Inmunohematología 2016 Dra. Ana Cecilia Haro
Sensibilización Aglutinación Ag + Ac Ag-Ac
Enzimas LISS SAGH PEG Polibrene Albúmina Potencial zeta Tipo de Ac Densidad antigénica Tiempo de incubación Fuerza iónica ph Temperatura
Títulación de antisueros GR 5% Sistema Título ABO > 128 Rh > 32
Score Aglutinatos Graduación en tubo Grumo único ++++ 10 2-3 grumos +++ 8 Hasta 10 grumos ++ 5 Muchos, finos + 2 ninguno - 0 Sistema Score ABO > 50 Rh > 50 ++++ +++ ++ + - 10 8 5 2 0
Avidez GR 10% ABO GR 50% Rh Sistema ABO Rh Avidez < 8 segundos < 30 segundos
Especificidad ABO Rh Reactivo Anti-A Anti-B Anti-A,B Reactivo Anti-D GR A + - + GR B - + + GR AB + + + GR O - - - + - GR O Rh D (+) DCe/dce R1r GR O Rh D (-) dce/dce rr
Determinación de los grupos sanguíneos ABO y Rh
Grupo sanguíneo Sistema ABO GR Ag Plasma Ac A A A Anti-B B B B Anti-A AB AB A y B Ninguno O O Ninguno Anti-A y Anti- B
Anti-A DIRECTA Placa Anti- B Tubo Anti- B Anti-AB Anti-A A B AB INVERSA GR GR GR O A B A B O A B O GR 5% GR 5%
Interpretación Grupo sanguíneo PRUEBA DIRECTA PRUEBA INVERSA Anti - A Anti - B Anti - AB GR A GR B GR O O - - - + + - A + - + - + - B - + + + - - AB + + + - - -
Muestra mal identificada Reactivos no controlados Muestra coagulada Dilución de Ig por trasfusión masiva de plasma Subgrupos ABO Quimera (transfusión o transplante) Expresión antigénica eritrocitaria disminuida (leucemia y otras neoplasias) Actividad antiaglutinínica escasa o nula (inmunodeficiencia) Lactantes < 4-6 meses dan reacciones débiles o nulas Presencia de autoanticuerpos (crioaglutininas)
Sistema Rh (Ag D) Differences between normal D, D-weak D and partial-d D phenotypes Epitope: Normal Normal Mutados Cantidad de Ag: Antígeno D Normal común D Débil Normal Reducida Ac --- --- --- D parcial o Variante D Normal o Reducida Epitope Antígeno
Placa D C Tubo GR 5% Aglutina Rh D (+) No Aglutina Rh D (-) D débil D parcial D parcial débil No Aglutina Aglutina Rh D (+) Investigar antígenos D débiles
Determinación de antígenos D débiles P Paciente Control GR 5% GR 5% Anti-D Soluc.Fisiol. Centrifugar y Leer Aglutina No aglutina No debe aglutinar Rh D (+) Incubar 37ºC 30 min (SENSIBILIZACIÓN) Centrifugar y Leer Aglutina No aglutina No debe aglutinar Rh D (+) Lavar 3 veces con solución fisiológica SAGH SAGH Centrifugar y Leer Aglutina No aglutina No debe aglutinar Rh D débil (+) Rh D (-) C
Cómo se informa un grupo sanguíneo? Nombre y Apellido: Fecha: GRUPO SANGUÍNEO: AB B O FACTOR Rh D: Positivo Negativo
Prueba de Coombs
Prueba que permite demostrar la presencia de anticuerpos que sensibilizan los glóbulos rojos. El reactivo de Coombs ó SAGH reconoce fracción Fc de las Ig o las fracciones de C específicas. + Suero Coombs AGLUTINACIÓN
PRUEBA DE COOMBS DIRECTA (PCD) Detecta glóbulos rojos sensibilizados in vivo PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA (PCI) Detecta glóbulos rojos sensibilizados in vitro
Detecta los Acs y/ó componentes del Complemento fijados in vivo a los hematíes del paciente. rpm Descartar el plasma Sangre entera anticoagulada con EDTA Separar una alícuota para lavar con SF Muestra: GR del paciente en estudio
Lavar 3 veces con solución fisiológica Preparar suspensión globular al 5% 100 µl de GR + 1900 µl de SF 1 gota de suspensión de GR al 5% 1 gota del Rvo de Coombs rpm 45 a 1000g LEER
Resultado positivo: presencia de aglutinación. Se debe indicar la intensidad de la positividad: +, ++, +++, ++++. Resultado negativo: dejar a temperatura ambiente 10 minutos, centrifugar y leer.
Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal (EHFN) Reacción Hemolítica Postransfusional Anemia Hemolítica Autoinmune (AHAI) Anemia Hemolítica Inducida por Fármacos
EHFN Reactivo de Coombs + MUESTRA: GR del bebé lavados (2-5%) Sensibilización de los GR in vivo con Acs maternos
QUÉ OCURRIRÍA SI LOS LAVADOS SE OMITIESEN O SE REALIZARAN DEFICIENTEMENTE?
La muestra contiene GR sensibilizados y muchas globulinas no unidas
Muestra 1ra Centrifugación Correcto Erróneo
3ra Centrifugación Correcto Erróneo
Detecta los Acs y/ó componentes del Complemento presentes en el suero del paciente, los cuales serán fijados in vitro a los hematíes. MUESTRA: SUERO DEL PACIENTE REACTIVOS: GR O Rh+ ó Paneles Selectores Reactivo de Coombs SF ó LISS (solución salina de baja fuerza iónica)
100 µl SUERO + 50 µl GR al 5% en SF 100 µl SUERO + 50 µl GR al 5% en LISS Ag - Ac Incubar 30 a 37 C Incubar 15 a 37 C rpm LEER Lavar 3 veces con SF 1 gota del Rvo de Coombs
Si la reacción es positiva se debe ser titular Diluciones: 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64
Pruebas de compatibilidad Detección de anticuerpos irregulares Identificación de anticuerpos irregulares Tipificación de antígenos en el GR
Fase Preanalítica Se deben emplear -GR sensibilizados con IgG -GR sensibilizados con C -GR normales no sensibilizados Fase Analítica Anamnesis Muestra Limpieza del material Centrífugas Reactivos Titulación del Rvo de Coombs. Controlar el ph de la SF (debe tener ph 7,0 7,2) Panel eritrocitario selector Suspensiones de GR Lavados Tiempos de incubación En la centrifugación Lectura
Lavado inadecuado Prueba interrumpida o diferida Interpretación errónea de pruebas positivas débiles Omitir el agregado de SAGH Pérdida de actividad de SAGH por mala conservación Centrifugación inadecuada Concentración de GR alta o baja Concentración alta de IgG en suero en estudio ph de solución fisiológica 6.0 disminuye sensibilidad
Glóbulos rojos autoaglutinados o poliaglutinados Partículas, contaminantes, precipitados o fibrina presentes en tubos que producen agregación de GR Sobrecentrifugación
Esta prueba permite que los GRs no aglutinados pasen libremente a través de la columna de gel bajo centrifugación, mientras que aquellos aglutinados, permanecen atrapados entre las esferas de gel. NEGATIVO POSITIVO
GRACIAS POR SU ATENCIÓN