Biopsia líquida: últimos datos y proyección de futuro. Dr. Rafael López Hospital Clínico Universitario de Santiago de Compostela
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- Ernesto Ortiz Álvarez
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1 Biopsia líquida: últimos datos y proyección de futuro Dr. Rafael López Hospital Clínico Universitario de Santiago de Compostela Foro de Debate. Formigal
2 New therapies
3 Prevención Diagnóstico Tratamiento Diagnóstico temprano Detección de enfermedad mínima residual Perfil molecular y pronóstico Selección de tratamientos Monitorización de respuesta Estudiar la evolución clonal y resistencias Generar nuevo conocimiento
4 Tumor primario o metástasis Células tumorales circulantes (CTCs) A ulante Exosomas tumorales circulantes
5 CTCs cfdna cfrna Plaquetas Exosomas Células tumorales viables seleccionadas que abandonan activamente las células primarias y/o metástasis Células tumorales necróticas y apoptóticas Células tumorales necróticas y apoptóticas Incorporación activa de exosomas Secreción activa de partículas encapsuladas por células tumorales Células tumorales Genomas fragmentados liberados de células tumorales moribundas de origen primario y/o metástasis ARN fragmentado liberado de células tumorales moribundas Plaquetas circulantes Partículas encapsuladas circulantes
6 lo XIX: 1º Caso reportado: A case of cancer in which cells similar to those in tumours were seen in the blood after death, T. R. Ashworth, The Medical urnal of Australia sta 1950: Reportados unos 50 casos en la literatura 55: 1º Boom: Cancer Cells Circulating in the Blood: a Clinical Study on the Occurrence of Cancer Cells in the Peripheral Blood and in Venous Blood Draining the Tumor Area at Operation. Engell H. C. Acta Chir.Scand., Estudios de citología Sensibilidad muy baja Métodos inmunohistoquímicos: Importancia de la detección de células tumorales en sangre y médula ósea 90-presente: PCR-Análisis de expresión Aumento exponencial de estudio Aplicabilidad clínica
7 Circulating tumour cell (CTC) enrichment technologies.
8 vs
9 DEParray Technology
10 SINGLE CELL STUDIES USING CTCs FROM mbcp DEParray Technology
11 vivo culture of CTCs CDX (CTCs derived xenografts): Triple negative breast cancer patient 24,6 mm 20,6 mm te próstata ost aislamiento EpCAM DAPI CD45EpCAM CD45 nto Post cultivo CD45 CD45 EpCAM Posible CTC mesenquimal? Ki67 CK
12
13 étais: NA) 1977: cfdna increased in cancer patients Stroun: cancer cells produce cfdna 2008 Diehl & Díaz: minimal residual disease ctdna 1991: Sidransky: TP53 mutations in bladder cancer 2012: Hybrid capture sequece Liquid Biopsy 1994: KRAS mutations in pancreatic cancer 2012: Amplicon Sequence 1999: Vogelstein & Kinzler: digital PCR 2012:Whole Genome Sequence
14 Circulating Tumor DNA Concentration: 1 10 ng/ml Major species is ± 175bp (one nucleosome wrap) Typically at ±5ng/ml of plasma in healty Higher levels can be seen in many settings (Cancer, infection, inflammation, trauma, etc) Primarily from hematopoietic cells (±80%) Half life short (±0.5 hours)
15 tage 0 cioma in situ Stage I Localized Stage II Locally advanced (early) Stage III Locally advanced (late) Stage IV Metastatic nt copy 2 mc/ml mc/ml Capacidad de detección (ADN mutado/adn total) 100% 5% 1% Secuenciación Sanger Pirosecuenciación PCR NGS El ADN tumoral en plasma puede estar en proporciones tan bajas como 0,01%
16 PCR digital utaciones conocidas utaciones individuales y lecciones a sensibilidad depende de la utación (± optimización del sayo) esultados altamente producible ápido ínima bioinformática arato NGS Evaluación de regiones genómicas mediante PCR o métodos basados en captura Amplificaciones, reordenamientos, aneuploidía, secuenciación de todo el exoma Alta tasa de falsos descubrimientos Tiempo de respuesta 1 2 días
17 June August 2016 (n=115 patients)atients) RAS wt tumor by SoC (n = 60) RAS mut tumor by SoC (n = 55) Anti- EGFR treatment (n=34) No anti- EGFR treatment (n=26) CT +/- antiangiogenic(n=51) for analysis: sion at 1st CT scan response not (n=2) a available at on (n=10) Excluded for analysis: - Progression at 1st CT scan (n=8) - Tumour response not assessed (n=2) - No plasma available for monitoring (n=26)
18 Resultados del RAS en tejido Mutado No Mutado Total Mutado No Mutado Total % mutacion RAS en tejido (SOC) 51.3% mutacion RAS en plasma (BEAMing) Concordancia positiva: 53/55: 96.4% Concordancia negativa: 54/60: 90% Concordancia Global: 107/115: 93% BEAMING 24% 9% 3% TEJIDO RAS SoC 23% 52% 9% 1% 2% KR12 KR13 KR61 KR117 KR146 NR12 NR13+ RAS WT en tejido RAS WT en Plasma
19 n Median OS MAF <1% 8 43,6 (28,8-58,4) MAF 1% 14 19,7 (6,8-32,5) n MAFs Median levels PFS MAF <1% 8 17,6 (7,5-27,6) MAF 1% 14 7,2 (4,5-9,9) p=0.038 p=0.044
20 6,15% Tumor load (% of baseline) plasma NRAS61 MAF 7% 6% Aparición de la fracción mutante de RAS durante el tratamiento 5% 3,87% 4% 3% 2% 1% 0,04% 0,07% 0 0 0% nt Week 4 of treatment Week 12 of treatment CT scan: SD Surgery Disease Recurrence CT scan: SD
21
22 ientes sin quimioterapia ctdna postoperatorio negativo (n=164) Pacientes sin quimioterapia Riego clínico bajo (n=129) ctdna postoperatorio positivo (n=14) Porcetaje libre de recurrencia Riego clínico alto (n=49) Meses tras cirugía Meses tras cirugía
23
24 mo RAS ción KRAS ción HER2 EGFR negfr ación Src) n EGFR Estrategia Anti-EGFR + inhibidor MEK Anti-EGFR + inhibidor MEK Anti-EGFR + anti-her2 Panitumumab Anti-EGFR + inhibidor Src Anti-VEGFR
25 l desarrollo pleno de la biopsia líquida contribuirá aplicar una oncología de precisión a biopsia líquida emerge como técnica ndamental para monitorizar y tratar al paciente on cáncer a biopsia líquida incrementará el conocimiento iológico y el desarrollo tecnológico en cáncer a biopsia líquida producirá un cambio en el aradigma del manejo del cáncer por el Oncólogo édico
26 egún la situación clínica, disponibilidad, financiación y sobre todo. Conocimiento Habilidades Competencias Diagnóstico Tratamiento
27 quipo multidisciplinar Biólogos Moleculares Bioinformáticos Patólogos Hematólogos Análisis clínicos Inmunólogos lataformas comunes y compartidas nidades funcionales y/o centros de cáncer
28 rabajo en red entre diferentes centros valuar y publicar la calidad del trabajo ambiar la investigación clínica segurar la financiación
29
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