IGF-1-EASIA KAP1581. DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B Louvain-la-Neuve - Belgium

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1 IGF1EASIA KAP1581 DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue du Bosquet, 2 B 1348 LouvainlaNeuve Belgium

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3 es Leer por complete este protocolo antes de su. IGF1EASIA I. USO PREVISTO Ensayo inmunoenzimático para la medición cuantitativa de Factor de Crecimiento Insulinico tipo 1 (IGF1) en suero II. INFORMACIÓN GENERAL A. Nombre propietario: DIAsource IGF1EASIA Kit B. Catalogue numero: KAP1581: 96 pruebas C. Fabricado por: DIAsource ImmunoAssays S.A. Rue du Bosquet, 2, B1348 LouvainlaNeuve, Belgium. Para asistentcia técnica o información de pedido contactarse: Tel : +32 (0) Fax : +32 (0) III. ANTECEDENTES CLÍNICOS A. Biológicas actividades El Factor de Crecimiento Insulinico tipo 1 (IGFI) o Somatomedina C es cadena polipeptidica sencilla básica de 70 aminoácidos (Peso Molecular: 7649 Da) similar a la proinsulina (50% de homología de secuencia), y para otro miembro bien caracterizado de la familia de la somatomedina familia: IGF II (67AA, homología de 70% con la secuencia de IGFI). El IGFI es el factor más importante, que media el crecimiento de la promoción de acciones de la hormona de crecimiento, una hormona pituitaria con niveles en sangre muy fluctuantes debido a su liberación pulsátil. La concentración en sangre de la proteína de unión predominante (Peso Molecular: ) asi como la producción de IGFI, esta regulada por la hormona de crecimiento. Esto estimula el crecimiento y regula la diferenciación de varios tejidos, despliega las actividades tipo insulina y promueve el crecimiento del cartílago. Sin embargo la Hormona de Crecimiento es el factor mas importante de control para la secreción de la IGF1 en el micro ambiente local de un órgano particular (actividades paracrinas), mientras que la concentración en sangre de IGF1 es la variable mas importante para el crecimiento sistémico balanceado (actividades endocrinas). B. Aplicaciones clínicas Retardo del Crecimiento: Retraso del crecimiento: El retraso del crecimiento puede deberse a varias causas, entre las cuales se tienen la deficiencia en la producción de GH (hipopituitarismo), la cual está asociada con niveles bajos de IGFI en sangre. Debido a las dificultades para obtener resultados interpretables a partir de mediciones de GH (mediante pruebas dinámicas de estimulación o múltiples), la determinación de la concentración estable de IGFI en el plasma es a menudo considerado como una simple prueba de selección para la evaluación del paciente antes de decidir acerca de investigaciones más amplias. En varias situaciones clínicas con problemas de crecimiento, se pueden observar niveles bajos de IGFI, a pesar de la producción normal o alta de GH (es decir, malnutrición, enfermedades crónicas, algunos problemas genéticos de crecimiento como los pigmeos,...). Curiosamente, los niños con una disfunción discreta de neuronas GH pueden presentar valores bajos de IGFI, a pesar de valores normales de GH presentes en pruebas convencionales. Los resultados de ensayo con IGFI deben interpretarse con cautela teniendo en cuenta la variación normal de IGFI durante la infancia y la adolescencia. (Ver Rosenfeld et al). Acromegalia. Los niveles de IGFI son elevados en presencia de acromegalia (exceso de producción de GH) y pueden servir como indicador de la gravedad de la enfermedad. Los resultados son más fáciles de interpretar, ya que los valores normales son más fácilmente definidos en adultos. Las mediciones de IGFI son también útiles para supervisar el tratamiento. Investigación: El kit IGFI EASIA es una herramienta invaluable para estudiar las modificaciones de este factor de crecimiento durante situaciones fisiológicas (ej. embarazo) o patológicas (ej. diabetes), y las normas locales para la producción de IGFI en relación con actividades paracrinas y autocrinas (curación de heridas, regeneración de órganos, crecimiento neoplásico. desarrollo fetal, regulación gonadal, etc.)

4 IV. PRINCIPIOS DEL MÉTODO El kit DIAsource IGFlEASIA es un Inmunoanálisis enzimático de fase sólida con sensibilidad amplificada realizado sobre microplacas de poliestireno. En el presente kit, DIAsource presenta un paso de pretratamiento con el fin de mejorar el rendimiento clínico del ensayo. Es bien sabido que la unión de proteínas interfieren con el ensayo de EASIA para IGFl. El paso de pretratamiento utilizado por DIAsource es el procedimiento ácidoetanol de Daughaday et al (8). Una cantidad fija de IGFl marcado con peroxidasa de rábano picante (HRP), compiten con los IGFI no marcados presentes en el calibrador, controles y muestras por un número limitado de sitios de unión de un anticuerpo específico. Después de 1 hora de incubación a temperatura ambiente, la microplaca se lava para detener la reacción de la competencia. La solución Cromogénica (TMB) se añade y se incuba durante 15 minutos. La reacción se detiene con la adición de una Solución de Parada y luego se realiza la lectura de la microplaca según la longitud de onda apropiada. La cantidad de sustrato producido se determina de manera colorimétrica mediante la medición de la absorbancia, la cual es inversamente proporcional a la concentración IGFl. Se traza una curva de calibración y se determina la concentración de IGF1 en las muestras mediante la interpolación, a partir de la curva de calibración. V. REACTIVOS SUMINISTRADOS Reactivos Kit de 96 Microplaca (rompible o que se puede dividir) con 96 pozos revestidos con anti IGF1 Conjugado: IGF1 etiquetado con HRP en tampón de fosfato con caseína y timol. Tampón conjugado: Tampón de fosfato con caseína y timol Solución de pretratamiento con contenido de etanol Solución de reconstitución con contenido de etanol Solución de neutralización con contenido de: tampón de fosfato con caseína y azida (<0.1%) Calibrador Cero en tampón de fosfato con caseína bovina Calibradores N = de 1 a 5 (Ver valores exactos en las etiquetas de los viales) en tampón de fosfato con caseína bovina Controles N = 1 o 2 en suero humano con timol. Solución de lavado (trishcl) Solución cromogénica TMB (Tetrametilbenzidina) Solución de detención : HCL 10 N Nota: pruebas Código de color Reconstitución 96 pozos Azul 0.2 ml. 11, 5 ml 20 ml 10 ml 30 ml Liofilizado 5 viales Liofilizados 2 viales Liofilizados 10 ml 12 ml 12 ml 1 Utiliza el calibrador cero para las diluciones de las muestras Rojo Rojo Negro Azul Verde Diluir 100 x con búfer de conjugado Amarillo Adicionar 1.0 ml de solución de reconstitución Amarillo Adicionar 1.0 ml de solución de reconstitución Plateado Adicionar 1.0 Café Café blanco ml de agua destilada Diluir 200 x con agua destilada ( usar un mezclador magnético) 2. 1 ng de la preparación de calibrador es equivalente a 1 ng de NIBSC 1st IRR 87/518 VI. SUMINISTROS NO PROPORCIONADOS El siguiente material es necesario, pero no se proporciona dentro del kit: 1. agua destilada de Alta calidad 2. Pipetas de 50 ul, 100 ul, 400 ul, 500ul, 600 ul y 1 ml (se recomienda el de pipetas de precisión con puntas desechables de plástico) 3. Opcional: tubos de microcentrífugado de polipropileno para pretratamiento de muestras (p.e. Eppendorf 3810) 4. Tubos de polipropileno para la fase de neutralización (Falcon ) 5. Mezclador Vortex 6. Agitador magnético 7. Microcentrífuga o Centrífuga 8. Lavadora para microplacas 9. agitador horizontal de microplacas ajustable a 500 rpm 10. Lector de microplacas para 450 y 650 nm (lectura monocromática) VII. PREPARACIÓN DE REACTIVOS A. Calibración: Reconstituir el calibrador cero y otros calibradores con 1,0 ml de solución de reconstitución B. Controles: Reconstituir los controles con 1.0 ml de agua destilada. C. Conjugado de Trabajo IGFlHRP conjugado: Prepare una cantidad adecuada de solución conjugada añadiendo por ejemplo, 20 ul de concentrado 100x de conjugado IGF1HRP a 2 ml de tampón conjugado. Utilice un vórtex para homogeneizar. Se recomienda una preparación extemporánea. D. Solución de Lavado Activa: Prepare una cantidad adecuada de solución de lavado activa mediante la adición de 199 volúmenes de agua destilada a 1 volumen de la solución de lavado (200x) Utilice un agitador magnético para homogeneizar. Descarte la solución de lavado no utilizada al final del día. VIII. ALMACENAMIENTO Y FECHA DE VENCIMIENTO DE LOS REACTIVOS Antes de la apertura o de su reconstitución, todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de vencimiento indicada en la etiqueta del vial, siempre y cuando se mantenga bajo una temperatura de 2 a 8 C. Las tiras no utilizadas deben ser almacenadas, de 28 C, en una bolsa sellada que contenga una desecante, hasta la fecha de caducidad. Después de la reconstitución, los calibradores y controles son estables durante una semana a una temperatura de 2 a 8 C. Para períodos más largos de almacenamiento, las alícuotas deben realizarse y mantenerse a una temperatura de 20 C para un máximo de 3 meses. Evite realizar continuas etapas de congelación y descongelación. La solución de lavado concentrada es estable a temperatura ambiente hasta fecha de caducidad. La solución de lavado recién preparada debe utilizarse el mismo día. El conjugado IGFIHRP es estable durante 4 horas a temperatura ambiente, evite la luz directa del sol. Las alteraciones en la apariencia física de los reactivos del kit pueden indicar inestabilidad o deterioro. IX. RECOLECCION Y PREPARACION DE MUESTRAS El suero debe mantenerse a una temperatura de 2 8 C. Si la prueba no se ejecuta dentro de las 24 horas, se recomienda almacenar las alícuotas a 20 C. Evite etapas posteriores de congelación y de descongelación. Antes de usar, todas las muestras deben estar en una temperatura ambiente. Se recomienda mezclar las muestras antes de su. No utilice muestras hemolizadas X. PROCEDIMIENTO A. Notas sobre manipulación No utilice el kit o los componentes después de la fecha de caducidad. No mezcle materiales de diferentes lotes. Permita que todos los reactivos alcancen temperatura ambiente antes de su. Mezcle bien todos los reactivos y muestras agitándolas suavemente. Realice pruebas de calibradores, controles y muestras por duplicado. Se recomienda la alineación vertical. Utilice un recipiente de plástico limpio para preparar la solución de lavado. Para evitar la contaminación cruzada, use boquillas de pipeta desechables para la adición de cada reactivo y de muestra. Para la dispensación de la Solución cromogénica y la Solución de Detención evite el de pipetas metálicas. Las pipetas de alta precisión o equipo automático de pipeteado mejorarán la precisión. Respete los tiempos de incubación. Para evitar derivaciones, el tiempo entre el pipeteado del primer calibrador de la primera y la última muestra debe limitarse al tiempo mencionado en la sección XIII parágrafo E. (Retardo). Prepare una curva de calibración para cada prueba, no utilice los datos de pruebas anteriores. Dispense la solución Cromogénica dentro de los 15 minutos después del lavado de la microplaca. Durante la incubación con Solución cromogénica, evite la exposición a la luz directa del sol sobre la microplaca.

5 B.1 Fase de Pretratamiento para tubos de microcentrifugado No extraiga los calibradores 1. Etiquete un tubo de microcentrífugado (para la extracción) y un tubo de polipropileno (para neutralización) para cada una de las muestras y control. 2. Dispense 100 ul de cada muestra y control en el tubo. 3. Añada 400 ul de solución de pretratamiento dentro de este tubo. 4. Cierre los tubos, agite e incúbelos 30 minutos a temperatura ambiente. 5. Centrifugue durante 2 minutos a rpm. 6. Tome 100 ul del sobrenadante y trasládelo al tubo de polipropileno etiquetado. 7. Añada 600 ul de solución de neutralización en el tubo. 8. Agite cada tubo en el vortex.. B2. Paso de Pretratamiento para otros tubos de polipropileno No extraiga los calibradores! 1. Etiquete dos tubos de polipropileno (uno para extracción y el otro para neutralización) para cada muestra y control. 2. Dispense 100 ul de cada muestra y control dentro del tubo de extracción. 3. Añada 400 ul de solución de pretratamiento en el tubo. 4. Cierre los tubos, agite e incube durante 30 minutos a temperatura ambiente. 5. Centrifugue durante 15 minutos a 3000 rpm. 6. Tome 100 ul del sobrenadante y transfiéralo en el tubo de polipropileno etiquetado. 7. Añada 600 ul de solución de neutralización en el tubo. 8. Agite cada tubo con vortex. Compuesto Reactividad cruzada (%) IGF I IGF II Insulina GH ND ND Nota: esta tabla presenta la reactividad cruzada para el anticuerpo IGF I C. Precisión Intra ensayo Inter ensayo Suero N <X> + SD CV (%) Suero N <X> + SD A C B D SD: Desviación estándar CV: Coeficiente de variación D. Exactitud PRUEBA DE RECUPERACIÓN CV (%) C. Procedimiento 1. Seleccione el número necesario de pozos para la prueba. Los pozos no utilizados deben ser resellados en la bolsa con un desecante y almacenados de 2 8 C. 2. Mantenga los pozos seguros dentro del marco de contención 3. Pipetee 50 ul de cada calibrador, el control extraído y la muestra extraída en el pocillo adecuado. 4. Vierta 100 ul de solución de conjugado IGF1 HRP en todos los pozos. 5. Incube durante 1 hora a temperatura ambiente 6. Aspire el líquido de cada pocillo. 7. Lave la placa 3 veces mediante: Dispensando de 0,4 ml de solución de lavado en cada pocillo Aspirando del contenido de cada pocillo 8. Pipetear 200 ul de solución Cromogénica en cada pocillo dentro de los 15 minutos después del paso de lavado, 9. Incube la microplaca durante 15 minutos a temperatura ambiente, en el agitador (500 rpm) evite la exposición a la luz directa del sol. 10. Vierta 100 ul de solución de detención en cada pocillo. 11. Lea las absorbancias a 450nm (filtro de referencia de 630 nm o 650 nm) dentro de 1 hora y calcule los resultados tal y como se describe en la sección XI. XI. CÁLCULO DE LOS RESULTADOS 1. Lea la placa a 450 nm frente a un filtro de referencia establecido a 650 nm (o 630 nm). 2. Calcule la media de las determinaciones por duplicado. 3. Realice el siguiente cálculo para cada calibrador, el control y la muestra: B/B0(%) = OD (Calibrador, control o muestra) x 100 OD (Calibrador cero) 4. Usando ya sea papel lineal o semilogarítmico, trace los valores B/B0(%) para cada punto de calibración en función de la concentración IGF1 de cada punto de calibración. Rechace valores anómalos evidentes. 5. También se pueden utilizar métodos asistidos por ordenador para la construcción de la curva de calibración. En caso de utilizar procesamiento automático de resultados, se recomienda una curva de función logística de 4parámetros. Mediante la interpolación de los valores B/B0(%) de la muestra, determine las concentraciones de IGF1 de las muestras de la curva de calibración. XII. DATOS TIPICOS Los siguientes datos tienen solamente fines ilustrativos y no deben ser usados en lugar de una curva real de calibración en tiempo real. Calibradores ng/ml Unidades OD S0 0 2,400 S1 10 1,987 S2 25 1,567 S3 62 1,333 S ,838 S ,501 XIII. RENDIMIENTO Y LIMITACIONES A. Limite de detección Se analizaron 16 calibradores cero junto con un grupo de otros calibradores. El limite de detección, definido como la concentración aparente dos desviaciones por debajo del promedio de OD en la unión cero, fue de 7.8 ng/ml. B. Especificidad Los porcentajes de reacción cruzada estimados mediante la comparación de la concentración producida con un 50% de inhibición se presentan en la siguiente tabla: Muestra IGF1 adicionado Esperado Medido Recuperación (%) Muestra IGF1 adicionado Esperado Medido Recuperación (%) PRUEBA DE DILUCIÓN Muestra A Muestra B Dil Esperado Medido Dil Esperado Medido 1/ / / / / / / / / / Las muestras fueron diluidas después de la extracción con calibrador cero Factor de conversión: De ng /ml a nmol /L: x 0.13 De nmol /L a ng /ml: x 7.65 E. Retardo de tiempo entre el calibrador anterior y el dispensado de la muestra Como se indica a continuación, los resultados de prueba siguen siendo precisos, incl cuando una muestra es dispensada 30 minutos después de añadir los calibradores a los pozos revestidos. Retardo en tiempo 0 minutos 30 minutos ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml

6 XIV. CONTROL DE CALIDAD INTERNO Si los resultados obtenidos para el Control 1 y/o Control 2 no se encuentran dentro del intervalo de valores especificado en la etiqueta del vial, los resultados no pueden ser utilizados a menos que se cuente con una explicación satisfactoria de la discrepancia. Si se desea, cada laboratorio puede realizar sus propios grupos de muestras de control, el cual debe mantenerse congelada en alícuota. Los controles que contienen azida pueden interferir con la reacción enzimática y no pueden ser usados. Los criterios de aceptación para la diferencia entre los resultados de muestras en duplicado deben basarse en las Buenas prácticas de laboratorio. Se recomienda que los controles sean analizados rutinariamente como muestras desconocidas con el fin de medir la variabilidad. Los resultados del ensayo deben ser revisados con tablas de control de la calidad. Es bueno comprobar visualmente el ajuste de la curva seleccionada por el computador. XV. INTERVALOS DE REFERENCIA Estos valores se dan sólo para orientación, cada laboratorio debe establecer su propio rango de valores. Males Females Age group (years) n Median Rango n Median Rango > Estos rangos con expresados como percentiles 2.5% a 97.5% XVII. BIBLIOGRAFÍA 1. DAUGHADAY W.H. and ROTWEIN P. (1989) Insulinlike growth factors I and II. peptide, messenger ribonucleic acid and gene structures, serum and tissue concentrations. Endocrine Rev., 10(1) : FROESCH E.R. and ZAPF J. (1985) Insulinlike growth factors and insulin : comparative aspects. Diabetologia, 28 : FURLANETTO R.W., UNDERWOOD L., VAN WYK J.J.., D ERCOLE A.J. (1977) Estimation of spmatomedinc levels in normals and patients with pituitary disease by radioimmunoassay. J. Clin. Invest. 60 : ROSENFELD R.G., WILSON D.M., LEE P.D.K. and HINTZ R.L. (1986) Insulinlike growth factors I and II in evaluation of growth retardation. J. Pediatr., 109 : RUDMAN D., KUTNER M.H. and CHAWLA R.K. (1985) The short child with subnormal plasma somatomedinc. Pediatric Res., 19(10) : ALBERTSSONWIKLAND K. and HALL K. (1987) Growth hormone treatment in short children : relationship between growth and serum insulinlike growth factor I and II levels. J. Clin. Endocrinol Metab., 65 : WASS J.A.H., CLEMMONS D.R., UNDERWOOD L.E., BARROW L., BESSER G.M. and VAN WYK J.J. (1982) Changes in circulating somatomedinc levels in bromocriptine treated acromegaly. Clin. Endocrinol., 17 : DAUGHADAY W.H., MARIZ I.K. and BLETHEN S.L. (1980) Inhibition of access of bound somatomedin to membrane receptor and immunobinding sites a comparison of radioreceptor and radioimmunoassay of somatomedin in native and acidethanol extracted serum. J. Clin. Endocrinol. Metab., 51 : 781. XVI. PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS Seguridad 9. BREIERB.H., GALLAHER B.W. and GLUCKMAN P.D. (1991) Radioimmunoassay for insulinlike growth factori : solutions to some potential problems and pitfalls. Journal of Endocrinology, 128 : SCHOUTEN J.S.A.G. and al. (1993) IGF1 : a prognostic factor of knee osteoarthritis. British J. Rheumatol., 32 : XVI. PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS Seguridad Grupo de edad Únicamente para de diagnostico in vitro. Los componentes de sangre humana incluidos en este kit han sido evaluados por métodos aprobados Europeos y/o aprobados por FDA y fueron encontrados como negativos para HBsAg, anti VHC, antivih1 y 2. Ningún método conocido puede ofrecer una completa seguridad de que los derivados de sangre humana no transmitan hepatitis, sida u otras infecciones. Por lo tanto, la manipulación de los reactivos, suero o plasma especímenes deben estar de acuerdo con los procedimientos de seguridad local. Todos los productos de origen animal y sus derivados han sido recolectado de animales sanos. Los componentes bovinos proceden de países donde no se ha reportado la presencia de BSE. Sin embargo, los componentes que contienen sustancias animales deben ser tratados como potencialmente contagiosos. Evite cualquier contacto de reactivos con la piel. La solución de detención contiene HCl. En caso de contacto con ésta, lave con abundante agua. No fume, beba, coma o aplique cosméticos en la zona de análisis. No pipetear con la boca. Utilice ropa de protección y guantes desechables. 11. GRONBAEK H., SKJAERBAEK C., NIELSEN B., FRYSTYK J., FOEGH M.L., FLYVBJERG A., ORSKOV H. (1995) Growth hormone and insulinlike growth factori: a suggested role in renal transplantation and graft vessel disease. Transplant. Proceed., 27/3 : TSITOURAS P.D., ZHONG Y.G., SPUNGEN A.M., BAUMAN W.A. (1995) Serum testosterone and growth hormone insulinlike growth factori in adults with spinal cord injury. Hormone and metabolic Research, 27/6 : KOCH A., DORR H.G., GERLING S., BEHRENS R., BOHLES H.J. (1995) Effect of growth hormone on IDFI levels in patients with growth hormone deficiency and Wilson disease. Hormone Research, 44/1 : 4044.

7 XVIII. RESUMEN DEL PROTOCOLO CALIBRADORES µl MUESTRA(S) CONTROL µl PRETRATAMIENTO Muestras, controles Solución de pretratamiento Incubación Centrifugación minutos a Temperatura ambiente 2 minutos a rpm (tubos de microcentrifugado) o 15 minutos a > o = 3000 rpm (tubos de polipropileno) Sobrenadante Solución de neutralización Agitado INCUBACIÓN Calibradores (0 a 5) Muestras, controles pretratados, Conjugado diluido Vortex Incubar durante 1 hora a temperatura ambiente, Aspire los contenidos de cada pozo. Lave 3 veces con 400 ul de Solución de Lavado y luego aspire. Solución Cromogénica Incube durante 30 minutos a temperatura ambiente Solución de detención Realice la lectura en un lector de microplacas y registre la absorbancia de cada pocillo a 450 nm (contra 630 o 650 nm) DIAsource Catalogo No. KAP1581 Numero P.I.: / español Número de revisión: /1 Fecha de revisión:

8 P.I. Number : Revisión nr Símbolos utilizados Consultar las instrucciones de Limitación de temperatura Fecha de caducidad Código de lote Número de catálogo Control Producto sanitario para diagnóstico in vitro Fabricante Contenido suficiente para <n> ensayos WASH SOLN CONC Solución de lavado concentrada CAL 0 Calibrador cero CAL N CONTROL N Ag 125I Ab 125I Ag 125I Ab 125I CONC CONC Calibrador # Control # Trazador Trazador Trazador concentrada Trazador concentrada Tubos INC BUF ACETONITRILE SERUM DIL SPE DIL BUF ANTISERUM IMMUNOADSORBENT DIL CAL REC SOLN PEG EXTR SOLN ELU SOLN GEL Tampón de incubación Acetonitrilo Suero Diluyente de Muestra Tampón de dilución Antisuero Inmunoadsorbente Diluyente de calibrador Solución de Reconstitución Glicol Polietileno Solución de extracción Solución de elución Cartuchos Bond Elut Silica PRE SOLN Solución de Pretratamiento NEUTR SOLN Solución de Neutralización TRACEUR BUF Ab HRP Ag HRP Ab HRP CONC Ag HRP CONC CONJ BUF CHROM TMB CONC CHROM TMB SUB BUF STOP SOLN INC SER BUF Ab AP SUB PNPP BIOT CONJ CONC AVID HRP CONC ASS BUF Ab BIOT Ab SAV HRP CONC NSB 2nd Ab ACID BUF Tampón de trazador Placa de microvaloración HRP Conjugado HRP Conjugado HRP Conjugado concentrada HRP Conjugado concentrada Tampón de Conjugado Cromógena TMB concentrada Solución Cromógena TMB Tampón de sustrato Solución de Parada Suero de Incubación Tampón AP Conjugado Sustrato PNPP Concentrado de conjugado de biotina Concentrado avidinahrp Tampón de ensayo Conjugado de biotina Anticuerpo específico EstreptavidinaHRP Concentrado Unión no específica Segundo anticuerpo Tampón de Acidificación

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