EVALUACIÓN DE LA CARGA BACTERIANA EN PAJILLAS DE SEMEN CONGELADO DE TOROS DEL BANCO NACIONAL DE SEMEN

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1 EVALUACIÓN DE LA CARGA BACTERIANA EN PAJILLAS DE SEMEN CONGELADO DE TOROS DEL BANCO NACIONAL DE SEMEN EVALUATION OF BACTERIAL IN STRAWS OF BULL S FROZEN SEMEN FROM THE SEMEN NATIONAL BANK Siever Morales C., 2, Próspero Cabrera V. 3, César Pantoja A. 4, David García I. 4 y Nancy Solís Ch. 4 RESUMEN Con el objetivo de evaluar la microflora bacteriana, en muestras de semen de Semen (Perú), se condujo una en diferentes tiempos de conservación: 8 pajillas de semen de toros antiguos pajillas de semen de toros nuevos (menor pajillas de semen congelado por toro y siguiendo la metodología de recuento de bacterias, se pudo observar presencia de mesófilos tanto en pajillas de semen de toros antiguos y nuevos con valores muy inferiores; igualmente, se pudo observar presencia de coliformes en pajillas de semen de toros antiguos y nuevos, pero en menor cantidad y con valores inferiores. Mediante la especies bacterianas, entre las cuales se obtuvo con mayor frecuencia porcentual bacilos no fermentadores Pseudomonas sp. Micrococcus sp. Bacillus sp. Staphylococcus sp. levaduras Pasteurella sp. para presencia de mesófilos no se halló diferencia estadística significativa a diferencia del análisis estadistico para coliformes, donde sí se encontró diferencia estadistica significativa en cuanto a periodo de conservación. Se concluye que estos valores son muy inferiores e inocuos para la reproducción. Palabras clave: semen congelado, pajillas, microflora bacteriana, coliformes, mesófilos. ABSTRACT of semen from bulls older (greater than the methodology of counting bacteria, observed in the presence of coliform FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA, UNIVERSIDAD CIENTÍFICA DEL SUR, LIMA, PERÚ. 2 LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA, FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA, UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS, LIMA, PERÚ. 3 UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA. LIMA, PERÚ. 4 UNIVERSIDAD NACIONAL DANIEL ALCIDES CARRIÓN. PASCO, PERÚ. Científica (), 23

2 Evaluación de la carga bacteriana en pajillas de semen congelado de toros del Banco Nacional de Semen variance for the presence of mesophilic no statistically significant difference the storage period. We conclude that reproduction. Keywords: bacterial microflora, coliforms, mesophylls. INTRODUCCIÓN La inseminación artificial contribuye al control y prevención de ciertas enfermedades de los animales domésticos; sin embargo, cuando sus fundamentos son violados en su uso práctico, puede convertirse en un serio peligro por la diseminación más intensa de estas, aún con mayor frecuencia que la monta natural. La introducción del semen actualidad, agravó el problema debido a que facilita el intercambio del material seminal sin limitaciones geográficas y sin afectar la supervivencia de los agentes infecciosos. Solo mediante una estricta supervisión y control veterinario de la salud de los machos donantes, unida a un competente laboratorio de diagnóstico, necesaria para obtener un semen libre de contaminaciones microbianas. del material espermático de toros han puesto en evidencia la presencia de microorganismos patógenos y saprofitos de varios géneros y especies. A pesar de las medidas higiénicas que se toman en los centros de inseminación artificial para la manipulación y preparación del semen, en este pueden encontrarse especies bacterianas saprofitas con mayor frecuencia, pero también pueden estar presentes algunas especies patógenas. en el Perú, viene trabajando desde de semen de toros nacionales en el país, con eplotación racional de vacunos reproductores en la colección y preparación de pajillas de semen congelado, para efectos de inseminación artificial, a fin de epandir la genética de los animales mejorados a nivel nacional. A la presencia en el semen fresco o congelado de microorganismos de la flora normal del tracto reproductor del macho y la adquirida durante la recolección y procesamiento del semen, e incluso durante su almacenaje, no debe restársele importancia como aspecto a considerar en la calidad del material seminal, debido a su influencia en la fertilidad y potencialidad infecciosa. En este sentido, las medidas de bioseguridad que se toman durante el proceso tecnológico, desde la recolección la calidad sanitaria del semen. La forma correcta es efectuar análisis una inseminación artificial libre de enfermedades y, por consiguiente, que el semen congelado no sea portador de agentes patógenos que podrían dañar la mejora genética de los productores que presente trabajo de investigación fue Científica (), 23

3 ARTÍCULOS ORIGINALES Siever Morales C., César Pantoja A., David García I. y Nancy Solís Ch. evaluar la microflora bacteriana en muestras de semen congelado de conservadas durante diferentes periodos. MATERIALES Y MÉTODOS Lugar de estudio El presente trabajo de investigación se (recolección de pajillas de semen) en Agraria La Molina, y la segunda etapa en los laboratorios de Microbiología de la Universidad Científica del Sur, en Lima. Para el presente estudio se consideró al identificación y registro genealógico de los mismos. A efectos del estudio, se conformaron dos grupos de pajillas según periodos de pajillas congeladas con menor o igual a granel en los tanques asignados a cada cultivo convencionales para el recuento e identificación de bacterias mesófilas y coliformes (agar plate count y rojo bilis, respectivamente), apoyados en sistemas de coloración bacteriana y pruebas bioquímicas para su identificación final, como prueba de citrato de simmons, de urea, maltosa, prueba de reducción de nitratos, gelatinasa, oidasa, coagulasa e hidrolisis de esculina. se detallan a continuación:.ª etapa: Las muestras se evaluaron por pareado, para así poder obtener un a cada pajilla, diluciones seriadas a siendo las diluciones posible a través del de la evaluación total se obtuvo por medios de cultivo fue uno de los puntos críticos considerados en el presente de los materiales (nombre del toro, fecha de procesamiento, tipo de medio, etc.) se procedió a descongelar las pajillas convencionalmente, buscando no afectar la viabilidad de las células bacterianas, diluyente (H2Opp), respectivamente. Para O, de lo que se por placa), siendo dos para coliformes y dos para mesófilos. Para la segunda dilución 9 ml de H Opp. Finalmente, se de la muestra. 2.ª etapa: la muestra en cada placa, se procedió a verter los agares correspondientes (rojo bilis para coliformes y PCA para mesófilos), según rótulo en un volumen Científica (), 23

4 Evaluación de la carga bacteriana en pajillas de semen congelado de toros del Banco Nacional de Semen modo tal que no inactive a las bacterias presentes. 3.ª Etapa: la mesa de trabajo, tratando de distribuir homogéneamente la muestra sobre la superficie de la placa. 4.ª Etapa: agar, aproimadamente, con la finalidad de sellar la muestra y que dentro de ella se formen las colonias características y sean más notorias. El tiempo de incubación transcurrido rojo bilis (coliformes) y 48 horas agar PCA (mesófilos). 5.ª etapa: lectura de las placas, para identificar la presencia de colonias, la cual se cuantificó y, posteriormente, se identificó a través de una resiembra sobre la superficie del agar que corresponde. El recuento final de bacterias se obtiene a través del promedio aritmético de las de muestra de semen de bovino. 6.ª etapa: Tras la resiembra, a las se determinar las características de la pared celular bacteriana (gramnegativas o grampositivas). 7.ª etapa: Finalmente, a través de pruebas bioquímicas, se determinaron las características que muestran las como glucosa, lactosa, sacarosa, sustratos como fuente de carbono: citrato, lisina; motilidad, eliminación de como coagulasa, gelatinasa, ureasa; reducción de nitratos e hidrolisis de esculina. RESULTADOS Y DISCUSIÓN DE LA CALIDAD SEMINAL ANTES DE LA EVALUACIÓN congelado de toros, la motilidad individual progresiva posdescongelacion promedio congelado posdescongelado. REACCIÓN A LOS MEDIOS DE CULTIVO La reacción de los medios de cultivo y pruebas bioquimicas que se obtuvo obtuvo lecturas. MESÓFILOS EN PAJILLAS DE SEMEN CONGELADO CONSERVADOS DURANTE MÁS DE UN AÑO (ANTIGUOS) Tras la evaluacion de pajillas conservadas durante más de un año (antiguas), se verificó la presencia de mesófilos en lecturas de primera y hasta tercera dilución, con valores muy inferiores e inocuos para generar lesiones patológicas, especialmente en el toro dentro de las consideraciones descritas halló bacterias en lavados prepuciales antes de colección. Científica (), 23

5 ARTÍCULOS ORIGINALES Siever Morales C., César Pantoja A., David García I. y Nancy Solís Ch. COLIFORMES EN PAJILLAS DE SEMEN CONGELADO CONSER- VADOS DURANTE MÁS DE UN AÑO (ANTIGUOS) Tambien se pudo hallar la presencia de coliformes en lecturas de primera dilución en un solo toro, siendo estos valores muy inferiores e inocuos. En la segunda lectura se observó presencia de coliformes en mayor proporción en dentro de las consideraciones descritas que no es posible obtener semen estéril. MESÓFILOS EN PAJILLAS DE SEMEN CONGELADO CONSERVADOS POR UN PERIODO MENOR DE UN AÑO (NUEVOS) Tras la evaluacion de pajillas conservadas por un periodo menor a un año (nuevos), se comprobó la presencia de mesófilos toros no se halló presencia de mesófilos. reconfirmar ausencia de mesófilos de los dos toros, a la primera dilución se en la tercera dilución pudo hallarse en el consideraciones descritas por Silveira et que se debe a una colecta de semen en condiciones ambientales no apropiadas. COLIFORMES EN PAJILLAS DE SEMEN CONGELADO CONSER- VADOS POR UN PERIODO MENOR DE UN AÑO (NUEVOS) Tambien se puede observar que eiste presencia de coliformes a la primera ecentos de UFC, siendo estos valores muy aceptables para toros que se colectan a medio ambiente. Estos de investigación, a fin de establecer una relación entre cantidad de bacterias en semen y fertilidad del mismo. BACTERIAS LOCALIZADAS EN LAS MUESTRAS DE SEMEN CONGELADO En las muestras de semen congelado bacterianas entre las cuales se obtuvo Pseudomona sp. Micrococcus sp Bacillus sp. Staphilococcus sp. Pasteurella sp. de estas bacterias en las secreciones prepuciales que en forma natural hay desinfección no podría darse a diario o antes de la colección por la peligrosidad que representan estos animales. Se demuestra que obtener semen estéril es imposible, ya que la contaminación puede ocurrir durante el procesamiento ANÁLISIS DE VARIANCIA PARA PRESENCIA DE MESÓFILOS EN PAJILLAS DE SEMEN CONGELADO- DESCONGELADO DE TOROS, SEGÚN RAZA Y PERIODO DE CONSERVACIÓN con la metodología descrita por Steel y Científica (), 23

6 Evaluación de la carga bacteriana en pajillas de semen congelado de toros del Banco Nacional de Semen TABLA. FRECUENCIA DE BACTERIAS PRESENTES EN PAJI LLAS DE SEMEN CONGELADO DE TOROS DEL BANCO NACIONAL DE SEMEN - UNALM, PERÚ, SEGÚN PERIODOS DE CONSERVACIÓN. BACTERIAS FRECUENCIA % ANTIGUOS % NUEVOS % Bacillus no fermentadores 3 27, ,256 Pseudomonas sp. 9 8,75 9 2,93 Micrococcus sp. 8 6, ,279 Bacillus sp. 7 4, ,953 Staphylococcus sp. 6 2,5 6 3,953 Levadura 4 8, ,32 Pasteurella sp. 2,833 2,326 Total TABLA 2. BACTERIAS PRESENTES EN SEMEN DE TOROS TOROS BACTERIAS entre toros antiguos cuyas pajillas tienen más de un año de conservación y nuevos cuyas pajillas tienen menos de un año de conservación, lo que significa que en ambos casos se puede hallar presencia de mesófilos, aunque en muy baja proporción. no se halló diferencias estadísticas ANÁLISIS DE VARIANCIA PARA PRESENCIA DE COLIFORMES EN PAJILLAS DE SEMEN CONGELADO- DESCONGELADO DE TOROS, SEGÚN RAZA Y PERIODO DE CONSERVACIÓN Luego del análisis estadístico se encontraron diferencias estadísticas antiguos cuyas pajillas tienen más de Científica (), 23

7 ARTÍCULOS ORIGINALES Siever Morales C., César Pantoja A., David García I. y Nancy Solís Ch. un año de conservación y toros nuevos cuyas pajillas tienen menos de un año de conservación, lo que significa que en ambos casos se puede hallar presencia de coliformes, si bien en muy no se hallaron diferencias estadísticas DISCUSIÓN Teniendo en cuenta estos resultados, se deben identificar claramente todos los factores que podrían contribuir a la contaminación del semen, desde el toro hasta la transferencia del semen en los genitales de la hembra. Así, eiste un gran compromiso de todas las personas que trabajan en el área, no solo en la línea de producción, sino también las que trabajan como organismos reguladores, para asegurar un control efectivo, tal como lo recomienda determinar la presencia de microorganismos patógenos únicamente cuando las hembras fértiles fracasan en ser preñadas con semen de buena viabilidad y morfología, en dosis adecuada o cuando una historia de infertilidad implica una posible causa infecciosa. Por otro lado, si la cama está limpia, el prepucio bien lavado y se aplican métodos rigurosamente asépticos para la preparación de los diluyentes, en el montaje de la vagina y en el colector vaginal, se pueden obtener eyaculados con un mínimo de contaminación de las medidas higiénicas que se toman en los centros de inseminación artificial para la manipulación y preparación del semen, en este pueden encontrarse especies bacterianas saprofitas, con mayor frecuencia, pero también pueden estar presentes algunas especies patógenas, capaces de participar desfavorablemente fresco se corresponden con los obtenidos Obtener semen estéril es imposible, pues los toros sanos poseen una flora saprofita en el prepucio que puede contaminar el semen durante el ambientales apropiadas, algunas de estas bacterias pueden comportarse como patógenos oportunistas y ser un riesgo importante para las hembras lo que en cualquier eyaculado siempre hay microorganismos que deben ser controlados para evitar introducir enfermedades en lugares donde nunca Como medidas de control, Almquist et simultánea de penicilina y estreptomicina tenía una actividad antibacteriana más A partir de ese descubrimiento, dichos ampliamente en la mayor parte de los centros de etracción y procesamiento de semen bovino del mundo, tanto en los medios de dilución ordinarios como en los especiales para la congelación. La perdurabilidad de la actividad contra gérmenes patógenos de la combinación usuales fue señalada recientemente, y se de la contaminación eperimental del semen con Leptospira santarosai serovar guaricura, resultados muy superiores a CONCLUSIONES motilidad en las pajillas de semen Científica (), 23

8 Evaluación de la carga bacteriana en pajillas de semen congelado de toros del Banco Nacional de Semen posdescongelación, lo cual está dentro del rango aceptable para la inseminación artificial. lecturas. antiguos se obtuvo presencia de mesófilos, con un rango promedio de muestras de pajillas de toros antiguos, se obtuvieron lecturas con un rango obtuvo lectura de mesófilos con un semen. pajillas de toros nuevos, se obtuvieron bacterias presentó porcentajes que valores no afectarían la reproducción. variancia para mesófilos no mostraron significación, mientras que en los coliformes sí se halló significación respecto de la evaluación de toros antiguos y toros nuevos. RECOMENDACIONES Para las condiciones del presente estudio, se recomienda: bacterias identificadas en el presente estudio, que permitan reducir la población bacteriana en las muestras de semen congelado. que permita limpiar y desinfectar el prepucio de los toros momentos antes de la colección de semen, a fin de reducir las bacterias del prepucio en las muestras de semen, las cuales se presentaron en reducida cantidad en el presente estudio. Científica (), 23

9 ARTÍCULOS ORIGINALES Siever Morales C., César Pantoja A., David García I. y Nancy Solís Ch. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS y estreptomicina sobre la habitabilidad y el contenido bacteriano de semen Silveira P, Enrique A, Roberto M. Flora bacteriana del semen de toro antes y Movement of Semen and Embryos. Roma: FAO. RECIBIDO: 7/9/2 ACEPTADO: 5/2/3 AUTOR: SIEVER MORALES C. CORRESPONDENCIA: Científica (), 23