Servicio Antimicrobianos, Laboratorio Nacional de Referencia en Antimicrobianos, INEI- ANLIS Dr. Carlos G. Malbrán

Transcripción

1 Servicio ntimicrobianos, aboratorio acional de Referencia en ntimicrobianos, E- S Dr. Carlos G. Malbrán TBETS ROSCO: RPD CRB BUE Kit (Catálogo 98023) Traducción del protocolo del fabricante Evaluación y comentarios del Servicio ntimicrobianos, aboratorio acional de Referencia (R). lcance del ensayo: se podrán evaluar todos los bacilos gram negativos ) Solución de trabajo a preparar por el usuario (O CUD en el kit): Solución Fisiológica (Cla 0,9%) ajustada a ph 8,5 con cantidad necesaria de sol. aoh 0,01. Esta solución fisiológica ph 8,5 puede acidificarse durante conservación. Por favor, verifique antes de iniciar los ensayos, que el ph se mantenga dentro del valor requerido y si ello no ocurriera, ajuste gota a gota con sol. aoh 0,01 B) Procedimiento partiendo de cultivo aislado en placa:. Utilice siempre cultivo fresco (<24 hs).. os medios aptos para realizar este ensayo incluyen MH, gar Sangre o TS. E- S MBR Para el procedimiento directo de botella de hemocultivo u orinas, consulte ítems C y D a continuación. ota 1: el zinc es un cofactor necesario para la actividad enzimática de las MBs. segúrese de utilizar medios con contenido de zinc apropiado. El Servicio ntimicrobianos ha provisto a los laboratorios del PCCac de una cepa indicadora (Encuesta 49 Cepa 1, E. coli productora de VM-1) capaz de detectar sutiles deficiencias de zinc en el medio de cultivo. Halos <= 21 mm para imipenem Y simultáneamente presencia de sinergia entre EDT y carbapenem utilizando esta cepa indicadora sugieren un contenido apropiado de Zn 2+ del medio empleado. a falta de cumplimiento de uno de estos dos criterios indica niveles inadecuados de Zn 2+.Utilizar colonias crecidas en medios deficitarios en este catión puede producir resultados falsos negativos del Rapid CRB-Blue kit para MBs. 1

2 Servicio ntimicrobianos, aboratorio acional de Referencia en ntimicrobianos, E- S Dr. Carlos G. Malbrán ota 2: nunca utilice medios basados en la fermentación de hidratos de carbono como evine o Mc Conkey que producirán un test invalido. Colonias fermentadas en CDE puede producir un 30% aprox. de resultados inválidos.. Por cada cepa a ensayar, utilice 2 tubos eppendorf o similar. V. En cada uno de ellos, agregue 200 microlitros de Solución Fisiológica ajustada a ph 8,5. V. nocule ambos tubos con la bacteria a estudiar hasta alcanzar una turbidez de 2 en la escala de Mc Farland. V. gite vigorosamente con vórtex durante 1 minuto. V. Dejar reposar 30 minutos a temperatura ambiente (tiempo para la liberación de las carbapenemasas). V. gregue en cada uno de los tubos: a. Tableta de imipenem (2x) + Br.thymol (tubo de reacción) b. Tableta de CRB egative Control Blue (tubo control) X. gite con vórtex unos segundos hasta disgregación de las tabletas en los tubos. X. ncube a 35 C por un máximo de 2 horas. ota 3: El tiempo de incubación ha sido modificado por el R en relación al provisto por el fabricante para mejorar la detección de carbapenemasas de bajo poder hidrolítico y/o bajo grado de expresión (ej. expresión de DM en aislamientos de la tribu Proteae). E- S MBR X. ectura a ojo desnudo del color de cada tubo. nterpretación (ver fotos): Color tubo control (sin imipenem) Color tubo reacción (con imipenem) nterpretación Criterio o. zul marillo/blanco Carbapenemasa positivo zul Verde Carbapenemasa positivo Verde marillo/blanco Carbapenemasa positivo zul zul o Celeste Carbapenemasa negativo V Verde Verde Carbapenemasa negativo V marillo zul o verde o amarillo Test inválido V ota 4: Otros autores (ref. 2) han sugerido un paso adicional de centrifugación una vez finalizado el tiempo de incubación para facilitar la interpretación de la prueba mediante la observación de los tintes de color en el sobrenadante. 2

3 Servicio ntimicrobianos, aboratorio acional de Referencia en ntimicrobianos, E- S Dr. Carlos G. Malbrán X. Desempeño: datos preliminares Sensibilidad Especificidad Mecanismo de resistencia RPD CRB BUE ( Kit Rosco) Blue carba test n house (R) 1 R 1 Otros 2 KPC 100% 100% MBs 100% 100% OX-48: 90% 93.3% OXs OX-163 (rg.): 10% o productores de carbapenemasa OX-48: 90% OX-163 (rg.): 10% 100% 100% 100% El Kit de Rosco presentó en su evaluación preliminar, en dos centros independientes, un desempeño similar al método desarrollado in house. C) Procedimiento partiendo de hemocultivo positivo (protocolo del fabricante. o evaluado en el R a la fecha): X. Realice un sub- cultivo colocando 5 gotas (75 microlitros) del hemoculitvo positivo en 2 ml de caldo nutritivo conteniendo 0.12 mg/ de imipenem. XV. ncubar por 2hs a 35 C XV. Centrifugar a g durante 5 minutos XV. Descartar el sobrenadante XV. avar el pellet con cantidad suficiente de agua destilada estéril. Repetir pasos XV y XV E- S MBR XV. Resuspender el pellet en 200 microlitros de Solución Fisiológica ajustada a ph 8, 5 y continuar según indicado en V. D) Procedimiento partiendo de orinas (protocolo del fabricante. o evaluado en el R a la fecha). (con coloración de Gram indicando BG): XX. Tome 8-10 ml de orina y centrifugue hasta sedimentar XX. Descartar el sobrenadante. XX. Resuspender el pellet en 200 microlitros de Solución Fisiológica ajustada a ph 8, 5 y continuar según indicado en V. 3

4 Servicio ntimicrobianos, aboratorio acional de Referencia en ntimicrobianos, E- S Dr. Carlos G. Malbrán C O S D E R D O F (R): Un resultado POSTVO del RPD CRB BUE Kit indicará invariablemente cepa productora de carbapenemasa. Por el contrario, en escenarios con aumento de la prevalencia de OX- 48/OX- 48- like, como en rgentina, un resultado negativo con el BUE- CRB requerirá de pruebas adicionales para definir la presencia de esta carbapenemasa. Ejemplos de interpretación del ensayo: Criterio : positivo R B Criterio : positivo M S - E Criterio : positivo Criterio V: negativo 4

5 Servicio ntimicrobianos, aboratorio acional de Referencia en ntimicrobianos, E- S Dr. Carlos G. Malbrán Presentación del Kit: R B M S - E Bibliografía: 1. Pasteran F, Rapoport M, ucero C, Corso. Comparison of the in- house Blue- Carba Test (BCT) with the Rapid CRB Blue Kit for the Detection of Carbapenemase- Producing Gram egative Bacilli. 25th ECCMD, bstract 385; ovais et. al. Evaluation of the recently launched Rapid CRB Blue Kit for detection of carbapenemase- producing Gram- negative bacteria. 25th ECCMD, bstract O042; Consultas: atb@anlis.gov.ar fpasteran@anlis.gov.ar Tel/Fax Versión gosto