MAESTRÍA EN CIENCIAS ÁREA ACUACULTURA

U N I V E R S I D A D D E C O L I M A MAESTRÍA EN CIENCIAS ÁREA ACUACULTURA ESTIMACIÓN DE LOS REQUERIMIENTOS ALIMENTICIOS PARA E L CRECIMIENTO DEL BRAQUlÓPODO Artemia franciscana (Kellog, 1906) ALIMENTADO CON LA DIATOMEA Chaetoceros muelleri (Lemmerman) ORIENTADA A LA PRODUCCIÓN MASIVA. T E S I S QUE PARA OBTENER EL GRADO DE MAESTRÍA EN CIENCIAS ÁREA ACUACULTURA PRESENTA IGNACIO PINZÓN GUTIÉRREZ ASESORES Dr. Manuel García Ulloa Gómez M.C. Alfredo Mena Herrera Dr. Manuel Patiño Barragán M.C. Sonia I. Quijano Scheggia Manzanillo, Colima, México, Julio de 2000

UNIVERSIDAD DE COLIMA Facultad de Ciencias Marinas Manzanillo, Col., 15 de Junio de 2000 M en C. Sergio Alberto Lau Cham Director de la Facultad de Ciencias Marinas Presente. Los que suscriben, Sinodales de la Comisión nombrada para examinar el manuscrito de Tesis titulado: Estimación de los requerimientos alimenticios para el crecimiento del branquiopodo Artemia franciscana (Kellog, 1906) alimentado con la diatomea Chaetoceros muelleri (Lemmerman) orientada a la producción masiva. que presenta el candidato al Grado Académico Acuacultura, el de Maestría en Ciencias: Área C. IGNACIO PlNZÓN GUTIÉRREZ Manifiestan su aceptación a dicho trabajo en virtud de que satisface los requisitos señalados por las disposiciones reglamentarias y que se han hecho las correcciones que cada uno en particular consideró pertinentes. Atentamente Sinodal suplente, /* M. C. Sonia I. Quijano Scheggia kilómetro 20 I Carretera Manzanillo - Barra de Navidad / A P. 9-21 / Telefax 01 (333) 5 00 01 / Colima. México / E-mail: facimar@volcan.ucol.mx

AGRADECIMIENTOS A la Universidad de Colima por mi formación académica en el área de Acuacultura. A todo el equipo de trabajo del Laboratorio de Ciencias Marinas de la Universidad Autónoma de Guadalajara, por el gran apoyo recibido gracias. Ing. Daniel E. Godínez Siordia Sria. Sofía Bartoleño Sr. José Mitoma Flores. Sr. Juan Ramón Almada Mitoma. Sr. Ramón Almada Hernández. Al Dr. Manuel García Ulloa Gómez por todo el apoyo brindado en la dirección de la tesis, por su ejemplo y dedicación. A mis sinodales por sus valiosas sugerencias al trabajo: M. en C. Alfredo Mena Herrera Dr. Manuel Patiño Barragán M. en C. Sonia I. Quijano Scheggia A mis compañeros de generación.

DEDICATORIA A Dios por esto y todo lo que me a dado en la vida. Con mucho amor y cariño a mi esposa e hijos. Rosalva López Sotelo Francisco Javier, Liliana araceli, Juan Ignacio. A mi madre con todo cariño. Rogelia Gutierrez Ramirez A mis Hermanos con cariño. Bertha, José, Chabelo, Mauricio, María, Victoria, Jesús. A mis suegros y cuñados.

INDICE INTRODUCCION PAG 1 ANTECEDENTES 5 OBJETIVO GENERAL 15 OBJETIVOS PARTICULARES 15 HIPOTESIS 16 MATERIALES Y METODOS 17 A) Origen de la Artemia y decapsulación 17 B) Tratamiento de1 agua y cultivo de la microalga 17 C) Mantenimiento de1 cultivo madre de Artemia 18 D) Condiciones experimentales para determinar los indices de filtración e ingestión de Artemia en tubos de ensayo 19 E) Condiciones experimentales para determinar los indices de filtración e ingestión de Artemia en cultivo masivo a diferentes densidades 20 F) Evaluación de 1os indices de filtración e ingestión de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri 22 G) Evaluación de parametros biológicos 23 RESULTADOS 1) Fase experimental en tubos de ensayo 23 2) Fase experimental en cultivo masivo 24 3) Evaluación estadística 25 A) Fase experimental en tubos de ensayo 26 B) Cultivo masivo de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri y cultivada a diferentes densidades 29

DISCUSIONES CONCLUSIONES BIBLIOGRAFIA 36 45 47

Lista de Tablas Tabla 1, Valores promedio (± desviación estándar) de filtración (ml/art/h) de A. franciscana mantenida en tubos de ensayo y alimentada con Ch. muelleri. (Los números I a V representan las replicas utilizadas en esta fase experimental) 26 Tabla 2. Valores promedio (± desviación estándar) de ingestión (cél. X 10 4 Art./h) de A. franciscana mantenida en tubos de ensayo y alimentada con Ch. muelleri. (Los números I a V representan las réplicas utilizadas en esta fase experimental) 27 Tabla 3. Longitud promedio (µ ± desviación estándar) de A. franciscana mantenida en tubos de ensayo y alimentada con Ch. muelleri. (Los números de1 I al V representan las replicas Utilizadas en esta fase experimental). 28 Tabla 4. Valores promedio (± desviación estándar, n=3) de filtración (ml/art/h) de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri en condiciones de cultivo masivo y a diferentes densidades: I= 1,000 Art/1; II= 3,000 Al-t/1; III= 5,000 Art/1; IV= 7,000 Art/1. 3 0 Tabla 5. Valores promedio (± desviación estándar, n=3) de ingestión (cél X 10 4 /Art./h) de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri en condiciones de cultivo masivo y a diferentes densidades: I= 1,000 At-t/l; II= 3,000 Art/l; III= 5,000 Art/l; IV= 7,000 Art/l. 3 1 Tabla 6. Longitud promedio (µ± desviación estándar, n=3) de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri en condiciones de cultivo masivo y a diferentes densidades: I= 1,000 Art/l; II= 3,000 Art/l; III= 5,000 Al-t/l; IV= 7,000 Art/l. 3 2

Lista de Figuras Fig. 1. Producción de recursos acuáticos generados por la industria de La acuacultura reportadas por FAO desde 1990 hasta 1997. Los valores en cada barra horizontal representan millones de toneladas (Aquaculture Magazine,2000). 1 Fig. 2. Criterios de selección para una dieta en beneficio de la larva predadora (Léger et al., 1986). 5 Fig. 3. Principio de la técnica de bioencapsulación de A. franciscana en la que varios ingredientes esenciales pueden ser Incorporados a la dieta de1 predador. 11 Fig. 4. Relación entre 1os valores promedio de ingestion (y) y filtración (x) de A. franciscana alimentada con la microalga Ch. muelleri y cultivada en tubos de ensayo. 28 Fig. 5. Relación entre 1os valores promedio de ingestión (y) y longitud (x) de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri cultivada en tubos de ensayo. 29 Fig. 6. Correlación entre 1os valores promedio de filtración (ml/art/h) e ingestión (cél. X 10 4 /Art./h) de A.franciscana (n=3) alimentada con la microalga Ch. muelleri en cultivo masivo (A= 1,000 Art/l; B= 3,000 Art. /l; C= 5,000 Art/l; D= 7,000 Art/l. Fig. 7. Correlación promedio entre la longitud total ( µ) e ingestión (cél. X 10 4 /Art./h) de A. franciscana alimentada con la microalga Ch. muelleri en cultivo masivo (A= 1,000 Art/l; B= 3,000 Art. /l; C= 5,000 Art/l; D= 7,000 Art/l ( n=3 por tratamiento). 33 34 Fig. 8. Porcentaje de sobrevivencia (%) y producción de biomasa promedio (g) de A.franciscana alimentada con Ch. muelleri a diferentes densidades: I= 1,000 Art/l; 2= 3,000 Art. /l; 3= 5,000 Art/l; 4= 7,000 Art/l ( n=3 por tratamiento). 35

Lista de Fotos Foto 1. Adulto macho de Artemia franciscana 3 Foto 2. Larva de1 sargo europeo Sparus aurata, alimentandose de nauplios de A. franciscana 7 Foto 3 Dietas inertes micropulverizadas derivadas de subproductos agricolas, levadura de pan, microalgas vivas y secas, para la alimentación de organismos filtradores. 8 Foto 4. Chaetoceros sp., una de las microalgas mayormente Utiiizadas en acuacultura 11 Foto 5. Contenedor experimental para 1os ensayos de filtración e ingestión a nivel de cultivo masivo 22

RESUMEN Se estimó el requerimiento alimenticio de Artemia franciscana alimentada con la microalga Chaetoceros muelleri, por medio de la obtención de los índices de filtración e ingestión del branquiópodo bajo condiciones experimentales y de cultivo masivo a diferentes densidades. Se sembraron 5 larvas Instar II/ml en tubos de ensayo y la microalga a una densidad de 1.2X106 cél/ml. Tanto la filtración como la ingestión fueron registradas 2 horas después de la siembra y este procedimiento fue realizado los primeros 10 días una vez que las larvas nauplio de Artemia alcanzaron la edad de 48 horas después de la eclosión. El ensayo se repitió dos veces y se usaron 6 réplicas por ensayo. Los valores máximos de filtración e ingestión promedio (al día 10 experimental) fluctuaron desde 0.051 hasta 0.079 ml/ind./h, y desde 8.88 hasta 11.38 X 104 cél/ind./h, respectivamente. La misma densidad de Ch. muelleri y condiciones experimentales fueron utilizadas para el ensayo en cultivo masivo pero las densidades de Artemia se ajustaron a 1, 3, 5 y 7 ind./ml. En este caso, el tratamiento con menor densidad obtuvo 1os valores más altos de filtración e ingestión durante todos 1os días experimentales, observando una relación inversa entre la densidad y 1os índices alimenticios. La longitud promedio de Artemia obtenida en el presente ensayo (< 4,300 µ) sugiere que la densidad de la microalga se encontro por debajo de 1os requerimientos alimenticios para promover el óptimo crecimiento y desarrollo de A. franciscana, aunque es necesario tambien considerar aspectos relacionados con la morfología y digestibilidad de Ch. muelleri para la correcta interpretación de resultados. La diferencia en 1os resultados obtenidos en las dos etapas de los experimento pudieron haberse debido principalmente a las condiciones de cultivo específicas en cada ensayo. De acuerdo a las condiciones experimentales en este trabajo, una Artemia de 11 días de edad consumió 50,000 células de Ch. muelleri por hora.

ABSTRACT The food requirement of Artemiafranciscana fed on the microalgae Chaetoceros muelleri was estimated by using the filtration and ingestion rates, under experimental and massive culture conditions at different densities. Artemia and algae densities in small glass tubes were adjusted at 5/ml and 1.2X106/ml, respectively, in which the filtration and ingestion indexes were registered after 2 hours. This routine was applied to animals from two to eleven days old. The assay was performed twice with 6 replicates each. Mean higher filtration and ingestion values (at the tenth experimental day) varied from 0.051 to 0.079 ml/art/h, and from 8.88 to 11.38 X104 cells/art/h, resp. The same culture conditions were used for the massive culture phase, but Artemia densities were adjusted at 1, 3, 5 and 7/ml. In this case, the group with the lowest density showed the higher fluctuation and ingestion indexes during all the experimental days. There was an inverse relationship between the density and the feed rates. The mean length of Artemia in this experiment (< 4,300 µ) suggests that the algae density was below the optimum level for the growth and development of A. franciscana, although algae morphology and digestibility should be considered for better results interpretation. Differences in results between the two experiments may be due to the specific culture conditions. According to the experimental conditions used in this work, a 1l-days old Artemia consumed 50,000 Ch. muelleri cells per hour.

I. INTRODUCCION Las últimas estadisticas sobre la producción de organismos acuáticos reportadas por la Organización de Alimentos y Agricultura (FAO, por sus siglas en inglés) indican un volumen de cosecha de 28.8 millones de toneladas en 1997 (Fig. l), y estima que tal cantidad alcanzará 1os 37 millones de toneladas en el año 2000 (Aquaculture Magazine, 2000). Dicho incremento en la producción representa cerca de1 35% de1 volumen total estimado para la industria pesquera, considerando un modesto indicador de solo 3.7% en la predicción anual. Fig. 1. Producción de recursos acuáticos generados por la industria de la acuacultura reportadas por FAO desde 1990 hasta 1997. Los valores en cada barra horizontal representan millones de toneladas (Aquaculture Magazine, 2000). En gran medida, la producción de crias, huevecillos, esporas o semillas de calidad y en cantidades suficientes y constantes para cubrir la creciente demanda de las unidades de engorda en todo el mundo, ha significado un importante bastión en tal acelerado crecimiento de la industria. Sin embargo, en 1os últimos años ha sido también un factor muy crítico en la sustentabilidad de la producción de crias, reconociendose como uno de 1os cuellos de botella de mayor impacto en la acuacultura (Sorgeloos y Léger, 1992). Una de

las principales razones de lo anterior recae en el aspecto nutricional, en el que la producción de alimento vivo juega un papel primordial y la investigación en este rubro se convierte en una herramienta imprescindible para el mantenimiento de la acuacultura como industria productora de alimento. En la actualidad, tanto a nivel industrial como experimental, la producción de crias de larvas y peces y crustaceos sigue condicionada por la alimentación basada en presas vivas (Jones y Houde, 198 1) entre las que destaca el camarón de salmuera, Artemia, como la más utilizada, sobre todo en su fase de larva. El uso de Artemia como alimento vivo para organismos acuáticos a crecido exponencialmente de tal manera que sus primeros estadíos larvarios constituyen no solo el mejor, sino algunos casos, el único alimento vivo disponible para las larvas de peces y crustaceos cultivados (Bardach et al., 1966; Goodwin, 1976; Kinne y Rosenthal, 1977). Sin embargo, la producción de quistes de Artemia en 1os ultimos años, ha sido afectada por fenómenos naturales como El Niño y factores relacionados a la captura de1 recurso de1 Gran Lago Salado, Utah, E.U.A. -embalse que que surte cerca de1 95% de quistes para acuacultura en el mundo (Garcia-Ulloa, 1998a)-, por lo que algunas de las principales altemativas además de probar otros organismos vivos como alimento, se refieren a la producción de biomasa de Artemia en estadios juveniles y adultos para posteriormente ser procesados de acuerdo a las necesidades particulares, y la optimización de las técnicas de decapsulación, bioencapsulación y uso común de 1os nauplios. El empleo de biomasa de adultos y preadultos de Artemia en la acuacultura es relativamente menor si lo comparamos con la utilización de 1os nauplios (Foto 1). En 1os últimos años se

han desarrollado técnicas de cultivos que permiten cosechar grandes cantidades de biomasa de Artemia adulta en volúmenes reducidos de agua con gastos relativamente bajos aunque superiores a métodos extensivos. Además, este tipo de producción presenta ventajas en primera instancia, por la obtención de cantidades preestablecidas de biomasa en el momento que se requiera sin depender de1 medio natural y en Segundo lugar, por obtener organismos de mayor calidad nutricional (Amat et al., 1992). Foto 1. Adulto macho de Artemia franciscana. Uno de 1os principales factores bióticos que influyen en el éxito de su cultivo en forma intensiva, se refiere a su nutrición. Actualmente, son varias las dietas que son usadas para tal proposito, las cuales pueden diferenciarse en dietas vivas (microalgas, levaduras,

protozoarios y bacterias) y dietas inertes (microalgas secas, microparticulas, microcapsulas, emulsiones y harinas derivadas de subproductos agricolas). Dado que Artemia es un consumidor obligatorio y no selectivo de partículas (Dobbeleir et al., 1980; en: Sorgeloos et al., 1986) es necesario considerar la cantidad de alimento que ingiere diariamente para estimar su requerimiento alimenticio. Por otro lado, siendo un organismo filtrador captura constantemente partículas nutritivas de1 medio, las cuales deben medir menos de 50 micras de diámetro (Dobbeleir et al., 1980; en: Sorgeloos et al., 1986). La herramienta más útil para estimar la cantidad de alimento necesaria para realizar las necesidades metabólicas de 1os organismos planctónicos que dependen de un sistema de filtración para alimentarse, es la obtención de 1os indices de filtración e ingestión (Tizol et al., 1994) 1os cuales son utilizados para conocer la cantidad de alimento ingerido en un lapso relativo de tiempo. Por esto, es necesario estimar la cantidad de alimento diario de Artemia de tal manera que no carezca pero al mismo tiempo no exista en exceso, pues ambas situaciones limitan su crecimiento y desarrollo pudiendo colapsar su cultivo antes de que 1os organismos alcancen su estado adulto.

ll. ANTECEDENTES Desde que Seale (1993) y Rollefsen (1939) descubrieron que las larvas de Artemia son un buen alimento para estadios tempranos de peces, este crustaceo es utilizado como presa viva para muchas especies acuáticas. Considerando 1os criterios para la selección de un alimento en beneficio del depredador (Fig. 2) señalados por Léger et al. (1986), es indispensable conocer las características biométricas y cualidades fisicas y nutritivas de la dieta, las cuales deben ser lo suficientemente completas para las especies que se alimentarán de ella (Sorgeloos, 1980). CRITERIOS DE SELECCIÓN DE UNA DIETA EN BENEFICIO DE LAS LARVAS FISICOS: Pureza Disponibilidad Aceptable: Capturable Palatable o sabor Ingerible NUTRICIONALES: Requerimientos nutricionales y energéticos completos Digerible Fig. 2. Criterios de selección para una dieta en beneficio de la larva predadora (Léger et al., 1986). Como algunas de las propiedades biológicas que contribuyen al aumento en el uso de este branquiópodo en la alimentación larvaria se mencionan las siguientes: Artemia es un alimento disponible en cualquier etapa de su vida ya que tanto sus quistes decapsulados como adultos, son ampliamente utilizados; es de fácil cultivo y tiene alta resistencia al manejo, debido a que vive en amplios rangos de salinidad, oxígeno y temperatura; además,

es un alimento vivo de tamaño adecuado para la mayoria de 1os organismos acuáticos en sus primeros estadíos de vida (Castro et al., 1993) Los nauplios de Artemia son bien aceptados por 1os depredadores por su brillante color y permanente movilidad, caracteristicas que 1os hacen visibles (Foto 2.). La palatabilidad, es adecuada para 1os depredadores, por lo que ha menudo Artemia se usa como atrayente gustativo en las dietas artificiales. Artemia es digerible casi en un 83% en carpas y 89% para la trucha arcoiris (Leger et al., 1986). La buena calidad de la proteína y su alto aprovechamiento, favorecen el crecimiento y la reproducción de las especies depredadoras. El contenido energético de Artemia influye en la velocidad de desarrollo de las larvas cultivadas. En cuanto al contenido energético, la Artemia adulta viva alimentada con algas contiene 5.854 cal/g mientras que en la misma biomasa, pero congelada, contiene 5.100 cal/g, es decir 0.754 cal/g menos. Por lo que se sabe, el contenido energetico de Artemia adulta es 0.40 cal/g mayor que el de 1os nauplios, aunque a un costo más alto por el alimento que consume (Léger et al., 1986). En cuanto a la calidad nutritiva, Artemia contiene la mayoría de 1os macro y micronutrientes que requieren las especies marinas y dulceacuicolas. Sin embargo, existen diferencias en el contenido de proteínas, lipidos y carbohidratos entre las diversas cepas de este pequeño crustaceo. El contenido de aminoácidos de adultos y nauplios es más estable debido probablemente, a que es una característica controlada genéticamente (Castro et al., 1993). Ambos estadíos de desarrollo contienen la mayoria de 1os aminoácidos que son esenciales en la nutrición de peces y crustaceos. Sin embargo, Artemia como otros organismos planctónicos

Foto 2. Larva de1 sargo europeo Sparus aurata, alimentandose de nauplios de A. franciscana. (rotíferos, copépodos, cladoceros y microalgas), no contienen la totalidad de varios compuestos como 1os ácidos grasos esenciales, ni en las cantidades suficientes para las especies cultivadas, por lo que se recomienda mejorar la calidad de este organismo mediante técnicas de enriquecimiento (Léger et al., 1986), o suministrarla junto con otros organismos planctónicos para que en su conjunto, provean de 1os ácidos grasos polinsaturados que requiere el depredador.

De las dietas que mayormente se utilizan en la producción de biomasa de Artemia se mencionan las siguientes: a) Los desechos derivados de productos de la industria agricola son usados como alimento para larvas y juveniles de Artemia (Garcia Ulloa, 1998b). El salvado o cascarilla de arroz, soya, maíz y otros subproductos agrícolas (Foto 3) han sido reportados como fuentes alimentarias apropiadas para cultivarla a altas densidades (Dhont et al., 1993). Foto 3. Dietas inertes micropulverizadas derivadas de subproductos agrícolas, levadura de pan, microalgas secas y vivas, para la alimentación de organismos filtradores.

Bossuyt y Sorgeloos (1980) establecieron una tecnología de producción con la cual es posible producir dos kilos de biomasa en 1,000 litros de agua despues de dos semanas, manteniendo la temperatura de cultivo a 25 C y alimentado con harina de arroz. Dobbeleir et al. (1980: en Sorgeloos et al., 1986) examinaron el comportamiento de cultivo a altas densidades probando harina de trigo, soya y arroz, concluyendo que la harina de trigo como dieta única,no es apropiada debido a su contenido bioquimico. Estos autores lograron sobrevivencias mayores al 50% en contenedores experimentales de 1,000 ml de capacidad, pero una vez que se realize en cultivo de tanques de producción masiva, la sobrevivencia se redujo hasta menos de 10% en el caso de la harina de trigo, pero no así en animales alimentados con harina de soya, para 1os cuales se registró una sobrevivencia de1 80%. La principal ventaja que ofrecen estos productos es su bajo costo combinado con la disponibilidad a nivel mundial (Lavens y Sorgeloos, 1991), sin embargo y al igual que las microalgas secas y las microcápsulas, se requiere de un cuidado extra durante el tiempo de cultivo, ya que la calidad de1 agua puede ser facilmente deteriorada. Además, las partículas deben ser generalmente homogenizadas en cuanto a su tamaño debido a que el producto derivado de1 tratamiento de la micropulverización, no produce partículas de1 mismo diámetro. Por ello, la preparación de estas soluciones alimenticias debe realizarse diariamente. b) Las levaduras de pan (Foto 3) de cerveza y de origen marino que son usadas para alimentar Artemia y otros organismos (Sorgeloos y Léger, 1992)-, presentan varias ventajas como su pequeño tamaño (< 20 micras), su pared celular que evita la solubilidad de 1os nutrientes y su gran disponibilidad en el mercado (Litchfield, 1980). Coutteau et al. (1990) recomiendan el uso de levaduras marinas siempre y cuando estas Sean tratadas por una

sustancia enzimatica (Novozim 234) que las convierta en partículas más digeribles, sin que al mismo tiempo pierdan su potencial nutritivo. c) El uso de microcápsulas ha sido también reportado para engordar y mantener Artemia (Kanazawa et al., 1982; Jones et al., 1997). Este tipo de dieta tiene la ventaja de presentar y mantener una calidad bromatológica constante la cual es retenida por una membrana que es facilmente digerible por el crustaceo en cuestión, sin embargo 1os resultados obtenidos en cuanto a la sobrevivencia no ha sido muy alentadores usándolas como única fuente de alimento. En este caso, 1os criterios para la selección de1 alimento para larvas de peces y crustaceos mencionados por Léger et al. (1987) pudieran no ser cubiertos de1 todo. d) Otra modalidad en su alimentacion lo representa el uso de moléculas orgánicas solubles aplicadas en altas concentraciones, mismas que son absorbidas por via cutanea. También existen emulsiones basadas en su contenido de ácidos grasos esenciales, que sirven como enriquecedores durante la incubación de 1os diferentes estadíos de Artemia, 1os que posteriormente son otorgados a 1os organismos presas o depredadores que se pretende cultivar. Es decir, por medio de la tecnica de bioencapsulación (Sorgeloos, 1987) o enriquecimiento de Artemia (Fig. 3), su calidad bioquímica es capaz de ser mejorada sustancialmente lo cual se ha comprobado con 1os resultados en la producción de larvas de peces y crustaceos a nivel mundial. Tocher et al. (1997) y McEvoy et al. (1997) han reportado el uso de extractos de tejido nervioso de atún y bacalao, preparados como soluciones enriquecedoras de Artemia y de1 rotifero Brachionus plicatilis, obteniendo resultados muy alentadores en la producción de larvas de rodaballo europeo.

rotifero Artemia J Fig. 3. Principio de la técnica de bioencapsulación de A. franciscana en la que varios ingredientes esenciales pueden ser incorporados a la dieta de1 predador. e) De las dietas que comúnmente se han utilizado para la producción de biomasa de Artemia se encuentran las microalgas vivas (Foto 4). Su importancia radica en representar una fuente confiable de energia para favorecer el crecimiento, regulando la digestión de1 depredador y por lo tanto, incrementando su valor alimenticio (Freeman, 1991). Foto 4. Chaetoceros sp., una de las microalgas mayormente utilizadas en acuacultura Fábregas et al. (1996) han demostrado que al cultivar la prasinofita Tetraselmis suecica con diferentes concentraciones de nitrógeno en el medio de cultivo, provoca cambios en el nivel

nutricional de Artemia. Consecuentemente, sus funciones metabólicas fueron también afectadas, situación que se reflejó en la obtención de diferentes valores en 1os parámetros de sobrevivencia, peso seco, longitud total, porcentaje de hembras gravidas, cantidad de desoves y número de nauplios por desove. Estos investigadores alimentaron inicialmente al crustaceo con 25 µg (peso seco) de Tetraselmis suecica/ind., y la ración alimenticia fue incrementada gradualmente dependiendo de la transparencia del agua. Barata et al. (1996) reportaron el uso de la microalga Dunaliefia sp. para la producción de biomasa de especies de poco uso comercial de Artemia (A. tunisiana, A. parthenogenetica) con el objetivo de sugerir la selección de dichas cepas como recursos potenciales a ser explotados y usados en la acuacultura. Sin embargo, existen reportes de microalgas que por sus características morfológicas, más que por su contenido nutricional, no son recomendadas para alimentar al crustáceo en cuestión. Tal es el caso de Chlorella o Stichococcus, las cuales presentan una pared celular rígida que dificilmente es dirigida por Artemia (Sick, 1976); o la microalga Coccochloris, la cual produce sustancias gelatinosas que obstaculizan 1os mecanismos digestivos (Takano, 1967). Muchas especies de microalgas han sido utilizadas como alimento para Artemia en especial de1 genero Chaetoceros spp., la cual es considerada como una de las mejores por su pequeño tamaño y su alto contenido de ácidos grasos poli-insaturados (Jory, 1997). El alto porcentaje de sobrevivencia, así como la obtención de organismos de tallas más grandes refleja la calidad de1 alimento, particularmente en 1os organismos alimentados con Chaetoceros sp. donde se demuestra con base en 1os resultados obtenidos en varios estudios

como el de Cordero-Esquivel et al. (1993) que esta microalga reúne gran parte de 1os requerimientos nutricionales para A. franciscana. Correa y Buckle (1993) y Correa et al. (1994) reportaron una ración alimenticia de 1.5X10 5 células de Chaetoceros sp./día incrementandola gradualmente hasta 1.14X16 6 células/día. Como antecedente en el uso de esta microalga para la producción de biomasa de Artemia, el laboratorio de St. Croix Marine Station (Texas, USA), emplea sistemas de circuito abierto y usa como alimento Chaetoceros sp. con la cual se han reportado producciones de 25 Kg de biomasa de Artemia a partir de 30 g de huevecillos en un 1m 3 en solo dos semanas; esto promovido además, por un florecimiento artificial de nutrientes y por una biomasa de microalgas excepcionalmente elevada (Castro y Gallardo, 1993). Al parecer el valor nutricional de esta microalga es adecuado para el cultivo de Artemia ya que por ejemplo, presenta un alto porcentaje de proteína comparado con otras especies (32.5% de proteína, Paniagua-Chavez y Voltolina, 1995) pero se requiere la realización de más estudios en cuanto a la dosis y a otras características nutricionales de dicha dieta, ya que existe mucha discrepancia en 1os resultados encontrados de la literatura. Existen varios métodos para determinar el consumo de partículas en organismos planctónicos entre los que destacan el uso de radioisótopos como el C l4 (Davalos-Lind, 1996) el cual es captado e incorporado en las microalgas durante el proceso de fotosintesis para después ser trasmitido ya sea al organismo presa o desechado en las heces; otra metodología consiste en la medición de pigmentos como la clorofila (Lee y Wong, 1997) mediante un colorimetro. Sin embargo, el más usado radica en la aplicacion de formulas

para obtener los indices de tiltración e ingestión, para los cuales existen reportes especificos para Artemia (Braun, 1980; Coutteau, 1992; Garcia-Ulloa, 1998b) y para otros organismos planctónicos como el rotifero Brachionus calyciflomus (Ferrando et al., 1993) ambos alimentados con diversas dietas inertes y vivas. Por todo lo anterior y debido a la gran importancia que Artemia representa en el crecimiento sostenido de la producción acuícola a nivel mundial, es importante la optimización en el uso de dicho recurso para su mejor aprovechamiento. El presente estudio pretende contribuir al conocimiento, acerca del requerimiento alimenticio mediante el uso de una microalga como o dieta única en la producción de biomasa, evaluando su comportamiento alimenticio tanto a nivel de laboratorio como en cultivo masivo a diferentes densidades.

III. OBJETIVO GENERAL Estimar los requerimientos alimenticios de Artemia franciscana mediante la obtención de 1os indices de filtración e ingestión, alimentada con la microalga Chaetoceros muelleri bajo condiciones de laboratorio y en cultivo masivo. III.1 OBJETIVOS PARTICULARES 1) Determinar 1os indices de filtración e ingestión de A. franciscana alimentada con la diatomea Ch. muelleri bajo condiciones experimentales y en cultivo masivo. 2) Comparar el comportamiento alimenticio de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri y cultivada a nivel experimental e intensivo. 3) Evaluar la sobrevivencia de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri, cultivada en forma intensiva a diferentes densidades. 4) Evaluar la longitud corporal de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri en cultivo intensivo a diferentes densidades. 5) Comparar la producción de biomasa de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri, cultivada de manera intensiva a diferentes densidades.

IV HIPOTESIS a) La microalga Ch. muelleri cubrirá 1os requerimientos alimenticios de A. franciscana a la concentración experimental. b) La filtración e ingestión de A. franciscana serán similares en el experimentoh a nivel laboratorio y en cultivo masivo. c) La filtración e ingestión presentaran una relación directa respecto a la edad de 1os organismos. d) La longitud de Artemia será proporcional a 1os indices de ingestión y filtración e) La producción de biomasa y sobrevivencia estaran en relación directa con la densidad de siembra.

V. MATERIALES Y METODOS A) Origen de la Artemia y decapsulación Los quistes de Artemia fueron obtenidos de la compañia comercial GREAT LAKE ARTEMIA (grado A, USA) y fueron decapsulados e incubados siguiendo la técnica propuesta por Sorgeloos et al. (1986). B) Tratamiento de1 agua y cultivo de la microalga El agua de cultivo f u e tomada de la laguna de Barra de Navidad, pasada a través de un filtro de arena (Jacuzzi ), quelada con NaEDTA a una concentración de 12 mg/l, filtrada con cartuchos (hasta 5 m) y esterilizada por medio de una unidad de 8 lamparas ultravioletas antes de ser incorporada a 1os contenedores experimentales. La microalga utilizada como alimento en este trabajo fue Chaetoceros muelleri (clave CICESE; CH-M-l, Trujillo, 1993) cuyo contenido bromatológico es: proteina, 38.1 %; grasa, 19.12 %, cenizas, 25 %; carbohidratos, 17.77 % (Brown, 1991; Velasco, 1997; en: Garcia-Ulloa, 1998b). El cultivo de Ch. muelleri se realizó en un cuarto acondicionado con temperatura entre 20 y 22 C, y 1os garrafones utilizados (20 1 de capacidad, a un volumen de trabajo de 15 1) fueron provistos con aireación e iluminación constante por medio de un turbo soplador (2HP) y 4 lámparas fluorescentes de 75 watts. Se utilizo el medio F (Guillard y Ryther, 1962) como sustrato de crecimiento para la microalga y se mantuvo con

la técnica de cultivo semicontinuo (Guillard, 1975) que consiste en realizar cosechas parciales de1 medio y la reposición de1 volumen extraido para mantener la concentración algal constante. En el presente trabajo, el volumen extraido se ajustó de acuerdo a las necesidades de alimento diario que se mencionan en el inciso C) de1 presente capitulo, lo que significó una taza de renovación de1 50% cada tercer día por garrafón. Se utilizaron dos tipos de contenedores para su cultivo: 1) En garrafones de vidrio de 19.8 1 a una capacidad de trabajo de 15 1. bajo condiciones controladas, para surtir el alimentó durante la primera fase experimental y, 2) En condiciones ambientales y en forma masiva usando tanques de 1,000 1, para la segunda fase experimental. La microalga en cuestión se suministro como alimento cuando la curva de crecimiento se encontraba en la fase de crecimiento exponencial. Para determinar dicha fase, se realizaron ensayos previos al experimento, cultivando la microalga con el metodo de cultivo estatico (Guillard, 1975), manteniendo estables todas las condiciones de1 ensayo y realizando conteos diarios de la población. C) Mantenimiento del cultivo madre de Artemia Una vez que se obtuvieron nauplios recién eclosionados, se colocaron en una garrafon invertido de plastico con capacidad de 20 1, a un volumen de trabajo de 10 1. Este contenedor se mantuvo con aireación constante y luz difusa. Se realizo un conteo volumétrico con una pipeta de 1 ml para conocer la densidad de1 cultivo madre. Se alimentaron diariamente dos veces por dia durante 1os primeros 5 dias, y tres veces por día

desde el día 6 hasta el final de 1os ensayos, con una densidad entre 1 000,000 a 1 500,000 c é l / ml de la microalga Ch. muelleri. Para esto, se realizó un conteo de la población algal en el garrafon de Artemia y en 1os contenedores de cultivo de la microalga, ajustando dicha concentración. De este garrafón se extrajeron diariamente 1os organismos para el ensayo de filtración e ingestión en 1os tubos de ensayo. Para el mantenimiento de las condiciones adecuadas de cultivo en dicho contenedor, se realizaron recambios totales de1 medio todos 1os días, entre las 9:30 y 10:30 AM, y se mantuvieron 1os parámetros físicos y químicos como sigue: temperatura de 28±0.5 C, salinidad de 33±l.3 g/l y 8.3±0.9 de ph. Este proceso implicó la extracción de todos 1os animales de cada garrafón, su concentración en un tamiz de 150 µm, el lavado de1 contenedor y la adición de alimento fresco para volver a sembrar 1os organismos. D) Condiciones experimentales para determinar 1os indices de filtración e ingestión de Artemia en tubos de ensayo El experimento se realizó utilizando una gradilla de madera en la que se colocaron 5 tubos de ensayo de 12 ml, cada uno considerado como replica utilizándose un volumen experimental de 10 ml. Se introdujeron animales en 1os tubos a una densidad de 5 Art/ml, y Ch. muelleri una densidad de 1.2X10 6 cél./ml para evaluar 1os indices de ingestión y filtración, según la ración alimenticia recomendada por Correa y Buckle (1993) y Correa et al. (1994).

Para esto, se realizó un conteo de microalgas inicial (n=30) y se permitio que 1os animales se alimentaran por 2 horas. Al final de dicho tiempo, se extrajeron 1os organismos y la densidad de Ch. muelleri fue nuevamente obtenida, añadiendo una gota de formalina al 1O%, para obtener la concentración de microalgas (n=6 por tubo o replica) por medio de un hemacitómetro (0.1 mm de Prof., PROPPER ) Lomb ) y un microscopio compuesto(bausch & Este procedimiento fue llevado a cabo durante 10 dias desde el estadio larval Instar II de Artemia (es decir 36 horas después de la eclosión, edad en que 1os organismos presentan ya el tracto digestivo abierto, Sorgeloos et al., 1986) y fue repetido 3 veces para la verificación de 1os resultados. El trabajo se realizó en un cuarto semioscuro para evitar la reproducción de la microalga. I En el transcurso de1 tiempo experimental 1os tubos fueron invertidos cada media hora para mantener las microalgas en suspensión y evitar la sedimentación, pero sin agitar el tubo para no perturbar el proceso de filtracición de 1os organismos (Spittler, 1988). Para la obtención de la longitud total de Arteinia (Amat, 1980) se extrajeron diariamente al azar 10 organismos por tubo. La medición se realizó con un microscopio de reflexion de imagenes (Bausch & Lomb ) y un micrómetro ocular (10 mm/o. 1 mm). E) Condiciones experimentales para determinar 1os indices de filtración e ingestión de Artemia en cultivo masivo a diferentes densidades

Para esta fase se uso un módulo experimental propuesto por García-Ulloa et al., (1998) el cual consiste de 12 garrafones invertidos de plástico de 19.8 1. de capacidad con un adaptador central para mallas intercambiables y con un sistema de cultivo que puede ser modificado -ya sea abierto o cerrado de circulación de aqua-, 1os que fueron usados como contenedores de cultivo (Foto 5). En cada uno de estos, se colocó un anillo de tubo de plástico al centro para proveer de la aireación suficiente y mantener en suspension tanto alimento como animales. El volumen de trabajo se ajustó a 10 1. 1os animales fueron sembrados a cuatro densidades experimentales (1,000, 3,000, 5,000 y 7,000 Art/l.) después de 24 horas de la eclosión de 1os quistes. Los tratamientos fueron distribuidos al azar evaluándose por triplicado. La alimentación consistió en la microalga Ch. muelleri a la densidad descrita en 1os experimentos en tubos de ensayo. Diariamente se monitorearon 1os siguientes parametros: salinidad, ph y temperatura, y se realizaron recambios totales de agua siguiendo la rutina descrita para el contenedor de1 cultivo madre. Tambipen para este ensayo, la longitud de Artemia fue determinada por replica y tratamiento como se menciona en el inicio anterior. Al final de1 cultivo (edad de Artemia = dia 11) se cosecharon 1os animales de cada tratamiento para obtener la biomasa húmeda y seca. Los indices de filtración e ingestión fueron obtenidos despues de 2 horas de haber alimentado a 1os animales con la microalga, para lo cual se obtuvo la densidad celular de Ch. muelleri al tiempo de siembra y después de 120 minutos, en cada contenedor (n=l 0 en cada contenedor).

Foto 5. Contenedor experimental para 1os ensayos de filtración e ingestión a nivel de cultivo masivo. F) Evaluación de 1os indices de filtración e ingestión de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri Para el cálculo de filtración (ml/art/h) e ingestión (células/art./h) se emplearon las fórmulas propuestas por Hayward y Gallup (1976; en: Coutteau, 1992):

IR = [(Co-Cf)V]/n t (l), CR = IR/Cm (2), IR = ingestión (cél.lart./h), CR = filtración (ml/art/h), Co = concentración inicial de algas (cél./ml), Cf = concentración final de algas (&L/ml), Cm = (Co + Cf)/2, t = tiempo experimental (hora), n = densidad de Artemia/ml, V = volumen (ml). G) Evaluación de parametros biológicos I.- Fase experimental en tubos de ensayo a) Para obtener la longitud de A. franciscana por dia se extrajeron 10 organismos de cada tubo de ensayo (n = 50 org. por dia), se fijaron con lugol y se colocaron en un portaobjetos el cual se fijó en un microscopio de reflexion de imágenes provista de un micrómetro ocular, midiendo 1os organismos desde el ojo naupliar hasta el telson (Amat, 1980).

b) Para la filtración e ingestión se tomaron muestras de1 medio de cada uno de 1os 5 tubos y se fijaron con 1 gota de formol al 10%. La densidad de microalgas se realizó con la ayuda de un microscopio compuesto (Bausch & Lomb ) y un hematócimetro (0.1 mm de profundidad) realizando 6 conteos por cada réplica. 2.- Fase experimental en cultivo masivo a) Para obtener la longitud de A. franciscana por dia, se extrajeron 10 organismos de cada garrafón para ser procesados como en el párrafo anterior. b) Para la filtración e ingestión se procedió tambien como en el parrafo anterior realizando 6 conteos de cada garrafón. c) La sobrevivencia se evaluo diariamente, tomando 10 muestras por garrafón con una pipeta de 10 ml., para finalmente estimar el número de organismos en el volumen de cultivo aplicando la fórmula, propuesta por Cruz et al., (1993): sobrevivencia = # final de organismos/# inicial de organismos X 100. d) La biomasa de Artemia por garrafón y tratamiento se obtuvo al extraer todos 1os organismos de cada garrafón en un tamiz de 150 µ de abertura y quitando la humedad por medio de1 papel absorbente para obtener el peso húmedo de 1os animales utilizando una bascula electrica marca OHAUS. Para el peso seco, las muestras anteriores se colocaron

en una estufa electrica (FELISA ) durante 48 horas a una temperatura de 60 C. (García- Ulloa, 1995). 3.- Evaluación estadistica Los resultados de filtración e ingestión diarios tanto en tubos como en garrafones, fueron evaluados por medio de un análisis de varianza de una vía, al igual que la longitud y sobrevivencia de Artemia alimentada con la diatomea Ch. muelleri. En caso de encontrar diferencias significativas (œ=0.05) en 1os valores medios tanto de filtración e ingestión como de 1os otros parámetros biológicos, se aplicó la prueba de rangos multiples de Tukey, (95%). También, se realizaron pruebas de correlación entre factores como longitud y filtración o ingestión, expresando las ecuaciones de regresión lineal.

VI. RESULTADOS Los parametros físicos y químicos de1 agua de cultivo durante la producción masiva de Artemia, mostraron valores dentro de1 rango indicado por Sorgeloos et al. (1986) siendo la temperatura, salinidad y ph, de 28±0.5 C, 33±1.3 g/l y 8.3±0.9 respectivamente. A) Fase experimental de tubos de ensayo La filtración en 1os tubos de ensayo por día no presento diferencias significativas (P<0.05) desde el día I al final de1 ensayo, mostrando en general una tendencia a incrementarse con relación al tiempo (Tabla 1). Los valores de filtración al dia 10 fluctuaron desde 0.051 hasta 0.079 ml/ Art./ h Tabla 1. Valores promedio (± desviación estándar) de filtración (ml/art/h) de A. fianciscana mantenida en tubos de ensayo y alimentada con Ch. muelleri. (Los números I a V representan las replicas utilizadas en esta fase experimental) En promedio, 1os valores de filtración iniciales registraron un aumento de casi el doble con respecto a 1os observados para el ultimo día de1 ensayo.

En cuanto a la ingestión, tampoco se detectaron diferencias significativas (P I 0.05) entre las replicas durante 1os 10 dias experimentales (Tabla 2) y no se observó tendencia a incrementarse conforme 1os organismos crecieron. Solo se detecto un incremento notable en el índice de ingestión de1 dia 9 al 10, para el cual se registraron valores desde 8.88 hasta 11.38 X 10 4 cél/art./h Los valores en la longitud de 1os animales mantenidos en los tubos de ensayo no presentaron diferencias signiticativas (P < 0.05) por dia entre las replicas. Se observó una tendencia en el incremento de la longitud total de Artemia con relación al tiempo (Tabla 3), desde 477.86 µ al día 1 para el tubo IV, hasta 3,5 17 al décimo día en el tubo I. En promedio, 1os animales crecieron alrededor de1 600% al final de1 tiempo experimental con relación a la longitud registrada el primer dia.

La Fig. 4 muestra 1os valores promedio de correlación entre la filtración e ingestión de A. franciscana alimentada con la microalga Ch. muelleri y cultivada en tubos de ensayo. Los valores de correlación fluctuaron entre 0.89 y 1.00, mostrando un aumento proporcional y positivo entre 1os dos parámetros estudiados. I g 0.08 I e 3g 0.06 r=0.95 0.04 y=3.86+61.42x 5 g 0.02 z 0 / /, 1 IL 0 5 10 15 Ingestión (céle4/ar/h) Fig. 4. Relación entre los valores promedio de ingestión (y) y fiitración (x) de A. franciscana alimentada con la microalga Ch. muelleri y cultivada en tubos de ensayo.

En la Fig. 5 se muestran 1os valores promedio de correlación entre la longitud e ingestión de A. franciscana alimentada con la microalga Ch. muelleri y cultivada en tubos de ensayo. Los valores de correlación fluctuaron entre 0.039 y 0.52, mostrando una baja correlación entre 1os dos parámetros estudiados. g 12 2 10 1=0.321 8 y=1.57+0.0023x 3 6 6 4 ❻ 0 2000 4000 Longitud (mm) L Fig. 5. Relación entre 1os valores promedio de ingestión (y) y longitud(x) de A.franciscana alimentada con Ch. muelleri cultivada en tubos de ensayo. B) Cultivo masivo de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri y cultivada a diferentes densidades En el cultivo masivo, se observaron diferencias significativas (P > 0.05) en algunas réplicas de 1os valores de filtración desde el día 1 al 10 mostrando en general, una ligera tendencia a incrementarse con relación al tiempo (Tabla 4), a excepción de1 día 10 que mostró un valor más bajo que el dia 9.

En la ingestión masiva, se observaron diferencias signiticativas (P > 0.05) en algunas replicas desde el día 1 al 10, mostrando en general una tendencia a incrementarse con relación al tiempo (Tabla 5) con excepción de1 dia 1 que mostró valores más altos que el dia 2 en 1os tratamientos I y IV.

Para todos 1os dias, 1os valores más altos de ingestión fueron registrados en el grupo en que la densidad de Artemia/1 f u e menor. Para la longitud de1 crustaceo en cuestión bajo condiciones de cultivo masivo, se observó diferencia significativa (P > 0.05) en 1os dias 6 y 8 de1 ensayo, mostrando para todos 1os tratamientos, una tendencia a incrementarse con relación al tiempo (Tabla 6) a excepción de1 dia 8 en el tratamiento I, en el que el valor registrado fue mayor que para el resto de 1os dias experimentales.

En este caso, el aumento promedio de la longitud he aproximadamente 5 a 7 veces mayor con relación a la talla del dia inicial. La Fig. 6 muestra 1os valores promedio de la correlación entre la filtración e ingestión de A. franciscana alimentada con la microalga Ch. muelleri y cultivada a nivel masivo a diferentes densidades. Los valores de correlació fluctuaron entre 0.679 y 0.801, mostrando una baja correlació entre estos dos parámetros estudiados para todos los tratamientos, principalmente para el grupo de menor densidad de Artemia/1.

g 3 2 2.5 &2.- E. 1.5.- 9' 1 f=o.679 ; 0.5 y=3.16+0.544x = L, / : 0 3.5 4. 4 A \ 5 g 3-2 2.5 = 4' 1.5 2 ❻ ❼ 1 f 0.5- y=2.68+0.635x g 01 1 3.5 4 4.5 5 B Ingestibn (dlbuatt/h) 1 g 3-225- 4 % =2 ❼ %.5-5 l HI.738 5 O.5 y=242+0.69ex C E 0 I / / 3.4 3.9 4.4 4.9 F 3 * 2.5 3 2 g5 1.5 h 1 r=0.801 ; 0.5.- E O i y=2.21+0.754x 3.2 3.7 IngestM(cM3/AR/h) D I 7 4.2 Fig. 6. correlación entre 1os valores promedio de filtración (ml/art./h) e ingestión (cél. X 10 4 /Art./h) de A. franciscana (n = 3) alimentada con la microalga Ch. mueiieri en cultivo masivo (A = 1,000 Art/l; B = 3,000 Art./1 C = 5,000 Art./1;, D = 7,000 Art/l). La Fig. 7 muestra 1os valores promedio de correlación entre la longitud e ingestión de A. franciscana alimentada con la microalga Ch. muelleri y cultivada a nivel masivo. Los valores de correlación fluctuaron entre 0.87 y 0.79, mostrando una baja correlación en estos dos parámetros estudiados.

r z,.j 4.8 a $ 4.6 5 2 4.4 g 4.2 4 4 2 P 4, I 0 2000 4000 60C r= 0.794 y = 4.14+O.aIOlX E 2 4.5 h 4.2 y 3.9 g3.6 B 3.3 5 & 3 Loneiu (mm) A r=0.80 y = 3.75+0. omx Longitud (mm) B 1 5 I=0244 y=3.32+o.ai2x Longitud (mm) C r-o.87 y=3.11+o.ooow Lcmgitud (mm) D -I Fig. 7. Correlación promedio entre la longitud total (c e ingestión (cél./art./h) de A Franciscana alimentada con la microalga Ch. muelleri en cultivo masivo (A = 1,000 Art/l; B = 3,000 Art/l; C = 5,000 Art/l; D = 7,000 Art/l (n = 3 por tratamiento). En la fig. 8 se muestran los valores de la biomasa húmeda (g) y sobrevivencia (%) finales 1os cuales fluctuaron desde 27.7 g hasta 3 1.3 g, y desde 54% hasta 80%, respectivamente. El valor promedio más alto de sobrevivencia (n = 3 por tratamiento fue registrado para el grupo de mayor densidad de Artemia por litro (7,000) mientras que la mayor cantidad de biomasa fue obtenida para el tratamiento de 5,000 Art/l.

G 32-100 ; 31 -- -- 80 F z 30-- % 5 29 -- -- 60 'i z 28 -- -- 40 '$ s! 35l 27-- 26-- -- 20! E 25 0 cn El 1 2 3 4 barras Tratamientos I liilg3 Fig. 8. Porcentaje de sobrevivencia (%) y producción de biomasa promedio (g) de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri a diferentes densidades: 1 = 1,000 Art./A, 2 = 3,000 Art/l, 3 = 5,000 Art/l, 4 = 7,000 Art./1 (n = 3 por tratamiento).

VII. DISCUSIONES No obstante que Artemia es un organismo que presenta varias ventajas biológicas que benefician su proceso de alimentación -como no seleccionar las partículas que filtra en forma constante-, existen muchos factores que de acuerdo a Braun (1980) influyen sobre el comportamiento alimenticio. Entre estos destacan el volumen de1 contenedor, la edad y el tamaño de 1os organismos, y la calidad y la concentración de1 alimento; pero aún revisando cada factor de manera aislada, Lavens y Sorgeloos (199 1) mencionan que el efecto de la combinación de condiciones o parametros de cultivo lejos de 1os niveles optimos, pueden limitar su capacidad alimenticia lo cual pudiera reflejarse en la disminución de 1os procesos de filtración e ingestión. En el presente estudio, 1os valores de filtración por día de A. franciscana alimentada con Ch. muelleri en 1os tubos de ensayo no indicaron diferencias significativas (P > 0.05, Tabla 1) considerando así, que las condiciones de cultivo en cada replica fueron similares y estables. Es posible establecer entonces, que dichos valores fueron confiables a las condiciones usadas en el ensayo. Aunque no se observó que tanto la filtración como la ingestión se hayan incrementado con el tiempo de cultivo en 1os tubos de ensayo como se reporta en 1os trabajos de Coutteau (1991) Lavens y Sorgeloos (1991) y Makridis y Vadstein (1999), el valor máximo encontrado al día 10 indica la necesidad de extender el tiempo experimental con la microalga estudiada para obtener una mayor cantidad de medio filtrado, proporcional a la presencia de animales de tallas mayores.

Los valores de filtración obtenidos en la primera fase experimental coinciden con 1os reportados por Coutteau (1991) de 0.01 a 0.03 ml/h para animales de 72 horas de edad, y de 0.2 a 1.08 ml/h para Artemia de 144 horas de edad, usando como alimento la levadura de pan a diferentes concentraciones. Sin embargo, los resultados de dicho autor con animales de 8 días de edad fueron mayores a 1os obtenidos en el presente trabajo. Makridis y Vadstein (1999) obtuvieron una filtración de más de 2 ml/h en animales de 7 dias de edad alimentados con particulas de diversos tamaños, incluyendo microalgas vivas como Isochrysis galbana y Tetraselmis suecica. Estos investigadores concluyeron que el branquiópodo en estudio mostró una preferencia alimenticia por filtrar e ingerir particulas menores de 10 u de diámetro -como es el caso de la microalga Ch. muelleri usada en el presente trabajo (Trujillo-Valle, 1993)-, condicionada principalmente a la distancia entre las setas de 1os apéndices filtradores, 1os cuales son más complejos cuando 1os animales alcanzan la edad adulta. En comparación a 1os valores de filtración reportados por Makridis y Vadstein (1999) la filtración en este ensayo fue 3 a 4 veces menor, lo que sugiere que el tipo de alimento y las condiciones de cultivo especificas para cada trabajo pudieron provocar las diferencias entre 1os resultados. De acuerdo a Lavens y Sorgeloos (1991) la actividad filtradora de1 camarón de salmuera no es muy eficiente en 1os primeros estadíos de vida debido a que sus estructuras morfológicas para tal f u n c i o n n o están completamente desarrolladas. De esta manera, la maxima filtración es sólo alcanzada cuando todos 1os apéndices conocidos como toracópodos son funcionales. En 1os tubos de ensayo no f u e posible observar dicho efecto