AMPLIACIÓN BIOLOGÍA 4º ESO Taller Biología 4º E.S.O. BLOQUE 2. MICROSCOPÍA Y CITOLOGÍA PRÁCTICA 2. PREPARACIONES MICROSCOPICAS 1. CÉLULA EUCARIOTA VEGETAL: EPIDERMIS DE CEBOLLA. OBJETIVOS o Adquirir práctica en el manejo del microscopio óptico. o Aprender las técnicas básicas de preparación y tinción de una muestra. o Observación e interpretación de la estructura de células procariotas y eucariotas, vegetal y animal. NOTAS TEÓRICAS La visión que obtenemos con el microscopio se hace por transparencia, por lo que sólo secciones muy, muy finas del material biológico a estudiar nos darán observaciones adecuadas: tendremos que manipular el material y preparar secciones, bien con una cuchilla, bien con el empleo del microtomo. Además, dado que la mayor parte de los tejidos y estructuras de los seres vivos son incoloros, habremos de emplear colorantes que favorezcan el contraste y la visibilidad de las estructuras deseadas. A la hora de montar 35
DEPTO. BIOLOGÍA-GEOLOGÍA. IES CEUTÍ. nuestras preparaciones deberemos decidir si empleamos: Ø Colorantes vitales: su acción es compatible con la vida (verde de metilo acético; azul de metileno) Ø Colorantes no vitales (hematoxilina-eosina; violeta de genciana; etc) También decidiremos si usamos: Ø Preparaciones temporales: se suelen montar en una gota de agua destilada o de solución fisiológica, que podemos colocar previamente sobre el portaobjetos, o tras colocar el cubre. Este tipo de montaje apenas dura una hora, ya que el calor del foco evaporará el agua de la preparación. Una pequeña cantidad de vaselina sólida o parafina en los bordes alargará la vida de la preparación. Ø Preparaciones permanentes: como en este caso pretendemos que la preparación dure mucho tiempo, necesitaremos evitar su evaporación. Pueden emplearse resinas sintéticas o Bálsamo de Canadá. MATERIAL Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Cubeta Agujas enmangadas Pinzas Escalpelo Verde de metilo acético o azul de metileno Cuentagotas Cebolla MÉTODO 1. Separar con el bisturí o con un cuchillo una de las hojas interna de la cebolla y desprender con las pinzas la tenue membrana que está adherida por su cara inferior cóncava. 2. MONTAJE: depositar el fragmento de membrana en un porta con unas gotas de agua. Pon el porta sobre la cubeta de tinción o una placa de Petri para que caiga en ella el agua y los colorantes. Si es preciso, estirar el trozo de epidermis con ayuda de dos agujas enmangadas. 36
AMPLIACIÓN BIOLOGÍA 4º ESO 3. TINCIÓN: escurrir el agua, añadir una gotas de verde de metilo acético (o azul de metileno) sobre la membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. No debe secarse la epidermis por falta de colorante o por evaporación del mismo! 4. LAVADO: con el cuentagotas bañar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante. 5. SELLADO: colocar sobre la preparación un cubreobjetos evitando que se formen burbujas y llevarla al microscopio (lo usual es colocar el canto del cubre sobre el porta ligeramente inclinado y dejarlo caer sobre la muestra con mucho cuidado para no arrastrarla). 37
DEPTO. BIOLOGÍA-GEOLOGÍA. IES CEUTÍ. 6. OBSERVACIÓN: observa la preparación a distintos aumentos, empezando por el más bajo. Identifica las distintas células del tejido epidérmico y las de las hojas del bulbo de cebolla. 2. CÉLULA EUCARIOTA ANIMAL: MUCOSA BUCAL HUMANA. MÉTODO 1. Raspa suavemente el interior de la mucosa bucal (carrillo) utilizando un palillo estéril al que previamente habrás eliminado una de sus puntas. 2. Coloca la muestra blanquecina obtenida sobre un porta con una gota de agua y extiéndelo suavemente con la aguja enmangada. (Si decides hacer este paso al modo de un frotis deberás colocar la gota en un extremo del porta y extenderla con el borde de otro tal y como se muestra en la figura). 3. Sujeta el porta con las pinzas de madera y calienta suavemente a la llama del mechero. Pasa repetidas veces la preparación sobre la llama sin dejarla parada: el objetivo es desecarla, no que se queme. 38
AMPLIACIÓN BIOLOGÍA 4º ESO 4. El proceso de tinción es similar al que utilizamos para la epidermis de cebolla, pero en este caso usaremos azul de metiileno y dejaremos actuar el colorante sólo dos minutos. 5. Lava, coloca el cubre en la zona más prometedora de la preparación (donde observes a simple vista una acumulación de puntos azules) y observa. 3. CÉLULA PROCARIOTA: BACTERIAS DEL YOGUR. MÉTODO 1. Prepara un porta con una gota de agua en su extremo para hacer un frotis. 2. Flamea la aguja enmangada hasta el rojo para su completa esterilización y, tras unos segundos para que se enfrie, toma una pequeñísima porción de la parte más líquida del yogurt. 3. Seca la preparación a la llama del mechero tal y como hemos hecho con anterioridad. 4. Utilizando un cuentagotas y sobre la cubeta de tinción vamos a eliminar la grasa del yogurt lavando la muestra. 39
DEPTO. BIOLOGÍA-GEOLOGÍA. IES CEUTÍ. 5. Teñimos con azul de metileno o violeta de genciana y dejamos actuar 10 minutos. Vuelve a lavar. 6. Monta la preparación y observa. ACTIVIDADES 1. Haz esquemas interpretativos de todas tus observaciones. 2. Qué partes comunes muestran las células observadas?, hay diferencias observables entre los tres tipos?. 3. Por qué crees que no se aprecian otros orgánulos? 4. Hay diferencias entre las preparaciones teñidas y las que no lo están? 5. En el caso de las células vegetales y animales, nuestras muestras formaban parte de tejidos?, presentan las células características que te hablen de la función de esos tejidos? 6. A qué tipos morfológicos pertenecen las bacterias observadas? 7. Cómo obtienen el alimento las bacterias del yogurt?. Serán aerobias o anaerobias?, Serán parásitas, simbióticas o saprofíticas? Explica tu respuesta. 40