ESTE MGA SERÁ ELIMINADO
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- Bernardo Soriano
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1 COMENTARIOS Con fundamento en el numeral de la Norma Oficial Mexicana NOM-001-SSA1-2010, se publica el presente proyecto a efecto de que los interesados, a partir del 1º de noviembre y hasta el 31 de diciembre de 2018, lo analicen, evalúen y envíen sus observaciones o comentarios en idioma español y con el sustento técnico suficiente ante la CPFEUM, sito en Río Rhin número 57, colonia Cuauhtémoc, código postal 06500, Ciudad de México. Fax: Correo electrónico: consultas@farmacopea.org.mx. DATOS DEL PROMOVENTE Nombre: Institución o empresa: Teléfono: Cargo: Dirección: Correo electrónico: ESTE MGA SERÁ ELIMINADO MGA VALORACIÓN BIOLÓGICA DE VASOPRESINA. Preparación de la referencia. Colocar de 50 a 100 mg de la SRef en un matraz de 250 ml. Agregar 0.5 ml de una solución de ácido acético N, por cada unidad de actividad vasopresora de la SRef. Introducir un embudo pequeño en el matraz y calentar en baño de agua, agitando suavemente, durante 5 min. Enfriar el matraz al chorro de agua y filtrar. Cada mililitro de filtrado contiene 1.75 unidades de vasopresina activa. Preparación de la muestra. Colocar suficiente cantidad de muestra y agregar solución salina de manera que cada mililitro de la solución tenga una potencia teórica igual a la preparación de la SRef. Animal de prueba. Seleccionar una rata macho que pese entre 275 y 325 g, 18 h antes de la prueba. Preparar una solución que contenga 50 mg de clorhidrato de fenoxibenzamina en 0.1 ml de alcohol acidificado con una gota de ácido clorhídrico y llevar a 5 ml con SR de cloruro de sodio. De esta solución inyectar al animal, por vía subcutánea, CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 1 de 11 MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS
2 1 ml/kg de peso. El día de la prueba, anestesiar al animal con una sustancia que favorezca el mantener la presión sanguínea, uniforme. Una vez anestesiado, sujetarlo y canular la tráquea y las arterias carótidas. Disecar la vena femoral a nivel de la región inguinal. Canular la vena femoral y la arteria carótida, con un tubo flexible de polietileno, de 1 mm de diámetro externo, mantener la arteria carótida conectada a un transductor de presión, de manera que permita el registro continuo de la presión sanguínea. Mantener al animal caliente durante su preparación y a lo largo del experimento. Determinación de la sensibilidad del animal. Obtener los valores tensionales en condiciones basales y después de 30 min de registros estables, administrar dosis conocidas de la SRef, a intervalos regulares entre 12 y 15 min que provoquen elevaciones de 20 a 70 mm mercurio. De estas observaciones, seleccionar dos dosis de la SRef cuya relación sea 2 a 3 y designarlas como S 1 y S 2, respectivamente. Hacer lo mismo con la solución problema y designarlas como U 1 y U 2. La muestra conserva la misma relación correspondiente a la SRef. Procedimiento. Inyectar, en forma pareada las dosis seleccionadas, del estándar y del problema: Par 1: S 2U 1; Par 2: S 1U 2; Par 3: U 2S 1; Par 4: U 1S 2. Después de cada inyección lavar con 0.2 ml de SR de solución salina. Repetir la operación anterior cuatro o más veces en una o más ratas. Cálculos 1. Registrar el incremento en la presión sanguínea después de la aplicación de cada dosis. 2. Calcular la respuesta "Y". Para cada par de dosis, en cada réplica, restar el incremento obtenido con la dosis baja del incremento obtenido con la dosis alta para obtener la respuesta Y. CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 2 de 11 MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS
3 3. Tabular los valores de Y para cada par. 4. Cálculo de los valores perdidos. Si se ha perdido un valor de Y ajustar los grupos, que sean del mismo número de datos por medio del procedimiento Remplazo de los valores perdidos. 5. Si la relación entre las dosis alta y baja no ha cambiado entre cada juego de pares de dosis sumar los valores de "Y" para cada par de dosis para obtener las respuestas totales T 1, T 2, T 3 y T Cálculos preliminares para el cálculo de la potencia de la muestra. 6.1 Calcular T a 6.2 Calcular T b 6.3 Calcular el logaritmo de la potencia relativa de la preparación de prueba. Donde: 6.4 Cálculo de la potencia en unidades 6.5 Calcular el intervalo de confianza L para el logaritmo de la potencia. Cálculos preliminares Calcular el error de la varianza S 2 de "Y" Aplicar la siguiente ecuación: Donde:.. CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 3 de 11 MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS
4 f = Número de réplicas. Tr = Total renglones. Tt = Total columnas Calcular C Aplicar la siguiente ecuación: Donde: C = Término que mide la precisión de la pendiente en un intervalo de confianza. t 2 = Determinar t 2 (veáse tabla ) que depende de M = 4(f-1) grados de libertad en S 2 N = 4 f que es el número total de diferencias en los cuatro grupos Calcular el intervalo de confianza L en logaritmos Aplicar la siguiente fórmula: Donde: M' = Logaritmo de la potencia relativa. i = Logaritmo del intervalo entre dosis sucesivas. e' = Constante característica de la prueba Repetición de la prueba. Si L (log intervalo de confianza) del logaritmo de la potencia es mayor, que 0.15, repetir la prueba o incrementar el número de observaciones hasta que el intervalo de confianza de los resultados combinados sea 0.15 o menor. En donde la relación entre dosis ha sido cambiada, calcular separadamente el logaritmo de las potencias para aquellos conjuntos con las mismas relaciones. El logaritmo de la potencia combinada es la potencia ponderada media M para las potencias individuales así calculadas. Calcular similarmente el logaritmo del intervalo de CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 4 de 11 MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS
5 confianza L para cada logaritmo de la potencia individual y determinar el logaritmo del intervalo de confianza combinado Lc, este no debe exceder a La preparación patrón se ensayó a 5 y 15 μg/kg de rata. Se probaron dosis equivalentes de la preparación muestra. Cada una de cinco ratas recibió todo el tratamiento (combinación preparación-dosis). Para que el cálculo de la potencia sea válido, es necesario determinar si la prueba satisface ciertos requisitos, para ello, es necesario efectuar un análisis de la varianza acorde con el diseño experimental empleado; en este caso se trata de un diseño en bloques al azar para un patrón, una muestra, a dos dosis, por lo tanto, de aquí en adelante, cuando se remita a alguna tabla de la Farmacopea, se debe entender que se tiene que consultar la sección de este diseño experimental. Tabla Registro de los incrementos de la presión sanguínea (2 o 3 ratas machos). Rata macho PAR 1 PAR 2 PAR 3 PAR 4 Dosis Diferencia Rata Dosis Diferencia Rata Dosis Diferencia Rata Dosis S2 U1 macho S1 U2 macho U2 S1 macho U1 S2 Diferencia Yi = T 1 Yi = T 2 Yi = T 3 Yi = T 4 CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 5 de 11 MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS
6 PROCEDIMIENTO PARA EL ANÁLISIS DE LA VARIANZA 1) Codificación de los tratamientos según la tabla I del Procedimiento (véase numeral 4.4 del capítulo de Estadistica par ensayos biológicos). p = 5 g/kg patrón a dosis baja. p 2 = 15 g/kg patrón a dosis alta. m 1 = 5 g/kg patrón a dosis baja. m 2 = 15 g/kg patrón a dosis alta. 2) El formato seleccionado para el registro de los datos y los cálculos iniciales es el número dos de la tabla II E como se indica en el punto dos del Procedimiento. Suma total: Suma total de cuadrados: Suma de cuadrados de los totales: 3) El formato para construir la matriz de totales de tratamiento y contrastes es el número uno de la tabla III A según se indica en el punto tres del Procedimiento. 4) El formato para construir la tabla de análisis de varianza, es el número uno de la tabla IV A según se indica en el punto cuatro del Procedimiento. 5) Para determinar el valor crítico de la razón de la media de cuadrados (Fc) para cada fuente de variación, se emplea la tabla I (numeral 7.4). En este ejemplo, los grados de libertad del numerador es uno para las dos fuentes de variación de nuestro interés y los grados de libertad del denominador son 12 (error); por lo que Fc = de acuerdo con el punto cinco del Procedimiento. 6) El formato para elaborar la tabla para la regla de decisión de cada fuente de variación es el número uno de la tabla V (numeral 4.4) según lo especificado bajo el título Regla de decisión. CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 6 de 11 MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS
7 Tabla II E. Diseño en bloques al azar. Ensayo a dos dosis. Un patrón, una muestra. Bloques Tratamientos Totales p 1 p 2 m 1 m 2 r R 1 = 156 r R 2 = 164 r R 3 = 163 r R 4 = 147 r R 5 = 175 Totales P 1 = 130 P 2 = 260 M 1 = 145 M 2 = 270 y = 805 Tabla III A. Matriz de totales de tratamiento y contrastes. Ensayo a dos dosis. Un patrón, una muestra. Patrón P Muestra m Total de dosis baja P 1 = 130 M 1 = 145 Total de dosis alta P 2 = 260 M 2 = 270 Totales P = P 1+ P 2 = 390 M = M 1 + M 2 = 415 Contraste lineal Lp =P 2 - P 1 = 130 Lm = M 2 - M 1= 125 Tabla V A. Regla de decisión. Ensayo a dos dosis. Un patrón, una muestra. Regresión lineal. No paralelismo. Fuente de variación Regla de decisión 4590 > El logaritmo de la dosis tiene un efecto lineal sobre la respuesta < Las rectas, logaritmos dosis-respuesta, son paralelas. CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 7 de 11 MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS
8 Tabla IV A. Análisis de varianza. Ensayo a dos dosis. Un patrón, una muestra. Fuente de variación Grados de libertad Suma de cuadrados Cuadrados medios Fcalc Preparaciones Regresión lineal 1 No paralelismo 1 CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 8 de 11 MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS
9 Error --- Con base en los resultados de las reglas de decisión, se concluye que la prueba es válida para la estimación de la potencia y sus límites de confianza, para lo que se aplica el siguiente procedimiento: ESTIMACIÓN DE LA POTENCIA 1) Se calcula la media de las preparaciones patrón y muestra como se indica en la tabla del inciso uno del título Estimación de la potencia y límites de confianza (numeral 4.6). 2) Se calcula el logaritmo de la razón de las dosis (I) empleadas de acuerdo con la tabla del inciso dos (numeral 4.6). CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 9 de 11 MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS
10 3) Se calcula el valor de la pendiente (b) de la regresión, con base en la tabla del inciso tres (numeral 4.6) 4) Se calcula el logaritmo de la potencia relativa de la muestra con base a la tabla del inciso cuatro (numeral 4.6). 5) Se obtiene la potencia relativa de la muestra de acuerdo con la tabla del inciso cinco (numeral 4.6). CÁLCULOS DE LOS LÍMITES DE CONFIANZA 1) Se calcula el valor de la media de regresión. Donde: SC r = Suma de cuadrados de la regresión. CM e = Media de cuadrados del error. F c = Valor de F empleado para la regla de decisión. 2) Se calculan los límites de confianza para el logaritmo de la potencia relativa, con base en la tabla del inciso dos (numeral 4.6) ± CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 10 de 11 MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS
11 Límite inferior = Límite superior = ) Se determinan los límites de la potencia relativa de la muestra al obtener el antilogaritmo de los límites. y *Para una mejor comprensión de su solicitud adjunte bibliografía u otros documentos que sustenten sus comentarios. CONSULTA A USUARIOS DE LA FEUM Página 11 de 11 MÉTODOS GENERALES DE ANÁLISIS
MGA VALORACIÓN BIOLÓGICA DE VASOPRESINA.
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