COMPARACIÓN ENTRE CALIFORNIA MASTITIS TEST (CMT) Y EVALUACIÓN HISTOPATOLÓGICA EN EL DIAGNÓSTICO DE MASTITIS CLÍNICA EN VACAS LECHERAS.

COMPARACIÓN ENTRE CALIFORNIA MASTITIS TEST (CMT) Y EVALUACIÓN HISTOPATOLÓGICA EN EL DIAGNÓSTICO DE MASTITIS CLÍNICA EN VACAS LECHERAS. VALLEJO T., DARIO ANTONIO; CHAVES V., CARLOS ALBERTO; ASTAIZA M., JUAN MANUEL; BENAVIDES M., CARMENZA JANNETH. Universidad de Nariño, Facultad de ciencias pecuarias, Grupo de investigación en medicina interna y farmacología veterinaria - MIFARVET Pasto, Colombia. *Correspondencia: dariovallejo1@gmail.com

Introducción La mastitis es una enfermedad compleja, con alto impacto para la industria lechera. Benites, 2002 La ocurrencia de mastitis reduce la producción de leche y eficiencia reproductiva e incrementa: cantidad de leche descartada, descarte involuntario de animales y costos de producción. Ruegg, 2012

Durante décadas, la producción de leche de alta calidad proveniente de vacas sanas y el diagnóstico y control de mastitis forman parte de los principales objetivos en la practica veterinaria de bovinos. Sin embargo, la enfermedad continua siendo de alto impacto e incidencia. Smith, 2014

Es de mucho interés diagnosticar el problema mediante una prueba rápida, rentable y diagnostica, lo que nos conduce a la búsqueda de un sistema diagnóstico eficaz. Sheldom 2004 El estudio propone la utilización de histopatología en conjunto con la prueba de California Mastitis Test, como método diagnóstico y pronóstico de Mastitis.

Objetivo Comparar las pruebas de California Mastitis Test (CMT) y Evaluación Histopatológica en el diagnóstico de mastitis clínica en vacas lecheras.

Diseño Metodológico

Diseño Metodológico Estudio prospectivo, doble ciego de tipo descriptivo. Localización = Planta de beneficio del municipio de Ipiales, Departamento de Nariño Colombia Área de catedra y servicio de Patología Veterinaria UDENAR Variables objeto de estudio = Diagnóstico de mastitis clínica mediante California Mastitis Test; cambios histopatológicos en glándula mamaria; concordancia en el diagnóstico.

Tamaño de la muestra Con base en el promedio de sacrificio de bovinos (N = 2443) en la planta de beneficio del municipio de Ipiales durante los años 2013-2014 se estimó el tamaño de la muestra (n) con una proporción de cuartos mamarios positivos a mastitis clínica del 50%. El número de muestras (n) a obtener para el estudio con un intervalo de confianza del 95% se estimó en 332 cuartos bovinos que corresponden a 83 animales.

Criterio de inclusión. Vacas provenientes de sistemas de producción lechera especializada, Vacas positivas a mastitis clínica mediante la prueba de California Mastitis Test (CMT). Para evitar sesgos, el estudio se realizó mediante un doble ciego, el personal que tomo las muestras, realizo la tinción de las placas y la posterior lectura de estas, desconocían información respecto a la población objeto de estudio.

California Mastitis Test Durante la inspección ante-mortem, se realizó la prueba de CMT con base en el criterio de inclusión hasta completar el total de la muestra. La prueba fue realizada con base en lo recomendado por la Universidad de Wisconsin-Madison, 2008. Grado Diagnóstico Rango células somáticas* 0 Normal 0 200.000 T Mastitis Subclínica 200.000 400.000 1 Mastitis Clínica 400.000 1.200.000 2 Mastitis Clínica 1.200.000 5.000.000 3 Mastitis Clínica > 5.000.000

Colección y evaluación macroscópica de la muestra Después del sacrificio, se realizo una evaluación macroscópica y toma de muestras de tejido mamario (incluyendo piel) y del pezón de cada cuarto. Las muestras fueron fijadas en formol bufferado al 10% para su transporte. Los tejidos fueron procesados mediante la técnica de inclusión en parafina y coloración de hematoxilina y eosina de rutina, en el laboratorio de Patología de la Fundación Hospital San Pedro del Municipio San Juan de Pasto - Colombia

Evaluación Histopatológica La lectura de las placas se realizó en el área de catedra y servicio de Patología Veterinaria de la Universidad de Nariño. Para el estudio se tuvieron en cuenta los siguientes criterios de evaluación. Criterio Evaluación Severidad Patrón de distribución Tipo de infiltrado celular Cronicidad Presencia tejido conectivo Clasificación Leve Moderado Severo Intraductal Periductal Mononuclear Mixto - Supurativo Aguda Crómica Reparación

Análisis Estadístico Para determinar la distribución de los grados de mastitis clínica mediante CMT, se empleo estadística descriptiva determinando la participación porcentual de cada grado en la población objeto de estudio. Se identificaron los cambios histopatológicos encontrados, y su participación porcentual en el estudio. Estos cambios se relacionaron con los grados de mastitis clínica según la prueba de CMT. Para el análisis estadístico se emplearon hojas de calculo de Excel y el paquete estadísticos SPSS 20.0 bajo licencia shareware

RESULTADOS CALIFORNIA MASTITIS TEST

California Mastitis Test (CMT) Distribución por cuartos anteriores - posteriores

California Mastitis Test (CMT) - Distribución por cuartos AD AI PD - PI AI = Anterior Izquierdo AD = Anterior Derecho PI = Posterior Izquierdo PD = Posterior Derecho

RESULTADOS HALLAZGOS MICROSCOPICOS EN GLANDULA MAMARIA

Hallazgos histopatológicos en piel Severidad Hallazgo Porcentaje Leve Dermatitis linfocítica peri-vascular 9.61 % Moderado Dermatitis linfocítica peri-vascular 19.23 % Severo Dermatitis linfocítica peri-vascular 53.84 % Aparentemente Normal Sin hallazgos en piel 17.30%

A y B = Dermis superficial y Profunda Hematoxilina y Eosina H/E Severo Infiltrado inflamatorio linfocitico perivascular. A B 4X 10X

Criterio Evaluación Clasificación Porcentaje Severidad Patrón de distribución Tipo de infiltrado celular Cronicidad Presencia tejido conectivo 32.7% Hallazgos histopatológicos en tejido mamario Leve Moderado Severo Normal Intraductal Periductal Intraductal + Periductal Normal Mononuclear Mixto Supurativo Aparentemente Normal Aguda Crónica Leve Moderado Severo 36.53 % 29.80 % 30.76 % 2.88 % 5.78 % 21.15 % 70.19 % 2.88 % 38.46 % 41.34 % 17.30 % 2.88 % 17.30 % 79.80 % 16.34 % 10.57 % 5.76 %

Tipo de infiltrado celular Criterio Evaluación Clasificación Porcentaje Mononuclear Mixta Supurativa Linfocitos Macrófagos Plasmáticas Linfocitos Macrófagos Linfoplasmocitaria (Linfocitos Plasmáticas) Linfocitos Macrófagos Plasmáticas PMN Macrófagos Plasmáticas Escasos PMN Macrófagos Escasos PMN Escasos Macrófagos Abundantes PMN Macrófagos, Abundantes Linfocitos Abundantes PMN 90 % 5 % 5 % 95.34 % 4.65 % 33.33 % 55.55 % 11.11 %

Aspecto histológico glándula mamaria Bovino - Tejido glandular - Hematoxilina y Eosina H/E Severo infiltrado inflamatorio Supurativo (Polimorfo-nucleares PMN híper-segmentados) Intra-ductal A B 4X 10X

Aspecto histológico glándula mamaria Bovino - Tejido glandular - Hematoxilina y Eosina H/E Moderado infiltrado inflamatorio Mononuclear (Linfocitos Macrófagos Plasmáticas) Peri-ductal A B 10X 10X

Aspecto histológico glándula mamaria Bovino - Tejido glandular - Hematoxilina y Eosina H/E Severo infiltrado inflamatorio Mixto (Polimorfo-nucleares - Linfocitos Macrófagos Plasmáticas Intra-ductal y Peri-ductal A B 4X 10X

Aspecto histológico glándula mamaria Bovino - Tejido glandular - Hematoxilina y Eosina H/E Hiperplasia del epitelio de los conductos intralobulares A B 4X 10X

Aspecto histológico glándula mamaria Bovino - Tejido glandular - Hematoxilina y Eosina H/E Deposito de material basófilico intenso (Cuerpo extraño) asociado a severo infiltrado inflamatorio mononuclear (Linfocitos Macrófagos Plasmáticas) con presencia de tejido conectivo

Resultados RELACIÓN CMT - HISTOPATOLOGIA

California Mastitis Test (CMT) Histopatología

Concordancia entre diagnostico de severidad de mastitis clínica A pesar de que la evaluación por CMT es eficiente en el momento de detectar mastitis, presenta falencias para establecer la severidad y cronicidad del daño. La severidad del daño no tuvo concordancia en 57.85% de los casos.

Conclusiones y Recomendaciones

CALIFORNIA MASTITIS TEST EVALUACIÓN HISTOPATOLÓGICA 1. Evaluadas Leves G1 en un 46.22%. 2. Los cuartos AD AI y PI se evaluaron en igual proporción como G2 y G3 con 26.9%. 3. El cuarto PD se evaluó como G3 (CS > 5.000.000) en la mayoría de los casos. Según la prueba, la mayoría de los cuartos presento mastitis clínicas leves. 1. Severo en un 30.76 % 2. Peri-ductal en un 21.15 % 3. Infiltrado inflamatorio variable. Predominantemente Mixto en un 41.34% 4. Mastitis Crónicas 79.80 % 5. Presencia tejido conectivo 32.7% 6. Severa Dermatitis linfocítica peri-vascular 53.84%

CMT - Histopatología El CMT no permite establecer la cronicidad, ni la magnitud de la lesión. No permite establecer el pronóstico de la enfermedad ni la respuesta al tratamiento. CMT SENSIBILIDAD 97% ESPECIFICIDAD 93% PARA CÉLULAS INFLAMATORIAS E INFLAMACIONES INTRA-DUCTALES

CMT - Histopatología CMT = Prueba rápida, No invasiva, Debe considerarse como una prueba de cribaje. DIAGNÓSTICO HISTOPATOLÓGICO - Permite establecer severidad y cronicidad de la lesión, tejido mamario con fibrosis, alteraciones en piel del pezón. Invasiva, dificultad para realizar en todos los animales. CORRELACIÓN ENTRE CMT E HISTOPATOLOGÍA GLÁNDULA MAMARIA PERMITE TENER UN ABORDAJE DIAGNOSTICO Y PRONOSTICO MAS PRECISO QUE PUEDE SER UNA HERRAMIENTA ÚTIL EN EL TRATAMIENTO Y CONTROL DE LA MASTITIS EN BOVINOS.

Recomendaciones Uso de CMT en conjunto con otras pruebas diagnósticas (Examen clínico, CH, PO, QS, Palpación y Ultrasonografía glándula mamaria, Microbiología, Biopsia e histopatología. Uso de Histopatología en conjunto con tinciones histoquímicas. (PASS, PLATA, ZIEL NIELSEN, GRAM). Uso de Inmunohistoquimica INHQ y PCR Investigación = Estudio conjunto con todas las pruebas, toma de muestras e histopatología.

Grupo de investigación en Medicina Interna y Farmacología Veterinaria - MIFARVET Universidad de Nariño