DiaSorin S.p.A. Via Crescentino snc Saluggia (Vercelli) - Italy LIAISON Anti-HBs (310120), Anti-HBs Plus (310190)

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1 DiaSorin S.p.A. Via Crescentino snc Saluggia (Vercelli) - Italy Atención a las modificaciones! LIAISON Anti-HBs (310120), Anti-HBs Plus (310190) 1. FINALIDAD DEL ENSAYO El ensayo LIAISON Anti-HBs emplea la tecnología de la quimioluminiscencia (CLIA) en un ensayo inmunológico para la determinación cuantitativa de los anticuerpos dirigidos contra el antígeno de superficie de la hepatitis viral B (anti-hbs) en muestras de suero o plasma humano. El ensayo debe realizarse en el instrumento LIAISON. 2. SUMARIO Y EXPLICACIÓN DEL TEST La hepatitis es una enfermedad inflamatoria con etiología tanto no infecciosa como infecciosa, bacteriana o viral, que puede causar daños severos al hígado. La hepatitis viral B es endémica en todo el mundo (2). La infección se propaga sobre todo por vía parenteral, por ejemplo mediante transfusiones de sangre o hemoderivados no controlados para la presencia de HBV, o bien por el uso comunitario de agujas entre drogadictos (1, 18). El virus de la hepatitis B (HBV) se encuentra también en prácticamente todos los líquidos biológicos humanos y puede propagarse mediante el contacto genital. El virus HBV puede ser transmitido también de la madre al hijo por vía perinatal (17). El período de incubación de la hepatitis viral B es de 90 días en promedio (entre 40 y 180 días). Entre los síntomas más comunes se encuentran el agotamiento, la fiebre, la gastroenteritis y la ictericia. La infección por HBV puede causar las siguientes condiciones patológicas: (a) hepatitis ictérica; (b) hepatitis anictérica subclínica; (c) hepatitis fulminante; (d) hepatitis crónica activa o persistente (7). Más del 90% de los pacientes adultos con hepatitis B se recupera completamente de la enfermedad aguda, aproximadamente el 1% muere de hepatitis fulminante y aproximadamente el 6-10% se vuelve portador crónico activo o persistente (10, 15). El diagnóstico de la hepatitis B se ha basado en la detección de los marcadores serológicos, que ayuda a determinar la presencia de infección por HBV pasada o presente, la fase aguda o crónica de la enfermedad, la respuesta a la terapia y/o el estado inmunitario del paciente (4). El HBsAg es detectable en la circulación antes del comienzo de la enfermedad sintomática y durante toda la fase clínica de la enfermedad. Después de la enfermedad clínica, el título de HBsAg comienza a disminuir paulatinamente hasta llegar a unos valores inferiores al nivel de detección. Después de la desaparición del HBsAg del suero, aparecen los anticuerpos anti-hbs, aunque a menudo existe un intervalo llamado el período de ventana inmunológica de la infección entre la desaparición del HBsAg y la aparición del anti-hbs (seroconversión). En el 10% de los pacientes aproximadamente, el HBsAg persiste en el suero por toda la vida y los anticuerpos anti-hbs no aparecen; esto indica un estado de portador crónico (9). La presencia de anticuerpos anti-hbs en el suero indica la pasada exposición de un sujeto al virus de la hepatitis B y la inmunidad duradera adquirida (13). Sin embargo, los títulos bajos de anticuerpos anti-hbs pueden indicar la falta de inmunidad hacia futuras infecciones por HBV. Por consiguiente, la detección de los anticuerpos anti-hbs es fundamental para determinar la completa remisión de la infección y la adquisición de la inmunidad tanto de tipo natural (debida a la infección por HBV), como en respuesta a la vacuna. La amplia disponibilidad de las vacunas basadas en HBsAg de origen humano o recombinante (6, 14, 16) ha evidenciado la necesidad de cuantificar exactamente la respuesta de anticuerpos (3, 5): el ensayo de los anticuerpos anti-hbs en los vacunados es esencial para determinar la duración de la protección otorgada por el ciclo de vacunación y la necesidad de inoculaciones de refuerzo (8, 11, 12). El ensayo de los anticuerpos anti-hbs también es crucial para identificar a los individuos susceptibles a la infección por HBV en el estudio de las categorías que corren más riesgos y que hay que someter a vacunación. 3. PRINCIPIO DEL ENSAYO El método para la determinación cuantitativa de anticuerpos anti-hbs es un ensayo directo, a dos sitios (sandwich), basado en el principio de la quimioluminiscencia (CLIA). El antígeno HBsAg humano (subtipos ad y ay) se emplea para recubrir las partículas magnéticas (fase sólida) y está enlazado a un derivado del isoluminol (conjugado antígeno HBs-isoluminol). Durante la primera incubación, los anticuerpos anti-hbs presentes en los calibradores, en las muestras o en los controles enlazan la fase sólida y el antígeno HBs conjugado, formando así un sandwich. Durante la segunda incubación, el antígeno HBs conjugado reacciona con el complejo inmune ya enlazado a la fase sólida. Después de cada incubación, se elimina el material no enlazado mediante un ciclo de lavado. A continuación, se añaden los reactivos starter que inducen una reacción de quimioluminiscencia. La señal luminosa, y por lo tanto la cantidad de conjugado antígeno HBs-isoluminol, se mide con un fotomultiplicador en unidades relativas de luz (RLU, relative light units) e indica la concentración de anticuerpos anti-hbs presente en los calibradores, en las muestras o en los controles. 27 / 33 ES - 200/ , J - 11/2010

2 4. MATERIALES SUMINISTRADOS Integral de reactivos Partículas magnéticas (2,3 ml) Calibrador 1 (2,0 ml) Calibrador 2 (2,0 ml) Tampón G (2,4 ml) Conjugado (11 ml) Tampón D (21 ml) Diluyente de muestras (28 ml) Partículas magnéticas recubiertas con HBsAg de origen humano tratado mediante calentamiento (subtipos ad y ay equilibrados), albúmina sérica bovina, tampón fosfato, < 0,1% azida sódica. Suero/plasma humano que contiene niveles bajos de anticuerpos dirigidos contra el HBsAg de reactividad equilibrada para los subtipos ad y ay, EDTA, 0,2% ProClin 300 y conservantes. Las concentraciones de los calibradores () son calibradas contra el Segundo Estándar Internacional para Inmunoglobulinas humanas anti-antígeno de superficie del virus de la Hepatitis B (anti-hbs) de la Organización Mundial de la Salud, OMS (2008). Suero/plasma humano que contiene niveles altos de anticuerpos dirigidos contra el HBsAg de reactividad equilibrada para los subtipos ad y ay, EDTA, 0,2% ProClin 300, conservantes y un colorante azul inactivo. Las concentraciones de los calibradores () son calibradas contra el Segundo Estándar Internacional para Inmunoglobulinas humanas anti-antígeno de superficie del virus de la Hepatitis B (anti-hbs) de la Organización Mundial de la Salud, OMS (2008). Albúmina sérica bovina, tampón fosfato, EDTA, 0,2% ProClin 300, conservantes y un colorante rojo inactivo. HBsAg de origen humano tratado mediante calentamiento (subtipos ad y ay equilibrados), conjugado con un derivado del isoluminol, albúmina sérica bovina, tampón fosfato, 0,2% ProClin 300. Suero bovino, albúmina sérica bovina, tampón TRIS, 0,2% ProClin 300, conservantes. Suero/plasma humano, EDTA, 0,2% ProClin 300, conservantes y un colorante azul inactivo (solo para LIAISON Anti-HBs Plus, código ). Número de ensayos 100 Todos los reactivos se suministran listos para su uso. El orden de los reactivos refleja el orden con el que se han ensamblado los contenedores en el integral de reactivos. Materiales requeridos, pero no suministrados Otros materiales requeridos LIAISON Module (código ). Controles LIAISON Anti-HBs (negativo y positivo) LIAISON Starter Kit (código ). (código ). LIAISON Light Check (código ). LIAISON Cleaning Kit (código ). LIAISON Wash/System Liquid (código ). LIAISON Waste Bags (código ). 5. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Sólo para uso diagnóstico in vitro. Todas las unidades de suero y plasma utilizadas para la fabricación de los componentes de este kit se han analizado y se han encontrado no reactivas para la presencia de HBsAg, anti-hcv, anti-hiv-1 y anti-hiv-2, excepto la fase sólida y el conjugado, que son reactivos para HBsAg. El antígeno de superficie del virus de la hepatitis B ha sido tratado mediante calentamiento (60 C por 10 horas) durante el proceso productivo. A pesar de ello, no es seguro que la inactivación sea completa. Sin embargo, visto que ningún método de análisis puede asegurar que los agentes patógenos estén ausentes, todo el material de origen humano se deberá considerar potencialmente infeccioso y manipularlo como tal. 6. NORMAS DE SEGURIDAD No coma, beba, fume o se maquille durante la ejecución del ensayo. No pipetee las soluciones con la boca. Evite el contacto directo con el material potencialmente infeccioso usando batas de laboratorio, gafas de protección y guantes desechables. Lávese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo. Evite salpicaduras o formación de aerosoles. En caso de que esto sucediera, cada gota de reactivo se debe eliminar con una solución de hipoclorito sódico al 5% y el medio utilizado se deberá tratar como material residuo potencialmente infeccioso. Todas las muestras, los reactivos biológicos del kit y los materiales usados para efectuar el ensayo se deben considerar capaces de transmitir agentes infecciosos; por lo tanto los residuos se deberán eliminar de acuerdo con las reglamentaciones de las agencias autorizadas que tengan jurisdicción sobre el laboratorio, y con las normativas de cada país. El material desechable deberá ser incinerado; los residuos líquidos deberán ser descontaminados con una solución de hipoclorito sódico a una concentración final del 5% durante media hora como mínimo. Cualquier material que pueda ser reutilizado deberá ser tratado en autoclave con un tratamiento de exceso (overkill) (USP 24, 2000, p. 2143). Generalmente se considera que una hora a 121 C es un tiempo de esterilización adecuado; sin embargo se recomienda a cada usuario que verifique la eficacia del ciclo de descontaminación mediante una validación inicial y el uso rutinario de indicadores biológicos. Los reactivos que contienen ProClin 300 se clasifican como irritantes según las Directivas Europeas aplicables: R 43 - Posibilidad de sensibilización en contacto con la piel. S 24 - Evítese el contacto con la piel. S 37 - Úsense guantes adecuados. S 60 - Elimínense el producto y su recipiente como residuos peligrosos. 28 / 33 ES - 200/ , J - 11/2010

3 7. PREPARACIÓN DEL INTEGRAL DE REACTIVOS Antes de quitar la protección de los contenedores, es esencial agitar horizontalmente el integral de reactivos con delicadeza y sumo cuidado. Evite la formación de espuma. Elimine la protección de los contenedores y gire hacia adelante y hacia atrás la ruedecilla dentada situada por debajo del contenedor de las partículas magnéticas hasta que la suspensión adopte una coloración morena. Este procedimiento da inicio a la resuspensión de las partículas magnéticas. Seque con sumo cuidado la superficie de cada pared para eliminar el líquido residual. Coloque el integral de reactivos en el área de los reactivos del instrumento con la etiqueta de los códigos de barras situada a la izquierda y déjelo agitar durante 30 minutos antes del uso. Durante este tiempo las partículas magnéticas serán mantenidas en agitación automáticamente para garantizar una resuspensión completa. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para cargar las muestras e iniciar el ensayo. 8. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD DEL INTEGRAL DE REACTIVOS En el momento de su llegada, el integral de reactivos se debe mantener en posición vertical para facilitar la resuspensión de las partículas magnéticas. Si el integral se conserva sellado y se mantiene en posición vertical, los reactivos son estables a 2-8 C hasta la fecha de caducidad. No congele. El integral de reactivos no se debe usar pasada la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del kit y del integral. Después de la eliminación de la protección, el integral de reactivos es estable durante ocho semanas si se conserva refrigerado a 2-8 C o bien en el área de los reactivos del instrumento. 9. RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS El ensayo se puede efectuar en muestras de suero o plasma humano. Se pueden utilizar anticoagulantes como el citrato, el EDTA y la heparina. El ensayo efectuado en muestras de plasma obtenido con citrato ha demostrado una disminución de la señal, que provoca una subestimación de los resultados (del 20% aproximadamente). Recoja la sangre mediante punción venosa, déjela coagular y separe el suero del coágulo lo antes posible. Clarifique por filtración o centrifugación antes del ensayo las muestras que presenten material en suspensión, opalescencia, lipemia o residuos eritrocitarios. No use muestras fuertemente hemolizadas o lipémicas, ni muestras que presenten material suspendido o evidente contaminación microbiana. Elimine las eventuales burbujas de aire que pueda haber antes del ensayo. Si el ensayo se lleva a cabo dentro de los siete días sucesivos a la recogida, las muestras se pueden conservar a 2-8 C. En caso contrario, se deben subdividir en alícuotas congeladas a 20 C o a temperaturas inferiores. Si las muestras han sido descongeladas, agítelas con cuidado antes de realizar el ensayo. Cinco muestras de diferente reactividad se han conservado durante siete días a 2-8 C y se han sometido a cuatro ciclos de congelación y descongelación. Los resultados no han presentado diferencias significativas. El volumen mínimo de muestra necesario es 300 μl (150 μl de muestra μl de volumen muerto). 10. CALIBRACIÓN El ensayo de los calibradores contenidos en el integral de reactivos permite ajustar la curva predefinida memorizada por el fabricante (curva patrón) en el instrumento como se indica en los códigos de barras que aparecen en la etiqueta del integral de reactivos. El instrumento se debe calibrar en triplicado cada vez que se verifique una de las siguientes condiciones: Se usa un nuevo lote de integral de reactivos o un nuevo lote de reactivos starter. La calibración anterior fue realizada más de cuatro semanas antes. El instrumento ha sufrido una intervención de asistencia técnica. Los valores de los controles están fuera de los rangos esperados. 11. PROCEDIMIENTO OPERATIVO Para obtener unas prestaciones analíticas ideales hay que respetar estrictamente las instrucciones del manual operativo del instrumento. Cada parámetro del test es identificado mediante el código de barras en la etiqueta del integral de reactivos. En caso de que el lector del código de barras no funcione correctamente, se deberán introducir manualmente los datos convenientes. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para una información más detallada. El instrumento realiza las operaciones siguientes: 1. Distribuye calibradores, controles o muestras en el módulo de reacción. 2. Distribuye el conjugado. 3. Distribuye las partículas magnéticas recubiertas. 4. Distribuye el tampón G. 5. Incuba. 6. Lava con el líquido de lavado. 7. Distribuye el conjugado en el módulo de reacción. 8. Distribuye el tampón D. 9. Incuba. 10. Lava con el líquido de lavado. 11. Añade los reactivos starter y mide la luz emitida. 12. CONTROL DE CALIDAD El control de calidad se debe realizar (a) por lo menos una vez por cada día de trabajo, (b) cuando se usa un nuevo integral de reactivos, (c) cuando se calibra el kit, o según las disposiciones legislativas y las reglamentaciones vigentes en cada país. Los controles LIAISON se deben analizar individualmente para evaluar las prestaciones del test. Los valores de los controles tienen que estar comprendidos entre los rangos esperados: cada vez que los valores estén fuera de los rangos esperados habrá que volver a efectuar la calibración y probar de nuevo los controles. Si los valores experimentales de los controles estén de nuevo fuera de los rangos predefinidos después de la calibración, habrá que repetir el test usando un frasco de control no abierto. Si los valores de los controles estén fuera de los rangos esperados, los resultados no deben ser notificados. Las prestaciones de otros controles se deben evaluar para asegurar su compatibilidad con este test antes del uso. Por lo tanto es indispensable establecer los intervalos de los valores de los materiales usados para el control de calidad. 29 / 33 ES - 200/ , J - 11/2010

4 13. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS El instrumento calcula automáticamente las concentraciones de anticuerpos anti-hbs expresadas en y clasifica los resultados. Hágase referencia al manual operativo del instrumento para una información más detallada. El valor límite que discrimina entre la presencia y la ausencia de anticuerpos anti-hbs en niveles compatibles con la inmunidad contra la infección por HBV es 10. Los resultados de las muestras deben ser interpretados como sigue: Las muestras con concentraciones de anticuerpos anti-hbs por debajo de 9 se deben clasificar negativas. Las muestras con concentraciones de anticuerpos anti-hbs entre 9 y 11 se deben clasificar dudosas. Se recomienda repetir en duplicado el test de las muestras dudosas para confirmar el primer resultado. Las muestras con concentraciones de anticuerpos anti-hbs iguales o por encima de 11 se deben clasificar positivas. El análisis de la distribución de los valores expresados en observados en una población negativa para anti-hbs indica que el 99% de la población estudiada presenta una concentración aparente de anticuerpos anti-hbs inferior a 5 mui/ ml. Intervalo de medición de anticuerpos anti-hbs (LIAISON Anti-HBs) de anticuerpos anti-hbs (LIAISON Anti-HBs Plus). Las muestras que contengan concentraciones de anticuerpo superiores al intervalo de medición pueden ser pre-diluidas mediante la función Dilute del instrumento y reanalizadas (los factores de dilución aconsejados son 1:50 y 1:90, solo para LIAISON Anti-HBs Plus). Los resultados se multiplicarán automáticamente por el factor de dilución para obtener los niveles de anticuerpos de las muestras no diluidas. El diluyente de muestras disponible en el integral de reactivos permite realizar la pre-dilución 1:50 de 100 muestras o la pre-dilución 1:90 de 55 muestras. En la práctica clínica se considera que una concentración de anticuerpos anti-hbs superior a 10 indica la remisión de la infección o la respuesta a la vacunación. En ambos casos se piensa que el individuo es inmune a la infección por HBV. Una concentración de anticuerpos menor que 10 indica la ausencia de inmunidad, dado que un nivel de 10 se considera el límite inferior de protección. Sin embargo, la concentración de anticuerpos anti-hbs después del ciclo inicial de inmunización con la vacunación anti- HBV disminuye a lo largo del tiempo. Por este motivo en la literatura (12) se aconseja suministrar las inoculaciones de refuerzo anti-hbv en base al título de anticuerpos presente en circulación, como se muestra a continuación. de anti-hbs después del ciclo de inmunización Tiempo aconsejado para la inoculación de refuerzo inferior a 10 inmediatamente después de 3-6 meses después de un año después de 3,5 años superior a después de 7 años Por consiguiente en la práctica clínica puede ser útil un método cuantitativo que permita determinar la concentración de anticuerpos de las muestras. Sin embargo, en la clasificación de las muestras con una concentración de 10 ± 1 hay que tener en cuenta la variabilidad de la dosis debida a la imprecisión del ensayo. Por eso, estas muestras se deben evaluar con atención y considerar prudencialmente con una concentración de anticuerpos anti-hbs menor que 10 cuando se espere saber mediante el test si una muestra contiene seguramente una concentración mayor o igual a 10 mui/ ml. 14. LIMITACIONES DEL ENSAYO Para obtener resultados fiables es necesario atenerse estrictamente a las instrucciones de utilización y poseer una adecuada técnica manual. La contaminación bacteriana de las muestras o la inactivación mediante calentamiento pueden modificar los resultados del análisis. Los resultados del test se muestran de manera cuantitativa como positivos o negativos para la presencia de anticuerpos anti-hbs. Sin embargo, el diagnóstico de una enfermedad infecciosa no se debe formular en base al resultado de un solo ensayo, sino que éste se debe validar con otras pruebas clínicas, procedimientos diagnósticos y con la opinión del médico. La comparación de los datos cuantitativos obtenidos con los diferentes métodos analíticos sobre las mismas muestras presenta una discreta concordancia para la mayoría de las muestras. Sin embargo muestras individuales pueden suministrar resultados discrepantes debidos a los siguientes motivos (3): variabilidad antigénica de HBsAg (presencia y características de enlace de los diferentes epítopes de HBsAg, procedimiento de purificación del antígeno, proceso de inactivación de HBsAg, conjugación o fijación del antígeno en la fase sólida) composición de anticuerpo del analito (especificidad para diferentes epítopes, diferente afinidad para los mismos epítopes) prestaciones metodológicas del test (por ejemplo, relación con el estándar primario, principio del ensayo, sistema tampón) o método de cálculo de los resultados efecto matriz en las muestras diluidas y no diluidas y entre muestras y calibradores (debido por ejemplo a proteínas o lípidos). 15. PRESTACIONES METODOLÓGICAS DEL KIT Especificidad analítica La especificidad analítica se define como la capacidad que tiene el test para detectar exactamente el analito ante la presencia de factores potencialmente interferentes en la matriz de la muestra (por ejemplo, anticoagulantes, hemolisis, efectos de tratamientos de la muestra) o de reacciones cruzadas con anticuerpos potencialmente interferentes. Interferencias. Estudios controlados sobre los factores potencialmente interferentes han demostrado que las prestaciones del test no están influenciadas por anticoagulantes (EDTA, heparina), hemolisis (hasta 100 mg/dl de hemoglobina), lipemia (hasta 3000 mg/dl de triglicéridos), bilirrubinemia (hasta 20 mg/dl de bilirrubina) o por los ciclos de congelación y descongelación de las muestras. El ensayo efectuado en muestras de plasma obtenido con citrato ha demostrado una disminución de la señal, que provoca una subestimación de los resultados (del 20% aproximadamente). 30 / 33 ES - 200/ , J - 11/2010

5 Reacciones cruzadas. Por norma, la presencia de anticuerpos potencialmente interferentes no interfiere en el ensayo. Los anticuerpos estudiados han sido: (a) inmunoglobulinas dirigidas contra varios agentes etiológicos como hcmv, HSV, EBV, virus de la rubeola, HCV, HIV, HTLV-I/II, HAV, Toxoplasma gondii, Treponema pallidum (b) anticuerpos anti-nucleares (ANA), anticuerpos anti-ratón (HAMA, human anti-mouse antibodies), anticuerpos heterófilos, hípergammaglobulinas y factor reumatoide (inmunoglobulinas anti-fc) Precisión La repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo (es decir las variaciones intra-ensayo e inter-ensayo) han sido determinadas utilizando las muestras de referencia en diferentes concentraciones de analito. La variabilidad observada no ha dado lugar a una clasificación errónea de las muestras. Repetibilidad A B C D Número de determinaciones Media () 8,80 28,30 181,00 549,00 Desviación estándar 0,64 2,75 12,31 36,23 Coeficiente de variación (%) 7,3 9,7 6,8 6,6 Reproducibilidad A B C D Número de determinaciones Media () 7,10 24,90 182,00 557,00 Desviación estándar 1,12 3,29 9,28 27,29 Coeficiente de variación (%) 15,8 13,2 5,1 4, Veracidad La veracidad del ensayo ha sido controlada mediante el test de dilución. Test de dilución. Se han analizado diluciones en serie de seis sueros de concentración elevada de anticuerpos anti-hbs realizadas con una muestra negativa. Las concentraciones medidas de anticuerpos anti-hbs obtenidas en función de las concentraciones esperadas han sido analizadas con la regresión lineal. Los coeficientes de correlación (r) estaban comprendidos entre 0,996 y 0,999. Dilución esperada, medida, % Recuperación Dilución esperada, medida, % Recuperación no diluido 5.570,4 no diluido 5.686,4 1:16 348,2 374,1 107,5 1:16 355,4 367,1 103,3 1:32 174,1 198,1 113,8 1:32 177,7 149,5 84,1 1:64 87,0 99,7 114,5 1:64 88,9 75,8 85,3 1:128 43,5 47,1 108,2 1:128 44,4 28,0 63,0 1:256 21,8 19,7 90,5 1:256 22,2 15,4 69,3 1:512 10,9 11,8 108,5 no diluido ,8 no diluido 3.648,8 1:32 414,9 529,9 127,7 1:8 456,1 506,1 111,0 1:64 207,5 260,1 125,4 1:16 228,1 211,4 92,7 1: ,7 121,6 117,2 1:32 114,0 109,2 95,8 1:256 51,9 70,0 135,0 1:64 57,0 52,4 91,9 1:512 25,9 30,2 116,5 1:128 28,5 17,6 61,7 1: ,0 14,8 114,1 1:256 14,3 11,9 83,5 no diluido 7.859,2 no diluido ,2 1:32 245,6 277,1 112,8 1:32 361,9 357,4 98,8 1:64 122,8 122,9 100,1 1:64 180,9 161,4 89,2 1:128 61,4 65,2 106,2 1:128 90,5 84,3 93,2 1:256 30,7 28,5 92,8 1:256 45,2 46,3 102,4 1:512 15,4 15,3 99,7 1:512 22,6 18,8 83,1 1: ,3 10,7 94, Efecto arrastre El efecto arrastre (carryover) ha sido estudiado analizando tres muestras negativas tanto antes como después de dos muestras elevadamente positivas. Los resultados obtenidos permiten demostrar que no se verifica el efecto arrastre utilizando el instrumento LIAISON Efecto gancho con altas concentraciones Cuando se ensayen muestras que contengan unas concentraciones de anticuerpos sumamente elevadas con un método sandwich, se pueden obtener unos niveles aparentes de anticuerpo inferiores al nivel real por efecto gancho. Para cuantificar las muestras correctamente, las muestras que contienen niveles mayores que el del intervalo de medición deben ser diluídas con una muestra negativa o con el diluyente de muestras de LIAISON Anti-HBs Plus y analizadas de nuevo. Los resultados deben ser multiplicados por el factor de dilución para obtener los niveles de las muestras no diluídas. El kit ha sido desarrollado de modo que concentraciones de anticuerpos anti-hbs hasta proporcionen una señal analítica siempre superior al intervalo de medición. La presencia de un efecto gancho ha sido evaluada analizando dos muestras positivas para anticuerpos anti-hbs con alto título. Todas las muestras han presentado unos valores de concentración por encima del intervalo de medición, como se espera de las muestras con alto título, indicando que la clasificación de las muestras es correcta Especificidad y sensibilidad diagnósticas La especificidad y la sensibilidad diagnósticas han sido evaluadas analizando 1759 muestras provenientes de diversas poblaciones (donantes de sangre, sujetos nunca infectados por HBV, mujeres embarazadas, pacientes dializados, sujetos sometidos a trasplante de órgano, sujetos con infección pasada por HBV, sujetos vacunados contra el HBV, pacientes afectados por hepatitis por HBV). Las muestras han sido examinadas con diferentes métodos de comparación y se ha empleado la regla del consenso general y los datos clínicos y serológicos para establecer los resultados esperados. 17 muestras han sido clasificadas dudosas con los métodos de referencia y por lo tanto han sido excluidas del análisis de los resultados. 31 / 33 ES - 200/ , J - 11/2010

6 En la población presumiblemente negativa estudiada 3 muestras han resultado positivas, una muestra ha resultado dudosa y 1182 muestras han resultado negativas en el primer test - especificidad diagnóstica: 99,66% (intervalo de confianza al 95%: 99,14-99,91%). En la población presumiblemente negativa estudiada 4 muestras han resultado positivas y 1182 muestras han resultado negativas en el segundo test de las muestras dudosas - especificidad diagnóstica: 99,66% (intervalo de confianza al 95%: 99,14-99,91%). En la población presumiblemente positiva estudiada ninguna muestra ha resultado negativa y 556 muestras han resultado positivas en el segundo test de las muestras dudosas - sensibilidad diagnóstica: 100% (intervalo de confianza al 95%: 99,34-100%). Además, se han analizado 10 paneles de seroconversión (seguimiento de la vacunación) con una recogida negativa inicial e intervalos cortos entre las recogidas sucesivas. El test muestra una sensibilidad de detección sustancialmente equivalente a la de los métodos de referencia. 32 / 33 ES - 200/ , J - 11/2010

7 LIAISON Control Anti-HBs (310121) 1. Finalidad del ensayo. Los controles LIAISON Control Anti-HBs (310121) deben ser usados en el ensayo de quimioluminiscencia (CLIA) LIAISON para verificar la fiabilidad de los ensayos. Las prestaciones metodológicas de los controles LIAISON no son definidas con otros ensayos o instrumentos automáticos. 2. Materiales suministrados Control negativo (2 x 2,5 ml) Suero/plasma humano que no contiene anticuerpos anti-hbs con tampón TRIS, 0,2% ProClin 300 y conservantes. Control positivo (2 x 2,5 ml) Suero/plasma humano que contiene anticuerpos humanos anti-hbs, EDTA, 0,2% ProClin 300 y conservantes. Todos los reactivos se suministran listos para su uso. El intervalo de las concentraciones para cada control está impreso en el certificado de análisis e indica los límites definidos por DiaSorin para los valores de los controles obtenidos con test fiables. Cada laboratorio es responsable de adoptar límites diferentes para cumplir exigencias específicas. Los controles no son específicos para lote de kit. Se pueden intercambiar entre sí aunque pertenezcan a lotes diferentes. 3. Conservación y estabilidad. En el momento de su llegada, los controles se deben mantener a 2-8 C en posición vertical para evitar el contacto de la solución con la tapa del frasco. No congele. Si los controles se conservan sellados y en posición vertical, ellos son estables a 2-8 C hasta la fecha de caducidad. Después de la apertura, los controles son estables durante cuatro semanas si se conservan refrigerados a 2-8 C entre dos usos sucesivos. Evite la contaminación bacteriana de los controles. Los controles no se deben usar pasada la fecha de caducidad indicada en las etiquetas de los frascos. En el momento del uso, acondicione los controles a temperatura ambiente (20-25 C) antes de la apertura de los frascos y déjelos en el área de las muestras del instrumento sólo durante el tiempo requerido para realizar el test de control de calidad. Después del uso, tape los frascos lo antes posible y manténgalos a 2-8 C en posición vertical. El volumen muerto es 400 μl. Anti-HBs-es.fm LIAISON Control Anti-HBs (310121) 33 / 33 ES - 200/ , J - 11/2010