Implementación metodología analítica

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1 ALERGENOS EN ALIMENTOS Implementación metodología analítica Comisión Nacional de Alimentos Reunión Plenaria - 21 y 22 de septiembre de 2011

2 Alergias alimentarias Constituyen una falla o respuesta anormal del sistema inmunológico a determinados componentes de los alimentos NIÑOS Prevalencia ADULTOS 6 % 2 4 % leche, huevo y maní mariscos, soja, maní, frutos secos, pescado

3 Alergias alimentarias Si bien hay cientos de alimentos que contienen alérgenos capaces de causar un shock anafiláctico, son sólo ocho los responsables de más del 90 % de los casos que ocurren en todo el mundo

Los grandes ocho : Leche Huevo Maní Soja Alergias alimentarias Pescados ( especies de aleta de peces marinos y de agua dulce) Crustáceos (camarones, langostinos, langosta, cangrejo) Frutos secos

4 Los grandes ocho : Leche Huevo Maní Soja Alergias alimentarias Pescados ( especies de aleta de peces marinos y de agua dulce) Crustáceos (camarones, langostinos, langosta, cangrejo) Frutos secos (avellana, almendra, nueces, castañas, piñones) Trigo (Diferenciación con intolerancia al gluten) Reacciones idiosincráticas: No existe un mecanismo único Sulfito (antioxidante, conservante, blanqueador)

5 Gestión de alérgenos en alimentos Plan de acción OBJETIVO GENERAL: Fortalecer la cooperación técnica entre los laboratorios pertenecientes a la RENALOA para la correcta gestión de alérgenos en alimentos asegurando el máximo aprovechamiento de los recursos disponibles

6 Gestión de alérgenos en alimentos Plan de acción ALIMENTOS A ENSAYAR - Alérgenos seleccionados leche (caseína y β-lactoalbúmina) huevo maní soja frutos secos (avellana, nueces, almendras) trigo sulfitos

7 Objetivos específicos: Gestión de alérgenos en alimentos Plan de acción 1. Relevar la metodología analítica disponible para la detección de alérgenos en alimentos 2. Relevar la situación actual y capacidad analítica de los laboratorios pertenecientes a RENALOA para la puesta a punto y validación de la metodología de análisis 3. Coordinar con los Laboratorios Miembro de la Red la implementación de la metodología analítica disponible 4. Implementar y validar las metodologías analíticas seleccionadas en cada laboratorio miembro 5. Participar en Pruebas de Proficiencia

8 Gestión de alérgenos en alimentos Plan de acción OBJETIVOS ACTIVIDADES RESULTADOS ESPERADOS Específico 1: - Búsqueda bibliográfica - Bibliografía disponible Relevar la metodología analítica disponible para la detección de alérgenos en alimentos - Recopilación de información proveniente de diferentes grupos de investigación - Evaluar: alcance, disponibilidad de materiales, costos, tiempo de implementación. - Evaluar: equivalencia, ventajas y desventajas entre las diferentes metodologías estudiadas y probadas. - Informe de datos y resultados -Informe con detalle de métodos de ensayo aplicables -Cuadro comparativo de metodologías probables

9 METODOS BASADOS EN LA DETECCIÓN DE PROTEÍNAS INMUNOENSAYOS ELISA alta especificidad y sensibilidad de los anticuerpos Dispositivos de Flujo lateral (LFD) MÉTODOSDE SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS Espectrometría de masa (MS) análisis confirmatorio sensibilidad similar a ELISA MÉTODOS BASADOS EN ADN PCR / PCR en tiempo real herramienta valiosa para indicar la presencia / ausencia de un alérgeno análisis confirmatorio de ELISA monitoreo indirecto de los alérgenos a nivel de ADN detecta por debajo de una concentración de 10 mg/kg

10 METODOLOGÍAS DE DETECCIÓN DE ALERGENOS EN ALIMENTOS CUADRO COMPARATIVO Detección Métodos basados en la detección de proteínas (ELISA) Alérgeno principal o proteínas específicas Métodos basados en la detección de ADN (real-time PCR, PCR-ELISA) Fragmento ADN Especificidad Posible reacciones cruzadas Alta especificidad Límite de detección Cuantificación Variabilidad natural target Efecto matriz Efectos relativos al procesamiento del alimento Manipulación Bajo rango (ppm) Cuantificación de proteína específica Resultados pueden variar con especies, cambios climáticos + cambios estacionales Ligeros cambios en protocolo pueden afectar extracción Pueden no ser detectadas proteínas desnaturalizadas o modificadas enzimáticamente simple Teóricamente 10 moléculas Cuantificación indirecta del contenido de proteína Genotipo muy estable Inhibidores PCR presentes en el alimento Estable frente a altas temperaturas, pero ADN puede fragmentarse a ph bajo Requiere training en manipulación ADN Positivo Intermedio Negativo

11 Gestión de alérgenos en alimentos Plan de acción OBJETIVOS ACTIVIDADES RESULTADOS ESPERADOS Específico 2: Relevar la situación actual y capacidad analítica de los laboratorios pertenecientes a RENALOA para la puesta a punto y validación de la metodología de análisis -Redactar /Invitar a los laboratorios miembro -Contactar a los laboratorios miembro que respondieron a la invitación -Invitación redactada y enviada - Informe de situación

12 Gestión de alérgenos en alimentos Plan de acción OBJETIVOS ACTIVIDADES RESULTADOS ESPERADOS Específico 3: - Invitar a reunión presencial - Invitación realizada Coordinar con los Laboratorios Miembro de la implementación de la metodología analítica disponible - Realizar reunión con los Laboratorios (discutir criterios de selección de alérgenos prioritarios/criterios de validación/criterios de aceptación) -Agenda/Lista de participantes/acta de la reunión

13 Gestión de alérgenos en alimentos Plan de acción OBJETIVOS ACTIVIDADES RESULTADOS ESPERADOS Específico 4: Implementar y validar las metodologías analíticas seleccionadas en cada Laboratorio Miembro - Adquirir insumos necesarios para la implementación de la metodología: kits/material de referencia/reactivos -Implementar/Validar Metodología Analítica - Insumos disponibles -Informe de validación Específico 5: Participar en Pruebas de Proficiencia - Seleccionar pruebas de proficiencia - Participar de al menos 2 pruebas proficiencia/año -Laboratorios generando resultados confiables y reproducibles

14 CONCLUSIONES NECESIDAD DE EVALUAR RIGUROSAMENTE LOS MÉTODOS DE ENSAYO IMPLEMENTACIÓN DE MÉTODOS Y VALIDACIÓN DE LOS MISMOS ENFOCAR LA ATENCIÓN EN LOS RIESGOS COMPROBADOS Y PREDOMINANTES

15 BIBLIOGRAFÍA O. STEPHAN, N. WEISZ, S. VIETHS, Protein Quantification, Sandwich ELISA, and Real-Time PCR Used to Monitor Industrial Cleaning Procedures for Contamination with Peanut and Celery Allergens, Journal of AOAC International vol. 87, NO. 6, pp M. ABBOTT, S. HAYWARD, W. ROSS, S. GODEFROY BENREJEB, Validation Procedures for Quantitative Food Allergen ELISA. Methods: Community Guidance and Best Practices, Journal of AOAC International vol. 93, NO. 2, pp R. E. Poms, E. Anklam, M. Kuhn, Polymerase Chain Reaction Techniques for Food Allergen Detection, Journal of AOAC International vol. 87, NO. 6, pp DIRECTIVA 2007/68/CE DE LA COMISIÓN de 27 de noviembre de 2007 que modifica el anexo III bis de la Directiva 2000/13/CE del Parlamento Europeo y del Consejo por lo que se refiere a determinados ingredientes alimentarios Código Alimentario Argentino, Ley 18284, decreto reglamentario 2126/71 y sus modificatorios G. Fine, Guidance on Allergen Management and Consumer Information. Published by Food Standards Agency, 2006

16 NORMAS AENOR Asociación Española de Normalización y Certificación Norma española UNE-EN Productos alimenticios Detección de alérgenos mediante métodos inmunológicos Parte 1: Consideraciones generales Norma española UNE-EN Productos alimenticios Detección de alérgenos mediante métodos biológicos moleculares Parte 1: Consideraciones generales Información disponible en la web: Contactos INAL - Depto Control y Desarrollo: Lic. Susana Balán - sbalan@anmat.gov.ar Lic. Susana Malo - smalo@anmat.gov.ar

17 Muchas gracias! Av. de Mayo 869 C1084AAD - Ciudad Autónoma de Buenos Aires (+54-11) (+54-11) Lic. Adriana Garbini - INAL - Jefe Departamento Control y Desarrollo - agarbini@anmat.gov.ar

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