ENSAYO TAVAN BOTRYLIN Y BACTOFUS

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1 ENSAYO TAVAN BOTRYLIN Y BACTOFUS PRUEBA DE EFICACIA DE LOS PRODUCTOS BOTRYLIN Y BACTOFUS EN EL CONTROL DE LA PUDRICIÓN GRIS (Botrytis cinerea Pers.) Y CÁN BACTERIAL (Pseudomona syringae pv. syringae) EN ARÁNDANOS (Vaccinium corymbosum) cv O NEAL.

2 ÍNDICE PRUEBA DE EFICACIA DE LOS PRODUCTOS BOTRYLIN Y BACTOFUS EN EL CONTROL DE LA PUDRICIÓN GRIS (BOTRYTIS CINEREA PERS.) Y CÁN BACTERIAL (PSEUDOMONA SYRINGAE PV. SYRINGAE) EN ARÁNDANOS (VACCINIUM CORYMBOSUM) CV O NEAL RESUMEN... 3 OBJETIVO... 4 ANTECEDENTES GENERALES... 5 Lugar... 5 Datos del cultivo... 5 Datos meteorológicos... 7 MATERIALES Y MÉTODOS... 9 Evaluaciones Pinta Precosecha Cosecha Calidad de la fruta Diseño experimental y análisis estadístico RESULTADOS Pinta Precosecha Cosecha CONCLUSIONES ANEXO

3 PRUEBA DE EFICACIA DE LOS PRODUCTOS BOTRYLIN Y BACTOFUS EN EL CONTROL DE LA PUDRICIÓN GRIS (Botrytis cinerea Pers.) Y CÁN BACTERIAL (Pseudomona syringae pv. syringae) EN ARÁNDANOS (Vaccinium corymbosum) cv O NEAL. RESUMEN A fin de evaluar la eficacia de los productos Botrylin y Bactofus sobre el control de la pudrición gris causado por el hongo Botrytis cinerea y cáncer bacterial causado por la bacteria Pseudomona syringae pv. syringae, escogiendo para esto un huerto de arándanos con sintomatología de cáncer bacterial y antecedentes de pudrición gris (Botrytis cinerea) ubicado en la comuna de San Fernando (70 59'52.88"O 34 33'20.43"S), VI Región, Chile. Se utilizaron plantas de arándanos (Vaccinium corymbosum) cv. O Neal, plantadas el año 2006 en un marco de plantación de 2,4 x 0,9 m y conducidos bajo el sistema arbustivo. Este ensayo se llevó a cabo desde el día 07 de Noviembre de 2013 hasta el día 06 de Diciembre de A fin de cumplir con el objetivo planteado, se establecieron 3 tratamientos, constituidos por cuatro repeticiones: (T0) control sin aplicación; (T1) cuatro aplicaciones de Botrylin y dos aplicaciones de Bactofus a razón de 400 y 416 cc/hl, respectivamente; y (T2) tres aplicaciones de Captan (a razón de 300 g/hl), una de 3-Tac (a razón de 500 g/hl) y una de BC-1000 a razón 300 g/hl. Las variables evaluadas por tratamiento fueron: (a) identificación de la presencia de patógenos en el sector del ensayo previo al inicio de las aplicaciones de precosecha contempladas en el ensayo, mediante análisis fitopatológico in vitro; (b) identificación in vitro e incidencia, de la presencia de fitopatógenos tales como Pseudomona syringae pv. syringae y Botrytis cinerea, a los 21 y 7 días previo a la cosecha; (c) parámetros de calidad de la fruta al momento de cosecha como firmeza, concentración de sólidos solubles y calibre; y, (d) porcentaje de frutos dañados por los diferentes patógenos evaluados a los 15 y 30 días de almacenamiento en atmosfera regular (± 0 C) y mantenido unos días a temperatura ambiente. El sector del huerto seleccionado para el ensayo presentó, en todas las plantas, una carga inicial similar de Botrytis cinerea, único hongo detectado a nivel in vitro, y no se detectó la presencia de Pseudomona syringae pv. syringae, garantizándose así una condición homogénea para el inicio y desarrollo de este ensayo. En las evaluaciones realizadas durante el periodo de precosecha se detectó incidencia sólo de Botrytis cinerea, con una presión 3

4 semejante en todos los tratamientos. Sin embargo, durante poscosecha los programas fúngicos correspondientes al tratamiento 1 (Tavan) y al tratamiento 2 (campo: tres aplicaciones de capta, una aplicación de 3 Tac y una de BC-100) tuvieron un control efectivo sobre Botrytis cinerea, que les permitió diferenciarse estadísticamente al tratamiento 0 correspondiente al testigo absoluto del ensayo. OBJETIVO Evaluar el efecto de los productos Botrylin y Bactofus representados por la empresa Tavan en el control de la pudrición gris (Botrytis cinerea Pers.) en arándanos (Vaccinium corymbosum) cv O Neal. 4

5 ANTECEDENTES GENERALES Lugar El ensayo se realizó en un huerto ubicado en la comuna de San Fernando (70 59'52.88"O 34 33'20.43"S), VI Región, Chile. Datos del cultivo Nombre científico Vaccinium corymbosum L. Variedad utilizada O Neal Año de plantación 2006 Distancia de plantación 2,4 m x 0,9 m Sistema de conducción Arbustivo Duración del ensayo 07 de Noviembre de Diciembre 2013 Figura 1. Fotografía representativa del sector del ensayo en precosecha. 5

6 Figura 2. Fotografía representativa de una planta tipo en el ensayo. 6

7 Datos meteorológicos Todos los datos climáticos fueron obtenidos de una estación meteorológica ubicada en el Liceo Agrícola El Carmen en la comuna de San Fernando, cercana al lugar donde el ensayo fue emplazado. El Cuadro 1 y las Figuras 3-4 muestran el registro de las temperaturas mínimas y máximas y las precipitaciones durante el periodo de duración del ensayo. Cuadro 1. Media aritmética mensual de temperatura mínima, temperatura máxima y oscilación térmica y precipitación acumulada mensual durante el periodo de ensayo. Temperatura Precipitación Mes Máxima Mínima Oscilación C Septiembre 17,1 4,3 12,9 7,7 Octubre 21,4 7,6 13,8 0,0 Noviembre 25,9 9,5 16,4 0,0 Diciembre 28,9 12,1 16,8 0,0 mm Cuadro 2. Registro de eventos de helada previo al periodo de ensayo: fecha de ocurrencia; temperatura mínima, y; duración. T Duración Fecha C Horas ,8 - Cuadro 3. Registro de las temperaturas máximas, mínimas y la oscilación de éstas, durante los días en que se efectuaron las aplicaciones del ensayo. Temperaturas en el día de las Aplicaciones Mes Máxima Mínima Oscilación C ,1 9,9 14, ,0 9,8 23, ,0 9,0 20, ,3 7,1 16,2 7

8 Figura 3. Media mensual de temperatura máxima, mínima y oscilación térmica para el periodo de estudio. Figura 4. Precipitación acumulada mensual para el periodo de estudio. 8

9 MATERIALES Y MÉTODOS El ensayo estuvo constituido por tres tratamientos compuestos por cuatro repeticiones cada uno, estableciéndose todas las repeticiones dentro de dos hileras del huerto. Cada repetición constó de 15 plantas, las cuales fueron aplicadas en su totalidad, pero evaluadas solo las 5 centrales, dejando cinco plantas de borde (aplicadas) entre repeticiones. El detalle de cada uno de los tratamientos se presenta en el Cuadro 4. Cuadro 4. Descripción de los tratamientos realizados. Las aplicaciones fueron realizadas mediante el empleo de una motobomba conectada a un pitón con boquilla que, a la presión utilizada, permitía un caudal de 1,6 litros por minuto. Las dosificaciones fueron llevadas a litros a aplicar por planta, en base al marco de plantación dado, y fueron realizadas buscando un mojamiento equivalente a 500 l/ha. El ensayo utilizó una superficie total de 240 m 2 en los cuales se sortearon los tratamientos en un diseño completamente aleatorizado. Cuadro 5. Descripción de unidades experimentales evaluadas. N de aplicaciones Momento de aplicación Número de tratamientos 3 Repeticiones 4 Número de árboles por repetición 15 Fecha de aplicación Dosis Dosis Mojamiento Tratamiento Producto -cc o l o g g/hl- /ha ----l/ha---- T Botrylin DAC T1 Botrylin+Bactofus DAC Botrylin DAC Botrylin+Bactofus DAC T2 Captan 3-Tac BC ,5 2,5 1, DAC 21 DAC 14 DAC 7 DAC 2 DAC 07 nov nov nov nov nov nov nov nov dic

10 Fotografía 1. Arándanos con desarrollo miceliar de Botrytis cinerea, observados durante las evaluaciones realizadas en poscosecha. 10

11 Evaluaciones Pinta Identificación e incidencia: 30 días previos a cosecha PREVIO A LAS APLICACIONES Previo a las aplicaciones correspondientes a precosecha, se tomaron muestras de 4 ramillas por repetición, cada ramilla tenía al menos 10 frutos. Estas ramillas con frutos fueron enviados a laboratorio para evaluar la incidencia in vitro de Botrytis cinerea y Pseudomona syringae pv. syringae. Identificación e incidencia: 21 días previos a cosecha Posterior a la segunda aplicación correspondiente a 21 días previos a cosecha, se tomaron muestras de 40 frutos por repetición. Estas ramillas con frutos fueron enviados a laboratorio para evaluar la incidencia in vitro de Botrytis cinerea y Pseudomona syringae pv. syringae y su dinámica poblacional. Precosecha Incidencia: 7 días previos a cosecha Posterior a la última aplicación correspondiente a 7 días previos a cosecha, se tomaron muestras de 40 frutos por repetición. Estas ramillas con frutos fueron enviados a laboratorio para evaluar la incidencia, in vitro, de Botrytis cinerea y su dinámica poblacional. Cosecha La cosecha se realizó el día 06 de noviembre del 2013, oportunidad en la cual se cosecharon 2 cajas o clamshell (510 gramos) por repetición, eligiéndose frutos sanos y con criterio de cosecha de mercado, que fueron embalados y almacenados en atmosfera regular a 0 C, embalándose 8 cajas por tratamiento. Calidad de la fruta En una muestra de 40 frutos de las plantas centrales de cada unidad experimental se medió: Peso de fruto, mediante una balanza digital que registró el peso de cada fruto, expresando el resultado en gramos; calibre, se medió el diámetro ecuatorial de cada fruto con un calibrador metálico, expresando el resultado en mm; firmeza (unidades de firmtech) y la concentración de sólidos solubles ( Brix). Poscosecha Transcurrido 15 y 30 días de almacenamiento de la fruta del ensayo en atmosfera regular, se procedió a dejarla a temperatura ambiente. 11

12 Inmediatamente después de retirar la fruta de la cámara de frío, se evaluó la condición en que se encontraba, determinando si presentaban o no algún grado de pudriciones causada por algún hongo. Los frutos que presentaron pudriciones, se clasificaron de acuerdo al agente causal (Botrytis cinerea, Botryosphaeria sp., Mucor sp. y Penicillium sp.) y fueron pesados de acuerdo a estas clasificaciones, sacando una relación entre el peso total de la caja y el peso de la fruta clasificada con pudriciones, para obtener el porcentaje de infección en poscosecha. Después de esta evaluación, la fruta se dejó a temperatura ambiente ± 20 C y se evaluó al 6, y 9 día, con los mismos parámetros anteriormente descritos. Diseño experimental y análisis estadístico Se utilizó un diseño completamente aleatorizado con 3 tratamientos y 4 repeticiones de 15 plantas cada una, montado sobre dos hileras. Para comparar los tratamientos, los resultados de las evaluaciones tanto de aquellos obtenidos desde laboratorio como de terreno (evaluación in situ, cosecha y poscosecha) fueron analizados mediante análisis de la varianza (ANOVA) a un nivel de significancia del 95%. Cuando los supuestos de homocedasticidad y normalidad de residuos estuvieron comprometidos para alguna variable, transformaciones estadísticas fueron realizadas sobre los datos, sin embargo, si estos aún no cumplían con los supuestos necesarios para el ANOVA, fue utilizado el análisis de la varianza no paramétrico de Kruskal-Wallis. 12

13 RESULTADOS Pinta Identificación e incidencia: 30 días previos a cosecha En las evaluaciones previo al inicio del ensayo, es decir, la carga inicial del predio antes de iniciar las aplicaciones correspondientes a precosecha, no se detectó la presencia in vitro de Pseudomona syringae pv. syringae, en las muestras enviadas al laboratorio. Sin embargo, se detectó la presencia de Botrytis cinerea en todos los tratamientos, no diferenciándse estadísticamente entre si (Cuadro 6). Cuadro 6. Medias, desviación estándar (D.E.) y p-valor asociado al ANOVA, realizado para la evaluación in vitro de los muestras tomadas previo al inicio del ensayo. TRATAMIENTO Botrytis cinerea (%) Media D.E 0 Testigo Absoluto 6,25 7,50 1 Programa Tavan 2,50 5,00 2 Programa Campo 5,00 7,07 p-valor 0,7818 Figura 5. Gráfica que presenta el porcentaje de incidencia de Botrytis cinerea, inicial del campo. No se encontraron diferencias de significancia estadística entre tratamientos. 13

14 Identificación e incidencia: 21 días previos a cosecha Posterior a la segunda aplicación correspondiente a 21 días previos a cosecha, nuevamente no se detectó la presencia de Pseudomona syringae, sin embargo, Botrytis cinerea se detectó de forma aislada solo en los tratamientos 1 y 2. Cuadro 7. Medias, desviación estándar (D.E.) y p-valor asociado al ANOVA, realizado para la evaluación in vitro de los muestras tomadas posterior a las aplicaciones realizadas 21 días previo a cosecha. TRATAMIENTO Botrytis cinerea (%) Media D.E 0 Testigo Absoluto 0,0 0,0 1 Programa Tavan 2,5 5,0 2 Programa Campo 1,3 2,5 p-valor 0,5694 Figura 5. Gráfica que presenta el porcentaje de incidencia de Botrytis cinerea, posterior a las aplicaciones de 21 días de precosecha. No se encontraron diferencias de significancia estadística entre tratamientos. 14

15 Precosecha Incidencia: 7 días previos a cosecha Las muestras tomadas posterior a las aplicaciones de precosecha, no desarrollaron incidencia de Botrytis cinerea en los frutos analizados en los diferentes tratamientos. Cosecha La cosecha se realizó el día 06 de noviembre del 2013, momento en el cual se realizaron evaluaciones de calidad de la fruta, con el fin de verificar si existía alguna diferencia en la fruta luego las aplicaciones. Cuadro 8. Medias, desviación estándar (D.E.) y p-valor asociado al ANOVA, realizado para las evaluaciones de los parámetros de calidad correspondientes a firmeza y concentración de sólidos solubles al momento de cosechar. Firmeza Concentración de Sólidos Solubles TRATAMIENTO lbs/pulg2 Brix MEDIA D.E MEDIA D.E 0 Testigo Absoluto 258,04 7,97 9,51 0,85 1 Programa Tavan 240,91 9,28 9,70 0,79 2 Programa Campo 238,77 6,99 10,90 1,21 p-valor 0,0162 0,1441 Figura 6. Gráfica que presenta la firmeza de la fruta al momento de cosecha, evaluada por tratamiento. No se encontraron diferencias de significancia estadística entre tratamientos. 15

16 Figura 7. Gráfica que presenta la concentración de sólidos solubles de la fruta al momento de cosecha, evaluada por tratamiento. No se encontraron diferencias de significancia estadística entre tratamientos. La fruta cosechada se agrupó principalmente en calibres menores a 15 (mm), no presentándose diferencias estadísticas entre los tratamientos (p-valor >0,05) como se observa en el Cuadro 9 y figura 8. Cuadro 9. Medias, desviación estándar (D.E.) y p-valor asociado al ANOVA, realizado para las evaluaciones de calibre al momento de cosechar. Distribución de calibre Tratamiento < Media D.E. Media D.E. Media D.E. Media D.E. Testigo Absoluto 75,0 21,0 25,0 21,0 0,0 0,0 0,0 0,0 Programa Tavan 71,0 24,5 22,0 18,6 6,0 7,7 1,0 2,0 Programa Campo 71,0 10,0 21,0 6,8 7,0 6,0 1,0 2,0 p-valor 0,9459 0,9400 0,2000* > 0,9999* *Prueba realizada mediante el análisis no paramétrico de Kruskal-Wallis. 16

17 Figura 8. Gráfica que presenta la concentración de sólidos solubles de la fruta al momento de cosecha, evaluada por tratamiento. No se encontraron diferencias de significancia estadística entre tratamientos. Poscosecha La fruta fue cosechada según los parámetros de calidad requeridos, y se mantuvo por 15 y 30 días a 0 o C, con la finalidad de simular venta en un mercado exterior de destino y así poder evaluar el desarrollo de los diferentes hongos. Primera apertura: 15 días a 0 C + 9 días a T a ambiente Al realizar una evaluación del daño por pudriciones acumulativas clasificadas por patógeno y a la vez por tratamiento, se identificó la presencia solo de Botrytis cinerea, con una mayor incidencia en el tratamiento testigo absoluto (10,62 ± 6%) y un menor porcentaje de incidencia en los tratamientos 1 y 2 correspondientes al programa Tavan y al programa del campo, respectivamente, diferenciándose éstos tratamientos del tratamiento testigo absoluto (Cuadro 10). 17

18 Cuadro 10. Medias, desviación estándar (D.E.) y p-valor asociado al ANOVA, realizado para las evaluaciones de pudriciones presentes en poscosecha, luego de mantener la fruta por un periodo de 15 días a 0 C. TRATAMIENTO Poscosecha (15 días en atmosfera regular) Botrytis cinerea % MEDIA D.E 0 Testigo Absoluto 10,62 b 1 5,83 1 Programa Tavan 4,44 a 2,45 2 Programa Campo 2,38 a 1,68 p-valor 0, Letras distintas indican que existen diferencias con significancia estadística. Figura 9. Gráfica que presenta la incidencia (%) de Botrytis cinerea, luego de haber mantenido la fruta por 15 días en atmosfera regular (± 0 C), evaluada por tratamiento. Se encontraron diferencias de significancia estadística entre tratamientos. 18

19 Segunda apertura: 30 días a 0 C + días a T a ambiente Las pudriciones acumulativas clasificadas por patógeno y a la vez por tratamiento, se identificó la presencia de Botrytis cinerea, Botryosphaeria sp., Penicillium sp. y Mucor sp. El principal patógeno que se desarrolló durante esta evaluación fue Penicillium sp., observándose un mayor control de este patógeno con el programa Tavan, sin embargo estas diferencias no son estadísticamente significativas entre los tratamientos, situación que se repite con Botrytis cinerea (Cuadro 11, Figura 10). Cuadro 11. Medias, desviación estándar (D.E.) y p-valor asociado al ANOVA, realizado para las evaluaciones de pudriciones presentes en poscosecha, luego de mantener la fruta por un periodo de 30 días a 0 C. Poscosecha (30 días en atmosfera regular) TRATAMIENTO Porcentaje acumulado de patógenos Botryosphaeria sp. Penicillium sp. Botrytis cinerea Mucor sp. MEDIA D.E MEDIA D.E MEDIA D.E MEDIA D.E 0 Testigo Absoluto 5,7 5,3 11,3 3,0 3,1 1,2 0,0 0,0 1 Programa Tavan 5,4 4,6 8,5 2,4 1,9 2,0 0,0 0,0 2 Programa Campo 1,6 1,5 9,3 4,1 4,1 4,0 0,1 0,2 p-valor 0,6298* 0,4748 0,5385 0,4053 *Prueba realizada mediante el análisis no paramétrico de Kruskal-Wallis. Figura 10. Gráfica que presenta la incidencia (%) de Botryosphaeria sp., Penicillium sp., Botrytis cinerea y Mucor sp. luego de haber mantenido la fruta por 15 días en atmosfera regular (± 0 C), evaluada por tratamiento. Se encontraron diferencias de significancia estadística entre tratamientos. 19

20 CONCLUSIONES Según los resultados obtenidos en las condiciones del presente ensayo se puede concluir que: El huerto seleccionado presentaba una condición homogénea al inicio del ensayo, detectándose sólo la presencia de Botrytis cinerea y en un nivel de incidencia semejante en todos los tratamientos. Además se analizó de forma in vitro, la presencia de bacterias fitopatógenas, no detectándose la presencia de Pseudomona syringae pv. syringae. En el transcurso del ensayo, las muestras evaluadas in vitro no detectaron la presencia de la bacteria Pseudomona syringae pv. Syringae, pero sí del hongo Botrytis cinerea. Éste hongo, se desarrolló de forma semejante en todos los tratamientos y en todas las evaluaciones realizadas in vitro previo a cosecha, sin embargo, durante las evaluaciones realizadas en poscosecha se pudo observar un efecto de control, estadísticamente significativos, de los tratamientos 1 (programa Tavan) y 2 (programa campo) en la disminución de la incidencia de Botrytis cinerea en frutos de arándanos luego de mantener la fruta por 15 días en atmosfera regular (±0 C). Los parámetros de calidad evaluados a cosecha, tales como firmeza y concentración de sólidos solubles, junto con la evaluación de la distribución de los calibres de la fruta cosechada, no presentaron diferencias estadísticamente significativas entre los tratamientos. 20

21 ANEXO Anexo 1. Informe fitopatológico emitido por un Laboratorio, de muestras de frutos obtenidas de las plantas del ensayo antes de comenzar las aplicaciones de precosecha. 21

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23 Anexo 2. Informe fitopatológico para identificación de Pseudomona syringae pv. syringae emitido por un Laboratorio, de muestras de frutos obtenidas de las plantas del ensayo previo al inicio de las aplicaciones de precosecha. 23

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25 Anexo 3. Informe fitopatológico para identificación de Botrytis cinerea emitido por un Laboratorio, de muestras de frutos obtenidas de las plantas del ensayo 21 días antes de cosechar. 25

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27 Anexo 4. Informe fitopatológico para identificación de Pseudomona syringae pv. syringae emitido por un Laboratorio, de muestras de frutos obtenidas de las plantas del ensayo 21 días antes de cosechar. 27

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29 Anexo 5. Informe fitopatológico emitido por un Laboratorio, de muestras de frutos obtenidas de 29

30 las plantas del ensayo 7 días antes de co 30

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32 32