 INTRODUCCION Como parte de los proyectos de colaboración internacional, frecuentemente visito laboratorios clínicos en ciudades del sudeste de Asia. En cada visita me he quedado impresionado por el conocimiento que tienen sobre las más recientes pruebas clínicas, su gran deseo por aprender y la atmósfera energética que existe en el lugar de trabajo. Algunos de estos laboratorios han introducido pruebas con métodos de punta, incluyendo la tecnología de PCR, mientras que otros están tratando de alcanzar la sistematización. No obstante, el desarrollo es lento debido a las inadecuadas condiciones sociales y financieras, aunque esto mejorará tanto como la economía crezca en el futuro. En los laboratorios de hematología de instituciones médicas de estas ciudades del sudeste de Asia, las mediciones automatizadas de sangre se están incrementando e incluyen los más recientes parámetros en hematíes y plaquetas, como por ejemplo, el cambio del diferencial de tres partes al de cinco partes en la cuenta de leucocitos. Además, está aumentando el reconocimiento a la importancia que debe tener la calidad de los análisis. Pese a ello, con la actual difusión de modernos analizadores multiparamétricos totalmente automatizados, algunos sectores tienen temor a que las técnicas de microscopio se pierdan. Este es un tema que debe recibir atención en los entrenamientos técnicos y médicos, mientras tanto, no se debe concluir que la automatización del diferencial es algo malo. Los analizadores automatizados del diferencial de leucocitos pueden proveer cuentas exactas y precisas de las células presentes con alto nivel de veracidad. Esto permite al personal del laboratorio tener tiempo suficiente para la examinación microscópica de las pocas muestras que no pueden ser manejadas por los equipos. Esto se debe aplicar no sólo en el sudeste de Asia, sino también en todo el mundo. Sin embargo, para usar los analizadores automatizados del diferencial de leucocitos eficiente y efectivamente, los laboratorios deben establecer estrategias para reconocer anormalidades en los histogramas y dispersogramas. También se deben establecer estrategias para el manejo de avisos y mensajes de interpretación proveídos por el instrumento. Métodos eléctricos, ópticos _ y ahora sistemas híbridos _ son ampliamente aceptados para la diferenciación de leucocitos debido a la superioridad que tienen en cuanto a precisión, exactitud y rapidez. No obstante, con el impresionante aumento en la velocidad del proceso de cómputo, en esta etapa de información en tecnología puede ser que esta actitud requiera de una reevaluación en un futuro cercano. Muchos hematólogos tienen más confianza en las características morfológicas encontradas en una tinción o coloración Giemsa particularmente para células raras. Por esta razón, es previsible que para un futuro cercano los técnicos y doctores deban mantener sus habilidades en la identificación de células por microscopio mientras aprecian el valor de los analizadores automatizados en la rutina práctica. Espero que la presente literatura les sea útil en el trabajo diario. Diciembre, 2000 Noriyuki Tatsumi Profesor, Departamento de Clínica y Laboratorio Médico, Escuela de Medicina de la Universidad de Osaka, Osaka (Japón) 3

4

5 CASOS DE CELULAS LINFOIDES ANORMALES Leucemia de adultos célula tipo T (LAT) (1) 6 Leucemia de adultos célula tipo T (LAT) (2) 8 Leucemia de células peludas (LCP) (tipo japonés) 10 Caso de leucomogénesis a partir de un linfoma 12 Linfoma maligno (LM) 14 Linfoma linfocítico granular grande (LLGG) 16 Leucemia prolinfocítica-t (LPL-T) 18 Reincidencia de leucemia linfocítica aguda tipo T (LLA-T) 20 Leucemia linfocítica aguda tipo B (LLA-B) 22 5

6 Casos de células linfoides anormales Leucemia de adultos célula tipo T (LAT) (1) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & 6.56 [10 9 /L] RBC 3.74 [10 12 /L] HGB 141 [g/l] HCT 38.8 [%] MCV [fl] MCH 37.7 [pg] MCHC 363 [g/l] PLT 63 * [10 9 /L] RDW-SD [fl] RDW-CV 14.8 [%] PDW ---- [fl] MPV ---- [fl] P-LCR ---- [%] PCT ---- [%] NEUT 3.31 * [10 9 /L] 50.4 * [%] LYMPH & 2.53 * [10 9 /L] 38.6 * [%] MONO 0.55 * [10 9 /L] 8.4 * [%] EO 0.07 * [10 9 /L] 1.1 * [%] BASO 0.10 [10 9 /L] [%] NRBC 0.06 [10 9 /L] 0.9 [/100WBC] RET 1.49 [%] 55.7 [10 9 /L] IRF 10.3 [%] LFR 89.7 [%] MFR 9.3 [%] HFR 1.0 [%] WBC IP Messages Abn Lympho/L_Blasts RBC/RET IP Messages RF DIFF IMI PLT IP Messages PLT Abn Distribution PLT Clumps (S)? DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual Banda 5.0 [%] Segmentados 65.5 [%] Linfocitos 17.0 [%] Monocitos 5.0 [%] Eosinófilos 3.0 [%] Basófilos 0.5 [%] Mielocitos 1.0 [%] Células atípicas 3.0 [%] El límite confuso entre las áreas de linfocitos y monocitos en el dispersograma DIFF (indicado por ) sugiere la presencia de células linfoides anormales en este lugar. Estos puntos corresponden a los linfocitos atípicos de LAT (de los cuales se encontraron 3% en la sangre periférica). La aparición del aviso Abn Lympho/L_Blasts? demuestra la excelente sensibilidad del canal DIFF para detectar células linfocíticas anormales. 6

7 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Otros CD CD CD CD HLA-DR 31.4 CD CD CD Resultados positivos para marcadores CD7 y CD25. El valor de CD4 no aumentó significativamente, lo que sugiere que las células LAT no se incrementaron. Información obtenida del análisis del frotis Se encontraron células segmentadas, enclavadas y onduladas (también conocidas como células en flor ) entre linfocitos maduros. 7

8 Casos de células linfoides anormales Leucemia de adultos célula tipo T (LAT) (2) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC [10 9 /L] DIFF WBC/BASO RBC 4.77 [10 12 /L] HGB 165 [g/l] HCT 48.0 [%] MCV [fl] MCH 34.6 [pg] MCHC 344 [g/l] PLT 145 [10 9 /L] RDW-SD 50.1 [fl] RDW-CV 13.6 [%] PDW 16.4 [fl] MPV 12.8 [fl] P-LCR [%] PCT 0.18 [%] NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO 0.22 [10 9 /L] 0.9 [%] BASO 0.09 [10 9 /L] 0.4 [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 1.17 [%] 55.8 [10 9 /L] IRF 4.5 [%] LFR 95.5 [%] MFR 3.8 [%] HFR 0.7 [%] RF IMI DC NRBC Diferencial manual WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Leukocytosis Atypical Lympho? Abn Lympho/L_Blasts? RBC/RET IP Messages PLT IP Messages Banda 4.0 [%] Segmentados 19.0 [%] Linfocitos 13.0 [%] Monocitos 4.0 [%] Eosinófilos 0.5 [%] Basófilos 0.5 [%] Células atípicas 59.5 [%] El límite confuso entre las áreas de monocitos y linfocitos en el dispersograma DIFF (indicado por ) sugiere la presencia de células linfoides anormales. Fueron consideradas como células LAT (encontradas en un 60% en la sangre periférica). 8

9 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Otros CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD8 7.6 El alto índice de positividad para CD4 y CD25 sugiere células T tumorales, mientras que el bajo índice de positividad para CD7 sugiere leucemia T crónica o aguda en adulto. Este caso fue diagnosticado como LAT aguda. Información obtenida del análisis del frotis Se encontró un significativo número de linfocitos con forma de flor segmentada. 9

10 Casos de células linfoides anormales Leucemia de células peludas (LCP) (tipo japonés) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC [10 9 /L] RBC 4.24 [10 12 /L] HGB 147 [g/l] HCT 42.5 [%] MCV [fl] MCH 34.7 [pg] MCHC 346 [g/l] PLT 211 [10 9 /L] RDW-SD [fl] RDW-CV 15.5 [%] PDW 10.4 [fl] MPV 10.1 [fl] P-LCR 23.0 [%] PCT 0.21 [%] NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO 0.30 [10 9 /L] 1.2 [%] BASO 0.07 [10 9 /L] 0.3 [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 0.78 [%] 33.1 [10 9 /L] IRF 9.4 [%] LFR 90.6 [%] MFR 8.3 [%] HFR 1.1 [%] RF DIFF IMI DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Leukocytosis Atypical Lympho? Abn Lympho/L_Blasts? RBC/RET IP Messages PLT IP Messages Banda 0.5 [%] Segmentados 8.5 [%] Linfocitos 23.5 [%] Monocitos 0.0 [%] Eosinófilos 0.0 [%] Basófilos 2.0 [%] Células peludas 65.5 [%] Este es un caso de leucemia de células peludas (LCP). En el dispersograma DIFF se formó un grupo de puntos en la región del área de linfocitos hacia el área de monocitos (indicado por ), lo que sugiere la presencia de células peludas. 10

11 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Moléculas de adhesión celular CD CD CD11a 69.0 CD CD CD11c 97.3 CD CD CD CD Otros CD FMC CD SM-IgD 1.5 SM-IgM 37.7 SM-IgA 7.7 SM-IgG 78.2 SM-IgT 75.4 SM-IgK 4.5 SM-IgL 2.4 Resultados positivos para marcadores CD19 y CD20, lo que sugiere un tumor de tipo célula B. CD11c-positivo, CD24- negativo y FMC7-positivo indican leucemia de células peludas. El valor bajo para CD25 sugiere que la leucemia es de tipo japonés. Información obtenida del análisis del frotis (*secado con un ventilador) (*secado con un ventilador) (aire seco) Tinción de fosfatasa ácida Prueba resistente al tartrato Se observan células en forma de huevo frito. En el frotis están presentes células peludas con numerosas proyecciones. En la tinción de fosfatasa ácida se encontraron células granulares grandes que contienen una o dos células débilmente positivas, las cuales fueron resistentes al tartrato. Se sabe que la leucemia de células peludas de tipo japonés muestra positividad débil en la tinción de fosfatasa ácida. *La mayoría de laboratorios japoneses usan un ventilador para secar sus tinciones o coloraciones de sangre periférica. 11

12 Casos de células linfoides anormales Caso de leucomogénesis a partir de un linfoma Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & [10 9 /L] RBC 4.00 [10 12 /L] HGB 113 [g/l] HCT 34.0 [%] MCV [fl] MCH 28.3 [pg] MCHC 332 [g/l] PLT & 20 -[10 9 /L] RDW-SD 46.5 [fl] RDW-CV 15.0 [%] PDW [fl] MPV 10.7 [fl] P-LCR 29.6 [%] PCT [%] NEUT 2.19 *[10 9 /L] 15.3 * [%] LYMPH & *[10 9 /L] 74.7 * [%] MONO 0.98 *[10 9 /L] 6.9 * [%] EO 0.19 *[10 9 /L] 1.3 * [%] BASO 0.25 *[10 9 /L] 1.8 * [%] NRBC 0.57 [10 9 /L] 4.0 [/100WBC] RET 0.36 [%] 14.4 [10 9 /L] IRF 20.2 [%] LFR 79.8 [%] MFR 15.0 [%] HFR 5.2 [%] WBC IP Messages Lymphocytosis Basophilia NRBC Present Blasts? Immature Gran? RBC/RET IP Messages RF DIFF IMI PLT IP Messages Thrombocytopenia DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual Banda 3.5 [%] Segmentados 2.5 [%] Linfocitos 8.5 [%] Monocitos 0.5 [%] Eosinófilos 1.5 [%] Basófilos 0.0 [%] Mielocitos 1.0 [%] Células anormales 82.5 [%] (Blastos +) Hematíes nucleados 2.5/100 leucocitos El límite confuso entre las áreas de linfocitos y monocitos en el dispersograma DIFF (indicado por ) sugiere la presencia de células linfoides anormales, ya que representan la mayoría en el frotis. 12

13 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/ Moléculas de Monocitos adhesión celular CD CD CD CD11a 95.7 CD CD CD CD11b 5.5 CD CD CD CD11c 4.2 CD CD CD CD CD CD CD CD CD HLA-DR 6.7 CD Plaquetas Células NK Otros CD CD CD CD Los datos sugieren que existe una proliferación neoplásica de células pre-t, las cuales son CD3 negativas; y CD4, CD8, CD10 y CD56 fueron positivas. Información obtenida del análisis del frotis Predominan pequeñas células con particiones celulares, las cuales se consideran como células de linfoma (82.5% del total). También se observa un pequeño número de células grandes y blastos. 13

14 Casos de células linfoides anormales Linfoma maligno (LM) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC [10 9 /L] RBC 4.24 [10 12 /L] HGB 116 [g/l] HCT 35.9 [%] MCV [fl] MCH 27.4 [pg] MCHC 323 [g/l] PLT 217 [10 9 /L] RDW-SD 40.3 [fl] RDW-CV 13.4 [%] PDW 13.8 [fl] MPV 12.1 [fl] P-LCR 40.6 [%] PCT 0.26 [%] NEUT *[10 9 /L] 76.5 * [%] LYMPH 1.77 *[10 9 /L] 12.5 * [%] MONO 1.34 *[10 9 /L] 9.5 * [%] EO 0.15 [10 9 /L] 1.1 [%] BASO 0.06 [10 9 /L] 0.4 [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 2.74 [%] [10 9 /L] IRF 25.0 [%] LFR 75.0 [%] MFR 19.9 [%] HFR 5.1 [%] WBC IP Messages Monocytosis Abn Lympho/L_Blasts? RBC/RET IP Messages RF DIFF IMI PLT IP Messages DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual Banda 8.5 [%] Segmentados 74.0 [%] Linfocitos 6.5 [%] Monocitos 7.0 [%] Eosinófilos 0.5 [%] Basófilos 0.0 [%] Células linfoma maligno 3.5 [%] El límite confuso entre las áreas de linfocitos y monocitos en el dispersograma DIFF (indicado por ) sugiere la presencia de células linfoides anormales, las cuales fueron clasificadas como células de linfoma maligno (3.5% del total del frotis). Aparece la alarma Abn Lympho/L_Blasts?. 14

15 Información obtenida del análisis del frotis Se encontraron células grandes de linfoma propensas a la segmentación y blastos (3.5% del total) en el frotis. 15

16 Casos de células linfoides anormales Linfoma linfocítico granular grande (LLGG) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC [10 9 /L] RBC 3.56 [10 12 /L] HGB 100 [g/l] HCT 30.6 [%] MCV 86.0 [fl] MCH 28.1 [pg] MCHC 327 [g/l] PLT 125 [10 9 /L] RDW-SD 46.5 [fl] RDW-CV 14.8 [%] PDW 13.1 [fl] MPV 10.7 [fl] P-LCR 31.8 [%] PCT [%] NEUT 1.45 *[10 9 /L] 4.7 * [%] LYMPH *[10 9 /L] 93.8 * [%] MONO 0.37 *[10 9 /L] 1.2 * [%] EO 0.03 [10 9 /L] 0.1 [%] BASO 0.05 [10 9 /L] 0.2 [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 1.11 [%] 39.5 [10 9 /L] IRF 6.8 [%] LFR 93.2 [%] MFR 5.9 [%] HFR 0.9 [%] RF DIFF IMI DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual WBC IP Messages Lymphocytosis Leukocytosis Abn Lympho/L_Blasts? RBC/RET IP Messages PLT IP Messages Banda 0.0 [%] Segmentados 11.0 [%] Linfocitos 1.5 [%] Monocitos 1.5 [%] Eosinófilos 0.0 [%] Basófilos 0.0 [%] Linfocitos granulares grandes 86.0 [%] Linfocitos granulares grandes (90% en el frotis) aparecen en el área de linfocitos del dispersograma DIFF, los cuales mostraban mayor dispersión lateral que los linfocitos normales debido a su gran contenido granular (indicado por ). 16

17 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/ Células NK Monocitos CD CD CD CD CD CD CD CD CD HLA-DR 9.2 CD Otros CD apagado CD Los datos sugieren una proliferación neoplásica de células positivas para CD3, CD4, CD8 apagado, CD16 y CD56. El linfoma linfocítico granular grande es clasificado en células tipo T o células nulas. Es raro aun para células tipo T el expresar CD4. Información obtenida del análisis del frotis La mayoría de linfocitos son grandes y contienen gránulos. 17

18 Casos de células linfoides anormales Leucemia prolinfocítica-t (LPL-T) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC [10 9 /L] RBC [10 12 /L] HGB [g/l] HCT [%] MCV 97.3 [fl] MCH 32.2 [pg] MCHC 331 [g/l] PLT 185 [10 9 /L] RDW-SD 47.6 [fl] RDW-CV 13.3 [%] PDW 12.7 [fl] MPV 11.0 [fl] P-LCR 33.2 [%] PCT 0.20 [%] NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH 9.84 *[10 9 /L] 69.3 * [%] MONO 0.51 *[10 9 /L] 3.6 * [%] EO 0.09 [10 9 /L] 0.6 [%] BASO ---- [10 9 /L] ---- [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 1.16 [%] 64.1 [10 9 /L] IRF 7.1 [%] LFR 92.9 [%] MFR 6.0 [%] HFR 1.1 [%] RF DIFF IMI DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Lymphocytosis Abn Lympho/L_Blasts? RBC/RET IP Messages PLT IP Messages Banda 3.0 [%] Segmentados 30.5 [%] Linfocitos 41.5 [%] Monocitos 1.0 [%] Eosinófilos 0.5 [%] Basófilos 2.0 [%] Células anormales 21.5 [%] (células segmentadas +) El límite confuso entre las áreas de linfocitos y monocitos en el dispersograma DIFF (indicado por ) sugiere la aparición de células linfoides anormales segmentadas, las cuales fueron encontradas en el frotis. 18

19 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/ Células NK Monocitos CD CD10 < 1.0 CD CD CD CD CD CD CD HLA-DR 5.9 CD CD8 1.4 El alto índice de positividad (por encima del 90%) para CD2, CD3, CD4, CD5 y CD7 sugiere un incremento significativo en células T. Información obtenida del análisis del frotis Se encontró un importante número de células anormales linfocíticas con cúmulos burdos en la cromatina y nucléolos claros y poco claros. Los hallazgos por los cuales este paciente fue diagnosticado con leucemia prolinfocítica fueron leucocitosis, nódulos linfáticos y bazo inflamados, así como por los resultados de la citometría de flujo y el análisis del frotis de la sangre periférica. 19

20 Casos de células linfoides anormales Reincidencia de leucemia linfocítica aguda tipo T (LLA-T) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & 3.16 [10 9 /L] RBC 2.82 [10 12 /L] HGB 86 [g/l] HCT [%] MCV 89.7 [fl] MCH 30.5 [pg] MCHC 340 [g/l] PLT & 21 -[10 9 /L] RDW-SD 51.3 [fl] RDW-CV 15.9 [%] PDW ---- [fl] MPV ---- [fl] P-LCR ---- [%] PCT ---- [%] NEUT 1.44 *[10 9 /L] 45.6 * [%] LYMPH & 0.77 *[10 9 /L] 24.4 * [%] MONO 0.94 *[10 9 /L] 29.7 * [%] EO 0.00 *[10 9 /L] 0.0 * [%] BASO 0.01 *[10 9 /L] 0.3 * [%] NRBC 0.16 [10 9 /L] 5.0 [/100WBC] RET 0.50 [%] 14.1 [10 9 /L] IRF 16.2 [%] LFR 83.8 [%] MFR 13.7 [%] HFR 2.5 [%] WBC IP Messages Lymphopenia NRBC present Blasts? Immature Gran? RBC/RET IP Messages Anemia RF DIFF IMI PLT IP Messages DC PLT Abn Distribution Thrombocytopenia WBC/BASO NRBC Diferencial manual Banda 9.0 [%] Segmentados 30.5 [%] Linfocitos 9.0 [%] Monocitos 26.0 [%] Eosinófilos 0.0 [%] Basófilos 0.0 [%] Mielocitos 2.5 [%] Metamielocitos 1.5 [%] Linfocitos atípicos 0.5 [%] Blastos 21.0 [%] (Células segmentadas grandes) monocitos grandes + Hematíes nucleados 4/100 leucocitos El espacio ocupado por los monocitos es más grande de lo normal en el dispersograma DIFF y se extiende al área de fluorescencia lateral alta. Se puede concluir que los blastos grandes y segmentados se encuentran localizados en esta área (indicado por ). Los blastos constituyeron el 21% en el diferencial manual. 20

21 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/ Moléculas de adhesión celular Monocitos CD CD CD CD11b 61.7 CD CD CD CD CD4 1.7 CD CD CD HLA-DR 1.8 CD CD8 6.9 Células NK Otros CD CD Se concluyó que este caso era una leucemia aguda tipo T. Fue positiva para CD3 y negativa para CD4 y CD8. Información obtenida del análisis del frotis Esta es una leucemia aguda tipo T recurrente. Los blastos (21% en el frotis) tienen una elevada relación núcleo/citoplasma (N/C), un solo núcleo por célula y cromatina burda. 21

22 Casos de células linfoides anormales Leucemia linfocítica aguda tipo B (LLA-B) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & @ [10 9 /L] RBC [10 12 /L] HGB 58 - [g/l] HCT [%] MCV 88.1 [fl] MCH 28.7 [pg] MCHC 326 [g/l] PLT & 45 *[10 9 /L] RDW-SD 51.2 [fl] RDW-CV [%] PDW ---- [fl] MPV ---- [fl] P-LCR ---- [%] PCT ---- [%] NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO 0.03 *[10 9 /L] 0.0 * [%] BASO 0.29 *[10 9 /L] 0.2 * [%] NRBC 0.13 *[10 9 /L] 0.1 * [/100WBC] RET 0.86 [%] 17.4 [10 9 /L] IRF 21.4 [%] LFR 78.6 [%] MFR 14.8 [%] HFR 6.6 [%] RF DIFF IMI DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Basophilia Leukocytosis Blasts? Immature Gran? RBC/RET IP Messages Anemia PLT IP Messages PLT Abn Distribution Trombocytopenia PLT Clumps? Banda 0.0 [%] Segmentados 0.5 [%] Linfocitos 6.0 [%] Monocitos 0.0 [%] Eosinófilos 0.5 [%] Basófilos 0.0 [%] Blastos 93.0 [%] (pocas células hendidas y células segmentadas) Los blastos (90% en el frotis) aparecen en el área de linfocitos y monocitos del dispersograma DIFF (indicado por ), pero muestran menos fluorescencia lateral que en el caso de LLA-T ilustrado en las páginas 20 y

23 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/ Monocitos Moléculas de adhesión celular CD2 5.6 CD CD CD11a 81.5 CD3 3.5 CD CD CD11b 72.0 CD4 3.6 CD CD CD CD5 4.2 CD CD CD CD7 5.3 CD CD CD8 3.6 HLA-DR 93.9 CD Plaquetas Células NK Otros CD CD CD CD CD10 y CD19 positivos, así como CD20 negativo, sugieren una proliferación neoplásica de células pre-b. A estas células se les ha considerado bifenotípicas, ya que fueron positivas para CD13 y CD33. Información obtenida del análisis del frotis Tinción peroxidasa Predominan blastos pequeños con una elevada relación núcleo/citoplasma (N/C). Se observó la presencia de algunas células segmentadas o con cisuras. 23

24 24 Por: Ken-ichi Anami, MT, Gerente del laboratorio clínico del Hospital Nacional Miyakonojo, Japón.

25 CASOS DE CELULAS INMADURAS DE TIPO MIELOIDE Síndrome mielodisplásico (SMD)-AR 26 LMC crisis blástica-1 28 LMC crisis blástica-2 30 Leucemia mieloide aguda (LMA)-M2 32 Leucemia mieloide aguda (LMA) variante forma-m3 34 Leucemia mieloide aguda (LMA)-M4(1) 36 Leucemia mieloide aguda (LMA)-M4(2) 40 Leucemia mieloide aguda (LMA)-M5b 42 25

26 Casos de células inmaduras de tipo mieloide Síndrome mielodisplásico (SMD)-AR Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & 4.29 [10 9 /L] RBC 3.62 [10 12 /L] HGB 122 [g/l] HCT 38.0 [%] MCV [fl] MCH 33.7 [pg] MCHC 321 [g/l] PLT & 27 -[10 9 /L] (PLT-I : 13) RDW-SD [fl] RDW-CV [%] PDW ---- [fl] MPV ---- [fl] P-LCR ---- [%] PCT ---- [%] NEUT 2.92 *[10 9 /L] 68.0 * [%] LYMPH & 0.66 *[10 9 /L] 15.4 * [%] MONO 0.17 *[10 9 /L] 4.0 * [%] EO 0.44 *[10 9 /L] 10.3 * [%] BASO 0.10 *[10 9 /L] 2.3 * [%] NRBC 0.14 [10 9 /L] 3.2 [/100WBC] RET 2.75 [%] 99.6 [10 9 /L] IRF 20.8 [%] LFR 79.2 [%] MFR 14.8 [%] HFR 6.0 [%] RF RF DIFF IMI PLT DC WBC/BASO NRBC PLT-O WBC IP Messages Lymphopenia NRBC Present RBC/RET IP Messages Anisocytosis PLT IP Messages PLT Abn Distribution Trombocytopenia Diferencial manual Banda 2.5 [%] Segmentados 66.5 [%] Linfocitos 15.0 [%] Monocitos 3.5 [%] Eosinófilos 6.5 [%] Basófilos 5.0 [%] Blastos 1.0 [%] Hematíes nucleados 2.5/100 leucocitos Este caso es una variante del síndrome mielodisplásico con anemia refractoria. La agrupación de neutrófilos en el dispersograma DIFF es anormal y se extiende desde el área de los fantasmas (indicado por ), lo que sugiere una dispersión lateral reducida y por lo tanto un menor contenido de gránulos. Esto fue confirmado en el examen de sangre periférica. Las plaquetas gigantes encontradas en el frotis fueron identificadas con una fluorescencia alta en el dispersograma PLT-O (indicado por ) y aparecen por encima de los 20fL en el histograma PLT (indicado por ). Debido a ello, la información obtenida en el dispersograma PLT-O fue usada para el reporte. 26

27 Información obtenida del análisis del frotis Están presentes neutrófilos hipersegmentados, plaquetas gigantes y eritroblastos con nucléolos bilobulados, todos característicos del síndrome mielodisplásico. Se encontraron blastos en una proporción del 1%. 27

28 Casos de células inmaduras de tipo mieloide LMC crisis blástica-1 Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & *[10 9 /L] DIFF RBC 2.72 [10 12 /L] HGB 84 [g/l] HCT [%] * Parámetros de investigación MCV 92.6 [fl] MCH 30.9 [pg] Otros 9.71 [10 9 /L] 36.1 [%] MCHC 333 [g/l] PLT & 31 *[10 9 /L] RDW-SD 51.2 [fl] RDW-CV [%] PDW ---- [fl] MPV ---- [fl] P-LCR ---- [%] PCT ---- [%] IMI NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO 0.18 *[10 9 /L] 0.7 * [%] BASO 0.13 *[10 9 /L] 0.5 * [%] NRBC 0.29 *[10 9 /L] 1.1 * [/100WBC] RET 3.67 [%] 99.8 [10 9 /L] IRF 22.6 [%] LFR 77.4 [%] MFR 17.8 [%] HFR 4.8 [%] WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Leukocytosis Blasts? Immature Gran? Left Shift? RBC/RET IP Messages Anemia * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. RF PLT IP Messages PLT Abn Distribution Thombocytopenia PLT Clumps? DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual Banda 14.0 [%] Segmentados 22.5 [%] Linfocitos 2.5 [%] Monocitos 5.0 [%] Eosinófilos 1.0 [%] Basófilos 1.0 [%] Blastos 38.5 [%] Mielocitos 9.5 [%] Metamielocitos 6.0 [%] Hematíes nucleados 1.0 /100 leucocitos En el dispersograma DIFF se puede observar en el área de monocitos una agrupación grande de puntos, la cual se extiende en la dirección de mayor fluorescencia lateral (indicado por ). Esto concuerda con la presencia de blastos encontrados en la sangre periférica. 28

29 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos examen inicial (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/ Moléculas de Monocitos adhesión celular CD2 2.0 CD CD CD11a 97.7 CD3 5.2 CD CD CD11b 92.2 CD CD CD CD CD5 1.9 CD CD CD CD7 3.4 HLA-DR 15.3 CD CD8 4.0 CD A la izquierda se muestran los marcadores de superficie en el examen inicial. CD4, CD11b, CD14 y CD36, marcadores conocidos de la serie monocítica, son todos positivos. Plaquetas Células NK Otros CD CD CD Información obtenida del análisis del frotis Este es un paciente con LMC en crisis blástica. Se identificó en el frotis un gran número de blastos con núcleos hendidos y citoplasma altamente basofílico. También fueron identificadas células inmaduras de la serie monocítica. Se encontró una reacción débilmente positiva a la esterasa α-naftol butirato sensitiva al fluoruro de sodio (NaF). Tinción esterasa Prueba de inhibición de NaF (x 400) 29

30 Casos de células inmaduras de tipo mieloide LMC crisis blástica (2) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & *[10 9 /L] DIFF RBC [10 12 /L] HGB 69 - [g/l] HCT [%] MCV 89.4 [fl] * Parámetros de investigación MCH 30.5 [pg] Otros 3.67 [10 9 /L] 36.6 [%] MCHC 342 [g/l] PLT & 12 *[10 9 /L] RDW-SD [fl] RDW-CV [%] PDW ---- [fl] MPV ---- [fl] P-LCR ---- [%] PCT ---- [%] IMI NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO 1.02 *[10 9 /L] 10.2 * [%] EO 0.01 *[10 9 /L] 0.1 * [%] BASO 0.26 *[10 9 /L] 2.6 * [%] NRBC 0.17 *[10 9 /L] 1.7 * [/100WBC] RET 0.35 [%] 7.9 [10 9 /L] IRF 22.8 [%] LFR 77.2 [%] MFR 17.4 [%] HFR 5.4 [%] WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Monocytosis Basophilia Blasts? Immature Gran? Left Shift? RBC/RET IP Messages Anemia * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. RF PLT IP Messages PLT Abn Distribution Thrombocytopenia PLT Clumps? DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual Banda 2.0 [%] Segmentados 4.5 [%] Linfocitos 15.5 [%] Monocitos 5.0 [%] Eosinófilos 0.5 [%] Basófilos 0.0 [%] Blastos 68.0 [%] Promielocitos 0.5 [%] Mielocitos 2.0 [%] Metamielocitos 2.0 [%] Hematíes nucleados 2.0/100 leucocitos Este es el mismo paciente mencionado en las páginas 28 y 29 después de tres semanas de tratamiento. Aun cuando el mismo grupo de puntos en el área de fluorescencia lateral fuerte todavía está presente en el dispersograma DIFF (indicado por ), otro grupo pequeño aparece en el área de monocitos (indicado por ). Esto sugiere una reducción en las células con alto contenido de ácido nucleico en comparación con los exámenes previos. 30

31 Información obtenida del análisis del frotis Apariencia del frotis de sangre periférica después de tres semanas de tratamiento. Los blastos eran grandes con vacuolas numerosas y de citoplasma profundamente basofílicos. Se encontraron células con apotosis por todo el frotis. 31

32 Casos de células inmaduras de tipo mieloide Leucemia mieloide aguda (LMA)-M2 Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC *[10 9 /L] RBC 2.76 [10 12 /L] HGB 90 [g/l] HCT 26.1 [%] MCV 94.6 [fl] MCH 32.6 [pg] MCHC 345 [g/l] PLT & 11 *[10 9 /L] RDW-SD [fl] RDW-CV [%] PDW ---- [fl] MPV ---- [fl] P-LCR ---- [%] PCT ---- [%] NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO 0.00 *[10 9 /L] 0.0 * [%] BASO 0.02 *[10 9 /L] 0.0 * [%] NRBC 0.00 *[10 9 /L] 0.0 * [/100WBC] RET 0.25 [%] 6.9 [10 9 /L] IRF 10.2 [%] LFR 89.8 [%] MFR 8.9 [%] HFR 1.3 [%] RF DIFF IMI DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Leukocytosis Blasts? Immature Gran? Left Shift? RBC/RET IP Messages Anemia PLT IP Messages PLT Abn Distribution Thrombocytopenia PLT Clumps? Banda 0.0 [%] Segmentados 0.0 [%] Linfocitos 2.5 [%] Monocitos 0.0 [%] Eosinófilos 0.0 [%] Basófilos 0.0 [%] Blastos 97.5 [%] Cuerpos de Auer+ Este caso es una leucemia mieloide aguda ( (LMA)-M2 ) en recaída. Se pensó que los blastos (97.5% en el frotis) estaban localizados en el área de linfocitos y monocitos en el dispersograma DIFF (indicado por ). Los puntos rojos que aparecen en el dispersograma IMI (indicado por ) sugieren la presencia de células inmaduras de la serie neutrofílica. 32

33 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (médula ósea) Células T Células B Granulocitos/ Moléculas de Monocitos adhesión celular CD2 4.2 CD CD CD11a 17.8 CD3 0.3 CD CD CD11b 7.4 CD4 4.4 CD CD CD CD5 4.3 CD CD CD CD7 6.0 CD CD CD8 2.1 HLA-DR 75.8 El marcador CD13 fue positivo, mientras que CD14 y CD36 fueron negativos, lo que sugiere la presencia de blastos de tipo mieloide. Plaquetas Células NK CD CD CD Información obtenida del análisis del frotis Se observan blastos con nucléolos bastante evidentes y citoplasmas ligeramente turbios, algunos de los cuales contienen cuerpos de Auer. La tinción de peroxidasa es fuertemente positiva. Tinción peroxidasa 33

34 Casos de células inmaduras de tipo mieloide Leucemia mieloide aguda (LMA) variante forma-m3 Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & *[10 9 /L] RBC 2.18 *[10 12 /L] HGB 55 - [g/l] HCT 17.5 * [%] MCV 80.3 * [fl] MCH 25.2 * [pg] MCHC 314 * [g/l] PLT & 30 *[10 9 /L] RDW-SD ---- [fl] RDW-CV ---- [%] PDW ---- [fl] MPV ---- [fl] P-LCR ---- [%] PCT ---- [%] NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO 0.03 *[10 9 /L] 0.0 * [%] BASO 0.08 *[10 9 /L] 0.1 * [%] NRBC 0.09 *[10 9 /L] 0.1 * [/100WBC] RET 1.71 * [%] 37.3 *[10 9 /L] IRF 51.4 * [%] LFR 48.6 * [%] MFR 31.4 * [%] HFR 20.2 * [%] WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Leukocytosis Blasts? Immature Gran? Left Shift? RBC/RET IP Messages RBC Abn Distribution Dimorphic Population RET Abn Scattergram Anemia Fragments? RF DIFF IMI PLT IP Messages PLT Abn Distribution Thrombocytopenia PLT Clumps? DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual Banda 0.0 [%] Segmentados 0.5 [%] Linfocitos 1.0 [%] Monocitos 0.0 [%] Eosinófilos 0.0 [%] Basófilos 0.0 [%] Blastos 3.0 [%] Promielocitos 91.5 [%] Mielocitos 3.5 [%] Metamielocitos 0.5 [%] Un grupo de puntos localizado en el área de linfocitos y monocitos que se extiende en dirección del sitio de mayor fluorescencia (indicado por ), sugiere que los promielocitos (91.5% en el frotis de sangre periférica) aparecen aquí. También se observan pequeños puntos en áreas usualmente ocupadas por neutrófilos y eosinófilos, lo que concuerda con las observaciones del recuento microscópico. La gran cantidad de puntos rojos que aparecen en el dispersograma IMI sugieren células inmaduras de la serie mieloide (indicado por ). 34

35 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos examen inicial (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/ Moléculas de Monocitos adhesión celular CD CD CD CD CD3 0.5 CD CD CD4 0.7 CD CD CD5 0.4 CD CD CD7 3.1 HLA-DR 1.1 CD CD8 0.1 CD Plaquetas Células NK CD CD Los marcadores mieloides CD13 y CD33 fueron positivos, mientras que los marcadores CD14 y CD36, a los cuales se conoce como reacción de células monocíticas, fueron negativos. Esto sugiere leucemia mieloide. Información obtenida del análisis del frotis Tinción peroxidasa Se observan muchas células bilobuladas, otras exhiben clivaje o núcleos hendidos. El citoplasma presentó variaciones de color, que fueron de azul profundo a gris con algunas vacuolas y pequeña cantidad de gránulos azurófilos y fardos de cuerpos de Auer (células de Faggot). Se observó una reacción fuertemente positiva a la tinción de peroxidasa en la mayoría de las células. Todos estos datos indican variante forma-m3. En la mayoría de casos de esta variante el recuento periférico de leucocitos es bajo, pero en el presente caso es elevado. 35

36 Casos de células inmaduras de tipo mieloide Leucemia mieloide aguda (LMA)-M4 (1) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC [10 9 /L] DIFF IMI RBC 3.47 [10 12 /L] HGB 106 [g/l] HCT 31.2 [%] MCV 89.9 [fl] * Parámetros de investigación MCH 30.5 [pg] IG [10 9 /L] 15.0 [%] MCHC 340 [g/l] PLT & 48 * [10 9 /L] RDW-SD 50.2 [fl] RDW-CV 15.4 [%] PDW ---- [fl] MPV ---- [fl] P-LCR ---- [%] x 10 PCT ---- [%] DIFF IMI NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO 0.69 * [10 9 /L] 0.3 * [%] BASO ---- [10 9 /L] ---- [%] NRBC 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [/100WBC] RET 0.44 * [%] 15.3 * [10 9 /L] IRF 47.8 * [%] LFR 52.2 * [%] MFR 21.1 * [%] DC HFR 26.7 * [%] * Parámetros de investigación Diferencial manual IG 5.07 [10 9 /L] 20.2 [%] Banda 0.5 [%] WBC IP Messages RBC/RET IP Messages PLT IP Messages Segmentados 0.0 [%] WBC Abn Scattergram RET Abn Scattergram PLT Abn Distribution Linfocitos 3.5 [%] Leukocytosis Thrombocytopenia Monocitos 20.0 [%] Eosinófilos 0.5 [%] Blasts? PLT Clumps? Basófilos 0.0 [%] Immature Gran? Left Shift? Promielocitos 4.0 [%] Mielocitos 15.5 [%] * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. Metamielocitos Blastos 3.5 [%] 52.5 [%] Presentación de un caso de LMA-M4. Aparecen muchos puntos rojos en el dispersograma IMI, lo que sugiere la presencia de granulocitos precursores. En el dispersograma DIFF, la fusión de puntos en el área de linfocitos y monocitos y su extensión dentro del área de alta fluorescencia (indicado por ), sugiere la presencia de blastos (52.5% de la preparación). Los datos de los parámetros de investigación del XE-2100 indican 15% de blastos, nivel ligeramente diferente del diferencial manual (promielocitos: 4.0% + mielocitos: 15.5% + metamielocitos: 3.5% = 23%). Sin embargo, el recuento original de leucocitos rebasó el límite de linearidad, se repitió el análisis en una dilución de 1 a 10 (indicado por la flecha ) dando como resultado un recuento de granulocitos inmaduros (IG) del 20%, el cual fue más cercano al conseguido por el método visual. La proporción de IMI obtenida de los datos de la pantalla de servicio fue de 73.6% (indicado por ), lo que se acerca al 75.5% obtenido por el método visual. RF RF DC 36

37 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/ Monocitos Moléculas de adhesión celular CD2 2.8 CD CD CD11b 49.8 CD7 4.6 HLA-DR 76.2 CD CD CD CD CD Células NK CD Los marcadores CD11b, CD13, CD14, CD15, CD33 y HLA-DR fueron positivos, mientras que CD14 estuvo cercano al 40%. Esto sugiere hiperplasia de las dos líneas celulares: mielocítica y monocítica. Información obtenida del análisis del frotis (1) Tinción peroxidasa Se aprecia un incremento de células mieloides inmaduras (en el rango de promielocitos y metamielocitos) y también de monocitos (incluyendo promonocitos). La tinción de peroxidasa va desde positiva o débilmente positiva a negativa. 37

38 Información obtenida del análisis del frotis (2) Tinción esterasa Prueba de inhibición de Naf (x 400) En la tinción de esterasa se encontraron células positivas para α-naftil butirato y células positivas para naftol-as-d-cloroacetato. 38

39 α α α α α α α α α α α µ 8 21 Por: Ken-ichi Anami, MT, gerente del laboratorio clínico del Hospital Nacional Miyakonojo, Japón. 39

40 Casos de células inmaduras de tipo mieloide Leucemia mieloide aguda (LMA)-M4 (2) Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & 4.08 *[10 9 /L] RBC 2.55 [10 12 /L] HGB 78 - [g/l] HCT [%] MCV 93.3 [fl] * Parámetros de investigación MCH 30.6 [pg] Otros 0.06 [10 9 /L] 1.5 [%] MCHC 328 [g/l] PLT & 25 *[10 9 /L] RDW-SD 48.0 [fl] RDW-CV 15.7 [%] PDW ---- [fl] MPV ---- [fl] P-LCR ---- [%] PCT ---- [%] NEUT 1.00 *[10 9 /L] 24.6 * [%] LYMPH & 1.22 *[10 9 /L] 29.9 * [%] MONO 1.82 *[10 9 /L] 44.6 * [%] EO 0.01 *[10 9 /L] 0.2 * [%] BASO 0.03 *[10 9 /L] 0.7 * [%] NRBC 0.05 *[10 9 /L] 1.2 * [/100WBC] RET 1.31 [%] 33.4 [10 9 /L] IRF 12.5 [%] LFR 87.5 [%] MFR 10.9 [%] HFR 1.6 [%] WBC IP Messages Monocytosis Blasts? Immature Gran? RBC/RET IP Messages Anemia RF DIFF IMI PLT IP Messages PLT Abn Distribution Thrombocytopenia PLT Clumps? * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual Banda 14.0 [%] Segmentados 17.5 [%] Linfocitos 24.0 [%] Monocitos 33.0 [%] Eosinófilos 0.0 [%] Basófilos 0.0 [%] Linfocitos atípicos 1.0 [%] Blastos 10.0 [%] Mielocitos 0.5 [%] Hematíes nucleados 1/100 leucocitos Los monocitos se extienden verticalmente en el área del dispersograma DIFF (indicado por ), lo que sugiere la presencia de blastos (10% de la preparación de sangre periférica). La lectura de Otros ( Other ), los cuales proveen información acerca de células con alto contenido de ácido nucleico, fue 1.5% (indicado por ). Esta área corresponde a los linfocitos atípicos. El recuento obtenido por el método visual concuerda con el de linfocitos atípicos del 1%. La nube de neutrófilos está anormalmente localizada, contigua al área de células fantasmas (indicado por ). Esto sugiere que los neutrófilos son hipogranulares y bajos en contenido de ácido nucleico. 40

41 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos examen inicial (médula ósea) Células T Células B Granulocitos/ Moléculas de Monocitos adhesión celular CD2 1.0 CD CD CD CD3 1.0 CD CD CD4 0.0 CD CD CD5 2.0 HLA-DR 63.0 CD CD7 1.0 CD8 0.0 Células NK CD Los resultados iniciales de los marcadores. CD13, CD14, CD33 y HLA-DR fueron positivos, lo que indica la presencia de blastos de línea mieloide y monocítica. Información obtenida del análisis del frotis (sangre periférica) Tinción esterasa (médula ósea) Tinción peroxidasa (sangre periférica) Este caso fue diagnosticado como LMA-M4 a partir del análisis de la médula ósea. En sangre periférica se observó incremento de células inmaduras de las líneas mieloide y monocítica. La mayoría de los monocitos mostraron una reacción negativa a la peroxidasa. Las células mieloides mostraron reacción positiva con las tinciones de esterasa, α-naftol butirato o naftol-as-d-cloroacetato. 41

42 Casos de células inmaduras de tipo mieloide Leucemia mieloide aguda (LMA)-M5b Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC * [10 9 /L] RBC 3.09 [10 12 /L] HGB 113 [g/l] HCT 33.6 [%] MCV [fl] MCH 36.6 [pg] MCHC 336 [g/l] PLT 60 * [10 9 /L] RDW-SD 50.7 [fl] RDW-CV 12.9 [%] PDW 11.0 * [fl] MPV 11.3 * [fl] P-LCR 31.4 * [%] PCT 0.07 * [%] NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO ---- [10 9 /L] ---- [%] EO 0.11 * [10 9 /L] 0.2 * [%] BASO 0.20 * [10 9 /L] 0.3 * [%] NRBC 0.00 * [10 9 /L] 0.0 * [/100WBC] RET 1.15 [%] 35.5 [10 9 /L] IRF 14.6 [%] LFR 85.4 [%] MFR 12.3 [%] HFR 2.3 [%] RF DIFF IMI DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual WBC IP Messages WBC Abn Scattergram Leukocytosis Blasts? Immature Gran? Left Shift? RBC/RET IP Messages PLT IP Messages PLT Clumps? Banda 1.5 [%] Segmentados 1.5 [%] Linfocitos 12.5 [%] Monocitos 24.5 [%] Eosinófilos 0.5 [%] Basófilos 0.0 [%] Promielocitos 0.5 [%] Blastos 59.0 [%] Hematíes nucleados 0.5/100 leucocitos Este caso fue diagnosticado como LMA-M5b. Aparecen muchos puntos rojos en el dispersograma IMI, lo que sugiere la presencia de células mieloides inmaduras. La fusión de linfocitos y monocitos en el área del dispersograma DIFF (indicado por ) sugiere la localización de los blastos encontrados en el frotis de sangre periférica (59%). 42

43 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/ Moléculas de Monocitos adhesión celular CD CD CD CD11b 82.4 CD3 0.6 CD CD CD CD CD CD5 0.6 HLA-DR 87.9 CD CD7 1.5 CD CD8 0.4 Células NK Otros CD CD CD El marcador CD14 fue positivo, lo que indica la presencia de células monocíticas. El alto índice de positividad para CD4 sugiere hiperplasia de blastos, en su mayoría monocitos. Información obtenida del análisis del frotis (1) Tinción peroxidasa Se observó en el frotis un gran número de blastos hendidos con una relación núcleo/citoplasma (N/C) elevada y con citoplasma basófilo. Los monocitos, incluyendo los promonocitos, están elevados. La tinción de peroxidasa varió de débilmente positiva a negativa, mientras que se hallaron células positivas para α-naftol butirato esterasa inhibidas por el NaF (ver página siguiente). 43

44 Información obtenida del análisis del frotis (2) Tinción esterasa Prueba de inhibición de Naf Tinción PAS 44

45 CASOS DE CELULAS DE APARIENCIA ESPECIFICA Caso de cuerpos de Howell-Jolly 46 Caso de linfocitos segmentados 48 Caso de células linfoides anormales 50 Caso de granulocitos inmaduros 52 Caso de esquizocitos 54 Neutrófilos sin granulación 56 45

46 Casos de células de apariencia específica Caso de cuerpos de Howell-Jolly Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & 4.26 *[10 9 /L] RBC 2.57 [10 12 /L] HGB 67 - [g/l] HCT [%] MCV 89.1 [fl] MCH 26.1 [pg] MCHC [g/l] PLT 435 *[10 9 /L] RDW-SD [fl] RDW-CV [%] PDW 12.9 * [fl] MPV 11.5 * [fl] P-LCR 36.9 * [%] PCT 0.50 * [%] NEUT 2.25 *[10 9 /L] 52.8 * [%] LYMPH & 0.92 *[10 9 /L] 21.6 * [%] MONO 0.89 *[10 9 /L] 20.9 * [%] EO 0.13 *[10 9 /L] 3.1 * [%] BASO 0.07 *[10 9 /L] 1.6 * [%] NRBC 1.15 *[10 9 /L] 27.0 * [/100WBC] RET 1.52 [%] 39.1 [10 9 /L] IRF 22.1 [%] LFR 77.9 [%] MFR 16.6 [%] HFR 5.5 [%] WBC IP Messages NRBC Present RBC/RET IP Messages Anisocytosis Anemia Fragments? RF DIFF IMI PLT IP Messages PLT Clumps? DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual Banda 2.0 [%] Segmentados 27.5 [%] Linfocitos 42.0 [%] Monocitos 23.0 [%] Eosinófilos 4.0 [%] Basófilos 1.0 [%] Mielocitos 0.5 [%] Hematíes nucleados 26/100 leucocitos En el dispersograma NRBC aparecen muchos puntos azules entre el área normal de células fantasmas y el área de normoblastos (indicado por ), lo que sugiere la presencia de cuerpos de Howell-Jolly. Estos puntos fueron incluidos en la fracción de células fantasmas sin tener influencia en los datos de hematíes nucleados. Los puntos rosados (indicado por ) representan hematíes nucleados, cuyo recuento concuerda muy cercanamente con el diferencial manual. En el dispersograma WBC/BASO, esos normoblastos aparecen en el eje de alta dispersión (indicado por ). Esto demuestra que el XE provee información verdadera después de descontar los hematíes nucleados que aparecen en el área de leucocitos (indicado por WBC & ). 46

47 Información obtenida del análisis del frotis (hematíes nucleados) (hematíes nucleados) (hematíes nucleados) (cuerpo Howell-Jolly) (cuerpo Howell-Jolly) (cuerpo Howell-Jolly) Los cuerpos de Howell-Jolly son normalmente de 2 µm o menores y se pueden diferenciar fácilmente de los hematíes nucleados. Sin embargo, este caso presenta gran cantidad de normoblastos con núcleos pequeños y eritrocitos con cuerpos de Howell-Jolly de gran tamaño. 47

48 Casos de células de apariencia específica Caso de linfocitos segmentados Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC [10 9 /L] RBC [10 12 /L] HGB 91 * [g/l] HCT [%] MCV [fl] MCH 42.1 * [pg] MCHC 370 * [g/l] PLT & 20 -[10 9 /L] RDW-SD [fl] RDW-CV 13.2 [%] PDW 13.8 [fl] MPV 12.6 [fl] P-LCR [%] PCT [%] NEUT 0.07 *[10 9 /L] 3.8 * [%] LYMPH 1.62 *[10 9 /L] 86.6 * [%] MONO 0.17 *[10 9 /L] 9.1 * [%] EO 0.00 [10 9 /L] 0.0 [%] BASO 0.01 [10 9 /L] 0.5 [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 0.29 [%] 6.3 [10 9 /L] IRF 0.0 [%] LFR [%] MFR 0.0 [%] HFR 0.0 [%] RF DIFF IMI DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual WBC IP Messages Neutropenia Leukocytopenia Abn Lympho/L_Blasts? RBC/RET IP Messages Macrocytosis Anemia Turbidity/HGB Interf? PLT IP Messages Thrombocytopenia Banda 0.0 [%] Segmentados 0.0 [%] Linfocitos 43.0 [%] Monocitos 0.0 [%] Eosinófilos 0.0 [%] Basófilos 0.0 [%] Células anormales 57.0 [%] (células segmentadas +) Este es un caso de LMA-M2 bajo tratamiento. Únicamente se hallaron linfocitos en el frotis de sangre periférica y la mayoría estaban segmentados. Se cree que estas células se detectaron en el área de linfocitos/monocitos del dispersograma DIFF (indicado por ). Debido al muy bajo recuento de leucocitos, aparece la alarma de Abn Lympho/L_Blasts?, lo que sugiere un problema con los linfocitos. 48

49 Información obtenida por el método de citometría de flujo Datos (sangre periférica) Células T Células B Granulocitos/ Otros Monocitos CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD HLA-DR 86.1 CD CD8 6.2 Los marcadores CD2, CD3 y CD4 fueron positivos, lo que indica un incremento en la relación cooperador/supresor de las células T. Como el CD25 y el HLA-DR también fueron positivos, se consideró que estas células estaban activadas. Información obtenida del análisis del frotis Este caso es una M2 en tratamiento. Se encontró un bajo recuento de leucocitos. La mayoría de las células eran linfocitos. Cerca del 50% de ellos fueron pequeños linfocitos anormales segmentados. 49

50 Casos de células de apariencia específica Caso de células linfoides anormales Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC [10 9 /L] RBC 3.26 [10 12 /L] HGB 103 [g/l] HCT 31.6 [%] MCV 96.9 [fl] MCH 31.6 [pg] MCHC 326 [g/l] PLT 161 [10 9 /L] RDW-SD 47.3 [fl] RDW-CV 13.7 [%] PDW 10.4 [fl] MPV 9.8 [fl] P-LCR 22.9 [%] PCT [%] NEUT 5.03*[10 9 /L] 45.9 * [%] LYMPH 5.31*[10 9 /L] 48.6 * [%] MONO 0.50*[10 9 /L] 4.6 * [%] EO 0.05 [10 9 /L] 0.5 [%] BASO 0.04 [10 9 /L] 0.4 [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 1.60 [%] 52.2 [10 9 /L] IRF 13.0 [%] LFR 87.0 [%] MFR 11.4 [%] HFR 1.6 [%] RF DIFF IMI DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual WBC IP Messages Lymphocytosis Abn Lympho/L_Blasts? RBC/RET IP Messages PLT IP Messages Banda 4.5 [%] Segmentados 51.0 [%] Linfocitos 31.0 [%] Monocitos 5.5 [%] Eosinófilos 1.0 [%] Basófilos 0.0 [%] Células anormales 7.0 [%] (células segmentadas +) El límite confuso entre las áreas de linfocitos y monocitos en el dispersograma DIFF (indicado por ) sugiere la presencia de células linfoides anormales. En el frotis se observaron células linfoides segmentadas anormales. 50

51 Información obtenida del análisis del frotis Se encontraron pequeñas células linfoides segmentadas anormales con alta relación núcleo/ citoplasma (N/C) en sangre periférica (7%). 51

52 Casos de células de apariencia específica Caso de granulocitos inmaduros Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC 8.69 [10 9 /L] DIFF RBC 4.05 [10 12 /L] HGB 128 [g/l] HCT 38.4 [%] * Parámetros de investigación MCV 94.8 [fl] IG 1.66 [10 MCH 31.6 [pg] /L] 19.1 [%] MCHC 333 [g/l] PLT 105 [10 9 /L] RDW-SD 47.9 [fl] RDW-CV 14.0 [%] PDW 11.2 [fl] MPV 10.1 [fl] P-LCR 26.5 [%] PCT [%] IMI NEUT &5.25 *[10 9 /L] 60.4 * [%] LYMPH [10 9 /L] [%] MONO 0.63 [10 9 /L] 7.2 [%] EO 0.13 *[10 9 /L] 1.5 * [%] BASO 0.11 *[10 9 /L] 1.3 * [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 2.14 [%] 86.7 [10 9 /L] IRF 24.0 [%] LFR 76.0 [%] MFR 20.5 [%] HFR 3.5 [%] WBC IP Messages Immature Gran? Left Shift? RBC/RET IP Messages * Estos datos han sido obtenidos de una pantalla de investigación. RF PLT IP Messages DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual Banda 17.0 [%] Segmentados 38.5 [%] Linfocitos 6.0 [%] Monocitos 10.0 [%] Eosinófilos 2.0 [%] Basófilos 0.5 [%] Mielocitos 17.0 [%] Metamielocitos 8.5 [%] Linfocitos atípicos 0.5 [%] En el dispersograma DIFF, un grupo de puntos se extiende desde el área de neutrófilos hacia el área de fluorescencia alta (indicado por ), lo que sugiere la presencia de granulocitos inmaduros. El XE-2100 ofrece un parámetro de investigación, el IG o granulocitos inmaduros, que reportó un valor de 19.1%, el cual corresponde cercanamente al 17% de mielocitos obtenidos por el diferencial manual. La presencia de granulocitos inmaduros también fue sugerida por la gran cantidad de puntos rojos en el dispersograma IMI (indicado por ). Además, la determinación del porcentaje de células mieloides inmaduras desde el menú de datos de servicio fue del 28.0%, lo que corresponde a la suma de los mielocitos (17%) + metamielocitos (8.5%) = 25.5%, obtenido en el frotis. 52

53 Información obtenida del análisis del frotis Se aprecia un gran número de células mieloides en sangre periférica (incluyendo mielocitos inmaduros y metamielocitos). 53

54 Casos de células de apariencia específica Caso de esquizocitos Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC 5.82 [10 9 /L] RBC 4.44 [10 12 /L] HGB 86 [g/l] HCT 31.3 [%] MCV [fl] MCH [pg] MCHC [g/l] PLT & 342 [10 9 /L] (PLT-I : 379) RDW-SD 49.7 [fl] RDW-CV [%] PDW 11.9 * [fl] MPV 9.7 * [fl] P-LCR 23.5 * [%] PCT 0.37 * [%] NEUT 3.88 [10 9 /L] 66.7 [%] LYMPH 1.51 [10 9 /L] 25.9 [%] MONO 0.33 [10 9 /L] 5.7 [%] EO 0.08 [10 9 /L] 1.4 [%] BASO 0.02 [10 9 /L] 0.3 [%] NRBC 0.00 [10 9 /L] 0.0 [/100WBC] RET 0.93 [%] 41.3 [10 9 /L] IRF 14.9 [%] LFR 85.1 [%] MFR 13.5 [%] HFR 1.4 [%] RET RBC PLT-O PLT Diferencial manual (Método Fonio) PLT 344 [10 9 /L] WBC IP Messages RBC/RET IP Messages Hypochromia Anemia Iron Deficiency? Fragments? PLT IP Messages PLT Abn Distribution El frotis de sangre periférica muestra muchos esquizocitos. Sin embargo, aun cuando en el dispersograma RET los esquizocitos se extienden desde el área de hematíes hacia las plaquetas (indicado por ), en el dispersograma PLT-O se observa una clara distinción entre las dos poblaciones (indicado por ). Ello indica que no hubo influencia de los esquizocitos en el recuento óptico de plaquetas. La alarma PLT Abn Distribution se generó debido a que los esquizocitos están presentes en el umbral de 30 fl en el histograma PLT (indicado por ), por lo que los datos del dispersograma PLT-O fueron usados para el recuento. Este resultado concuerda con los resultados obtenidos en el diferencial manual (344 vs. 342 x 10 9 /L). 54

55 Información obtenida del análisis del frotis Se observó un gran número de esquizocitos, tal como lo indican las flechas. (x 400) 55

56 Casos de células de apariencia específica Neutrófilos sin granulación Información del XE-2100 Información medida por el XE-2100 WBC & 8.17 [10 9 /L] RBC 2.85 [10 12 /L] HGB 102 [g/l] HCT 29.7 [%] MCV [fl] MCH 35.8 [pg] MCHC 343 [g/l] PLT 200 [10 9 /L] RDW-SD 49.1 [fl] RDW-CV 12.9 [%] PDW 10.2 [fl] MPV 10.3 [fl] P-LCR 24.8 [%] PCT 0.21 [%] NEUT ---- [10 9 /L] ---- [%] LYMPH ---- [10 9 /L] ---- [%] MONO 0.09 [10 9 /L] 1.1 [%] EO 0.00 [10 9 /L] 0.0 [%] BASO 0.01 [10 9 /L] 0.1 [%] NRBC 0.04 [10 9 /L] 0.5 [/100WBC] RET 1.39 [%] 39.6 [10 9 /L] IRF 13.4 [%] LFR 86.6 [%] MFR 12.1 [%] HFR 1.3 [%] WBC IP Messages WBC Abn Scattergram RBC/RET IP Messages RF DIFF IMI PLT IP Messages DC WBC/BASO NRBC Diferencial manual Banda 1.0 [%] Segmentados 57.5 [%] Linfocitos 19.0 [%] Monocitos 1.5 [%] Eosinófilos 1.5 [%] Basófilos 0.0 [%] Promielocitos 0.5 [%] Mielocitos 0.5 [%] Células sin clasificación 18.5 [%] (sospecha de basófilos) Este paciente tiene SMD (AREB). En el dispersograma DIFF aparece sólo un pequeño número de puntos en el área normal de neutrófilos (indicado por ). Sin embargo, aparece un grupo grande entre el área de linfocitos y células fantasmas (indicado por ). Se considera que este grupo de puntos corresponde a los neutrófilos con ausencia o reducción en la granulación. El eje de las X del dispersograma DIFF corresponde a la intensidad de dispersión que indica el contenido celular. 56

57 Información obtenida del análisis del frotis (1) ( Basófilo?) (Eosinófilo) Tinción peroxidasa Tinción peroxidasa Basófilo? Tinción peroxidasa Tinción peroxidasa (Eosinófilo) En el frotis se encontro un gran número de neutrófilos con reducción o ausencia de gránulos secundarios. La tinción de peroxidasa estuvo ausente en más del 90% de los neutrófilos maduros. Los gránulos de los eosinófilos fueron muy finos y en los basófilos no se pudieron distinguir. Además, en el 18.5% de las células fue difícil la diferenciación porque tienen núcleos semejantes a los basófilos, pero con ausencia de gránulos. 57

58 Información obtenida del análisis del frotis (2) Tinción fosfatasa alcalina Tinción PAS Tinción PAS Tinción esterasa Tinción esterasa Los neutrófilos se clasificaron como clase III ó IV en la coloración de fosfatasa alcalina. Algunas células mostraron reacción PAS difusa. En tinción de esterasa, naftol-as-d-cloroacetato fue negativa o débilmente positiva en la mayoría de los neutrófilos; sólo muy pocos mostraron reacción fuertemente positiva. 58