2. Conocer el grado de apoptosis celular en el tejido adiposo subcutáneo de estos pacientes.
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- Yolanda Gallego Nieto
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1 MECANISMOS REGULADORES DE LA ADIPOGÉNESIS EN LA LIPODISTROFIA ASOCIADA AL VIH Investigador principal: Dr. Cristòbal Richart Jurado Centro: Hospital Universitari Joan XXIII. Tarragona Duración: 3 años MEMORIA FINAL 1. Resumen Objetivo principal Evaluar el papel de genes claves en el proceso de diferenciación adipocitaria en el tejido adiposo subcutáneo de pacientes afectos de lipodistrofia asociada a VIH. Objetivos secundarios 1. Analizar el grado de activación transcripcional del sistema del FNT-_ y la IL-6 mononucleares periféricas en pacientes VIH con y sin lipodistrofia. 2. Conocer el grado de apoptosis celular en el tejido adiposo subcutáneo de estos pacientes. 3. Correlacionar los diferentes tratamientos empleados con las alteraciones observadas en los factores de transcripción y el grado de apoptosis. 1
2 Metodología Estudio transversal observacional de casos y controles. Pacientes infectados por el VIH con tratamiento HAART y que han desarrollado LD manifiesta, grupo control VIH con tratamiento HAART sin LD y grupo VIH negativos sanos. Análisis de variables clínicas y antropométricas. Parámetros bioquímicos y lipídicos en suero. Determinación de insulina, FNT-R1 y R2, interleucina 6, leptina y resistina en plasma. Biopsia de tejido adiposo subcutáneo abdominal. Cuantificación por PCR-Real Time del mrna del gen SREBP-1c, LMNA y FNT-_ en tejido adiposo. Expresión de FNT-_ e IL-6 en células mononucleares periféricas. Análisis de apoptosis a través de las técnicas TUNEL y caspasas en adipocitos. Se realizará el análisis estadístico descriptivo y comparación de promedios entre las poblaciones a través del test T de Student-Fisher o el test ANOVA o se realizará el test U de Mann-Whitney o el test de Kruskall- Wallis si la distribución de las variables es no-paramétrica. 2. Resultados -Biopsias de tejido adiposo con fecha 31 de diciembre de 2005: Pacientes VIH + con lipodistrofia: 35 sujetos Pacientes VIH + sin lipodistrofia: 33 sujetos Sujetos controles : sujetos IMC < 25: 22 sujetos sujetos IMC >25<40: 35 sujetos sujetos IMC > 40: 32 sujetos Total de sujetos reclutados con disponibilidad de tejido adiposo subcutáneo: 151. La cantidad total de tejido adiposo extraído en 8 pacientes no lipodistróficos fue insuficiente para realizar el estudio de 2
3 expresión. Por tanto, la muestra final para el estudio de expresión es de 25 biopsias no lipodistróficas y 35 con lipodistrofia. En cuanto al grupo control, se ha seleccionado un grupo de 25 sujetos emparejados por edad, sexo e IMC con los grupos VIH +, para el estudio de la lipodistrofia asociada a VIH. Para el estudio de la obesidad se utilizó el grupo control entero. Resultados de las variables bioquímicas realizadas en los sujetos incluidos: GRUPO MEDIA DESV. EST. p EDAD (años) GÉNERO (mujeres/ 40,86 11,20 VIH + LD - 39,79 6,96 VIH + LD + 43,56 8,97 5/16 VIH + LD - 3/ hombres) VIH + LD + 5/20 PESO (kg) IMC (kg/m 2 ) GLUCOSA COLESTEROL 70,62 12,74 VIH + LD - 68,84 10,15 VIH + LD + 68,61 8,79 24,66 2,66 VIH + LD - 23,44 2,59 VIH + LD + 24,29 2,79 5,13 0,56 VIH + LD - 5,00 0,40 VIH + LD + 5,21 0,98 5,14 0,56 VIH + LD - 5,00 0,40 VIH + LD + 5,21 0, HDL-colesterol 1,18 0,
4 VIH + LD - 1,31 0,54 VIH + LD + 1,10 0,33 LDL-colesterol ND VIH + LD - 2,96 0,78 TRIGLICÉRIDOS Si (modelo mínimo) INSULINA (mu/l) IL-6 (pg/ml) FNT R1 (ng/ml) FNT R2 (ng/ml) LEPTINA (ng/ml) VIH + LD + 3,08 0,97 1,88 1,93 VIH + LD - 2,15 1,27 VIH + LD + 3,48 2,55 ND VIH + LD - 3,36 0,95 VIH + LD + 2,17 1,58 3,37 2,00 VIH + LD - 7,63 3,98 VIH + LD + 11,79 6,95 0,94 1,09 VIH + LD - 4,45 6,79 VIH + LD + 2,00 1,20 1,45 0,84 VIH + LD - 2,09 0,60 VIH + LD + 2,11 1,04 4,52 1,89 VIH + LD - 4,69 1,57 VIH + LD + 6,25 2,71 VIH + LD - 6,33 4,63 VIH + LD + 6,35 6,
5 Cuantificación de la expresión de mrna de tejido adiposo ya determinada en esta fecha: GRUPO MEDIA DESV. EST. p Lamin A Lamin C SREBP1c FNT-α 1091,88 421,76 VIH + LD - 561,99 178,96 VIH + LD + 608, , ,24 419,95 VIH + LD ,06 500,51 VIH + LD + 957,30 370,60 24,77 19,49 VIH + LD - 238,09 128,27 VIH + LD + 190,67 179,41 1,34 0,96 VIH + LD - 1,40 0,69 VIH + LD + 1,62 0, Estudio de la apoptosis celular en el tejido subcutáneo GRADO DE VIH + LD - VIH + LD + APOPTOSIS (n=60) (n=60) (n=24) NEGATIVO (%) 24 (100) 17 (28,3) 35 (58,3) FOCAL (%) 20 (33,3) 15 (25,0) 0 (0) MODERADO (%) 10 (16,7) 10 (16,7) 0 (0) DIFUSO (%) 13 (21,7) 0 (0) 0 (0) 5
6 Correlacionar los diferentes tratamientos utilizados con las alteraciones observadas en el grado de apoptosis (European Journal of Clinical Investigation (2005) 35: Relevancia y posibles implicaciones clínica de los resultados finales obtenidos La lipodistrofia asociada a VIH no sólo está asociada a un ambiente inflamatorio con niveles de citocinas elevadas y a mayor grado de apoptosis en los adipocitos, sino que también se observa que la expresión de genes adipogénicos está alterada en el tejido adiposo. Este trabajo ha permitido mejorar el conocimiento fisiopatológico de la aparición de los cambios metabólicos del tejido adiposo de los pacientes VIH+ que reciben tratamiento con antirretrovirales inhibidores de las proteasas. No existe una implicación clínica inmediata como resultado del presente estudio, ya 6
7 que de hecho se trataba de un estudio fisiopatológico y no de intervención. La participación de genes que intervienen en la adipogénesis además de todo el componente inflamatorio alrededor del adipocito, abre una nueva visión fisiopatológica de la lipodistrofia asociada al VIH. 4. Publicaciones P. Domingo, F. Vidal, J.C.Domingo, S.Veloso, M.A.Sambeat, F.Torres, J.J.Sirvent, J.Vendrell, X. Matias-Guiu and C.Richart, on behalf of the HIV- FRS Study Group. Tumor necrosis factor alpha in fat redistribution syndromes associated with combination antiretroviral therapy in HIV-I-infected patients: potential role in subcutaneous adipocyte apoptosis. European Journal of Clinical Investigation (2005)
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