CAPÍTULO PRURIGO LUMBAR RESUMEN

Transcripción

1 CAPÍTULO PRURIGO LUMBAR RESUMEN El prurigo lumbar es una enfermedad infecciosa neurodegenerativa que ocurre de forma natural en ovejas y cabras, y se caracteriza por cambios vacuolares o esponjosos del sistema nervioso central (SNC). Se ha reconocido como un trastorno clínico desde hace aproximadamente dos siglos y medio. Mucho más tarde se definió como una encefalopatía espongiforme transmisible (EET) y como una enfermedad causada por priones. Las EET, o enfermedades producidas por priones, se definen por la acumulación de una forma anormal de la glicoproteína de la membrana de un hospedador (proteína del prión o PrP) en ciertos tejidos, sobre todo del sistema nervioso central y de los órganos linforreticulares. Esta isoforma anormal se denomina PrP Sc, la cual, de acuerdo con la hipótesis del prión, es un componente, quizás la única molécula, del agente causal. Los polimorfismos de la región codificadora de proteína del gen PrP de las ovejas están asociados con la ocurrencia del prurigo lumbar clásico en varias razas de ovejas. Se ha utilizado la genotipificación del PrP como una herramienta para el control del prurigo lumbar clásico, pero ningun genotipo parece ser completamente resistente a la infección. Se ha informado sobre una variante recientemente detectada llamada prurigo lumbar atípico en ovejas con genotipos de PrP que, según parece, son resistentes al prurigo lumbar clásico. Algunas poseen un polimorfismo en el codón 141 del gen PrP. El prurigo lumbar clásico es endémico en muchas partes del mundo, donde ha sido introducido generalmente por la importación. Australia y Nueva Zelanda se han mantenido libres de la enfermedad debido a la limitación estricta de las importanciones y ar otras medidas. La infección en el ganado ovino puede transmitirse de la oveja al cordero en el periodo que transcurre desde el parto hasta el destete. La infección también puede transmitirse horizontalmente a las ovejas o las cabras no emparentadas, particularmente cuando el parto tiene lugar en áreas reducidas. Se sabe que las membranas fetales constituyen una fuente de infección. El periodo de incubación entre la infección primaria y la enfermedad clínica es casi siempre superior a un año, y a veces puede exceder el periodo de vida comercial de las ovejas. La mayoría de los casos tienen lugar en las ovejas de entre 2 y 5 años de edad. La enfermedad clínica solamente se desarrolla si la infección penetra en el SNC. Identificación del agente: La enfermedad se reconoce por los síntomas clínicos, los cuales comienzan de manera insidiosa con anomalías en el comportamiento. Inicialmente pueden no ser reconocidos, pero generalmente progresan hasta la aparición de signos neurológicos más obvios, incluyendo el prurito y la descoordinación de movimientos. También es frecuente la pérdida de la salud. El trastorno clínico varía en su duración y en la variedad de signos presentes, aunque es inevitablemente fatal. El diagnóstico clínico se apoya en la inmunodetección de acumulaciones específicas de la proteína de prión en el cerebro o en los tejidos linforeticulares, o mediante el diagnóstico histopatológico de la encefalopatía espongiforme, o por la detección de las fibrillas asociada al prurigo lumbar, mediante la microscopía electrónica. La patología cerebral se caracteriza por la vacuolización neuronal bilateral generalmente simétrica, y por el cambio espongiforme de la sustancia gris, que, en el prurigo lumbar clásico, se da principalmente en el tronco cerebral y, en el prurigo lumbar atípico, puede predominar en el cerebelo. La detección de PrP Sc en las secciones de tejidos o en extractos de cerebros enfermos es un criterio de diagnóstico específico de la enfermedad. Se puede emplear la inumnohistoquímica para detectar acumulaciones anormales de PrP en secciones histológicas rutinarias preparadas a partir de cerebro y de tejido linforeticular. PrP res, una forma parcialmente truncada de proteasa resistente de la proteína del prión, puede detectarse Manual de la OIE sobre animales terrestres

2 en material del cerebro no fijado mediante extracción de detergente, digestión enzimática, electroforesis e inmunotransferencia. La detección inmunoquímica automática de la proteína en muestras de cerebro constituye la base de las pruebas rápidas utiizadas en los programas de vigilancia activa. La detección de PrP Sc en los tejidos linforreticulares durante el periodo de incubación en algunos animales proporciona un medio para el diagnóstico preclínico de la infección por prurigo lumbar, y puede ser particularmente útil con fines de vigilancia cuando se realiza en tejidos de biopsias. Las formas atípicas del prurigo lumbar, identificadas en su mayoría mediante la vigilancia activa, se describen parcialmente con fines de diagnóstico, pero siguen siendo objeto de ulteriores investigaciones. La mayoría de las formas de prurigo lumbar actualmente reconocidas pueden transmitirse a los roedores de laboratorio inyectándoles tejido de cerebro infectado, aunque la eficiencia variable de la transmisión, junto con largos periodos de incubación, lo excluyen como un procedimiento de diagnóstico práctico. Pruebas serológicas: No se sabe si la infección por prurigo lumbar provoca una respuesta inmune específica, y no existe una base para establecer un diagnóstico mediante la detección de anticuerpos específicos. Requisitos para la vacunas y el material de diagnóstico: No existen productos biológicos disponibles. A. INTRODUCCIÓN El prurigo lumbar es una enfermedad infecciosa neurodegenerativa progresiva y fatal que se pesenta de forma natural en ovejas y cabras, que ha sido reconocida como una entidad clínica que ha afectado a las poblaciones de ovejas de países de Europa Occidental durante al menos los últimos dos siglos y medio. La definición histológica de las lesiones del sistema nervioso central (SNC) se obtuvo a finales del siglo XIX, y la transmisión experimental se llevó a cabo en los años 30, pero sólo a finales del siglo XX comenzó a usarse de forma génerica el término encefalopatía espongiforme transmisible (EET) para describir el prurigo lumbar y a otras enfermedades relacionadas en humanos y en animales. Tras el descubrimiento de la proteína del prión en los años 80, estas enfermedades son ahora conocidas como enfermedades producidas por priones (véase el capítulo Encefalopatía espongiforme bovina [EEB]). La aparición del prurigo lumbar precede al reconocimiento de otras enfermedades producidas por priones propias de los mamímeros, de forma que, retrospectivamente, el prurigo es el arquetipo de los trastornos por priones (18). Estas enfermedades se definen por la presencia de un isoformo anormal de la proteína de membrana codificada por el hospedador (PrP c ), denominada PrP Sc, que se acumula en el SNC y en el sistema linforeticular (SLR) y, algunas veces, también en otros tejidos. Según la hipótesis del prión, se sostiene que la proteína alterada es el principal componente o la única molécula del agente etiológico. Se sugiere que diferentes cepas del agente proceden de diferentes formas de configuración de la proteína. En el pasado se han sugerido hipótesis alternativas sobre la estructura del agente tales como virus lento, virus no convencional, o el virión, requiriendo todos ellos la existencia de un genoma de ácido nucleico (que no ha sido identificado) (18). Desde hace mucho tiempo se sabe que en las EET, como en otras enfermedades, la interacción entre las variables relativas al agente (particularmente la cepa) y las variables del hospedador (particularmente la secuencia del gen PrP y la presencia o ausencia de ciertos alelos del gen PrP dentro de las razas) determina el fenotipo de la enfermedad. En las ovejas, diferentes alelos del gen (genotipos de PrP) se asocian con la sensibilidad a las EET (17). El gen PrP de las ovejas es muy polimórfico. Se han identificado polimorfirmos comunes dentro de la región codificada de la proteína del gen PrP de las ovejas en los codones 136, 154 y 171. La incidencia del prurigo lumbar en varias razas ovinas se ha asociado con alguno de estos polimorfismos. Los polimorfismos del codón 171 tienen una particular importancia en la determinación del riesgo global. La detección y caracterización de las diferentes cepas de los aislamientos del prurigo lumbar se han basado históricamente en la transmisión a roedores, principalmente a los ratones endogámicos (de tipo silvestre). Unas 20 o más cepas de prurigo lumbar en ratones, que han sido derivadas de aislamientos de casos de prurigo lumbar naturales, han sido descritas fenotípicamente en ratones sobre la base de los datos relativos al período de incubación y a los perfiles de lesiones cerebrales en áreas seleccionadas de sustancia blanca y gris (tipificación biológica de cepas) (6). Mientras que la reproducibilidad y la estabilidad del fenotipo de la enfermedad producido en la transmisión en serie de un aislamiento en ratones ha proporcionado las bases de tal tipificación, las cepas de prurigo lumbar de los ratones obtenidas no representan necesariamente las cepas del prurigo lumbar ovino original (véase el capítulo EEB) y no está muy claro cuántas cepas diferentes 2 Manual de la OIE sobre animales terrestres 2008

3 pueden presentarse en las ovejas. Dado que muchos aislamientos de prurigo lumbar naturales no se transmiten a los ratones silvestres, la caracterización de la cepa por este método tiene limitaciones. El uso de ratones transgénicos, que expresan el gen PrP del hospedador natural en lugar del gen PrP del ratón amplía el ámbito de acción para la tipificación biológica, pero aún no se cuenta con una cantidad de datos tan grande como la acumulada en los estudios en ratones silvestres. Los métodos moleculares de tipificación de las fuentes de EET se basan en las propiedades bioquímicas de la PrP Sc, por ejemplo, mediante el uso de la inmunohistoquímica o la inmunotransferencia. Se han utilizado patrones inmunohistoquímicos de acumulación de PrP Sc en el cerebro para diferenciar entre la enfermedad causada por los agentes de prurigo lumbar y la causada experimentalmente por el agente causal de la EEB (19). Se requieren muchos más datos sobre las correlaciones de los resultados de diferentes tipos de métodos de tipificación para lograr una mejor caracterización de la cepa del prurigo lumbar. Es de especial importancia la habilidad para distinguir entre las cepas del agente del prurigo lumbar y las cepas del agente de la EEB (clásica) en pequeños rumiantes debido a la naturaleza zoonósica de estos últimos y su posible exposición en el pasado al agente de origen alimentario y debido a la congruencia clínica entre la EEB experimental y le prurigo lumbar de los pequeños rumiantes y al único informe confirmado de la aparición de la EEB en una cabra en Francia (9). Sin embargo, no se ha descrito el aislamiento del agente de la EEB a partir de una EET de una oveja, y los datos epidemiológicos indicarían que, si está presente, lo está con una prevalencia que es indetectable por medio de los actuales programas de vigilancia. La introducción de vigilancia activa para los trastornos producidos por priones en pequeños rumiantes en la Unión Europea (UE) en 2002, con el uso de métodos inmunoquímicos rápidos aprobados previamente para la vigilancia de la EEB en el ganado vacuno, ha proporcionado pruebas sobre los patrones de distribución de PrP Sc en ovejas y cabras sanas sacrificadas para el consumo humano y en las existencias destruidas, que no fueron detectadas previamente por los enfoques de muestreo tradicionales o utilizando los criterios del diagnóstico del prurigo lumbar. Tales casos, conocidos coloquialmente como prurigo lumbar atípico, tienen rasgos en común con el fenotipo del prurigo lumbar denominado Nor98 y ocurrieron antes de 2002 (12). El prurigo lumbar atípico se ha identificado en ovejas resistentes al prurigo lumbar clásico, incluso en ovejas con polimorfismos en los codones 141, 154 o 171 del gen PrP, y en una cabra (22). El prurigo lumbar es endémico en muchos países europeos y también se ha informado de su aparición en Asia, África y Norteamérica. Debido a la inadecuación de la vigilancia (pasiva) básica y a la ausencia de los componentes de vigilancia activa, se desconoce el verdadero estado del prurigo lumbar en muchos países. Algunos de los que contaban con vigilancia general y/o focalizada nunca han registrado la enfermedad, mientras que otros se han mantenido libres de la enfermedad durante varios períodos merced a políticas rigurosas de prevención y vigilancia. Hay que resaltar que el prurigo lumbar se ha considerado ausente de Australia y Nueva Zelanda por más de 50 años (31). Dentro de la UE, desde enero de 1993, y ahora en muchos otros países, el prurigo lumbar es una enfermedad cuya notificación es obligatoria. Generalmente se presenta en ovejas de entre 2 y 5 años de edad (17). Raramente aparecen casos en ovejas de menos de un año de edad. Se ha informado de un número significativo de casos de prurigo lumbar atípico en ovejas de más de 5 años de edad. En algunos casos, la vida útil para el comercio de las ovejas puede ser muy corta o la exposición puede ocurrir en fases demasiado tardías de su vida como para permitir el desarrollo de la enfermedad clínica. También se ha descrito el prurigo lumbar en cabras y en muflones cautivos (Ovis musimon), una especie primitiva de oveja. La mayor parte de las razas de ovejas están afectadas, aunque algunas de ellas están dotadas de una resistencia claramente genética o se da una baja prevalencia de la enfermedad clínica. Los registros de los rebaños indican que en las ovejas la enfermedad tiende a estar asociada a ciertas líneas familiares. La infección de las ovejas puede transmitirse de ovejas a corderos en el período comprendido entre el parto y el destete. La infección también puede transmitirse de forma horizontal a ovejas y cabras sin conexión mutua, especialmente cuando el parto ocurre en áreas confinadas. Se sabe que las membranas fetales son una fuente de infección, pero también pueden representar un riesgo el pasto previamente pacido por ovejas infectadas o las instalaciones ganaderas ocupadas previamente por ellas. Los animales que están incubando la enfermedad, e incluso los que nunca desarrollan signos clínicos, también pueden ser un foco de infección para otros. El bioriesgo para los humanos, derivado de la realización de pruebas de diagnóstico del prurigo lumbar, parece ser limitado, pero deben tomarse las precauciones adecuadas. La larga existencia histórica de prurigo lumbar natural en ovejas domésticas y el hecho de que muchas investigaciones no hayan demostrado ninguna conexión epidemiológica entre el prurigo lumbar y las EET humanas, proporcionan una indicación sólida de que los riesgos para aquellos que trabajan con el agente son insignificantes (5). Más concretamente, se ha encontrado que la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ) no afecta con mayor frecuencia a aquellas personas cuyas ocupaciones implican un contacto más cercano con el agente que a otros grupos de población. Sin embargo, la extrema resistencia química y física del agente del prurigo lumbar y el hecho de que sea transmisible experimentalmente mediante inyección en un amplio espectro de especies de mamíferos, aconsejan prudencia para prevenir la exposición de los humanos a la misma. El agente de la encefalopatía espongiforme bovina (EEB) y los agentes relacionados se encuentran actualmente clasificados con respecto a sus bioriesgos junto con las EET (1), debido a la relación establecida actualmente entre la EEB y la variante de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ). La EEB y los agentes relacionados se categorizan ahora con respecto al nivel de bioriesgo designado para trabajar con los agentes de la EET humana (véase el capítulo EEB). Aunque el prurigo lumbar natural se encuentra excluido de esta clasificación, cuando se manejen en el laboratorio tejidos a partir de los casos naturales de Manual de la OIE sobre animales terrestres

4 prurigo lumbar se recomienda la adopción de medidas de contención similares a aquellas utilizadas para otros agentes de EET. Esto es particularmente relevante en aquellos países que han experimentado casos de EEB en su cabaña ganadera. Como las ovejas pueden haberse encontrado expuestas a los mismos piensos contaminados que se consideran como la fuente de infección en el ganado vacuno, aquellos que trabajen directamente con tejidos infectados deberían llevar equipo de protección personal y ropas apropiadas y seguir los procedimientos estándar de descontaminación para los agentes de la encefalopatía espongiforme (véase el capítulo EEB). Esta aproximación asegura que los intentos por caracterizar el agente del prurigo lumbar no se encuentran comprometidos por la contaminación cruzada. Cualquier tejido contaminado o el equipo de un solo uso deben desecharse de forma reglamentaria y segura y el equipo reutilizable debe lavarse y descontaminarse utilizando los procedimientos efectivos autorizados. Tales métodos también garantizan que el agente del prurigo lumbar no se vea afectado por la contaminación cruzada. La racionalidad de tales medidas de precaución se justifica por la aparición del prurigo lumbar atípico, que se ha transmitido de forma experimental a ovejas y a ratones transgénicos sobre-expresando el gen PrP ovino (23), pero cuyo riesgo de transmisión natural o cuya patogenicidad potencial para los humanos se desconoce. B. TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO 1. Diagnóstico preventivo basado en los signos clínicos Los signos clásicos del prurigo lumbar (26) generalmente empiezan subrepticiamente, a menudo con cambios de comportamiento que sólo son evidentes después de reiteradas inspecciones. Estos rasgos de apariencia sutil, que pueden conllevar una confusión aparente, la separación del rebaño y una mirada fija evolucionan hacia una enfermedad neurológica más definida, frecuentemente caracterizada por signos de prurito y ataxia o falta de coordinación en el andar. El prurito o la ataxia destacan durante el curso clínico de la enfermedad. La muerte puede occurrir después de un período prolongado de signos neurológicos vagos, pero también puede ocurrir sin que previamente se hayan observado signos premonitorios. La variedad de nombres que se han utilizado en diferentes lenguas para describir el prurigo lumbar, por ejemplo, la tremblante (tembladera), Traberkrankheit (enfermedad del trote), o Gnubberkrankheit (enfermedad del mordisco), refleja la diversidad de los síntomas que aparecen y predominan en las diferentes poblaciones de ovejas. El prurito se reconoce principalmente por el frotamiento o el rascado compulsivos de objetos fijos, por mordisquearse la piel y por escarbar con la pata trasera. Esto provoca una gran pérdida de lana, particularmente de la parte lateral del tórax, los costados y los cuartos traseros. La persistencia del prurito a menudo da como resultado autolesiones localizadas en la piel. Estas pueden ocurrir en zonas donde se ha perdido la lana y en la base de la cornamenta, la cara, las orejas y las extremidades. Un acto reflejo de mordisqueo característico puede ser a menudo provocado por la palpación de la región lumbar, y también puede estar provocado por los propios movimientos de la oveja al escarbar. La ataxia o falta de coordinación al andar, puede mostrarse en primer lugar como dificultad para posar las patas traseras al realizar giros; las patas traseras se tambalean y el animal mueve las patas delanteras con pasos altos o trotando. Se producen tropiezos y caídas, pero la oveja generalmente es capaz de recuperar rápidamente la posición erguida. Estos signos desembocan en debilidad y postración. La información en torno a las variantes fenotípicas del prurigo lumbar, denominadas prurigo lumbar atípico o Nor98 no es aún lo bastante conocida como para sugerir rasgos clínicos distintos de los del prurigo lumbar clásico, pero se ha descrito el predominio de la ataxia (20,26). Otros signos neurológicos pueden incluir el rechinamiento de los dientes (bruxismo), una posición anormalmente baja de la cabeza y las orejas, un temblor sutil, espasmos y ceguera. También puede presentarse hiperestesia al sonido, al movimiento o al tacto. En muchos casos, también se da un deterioro del estado de salud corporal, pero puede que la pérdida significativa de peso se manifieste sólo en las últimas fases clínicas de la enfermedad. El avance de la enfermedad clínica es muy variable, durando una semana o hasta varios meses, con un desenlace fatal inevitable. También existe una variación de los síntomas entre individuos y entre diferentes razas de ovejas. Estas diferencias pueden deberse a la influencia del genotipo del hospedador y a la cepa del agente. Los factores medioambientales también pueden tener influencia en el curso de la enfermedad. De ahí que pueda resultar difícil el diagnóstico clínico de casos individuales de prurigo lumbar. Los síntomas, especialmente los de la fase temprana de la enfermedad, pueden parecerse a los de otros estados de la oveja adulta, incluyendo el ectoparasitismo, la pseudorrabia (enfermedad de Aujeszky), la rabia, la listeriosis cerebral, la neumonía ovina progresiva (maedi-visna), la toxemia de la preñez (quetosis), la hipomagnesemia y las intoxicaciones químicas y por plantas. Pueden verse video-clips ilustrativos de los signos clínicos del prurigo lumbar en la página web de la Comisión Europea (CE), el Laboratorio de Referencia de la Comunidad para la EET/ Agencia de Laboratorios de 4 Manual de la OIE sobre animales terrestres 2008

5 Veterinaria (ALV) (10). También se pueden rastrear otras filmaciones históricas en video de los signos del prurigo lumbar clásico. (27). Asímismo están disponibles video-clips de los signos del prurigo lumbar atípico (20). 2. Identificación del agente Según la hipótesis del prión, la demostración de PrP Sc representaría la identificación del agente, pero, por definición, la transmisión de tejidos infectados, generalmente a roedores de laboratorio, mediante inyección es el único medio disponible de detección de la infectividad. Los largos períodos de incubación y el hecho de que algunos brotes de prurigo lumbar natural no se transmitan a cepas específicas de los ratones signfica que no es práctico utilizar el criterio de transmisibilidad en el diagnóstico. Sin embargo, la caracterización biológica de la transmisión es un componente importante de la definición de cualquier variante fenotípica nueva de prurigo lumbar que se presente, y para los enfoques orientados a la diferenciación entre los casos de prurigo lumbar y los de EEB en cabras y ovejas (10). En el pasado, el diagnóstico laboratorial del prurigo lumbar (14) se ha basado en la demostración de cambios patológicos, al no existir métodos in-vitro para el aislamiento del agente causal. Históricamente, el único método de ese tipo consistía en la demostración de los cambios histopatológicos en el SNC. Previamente al uso rutinario de la detección inmunoquímica de la PrP Sc, la demostración morfológica del PrP patológico en forma de fibrillas asociadas al prurigo lumbar (FAP) se utilizó junto con el diagnóstico histopatológico. Las FAP se visualizaron en extractos de cerebro no fijados utilizando la tinción negativa para microscopía electrónica. La detección de las FAP fue particularmente útil cuando el tejido de cerebro disponible fue autolisado. El diagnóstico histopatológico normalmente se basaba en el examen de una única sección de la médula oblongada tomada a la altura del óbex, que es el lugar predilecto para los cambios morfológicos (29). El examen inmunohistoquímico (IHC) de la sección de médula y las técnicas de inmunotransferencia realizada sobre tejido fresco adyacente se introdujeron asumiendo la especificidad diagnóstica de PrP Sc y el aumento de la eficacia de los métodos de detección. Al mismo tiempo que debe continuar la investigación inicial de los casos clínicamente sospechosos de prurigo, siempre que se disponga de muestras, mediante un examen histopatológico para la observación de cambios morfológicos, actualmente los criterios deben incluir la demostración de PrP Sc en el SNC. La PrP Sc detectable precede a la vacuolización y los signos clínicos, lo que convierte a las pruebas basadas en la inmunidad en una opción sensible (16). Este enfoque también es útil para la caracterización de la proteína del prión que está presente, y contribuye a la diferenciación de los distintos fenotipos de la enfermedad, sobre todo, la distinción entre el prurigo clásico, el prurigo atípico y la EEB (2, 30). Existen métodos de aplicación rápida disponibles en el mercado para la detección de PrP Sc e introducidos originariamente para el diagnóstico de la EEB, que están autorizados para el diagnóstico del prurigo lumbar (11). Se trata de la inmunotransferencia y el enzimoinmunoensayo (ELISA) (14). Estas pruebas rápidas posibilitan un examen preliminar cuyos resultados positivos o no concluyentes se someten a análisis mediante pruebas confirmativas de inmunohistoquímica o inmunotransferencia. El hecho de que no se observen cambios histológicos típicos o no se detecte PrP/FAP específico de la enfermedad no sirve para confirmar la ausencia de la enfermedad; la concordancia de los resultados de múltiples enfoques de diagnóstico proporciona la mejor garantía de exactitud. Está claro que, en situaciones de vigilancia en las que los análisis tienen por objeto la obtención de pruebas de ausencia de prurigo lumbar en especies de pequeños rumiantes, puede ser necesaria la aplicación de múltiples criterios de diagnóstico y la utilización de al menos dos métodos de laboratorio con tejido del SNC muestreado con precisión (histopatológico e inmunoohistoquímico, o inmunotransferencia) para mantener un alto grado de confianza en los resultados negativos. En los últimos años, la vigilancia pasiva del prurigo lumbar, que incluye el examen de material del SNC procedente de casos sospechosos, se ha complementado en muchos países con la vigilancia activa, orientada hacia ejemplares adultos sanos y al ganado de desecho (animales enfermos o muertos, también denominados animales de riesgo). El principal enfoque para el diagnóstico de la vigilancia activa ha consistido en la aplicación de métodos rápidos al material del SNC obtenido post mórtem. Sin embargo, a diferencia de lo que ocurre con la EEB, en el prurigo lumbar existe la oportunidad de realizar análisis que no se basen únicamente en el examen de tejido del SNC de animales muertos para detectar animales expuestos, ya que la presencia extendida de PrP Sc en tejido linforeticular posibilita la comprobación por biopsia de algunos tejidos linforeticulares accesibles de forma periférica. La detección de PrP Sc en el tejido linforeticular mediante inmunohistoquímica se ha utilizado para el diagnóstico preclínico del prurigo lumbar en ovejas utilizando la amígdala palatina, la membrana nictitante, los nódulos linfáticos superficiales y, más recientemente, las biopsias de tejido linforeticular de la mucosa rectal (15). Las aplicaciones de la detección de PrP para el diagnóstico preclínico del prurigo lumbar requieren un conocimiento más exhaustivo de la variabilidad de la patogénesis antes de que pueda valorarse su sensibilidad en relación con el periodo de incubación. Además, parece que los casos de prurigo lumbar ocasional de las ovejas carece de la Manual de la OIE sobre animales terrestres

6 fase de replicación linforeticular periférica (1, 15). Mientras que la aplicación a gran escala de pruebas para determinar la ausencia de la infección por prurigo lumbar debe incluir el análisis específico de los tejidos periféricos de los animales más jóvenes, la vigilancia para establecer la prevalencia de la enfermedad puede requerir que el examen de tejidos se restrinja a tejido del SNC de las ovejas adultas. No obstante, en la aplicación de pruebas para estimar la prevalencia de la enfermedad, deben tenerse en cuenta varios factores, incluida la estratificación de la explotación de la cría de ovejas, la dosis o nivel de infección en rebaños concretos, la frecuencia de la enfermedad y la relativa implicación del SLR en diferentes genotipos y el efecto de la combinación entre genotipo y la cepa sobre el periodo de incubación. La necesidad de diferenciar entre casos de prurigo lumbar y una posible EEB en ovejas y cabras ha conducido a la elaboración de métodos de diagnóstico con los que establecer la diferencia entre los agentes patógenos causantes de esas dos infecciones. En algunos estudios se sugiere que la conformación del PrP específico de la enfermedad producido en ovejas infectadas por EEB es diferente de la del PrP específico de la enfermedad hallado en el prurigo lumbar natural de las ovejas (12, 19, 25). Esas diferencias de forma pueden detectarse por inmunotransferencia o inmunohistoquímica en las que se utilizan anticuerpos específicos contra los péptidos. Dentro de la Unión Europea, la estrategia utilizada para la mencionada diferenciación consiste en el examen del material del SNC originario tras la detección inicial por medio de vigilancia activa o pasiva (análisis inicial) en el procedimiento de las fases primaria, secundaria y terciaria (10), que implica el uso de un método de inmunotransferencia capaz de tal discriminación, seguido de una revisión por pares y de la investigación adicional mediante la aplicación de métodos bioquímicos e inmunohistoquímicos para terminar, si es preciso, utilizando la transmisión desde ratones a una muestra estándar de ratones silvestres (véase el capítulo EEB). La interpretación de los métodos in-vitro (la inmunotransferencia o el ELISA) se basa en las diferencias existentes entre la EEB y el prurigo lumbar en el sitio de anclaje de la terminal N para la digestión de la PrP Sc con la proteinasa K. El enfoque de la inmunohistoquímica in-situ se basa en los patrones de distribución y marcación de péptidos de PrP Sc en el cerebro y en los tejidos linforeticulares. Se está incrementando el uso dede ratones transgénicos apropiados para la caracterización de la cepa del agente causal, pero ese procedimiento no cuenta con la riqueza de datos de partida de los estudios tradicionales sobre el uso de la muestra de ratones silvestres. El control de calidad (CC) y la garantía de calidad (GC) son partes esenciales de los procedimientos de prueba, y puede obtenerse asesoramiento de los laboratorios de referencia de la OIE (30). a) Preparación de la muestra La preocupación por la presencia de la EEB en poblaciones de pequeños rumiantes y, más recientemente, el descubrimiento del prurigo lumbar atípico han determinado los tipos de estrategias a aplicar en el muestreo y el diagnóstico. Aunque el muestreo más completo y los métodos de pruebas múltiples no estarían exentos de respuestas dudosas y contingentes para estas y otras posibles incertidumbres futuras en el diagnóstico de las enfermedades producidas por los priones de los pequeños rumiantes, los factores operativos también son determinantes a la hora de establecer lo que es viable desde el punto de vista práctico y económico. La relativa implantación de programas de vigilancia pasiva y activa así como los métodos de diagnóstico también influyen en la estrategia de muestreo. De ahí que la selección y la recomendación de los métodos estén necesariamente sujetas a una revisión continua. Para el diagnóstico rutinario, el material de la muestra del SNC se guarda fresco o congelado para las pruebas histoquímicas ulteriores o se fija para las preparaciones histológicas. Cuando existan programas para la identificación de la posible infección por EEB en pequeños rumiantes, el muestreo debe realizarse de forma aséptica utilizando instrumentos nuevos esterilizados y desechables o instrumentos esterilizados en las condiciones especificadas para la descontaminación de los priones, (véase el capítulo EEB). Debe evitarse la contaminación cruzada durante la realización de las necropsias. Por tanto, en los siguientes procedimientos en los que se muestrea el tejido fresco para su utilización con métodos bioquímicos, debe reservarse, si es preciso, una alícuota para los estudios de transmisión. Aunque, en muchos casos, la enfermedad puede confirmarse con el material autolisado o conservado en condiciones poco óptimas, del uso de tales muestras sólo puede derivarse una evidencia limitada de la ausencia de prurigo lumbar. Las ovejas sospechosas de padecer la enfermedad clínica (vigilancia pasiva) deben sacrificarse con una inyección intravenosa de barbitúricos y debe extraérseles el cerebro completo mediante procedimientos de necropsia estándar lo antes posible tras su muerte. Se aconseja extraer el cerebro completo para permitir los exámenes patológicos realizados para la diferenciación entre los diferentes fenotipos de EET posibles y para el diagnóstico diferencial de los trastornos cerebrales no relacionados con la EET. Los métodos de subdivisión del tejido cerebral para la aplicación de técnicas de detección de PrP en las que se requiere el uso de tejido fresco y para las técnicas histológicas dependen de la sensibilidad óptima de cada una de las pruebas realizadas en diferentes zonas del cerebro y del supuesto de que no pueda utilizarse la misma zona para los enfoques del tejido fresco o congelado y del tejido fijado. Se sugiere la utilización del siguiente protocolo, pero este puede modificarse para satisfacer la lista concreta de las pruebas aplicadas. Se puede obtener información adicional de los laboratorios de de referencia de la OIE (10, 30). 6 Manual de la OIE sobre animales terrestres 2008

7 Inicialmente, se toma un bloque coronal de médula oblongada que incluya el óbex (véase el capítulo EEB, figura 1) para fijar con tampón salino con formol al 10% durante 3 5 días antes de cortarlo y procesarlo histológicamente en cera parafinada para su examen histólogico e inmunohistoquímico. Deben tomarse precauciones para evitar que esa muestra se congele. Para la detección de PrP (o de las fibrillas relacionadas con el prurigo lumbar), se toman muestras de tejido fresco y se guardan congeladas ( 20 C o menos) antes de la extracción. Si es posible, la muestra debe proporcionar 5 g de tejidos. Al principio, esta debe tomarse de la médula caudal, y si es necesario, debe complementarse con el tronco cerebral inmediatamente rostral a la médula muestra de óbex. La subdivisión de este tejido, necesario para utilizar con muchos métodos, se puede lograr dividiéndolo en dos mitades o mediante sección transversal. La posible variación del muestreo para los requisitos de pruebas rápidas al nivel del óbex se describe más adelante en relación con los enfoques de vigilancia activa. Cuando se disponga del cerebro completo se aconseja el uso de muestras frescas adicionales para minimizar el diagnóstico de los negativos falsos, teniendo en cuenta la posibilidad de orientarse específicamente hacia una cepa en otras partes del cerebro. Por ejemplo, en el prurigo lumbar atípico, el cerebelo, el tálamo y las zonas de los ganglios basales constituyen zonas adicionales útiles para la aplicación de las pruebas. El tejido cerebral sobrante se fija en 10 veces su volumen con tampón salino con formol al 10% diez veces durante al menos 1 semana y luego se corta transversalmente en tantos bloques como sea preciso para su procesamiento histológico en cera parafinada. La muestra inicial puede limitarse a un solo bloque de médula para el diagnóstico inmunohistoquímico y morfológico (véase el capítulo EEB, fig. 1). Los requisitos para la caracterización patológica del fenotipo o para el diagnóstico diferencial pueden lograrse tomando muestras adicionales del tronco cerebral y, si es preciso, trozos representativos de todas las principales regiones cerebrales. Se tiñen secciones de 5 µm de grosor con hematoxilina y eosina y se examinan inicialmente para detectar cambios morfológicos y, según se requiera, para la detección inmunohistoquímica de PrP Sc, como se esboza más adelante. En los programas de vigilancia activa para las ovejas, se han diseñado métodos para la extracción de tronco cerebral por el foramen magnum utilizando instrumentos adecuados con forma de cuchara, semejantes a los utilizados en el ganado vacuno para el muestreo destinado al diagnóstico de la EEB (véase el capítulo EEB, figura 2). Aunque no es aconsejable, este enfoque puede utilizarse también en casos sospechosos de enfermedad clínica. La muestra mínima requerida es el tronco cerebral a la altura del óbex y, si se trata de diagnosticar también el prurigo lumbar atípico, se requiere también el cerebelo. La porción de tronco cerebral se corta en dos en el plano medio para utilizar una mitad (fresca o congelada) en una prueba rápida, y la otra (fijada) para histopatología. Como alternativa, se fija una porción coronal completa que incluya el óbex, y se toma una porción de médula caudal adyacente para la prueba rápida. En el pasado se ha recomendado la utilización de la porción coronal completa para determinar la simetría de los cambios morfológicos, pero, con la introducción de las técnicas moleculares rápidas, existe una competición entre las distintas pruebas en torno a cuál de las zonas del óbex resulta óptima para el diagnóstico. Con algunos kits de pruebas rápidas se utiliza un enfoque esencial de muestreo para obtener una cantidad adecuada de material de la zona del óbex. Aunque la división de la región del óbex del tronco cerebral lleva aparejada la falta de habilidad para valorar la simetría de la lesión vacuolar, esa desventaja se ve compensada en gran medida por la mayor especificidad de la inmunohistoquímica para detectar PrP Sc. Sin embargo, si se adopta este enfoque o el enfoque de muestreo esencial, es preciso asegurarse de que no se va a comprometer la zona contralateral diana. El núcleo dorsal del nervio vago (la zona diana óptima para la mayoría de casos de prurigo lumbar) es una columna delgada y está próxima a la línea media (véase el capítulo EEB, figura 3). Las opciones también dependen de los instrumentos de muestreo proporcionados por el fabricante de los kits de prueba. Para todos los métodos de muestreo es esencial que se entrene a los operarios y que la formación incluya información sobre la anatomía nerviosa general y transversal del tronco cerebral y sobre la localización precisa de las zonas diana en las que se acumula la PrP Sc específica de la enfermedad. Para diferencias entre los casos de prurigo clásico y los de prurigo atípico, se requieren porciones de cerebelo fijado y fresco/congelado. b) Análisis histológico Los cambios morfológicos del SNC son los provocados por la encefalopatía espongiforme y comprenden sobre todo la vacuolización de los pericarios neuronales y el neurópilo acompañada de una gliosis variable y menos visible (sobre todo una reacción astrocítica). Lo típico es que las lesiones tengan una distribución simétrica bilateral. Existe una gran variación en el patrón de distribución de la vacuolización y de otros cambios, pero las lesiones, al menos las producidas por el prurigo lumbar clásico, son por lo general más visibles en el tronco cerebral y con frecuencia afectan al núcleo dorsal del nervio vago. La vacuolización de los pericarios neuronales no es patognomónica porque se presenta a menudo en los cerebros de ovejas de apariencia sana, aunque con poca frecuencia (28). Más aún, no se puede considerar que los rasgos morfopatológicos individuales del prurigo lumbar sean específicos de la enfermedad, pero combinados entre sí y con abundantes cambios vacuolares son sin duda patognomónicos. No siempre se observan síntomas graves en presencia de cambios neuropatológicos graves. A la inversa, incluso cuando los síntomas son Manual de la OIE sobre animales terrestres

8 graves, es posible que los cambios morfológicos sean indetectables mediante microscopía electrónica (3, 13). No se puede rebatir el diagnóstico clínico de un presunto prurigo lumbar por el hecho de que no se encuentren cambios vacuolares significativos en el cerebro. La ausencia de lesiones no constituye, por tanto, una prueba de la ausencia de infección por prurigo lumbar, ya que esta puede estar presente aunque no haya síntomas ni cambios morfológicos detectables. A pesar de las reservas anteriores, el examen histológico de secciones de la médula oblongada a la altura del óbex puede ser suficiente para confirmar el diagnóstico en la mayor parte de los casos sospechosos de prurigo lumbar clínico (14, 29). Aunque este se ha utilizado con éxito para el diagnóstico rutinario del prurigo lumbar clásico, ante hallazgos poco claros a partir de la médula se requiere el examen de otras regiones del SNC. Esto ha sido bastante evidente en el reconocimiento del prurigo lumbar atípico, en el que pueden ser escasos o nulos los cambios morfológicos cerebrales y la demostración de PrP Sc sólo es posible en algunos lugares externos al tronco cerebral. Está claro que puede establecerse la ausencia de lesiones con el mayor grado de confianza examinando zonas representativas de todo el cerebro. c) Detección de formas de PrP específicas de la enfermedad Actualmente, los métodos de demostración de la acumulación de las formas de PrP específicos de la enfermedad en zonas diana constituyen el principal enfoque para el diagnóstico del prurigo lumbar natural (14). En los casos clínicos sospechosos, se aboga por la utilización conjunta de la inmunohistoquímica y la inmunotransferencia para la confirmación del diagnóstico. En los casos sospechosos, la inmunohistoquímica de secciones de tejido para demostrar la acumulación de PrP Sc debe aplicarse en paralelo con la histología rutinaria. Además, la PrP res, que es una forma truncada de PrP parcialmente resistente a la proteasa, puede detectarse, tras la purificación parcial a partir de extractos no fijados de cerebro afectado y tratados con detergente y proteasa, mediante electroforesis e inmunotransferencia. También se recomienda la utilización conjunta de la inmunohistoquímica y la inmunotransferencia cuando las lesiones tengan una gravedad moderada y se consideren dudosas. En los programas de vigilancia activa, el diagnóstico primario se realizará normalmente mediante la utilización de pruebas rápidas y, en caso de que se obtengan resultados positivos o no concluyentes, también deben aplicarse métodos confirmativos. Los métodos de prueba se detallan en las páginas web de los laboratorios de referencia de la OIE (véase el capítulo EEB). Métodos inmunohistoquímicos La PrP específica de la enfermedad del cerebro afectado por prurigo lumbar se demuestra mediante la utilización de histoquímica sobre material fijado de forma rutinaria con formalina aplicando una variedad de técnicas para desenmascarar los epitotos y utilizando anticuerpos adecuados frente a PrP (10, 30). El reconocimiento de las configuraciones de inmunomarcaje específicas de la enfermedad, sus combinaciones celulares y patrones de distribución neuroanatómica proporcionan la base para el diagnóstico confirmativo del prurigo lumbar clásico (21) y del atípico (4). Métodos de inmunotransferencia El diagnóstico basado en la detección de PrP res mediante experimentos de inmunotransferencia requiere que solamente se detecte en las calles de la muestra de prurigo lumbar tratada con proteinasa K un amplio rango de bandas inmunoteñidas correspondientes a proteínas de un peso molecular de kda, y que las calles de la muestra control proporcionen una comparación adecuada. Se ha publicado sobre varios métodos de inmunotransferencia para la detección de PrP res (24). La técnica original utilizada para el diagnóstico de la EEB, que ha sido descrita como la técnica de inmunotransferencia tipo Western de la OIE (10) se basaba en la extracción con detergente de una gran cantidad de tejido cerebral fresco (4 g) seguida de ultracentrifugación para concentrar la PrP, y un tratamiento con proteinasa K para digerir cualquier proteína normal del hospedador. Ello dejaría solamente en las muestras positivas PrP res fijada mediante un anticuerpo específico y un sistema de detección (79) (véase también el capítulo EEB). Si no se pueden obtener resultados del examen histopatológico e inmunohistoquímico debido al deterioro de la muestra, i.e. en casos de autolisado grave, las restantes opciones disponibles son la inmunotransferencia, los métodos ELISA y la detección de las FAP. De forma semejante, estos métodos también pueden aplicarse en circunstancias en las que, debido a un error durante el estadio post mórtem, el material del SNC destinado para la fijación y el examen histológico se ha congelado. Todavía se pueden aplicar a tales muestras los métodos inmunohistoquímicos, pero puede comprometerse la habilidad para identificar los sitios anatómicos, lo que quiere decir que cualquier resultado negativo debe ser cualificado. Con modificaciones, el método FAP puede también aplicarse con éxito en tejido fijado con formalina (7). La detección de las FAP no debería utilizarse como la única prueba si es posible utilizar un método inmunoquímico. 8 Manual de la OIE sobre animales terrestres 2008

9 Actualmente se utiliza una amplia variedad de antisueros y anticuerpos monoclonales para la detección de PrP mediante métodos inmunoquímicos, y algunos de ellos están disponibles en el mercado. Los controles positivos y negativos son esenciales Pruebas rápidas Se han elaborado y evaluado para uso diagnóstico los formatos de pruebas de inmunodiagnóstico para la detección de PrP Sc en el tejido cerebral de pequeños rumiantes (11). El ensayo rápido se basa en la optimización de los reactivos utilizados para la extracción y digestión, y en un anticuerpo monoclonal específico para la detección, lo que anula la necesidad de interminables fases de ultracentrifigación. Los ensayos requieren una médula fresca recogida en el óbex o simplemente dirigida hacia el óbex. En la mayoría de las pruebas rápidas se utiliza menos de 0,5 g de material y se han diseñado muchas herramientas del muestreo para el sub-muestreo de unas cantidades precisas. Sin embargo, de cara a posibles pruebas adicionales, se aconseja al menos 1 g de la muestra inicial, o muestra total. Algunos laboratorios utilizan la técnica de inmunotransferencia tipo Western de la OIE (si se encuentra suficiente tejido disponible) para confirmar cualquier muestra débilmente positiva que se detecte inicialmente empleando el ensayo rápido (10). El aumento de la concentración de PrP res mediante ultracentrifugación a partir de una mayor cantidad de tejido cerebral puede mejorar la sensibilidad. Se han utilizado métodos de pruebas rápidas para identificar los casos de prurigo lumbar atípico (12), y la detección se optimiza si se ensaya la muestra cerebral adecuada (como el cerebelo). Actualmente las perspectivas para el desarrollo de pruebas diagnósticas más específicas y sensibles frente al prurigo lumbar y otras EET se centran principalmente en el desarrollo de nuevos enfoques para la detección de formas de PrP específicas de la enfermedad. Es crucial el logro de la realización consistente de los métodos de prueba rápida para el enfoque del diagnóstico primario, sobre todo en relación con la capacidad de las pruebas para identificar los fenotipos del prurigo lumbar clásico y del atípico. La precisión del muestreo ejerce una fuerte influencia en la sensibilidad diagnóstica global. d) Otras pruebas de diagnóstico Por lo que se refiere a las pruebas de EEB en el ganado vacuno (véase el capítulo EEB) que se pueden aplicar de forma efectiva en los animales vivos para detectar los casos de prurigo lumbar en la fase precoz de incubación, dichas pruebas siguen siendo difíciles de perfilar a pesar de las diversas líneas de investigación sobre las mismas. La investigación en torno a los biomarcadores de las proteínas no priónica, mediante enfoques metabolómicos o proteómicos puede ofrecer perspectivas, pero existen limitaciones, incluida la de que se pueda acceder al tejido clave y se pueda demostrar la especificidad. 2. Pruebas serológicas No se ha detectado una respuesta inmune serológica frente al agente del prurigo lumbar. 3. Pruebas genéticas En algunos países se están desarrollando estrategias para el control y erradicación del prurigo lumbar basadas en la selección genética de la resistencia. La selección se lleva a cabo sobre la determinación de los polimorfismos comunes del gen PrP de la oveja. Como una herramienta para el control del prurigo lumbar clásico: el stock para cría, concretamente los carneros con un genotipo adecuado de PrP pueden seleccionarse para producir una progenie con un riesgo menor de desarrollar la enfermedad (8). Estos servicios de genotipificación se encuentran disponibles comercialmente en América del Norte y en varios países de Europa. El ensayo se realiza empleando ADN extraído a partir de leucocitos obtenidos de muestras de sangre tratadas con ácido etiléndiamino tetraacético (EDTA). La selección del ganado de cría puede realizarse en los animales más resistentes al prurigo lumbar, los homozigóticos para arginina en el codón 171, reduciendo de esta forma la incidencia del prurigo lumbar clásico en los rebaños individuales. Estos animales no son frecuentes en la mayoría de los rebaños, y en realidad el genotipo se encuentra ausente en algunas razas. Probablemente es prematuro establecer una aproximación estratégica pare eliminar la infección por prurigo lumbar de los rebaños de una nación o regiones geográficas adoptando un programa de reproducción genético similar. Una causa es la escasez de ovejas que son homozigóticas para arginina en el codón 171. Otra causa consiste en la falta de datos sobre los efectos de un predominio de tal genotipo sobre la productividad, la resistencia a otras enfermedades distintas al prurigo lumbar y la viabilidad general. Es más, hay un conocimiento insuficiente en lo relativo a la prevalencia y epidemiología del prurigo lumbar atípico. Para decidir sobre la adecuación de tales programas, debe tenerse en cuenta una evaluación exhaustiva de la situación actual del prurigo lumbar en un país o región, la disponibilidad de ovejas resistentes de reemplazo, la política de importación de ovejas, la disponibilidad de instalaciones para la realización de las pruebas y la disposición y apoyo a la ganadería ovina, especialmente la voluntad de los criadores de ovejas de comprometerse con el programa durante un largo periodo de tiempo. Manual de la OIE sobre animales terrestres

10 C. REQUISITOS PARA LAS VACUNAS Y EL MATERIAL DE DIAGNÓSTICO No existen productos biológicos disponibles. REFERENCIAS 1. ANDREOLETTI O., BERTHON P., MARC D., SARRADIN P., GROSCLAUDE J., VAN KEULEN L., SCHELCHER F., ELSEN J.M & LANTIER F. (2000). Early accumulation of PrPSc in gut-associated lymphoid and nervous tissues of susceptible sheep from a Romanov flock with natural scrapie. J. Gen. Virol., 81, BARON T., BIACABE A.G., ARSAC J.N., BENESTAD S. & GROSCHUP M.H. (2006). Atypical transmissible spongiform encephalopathies (TSEs) in ruminants. Vaccine, 30, BEGARA-MCGORUM I., CLARK A.M., MARTIN S. & JEFFREY M. (2000). Prevalence of vacuolar lesions consistent with scrapie in the brains of healthy cull sheep of the Shetland Islands. Vet. Rec., 147, BENESTAD S.L., SARRADIN P., THU B., SCHONHEIT J., TRANULIS M.A. & BRATBERG B. (2003). Cases of scrapie with unusual features in Norway and designation of a new type, Nor98. Vet. Rec., 153, BROWN P. (1992). Infectious cerebral amyloidosis: clinical spectrum, risks and remedies. In: Transmissible Spongiform Encephalopathies Impact on Animal and Human Health. Brown F., ed. Basel, Karger, Dev. Biol. Stand., 80, BRUCE M.E., BOYLE A. & MCCONNEL I. (2004). TSE strain typing in mice. In: Techniques in Prion Research, Lehmann S. & Grassi J., eds. Birkhäuser Verlag, Switzerland, CHAPLIN M.J., ALDRICH A.D. & STACK M.J. (1998). Scrapie associated fibril detection from formaldehyde fixed brain tissue in natural cases of ovine scrapie. Res. Vet. Sci., 64, DAWSON M., HOINVILLE L.J., HOSIE B.D. & HUNTER N. (1998). Guidance on the use of PrP genotyping as an aid to the control of clinical scrapie. Vet. Rec., 142, ELOIT M., ADJOU K., COULPIER M., FONTAINE J.J., HAMEL R., LILIN T., MESSIAEN S., ANDREOLETTI O., BARON T., BENCSIK A., BIACABE A.G., BERINGUE V., LAUDE H., LE DUR A., VILOTTE J.L., COMOY E., DESLYS J.P., GRASSI J., SIMON S., LANTIER F. & SARRADIN P. (2005). BSE agent signatures in a goat. Vet. Rec., 156, EUROPEAN COMMISSION (EC). TSE Community Reference Laboratory Web Resources EUROPEAN FOOD SAFETY AUTHORITY (EFSA) (2005a). Evaluation of rapid post-mortem TSE tests intended for small ruminants. EFSA Scientific Report, 49, EUROPEAN FOOD SAFETY AUTHORITY (EFSA) (2005b). Opinion on classification of atypical transmissible spongiform encephalopathy (TSE) cases in small ruminants, 276, FRASER H. (1976). The pathology of natural and experimental scrapie. In: Slow Virus Diseases of Animals and Man. Kimberlin R.H., ed. North-Holland, Amsterdam, The Netherlands, GAVIER-WIDEN D., STACK M.J., BARON T., BALACHANDRAN A. & SIMMONS M. (2005). Diagnosis of transmissible spongiform encephalopathies in animals: a review. J. Vet. Diagn. Invest., 17, GONZALEZ L., DAGLEISH M.P., BELLWORTHY S., SISÓ S., STACK M.J., CHAPLIN M.J., DAVIS L.A., HAWKINS S.A.C., HUGHES J. & JEFFREY M. (2006). Postmortem diagnosis of preclinical and clinical scrapie in sheep by the detection of disease-associated PrP in their rectal mucosa. Vet. Rec., 158, HAMIR A.N., MILLER J.M., SCHMERR M.J., STACK M.J., CHAPLIN M.J. & CUTLIP R.C. (2001). Diagnosis of preclinical and subclinical scrapie in a naturally infected sheep flock utilizing currently available post mortem diagnostic techniques J. Vet. Diagn. Invest., 13, HOINVILLE L.J. (1996). A review of the epidemiology of scrapie in sheep. Rev. sci. tech. Off. int. Epiz., 15, Manual de la OIE sobre animales terrestres 2008

11 18. HÖRNLIMANN B. (2006). Prions in Humans and Animals, Hörnlimann B., Riesner, D. & Kretzschmar H., eds. de Gruyter, Berlin, Germany. 19. JEFFREY M., MARTIN S., GONZALEZ L., RYDER S.J., BELLWORTHY S.J. & JACKMAN R. (2001). Differential diagnosis of infections with the bovine spongiform encephalopathy (BSE) and scrapie agents in sheep. J. Comp. Pathol., 125, KONOLD T., DAVIS A., BONE G.E., BRACEGIRDLE J., EVERITT S., CHAPLIN M., SAUNDERS G.C., CAWTHRAW S. & SIMMONS M.M. (2007). Clinical findings in two cases of atypical scrapie in sheep: a case report. BMC Vet. Res., 3, RYDER S.J., SPENCER Y.I., BELLERBY P.J. & MARCH S.A. (2001). Immunohistochemical detection of PrP in the medulla oblongata of sheep: the spectrum of staining in normal and scrapie-affected sheep. Vet. Rec., 148, SEUBERLICH T., BOTTERON C., BENESTAD S., BRÜNISHOLZ H., WYSS R., KIHM U., SCHWERMER H., FRIESS M., NICOLIER A., HEIM D. & ZURBRIGGEN A. (2007). Atypical scrapie in a Swiss goat and implications for transmissible spongiform encephalopathy surveillance. J. Vet. Diag. Invest., 19, SIMMONS M.M., KONOLD T., SIMMONS H.A., SPENCER Y.I., LOCKEY R., SPIROPOULOS, J., EVERITT S. & CLIFFORD, D. (2007). Experimental transmission of atypical scrapie to sheep. BMC Vet. Res., 3, STACK M.J. (2004). Western Immunoblotting Techniques for the Study of Transmissible Spongiform Encephalopathies. In: Techniques in Prion Research, Lehmann S. & Grassi J., eds. Birkhäuser Verlag, Switzerland, STACK M., JEFFREY M., GUBBINS S., GRIMMER S., GONZALEZ L., MARTIN S., CHAPLIN M., WEBB P., SIMMONS M., SPENCER Y., BELLERBY P., HOPE J., WILESMITH J. & MATTHEWS D. (2006). Monitoring for bovine spongiform encephalopathy in sheep in Great Britain, J. Gen. Virol., 87, ULVUND M.J. (2006). Clinical findings in scrapie. In: Prions in Humans and Animals, Hörnlimann B., Riesner D. & Kretzschmar H., eds. de Gruyter, Berlin, Germany, WELLS G.A.H. & HAWKINS S.A.C. (2004). Animal models of transmissible spongiform encephalopathies: experimental infection, observation and tissue collection. In: Techniques in Prion Research. Lehmann S. & Grassi J., eds. Birkhäuser Verlag, Switzerland, WELLS G.A.H., RYDER S.J. & HADLOW W.J. (2006). The pathology of prion diseases in animals. In: Prions in Humans and Animals. Hörnlimann B., Riesner D. & Kretzschmar H., eds. de Gruyter, Berlin, Germany, WOOD J.L.N., MCGILL I.S., DONE S.H. & BRADLEY R. (1997). Neuropathology of scrapie: a study of the distribution patterns of brain lesions in 222 cases of natural scrapie in sheep, Vet. Rec., 140, WORLD ORGANISATION FOR ANIMAL HEALTH (OIE). OIE Expertise Reference Laboratories WORLD ORGANISATION FOR ANIMAL HEALTH (OIE). World Animal Health Information Database (WAHID), Disease Information/ Scrapie. * * * NB: Existen laboratorios de referencia de la OIE para el prurigo lumbar (véase el cuadro de la parte 3 de este Manual de animales terrestres, o consúltese la lista más actualizada en la página web de la OIE: Manual de la OIE sobre animales terrestres