Bacterias, Arqueas y una introducción a las tinciones bacterianas. Dr. Héctor L. Ayala del Río UPRH-BIOL3707. Organizando la Diversidad 5 Reinos

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María Cristina Redondo Olivares
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1 Bacterias, Arqueas y una introducción a las tinciones bacterianas Dr. Héctor L. Ayala del Río UPRH-BIOL3707 Organizando la Diversidad 5 Reinos 1

2 Célula Eucariota Célula Procariota 2

3 Microbiología Acelulares Celulares Virus Prion Viroides Eucariotas Procariotas Hongos Protozoarios Algas Archae Bacteria Procariotas Ausencia de Núcleo Ausencia de organelos DNA no empacado Coeficiente de sedimentación del Ribosoma 3

Estructura Procariotas Eucariotas Núcleo - + Membrana citoplasmática + + Esteroles en la membrana - (*) + DNA Arreglo

subunidades Composición química de la pared celular Organelos Membranosos Internos Cloroplastos

Endoplásmico-------------------------- Aparato de Golgi----------------------------------

Lineal >1 + 80S 60S & 40S varios tipos (nunca mureina) + + + + + + Reproducción sexual - + Diámetro 1 10!m 10 100!

4 Estructura Procariotas Eucariotas Núcleo - + Membrana citoplasmática + + Esteroles en la membrana - (*) + DNA Arreglo geométrico Número cromosomas Asociación con histonas Coeficiente Sedimentación de ribosomas Coeficiente Sedimentación de subunidades Composición química de la pared celular Organelos Membranosos Internos Cloroplastos Mitocondria Retículo Endoplásmico Aparato de Golgi Vacuolas Usualmente circular Usualmente 1-70S 50S & 30S mureina Lineal >1 + 80S 60S & 40S varios tipos (nunca mureina) Reproducción sexual - + Diámetro 1 10!m !m Flagelos Arreglo microtubular Citoesqueleto - + Tomada del Manual de Laboratorio de Biología General I Diversidad de morfotipos 4

5 Dificultades al organizar la diversidad microbiana Poca resolución estructural Discrepancias entre la morfología y el metabolismo del microorganismo Taxonomía molecular Una alternativa libre de vicio 5

6 Taxonomía molecular Taxonomía tradicional Fenotipo --> Genotipo expresado Taxonomía Molecular Genotipo --> Secuencia Mayor información Objetivo Poder de resolución. 6

7 Porqué el RNA Ribosomal (rrna) Conservados Importante Contenido informativo Alineables Alcance 7

8 Domínio Arquea Muchos representativos de ambientes extremos Termofilos Acidofilos Halofilicos Quimiolitotrofos Metanogenos 8

9 Dominio Bacteria Poseen pared celular de mureina Gran diversidad metabólica Grupos Proteobacteria Cianobacteria Planctomicetos Espiroquetas Thermotogales A pesar de los avances en el campo de la taxonomía bacteriana todavía es necesaria la caracterización morfológica de los microorganismos desconocidos Caracterización microscópica 9

10 Como aumentamos el contraste de estas fotos Tinciones Tintes: Sales que aumentan el contrate de microorganismos a ser observados en el microscopio De naturaleza sintética Carl Weigert,

11 Componentes de un tinte Cromóforo- Radicales químicos que causan la aparición del color. Cromógeno- conjugado de benzeno y cromóforo Auxocromo- grupo ionizable que permite al tinte interaccionar con otra entidad física 11

12 12

Clasificación de los tintes Tipo de auxocromo y mecanismo de interacción Catiónicos (básicos) carga positiva Azul de Metileno, Cristal violeta, Safranina, verde de malaquita, Carbol Fucsina Aniónicos

13 Clasificación de los tintes Tipo de auxocromo y mecanismo de interacción Catiónicos (básicos) carga positiva Azul de Metileno, Cristal violeta, Safranina, verde de malaquita, Carbol Fucsina Aniónicos (acidicos) carga negativa Nigrosina, Congo Rojo, India ink, eosina Neutros Interacción por afinidad (polar vs no polar) Sudán Negro -- tinción de gránulos de inclusión de lípidos Mezcla de catiónicos y aniónicos 13

14 Anatomía bacteriana Como usamos los tintes Dependiendo lo que queremos teñir Para teñir toda la célula Tinte: cationico (básico) Tinción simple Para ver tamaño, forma y arreglo El tinte no entra a la célula Tinte: aniónico (ácido) Tinción negativa 14

se laven de la lamilla durante la tinción La forma no se distorcione Preparación de frotis bacteriano

15 Preparación de un extendido (frotis) Preparación de células seca sobre una laminilla Características de un buen frotis Células distribuidas uniformemente en la laminlla y se encuentren separadas Las células no se laven de la lamilla durante la tinción La forma no se distorcione Preparación de frotis bacteriano Colocar células sobre laminilla Cultivo liquido -- 2 loops Plato -- colocar 2 loops de agua y luego células 15

16 Preparación de frotis bacteriano Distribuir células homogéneamente en la laminilla Secar al aire Preparación de Frotis 16

17 17

18 Preparación de frotis a partir de cultivos en caldo Fijación de frotis y tinción Se emplea calor para remover remanentes de agua para que las células se adhieran a la laminilla Inundar laminilla con el tinte deseado, enjuague y secado con papel. 18

19 Tinciones Tinción simple Inundar con azul de metileno Lavar Secar Tinción negativa No requiere calentamiento Útil para determinar tamaño y forma celular Tinción Simple 19

20 Tinción negativa Mezclar muestra de microorganismos con una gotita de tinte (nigrosina) Tinción negativa Utilizar una laminilla para distribuir la mezcla de tinte y bacterias 20

21 Tinción negativa Se genera un gradiente de tinte a lo largo de la laminilla Secar al aire Resultados 21

22 Figure 4.38 Negative stain Morfotipos 22

23 Morfotipos Arreglos -- cocos 23

24 Arreglos - bacilos 24

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