BÚSQUEDA, AISLAMIENTO, REPRODUCCIÓN Y EVALUACIÓN DE HONGOS ENTOMOPATÓGENOS DE LA PLAGA DE GALLINA CIEGA, EN LA ZONA CENTRAL DE EL SALVADOR

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1 BÚSQUEDA, AISLAMIENTO, REPRODUCCIÓN Y EVALUACIÓN DE HONGOS ENTOMOPATÓGENOS DE LA PLAGA DE GALLINA CIEGA, EN LA ZONA CENTRAL DE EL SALVADOR AVANCE DE RESULTADOS DE MAYO A OCTUBRE DE 2003 GRUPO CENTRO PROMIPAC-EL SALVADOR (CENTA, UTLA, INFRAMS, ENA, FCCAA/UES) 1 L. Serrano Cervantes 2 IMPORTANCIA DEL ESTUDIO: L a gallina ciega, representa a un complejo de especies de insectos de la familia Scarabaeidae del orden Coleoptera, cuyo mayor impacto económico al dañar el sistema radicular de plantas cultivadas se presenta en el ecosistema del suelo, donde habitan las larvas, muchas veces en compañía de un complejo de enemigos naturales con su propia ecología, no entendida ni estudiada suficientemente en El Salvador. Sus daños suelen constituirse en una posible causa de reducción de crecimiento y rendimiento de los cultivos; así como en una posible causa de incremento de costos de producción por incremento en consumo de insecticidas. En la actualidad hay interés y demanda de alternativas de manejo racional y sostenible del problema, y dentro de ellas, el control biológico nativo es una de las opciones que necesita estudio para su aprovechamiento racional. El área de acción del Grupo Regional Centro PROMIPAC,y en la cual se realizó el trabajo de campo (fig. 1), involucra esencialmente a los Deptos. San Salvador, La Libertad, La Paz, Cuscatlan y Chalatenango ; áreas del país en donde el presente estudio está buscando la presencia de enemigos naturales de esta plaga, especialmente hongos entomopatógenos, como uno de los agentes nativos de biocontrol que se pretenden aislar, reproducir in vitro, identificar y evaluar sus características patogénicas. El desarrollo del proyecto hasta la fecha, representa una valiosa experiencia de trabajo cooperativo interinstitucional y es también en alguna forma interdisciplinario, representando en la práctica, con sus primeros logros, un estudio de hongos entomopatógenos de gallina ciega, y otros enemigos naturales, en la zona central de El Salvador, lo cual ha sido posible con la combinación de fortalezas y habilidades de las instituciones miembros del Grupo Centro, y el apoyo financiero de PROMIPAC, impulsado por fondos de la Agencia Suiza para el desarrollo. COSUDE, administrados en El Salvador y Nicaragua, a través de la Escuela Agrícola Panamericana El Zamorano, en Honduras. El objetivo general de este proyecto, fue planteado originalmente así: EVALUAR HONGOS ENTOMOPATÓGENOS SOBRE Phyllophaga spp (COLEOPTERA: SCARABAEIDAE), EN CONDICIONES DE INVERNADERO ; para lo cual se consideró la siguiente secuencia de objetivos específicos (en los cuales incluso se plantea la posibilidad de regresar a parcelas de campo para hacer algunas aplicaciones, al menos en pequeña escala, de hongos multiplicados en laboratorio): 1- Buscar hongos entomopatógenos en larvas de la familia Scarabaeidae, en campo. 2- Aislar diferentes hongos entomopatógenos encontrados en el campo. 3- Evaluar virulencia en condiciones de invernadero, de los hongos entomopatógenos encontrados sobre Phyllophaga spp. 4- Evaluar la eficacia de dos métodos de aplicación de hongos entomopatógenos en larvas de Phyllophaga. 1 PROMIPAC: Programa de Manejo Integrado de Plagas en América Central; CENTA: Centro nacional de Tecnología Agropecuaria y Forestal; UTLA: Universidad técnica latinoamericana; INFRAMS: Instituto nacional Francisco Martínez Suárez; ENA: Escuela Nacional de Agricultura; FCCAA/UES: Facultad de Ciencias Agronómicas, Universidad de El Salvador. 2 Docente del Depto. Protección Vegetal, Facultad Ciencias Agronómicas, Universidad de El Salvador

2 METODOLOGÍA: El estudio ha seguido los siguientes pasos: 1- Planificación, planteamiento y promoción del proyecto. (Abril-mayo 2003) 2- Discusión de criterios compartidos en la toma y manejo de muestras biológicas. 3- Colecta de material biológico de gallina ciega y enemigos naturales asociados. (Julio 2003) 4- Confinamiento y mantenimiento de material biológico recolectado en campo. (Julio a la fecha) 5- Cultivo y aislamiento de colonias de entomopatógenos, y cría de otros enemigos naturales, así como de adultos correspondientes a las gallinas ciegas de las colectas. (Julio a la fecha) 6- Preservación de especimenes y toma de microfotografías. (Julio a la fecha) 7- Ordenamiento de la información generada. (Septiembre 2003) Para la operación de estas fases, se utilizaron: palines, bolsas plásticas, baldes plásticos, botes plásticos, bandejas de aluminio, de plástico y de durapax, zanahorias, vehículos y combustible estanterías para confinamiento microscopios este reoscópicos y compuestos, cámaras fotográficas, cajas petri, medios de cultivo, medios de montaje para preparaciones microscópicas, alcohol etílico, agua, instrumental de laboratorio (pinzas, lupas, navajas, pinceles, laminillas porta y cubreobjetos), empleo de un formulario de registro de información local de lo sitios de búsqueda y colecta, diseñado ad-hoc así como el acceso a computadora. Las recolectas se hicieron durante el mes de julio de 2003, llevando al laboratorio, muestras de suelo infestado con larvas del tipo de gallina ciega, para su respectivo confinamiento y observación durante un período de más de 4 meses a la fecha; siendo alimentadas las larvas con rodajas de zanahoria colocadas dentro del suelo confinado asociado a las larvas, renovándolo cada 15 ó 20 días. De la diversidad de enemigos naturales de gallina ciega, encontrada, se hicieron preparaciones microscópicas y preservación o montajes apropiados de algunos, tomando algunas fotografías relevantes. De las larvas que no resultaron enfermas por ninguna causa, se recuperaron adultos que fueron sujeto de observación a fin de determinar en lo posible géneros y especies correspondientes. RESULTADOS PRINCIPALES: Se encontraron varios casos de larvas con apariencia corporal (color y forma) anormal y a veces con signos de presencia de algún crecimiento o fructificación fungosa. Material sospechoso fue manejado en laboratorio, con técnicas microbiológicas, a fin de aislar en medios de cultivo apropiados, los organismos entomopatógenos o en general entomófagos involucrados; los cuales no siempre fueron hongos, sino a veces bacterias, nemátodos endoparasíticos (Familia Rhabditidae Det. R. F. Guzmán de Serrano. Lab. Parasitología Vegetal CENTA), y en algunos casos se hallaron ectoparásitos del orden Díptera (Familia Asilidae, Género Mallophora Det. Rafaél Menjivar Rosa, D.P.V./F.CC.AA./UES). Los hongos se hallaron afectando a larvas de tamaño mediano a grande y a pupas. Las bacterias y nemátodos se hallaron en larvas medianas y grandes; aunque se hallaron algunos casos de afección bacteriana en adultos de la especie Euphoria yucateca. Los ectoparásitos de la Familia Asilidae, afectaron a larvas medianas. Los adultos que se recuperaron, se agrupan en los géneros Anomala, Cyclocephala, Euphoria, Phileurus y Tomarus (Bothynus = Lygirus); sin haberse encontrado ninguna evidencia por vía de adultos, y hasta ahora, de la ocurrencia del género Phyllophaga, probablemente debido entre otras causas a la época de colecta (mes de julio 2003, a las localidades y al número relativamente reducido de material colectado y confinado) La presencia de diferentes géneros de gallina ciega, en algunas localidades de recolecta, con base en los adultos, se resume en el Cuadro 1; así como también la presencia de la diversidad de enemigos naturales de gallina ciega, en diferentes condiciones de parcela de

3 colecta (Cuadros 2.1, y 2.2). Los resultados se pueden detallar así: 1. Se tiene información de colectas en este estudio, procedente de 105 sitios de colectas, dentro de la comprensión de 17 municipio: San Luis Talpa, San Pedro Masahuat, Olocuilta, San Martín, Quezaltepeque, Suchitoto, Apopa, San Juan Opico, San Pablo Tacachico, El Paisnal, San Pedro Perulapán, Nueva, La palma, San Ignacio, Colón, Ciudad Arce, El Congo; ubicados en 6 Deptos: La Libertad, San Salvador, La Paz, Chalatenango, Cuscatlán, y Santa Ana 2. Para finales de septiembre de 2003, en ninguna de estas colectas habían aparecido todavía, adultos del género Phyllophaga 3. El rango altitudinal aproximado de donde proceden las colectas fue desde 40m.s.n.m. (Depto de la Paz) hasta los 1950m.sn.m. (Depto Chalatenango). 4. Los cultivos actuales asociados a las muestras colectadas fueron en su mayoría maíz, y en muchos casos ese había sido también el cultivo anterior. Pocas muestras representan hortalizas, específicamente 5. De las recolectas, se detectaron 8 casos de presencia de hongos entomopatógenos, que representan una proporción de 8/105 = 7.6%.de las colectas. 6. Las localidades positivas para la presencia de hongos entomopatógenos de gallina ciega son: Ctn. La Flor, de San Martín; Ctn, Nueva Encarnación, de Ciudad Arce; Ctns. Santa Rosa y Gavilán, de Nueva ; Ctn. Las Pilas, de San Ignacio; Ctn Haciendita, de Suchitoto; Ctn Tecualhuya, de San Luis Talpa; Ctn. Las Flores (Astoria), de San Pedro Masahuat. 7. Se encontraron casos de infección bacteriana en 7 muestras de gallina ciega (representando el 6.6 % del total de colectas), que procedían de las localidades de: Ctn. La Joya, de Ciudasd Arce; Ctn. Santa Rosa, de Nueva concepción; Cantón Las Granadillas de La Palma; Ctn. Tecualhuya, de san Luis Talpa; Ctns. El Tránsito II y Malacoff, de Tonacatepeque; Ctn Las Flores (Astoria), de San Pedro Masahuat. 8. Se encontraron 2 casos de infección por nemátodos (lo que significa un 1.8 % del total de colectas) en muestras de gallina ciega, procedentes de las localidades de: Ctn. Las Flores (Astoria), de San Pedro Masahuat; Ctn. El Centro, de San Ignacio. Experimentalmente pudo comprobarse en laboratorio, la capacidad de infestación de los nemátodos sobre larvas sanas. 9. Se encontraron dos casos de invertebrados ectoparasitoides de larvas gallina ciega ; uno de los cuales (*) se crió en laboratorio hasta adulto (Diptera: Asilidae: Mallophora sp.), en colectas de municipios de: San Pedro Masahuat (Cooperativa Astoria), Depto La Paz; y Nueva (*), Depto Chalatenango 10. Se detectó una bacteria entomopatógena infectando adultos de Euphoria yucateca, procedente de la localidad de Ctn. Entre Ríos, de Colón. 11. Actualmente se mantienen en laboratorio, 14 cultivos de hongos entomopatógenos, aislados de muestras de gallina ciega, de los municipios de de: Nueva (5), San Luis Talpa(2), Ciudad Arce(4), San Pedro Masahuat (1), San Ignacio(1), San Martín(1). Además se mantiene una colonia de bacterias entomopatógenas, procedente del municipio de Ciudad Arce. 12. Se considera que los hongos entomopatógenos antes mencionados, representan al menos unas 4 especies, las cuales aún no están claramente identificadas. 13. La presencia de hongos entomopatógenos de gallina ciega, se recolectó frecuentemente en parcelas asociadas en el momento o inmediatamente antes, con maíz, en la mayoría de casos.

4 Fig. 1: Ubicación aproximada de las localidades principales de colecta de material biológico de gallina ciega, para búsqueda de hongos entomopatógenos en el salvador (Julio GRC-PROMIPAC EL SALVADOR). Simbología: Localidades de muestreo Cuadro 1: Ocurrencia de diferentes géneros de gallina ciega (Coleoptera: scarabaeidae) en la zona central de el salvador; colectadas en julio Referencia Localidad (Cantón y Municipio) Anomala Cyclocephala Euphoria Phileurus Tomarus San Antonio Abad, de Ciudad Arce Muestra C Benedicto Morataya J. Eulalio Amaya Entre Ríos, de Colón La Nueva Encarnación, de San Juan Opico F Haciendita, de Suchitoto POR-1/EEP Tecualhuya, de San Luis Talpa /112/13 Belén, de San Juan Opico La Flor, de San Martín B La Joya, de Ciudad Arce 35/3 Gavilán, de Nueva Muestra 10, de Atiocoyo San Isidro, de San Pablo Tacachico 35/6 Gavilán, de Nueva Arenal Zapotitán, de El Congo

5 Jayuca, de Olocuilta 35/7 Santa Rosa, de Nueva Arenal Zapotitán, de El Congo /15/10 Arenal Zapotitán, de El Congo Arenal Zapotitán, de El Congo 35/5 Gavilán, de Nueva San Isidro, de San Pablo Tacachico 35/2 Gavilán, de Nueva 35/4 Gavilán, de Nueva Santos Henríquez Méndez Agua Escondida, de San Juan Opico Cuadro 2.1: Ocurrencia de enemigos naturales de larvas de gallina ciega, en diferentes localidades de colecta en la zona central de El Salvador, en julio (GRC PROMIPAC-EL SALVADOR) (Parte primera). ACTUAL ANTERIOR Hongo Entomop, Bacteria Entomop Nematodo Endopar. MOSCA ECTOPAR. VIRUS?, Ó PROTOZOO? REFERENCIA DE MUESTRA LOCALIDAD (CTN, MPIO) Bosque Pasto de Corte Maíz Maíz F Maíz Maíz D Maíz Sandía 35/1 Pasto Maíz 35/4 Maíz Maíz 35/5 Pasto Pasto 35/7 Maíz Repollo, Baldío Col.43 M.A. Fuentes Maíz Maicillo La Flor, San Martín La Joya, Ciudad Arce La Joya Ciudad Arce Santa Rosa, Nueva Santa Rosa, Nueva Las Pilas, San Ignacio La Haciendita, Suchitoto Pasto Pasto Maíz? Potrero 13, EEP, FCCAA Astoria, Salomón Tobar Tecualhuya.San Luis Talpa Las Flores, San Pedro Masahuath Tomate Pepino F Nueva Encarnacion San Juan Opico

6 Cuadro 2.2: Ocurrencia de enemigos naturales de larvas gallina ciega, en diferentes localidades de colecta en la zona central de El Salvador, en julio (GRC PROMIPAC-EL SALVADOR) (Parte segunda). ACTUAL ANTERIOR HONGO ENTOMOP. BACTERIA NEMATODO ENTOMOP. ENDOPAR. MOSCA ECTOPAR. VIRUS?, Ó PROTOZOO? REFERENCIA DE MUESTRA Pipián Maíz E Papayo Maíz 35/2 Loroco Maíz 35/6 Maíz Brócoli Col.42 H.O. Vásquez Maíz Frijol Veg. Arvense Maíz LOCALIDAD (Ctn, Mpio) la Joya Ciudad Arce La Granadilla, La Palma El Tránsito II, Tonacatepeque Malacoff, Tonacatepeque Pastos Pasto Potrero 13, EEP, FCCAA Tecualhuya.San Luis Talpa Bosque Bosque Maíz Veg. Arvense Astoria, Lote La Montaña B Maiz Maiz 35/5 Pasto Papa Col.43 M.A. Fuentes Las Flores, San Pedro Masahuath Veracruz, Ciudad arce El Centro, San Ignacio