DETERMINACIÓN DE AMINAS BIÓGENAS EN MUESTRAS DE ALIMENTOS POR CL-MS/MS
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- José Antonio Rojas Herrera
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1 AMINAS BIÓGENAS
2 DETERMINACIÓN DE AMINAS BIÓGENAS EN MUESTRAS DE ALIMENTOS POR CL-MS/MS
3 Bibliografía A review of the liquid chromatographic methods for the determination of biogenic amines in foods Armagan Önal, Serife Evrim Kepekci Tekkeli, Cem Onal Food Chemistry 138 (2013) A review: Current analytical methods for the determination of biogenic amines in foods Armagan Önal Food Chemistry 103 (2007)
4 Cromatografía de Líquidos con detector de Fotodiodos con y sin derivatización. Cromatografía de Líquidos con detección Fluorimétrica con derivatización (ántes de la inyección o post columna). Cromatografía de Líquidos con detector de Masas con y sin derivatización.
5 PNTCNA_TDOO1_03. PNT PARA LA DETERMINAGION DE HISTAMINA Y OTRAS AMINAS BIOGENAS EN PESCADO POR CROMATOGRAFíA LÍQUIDA DE ALTA EFICACIA (HPLC) CON DERIVATIZACIÓN post-columna CON o- FTALDEHIDO Elaborado por: Teresa Mª Legarda Aprobado por: Pedro A. Burdaspal AESAN CNA MA/2/ PNT PARA LA DETERMINAGION DE AMINAS BIOGENAS EN ALIMENTOS POR CL-FLD Elaborado/rEVISADO por: A. SUÁREZ Agencia de Salud Pública del Consorcio Sanitario de Barcelona
6 Inconvenientes detectados en nuestro laboratorio: Reactivos (Corrosivos, tóxicos, peligroso para la salud y el medio ambiente, ). Atmósfera con malos olores a pesar de utilización de campanas de gases. Inestabilidad de los compuestos derivatizados (por ejemplo, derivatizados con o-ftaldehído). Interferencias (modificación del gradiente). Tiempo de respuesta alto.
7 Cualidades requeridas: Método rápido con tiempo de respuesta lo menor posible. Utilización del menor número de reactivos y que presenten los menores peligros posibles. Método seguro y preciso. Utilización de una técnica analítica robusta y selectiva.
8 Técnica: CL-MS/MS (directa) Simultaneous determination of eight underivatised biogenic amines in fish by solid phase extraction and liquid chromatography tandem mass spectrometry G. Sagratini, M. Fernandez-Franzon, F. De Berardinis, G. Font, S. Vittori a, J. Manes. Food Chemistry 132 (2012) High performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry determination of biogenic amines in typical Piedmont cheeses F. Gosetti, E. Mazzucco, V. Gianotti, S. Polati, M.C. Gennaro Journal of Chromatography A, 1149 (2007)
9 Partes del método Extracción de las aminas biógenas con un disolvente (TCA). Dilución a un volumen adecuado. Análisis instrumental: Equipo WATERS compuesto por Módulo de separación (Waters, modelo 2790), Horno de columnas (Waters, modelo Alliance), Espectrómetro de Masas Quattro micro (Micromass) con sonda ESI + y Sistema Informático.
10 Estudios de optimización Disolvente de extracción (mezclas metanol-agua, metanol, ácido clorhídrico, ácido fórmico, ácido tricloroacético, ) Purificación (evaporación y reconstitución, extracción en fase sólida) Columna cromatográfica. Concentración del patrón interno (1,7- diaminoheptane). Respuesta de cada amina biógena.
11 Análisis de masas El pico base de todas las aminas biógenas tienen un espectro de masas que corresponde a la molécula protonada [M+H] + Se registran dos transiciones. El análisis de masas se estructura en dos funciones.
12 Funciones de masa Función 1: ESI + (0-5minutos). MRM de 9 canales. Compuesto transición Dwell Voltage de cono Energía de colisión Putrescina 89 > Putrescina 89 > Cadaverina 103 > Cadaverina 103 > Histamina 112 > Histamina 112 > ,7-diaminoheptano 131 > Tiramina 138 > Tiramina 138 > Función2: ESI + (5-16minutos). MRM de 4 canales. Compuesto transición Dwell Voltage de cono Energía de colisión 2-Feniletilamina 122 > Feniletilamina 122 > Triptamina 161 > Triptamina 161 >
13 Ion ratios Relación entre la señal de la transición de menor dimensión dividido por la de mayor dimensión. El software de Waters da el inverso. Cadaverina: 0,400 (2,5) Putrescina: 0,023 (43,7) Histamina: 0,321 (3,12) Tiramina: (2,08) 2-Fenilalanina: 0,222 (4,50) Triptamina: 0,178 (5,62)
14
15 Contrastes del método Materiales de referencia para histamina en los análisis rutinarios. No se conoce para las demás aminas. Ejercicios de intercomparación para histamina. No se conoce para las demás aminas. Buenos resultados.
16 Gracias por su atención Francisco Palacios Pastor Teléfono:
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