CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN
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- Ángel Vera Duarte
- hace 6 años
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1 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN SERVICIO CONTAMINANTES Sección Materiales en contacto con alimentos Elvira Ruiz
2 Migración específica de aceite de soja epoxidado (ESBO) en alimentos. Determinación por LC-MS/MS
3 Los envases y materiales no deben ceder sustancias a los alimentos en cantidades que: Modifiquen su composición de forma inaceptable Modifiquen las características sensoriales de los alimentos Supongan un riesgo para la salud
4
5 REGLAMENTACIÓN Reglamento (UE) Nº 10/2011 de la Comisión de 14 de enero, sobre materiales y objetos plásticos destinados a entrar en contacto con alimentos (Anexo I)
6 ANEXO I
7 Ejemplo de estructura de un triglicérido de ESBO Peso molecular cercano a 1000 uam Fórmula C57H106O10
8 PRINCIPALES USOS DEL ESBO Aditivo de PVC Plastificante en juntas para tapas metálicas de tarros de vidrio Estabilizante
9 EXPOSICIÓN AL ESBO La principal vía de exposición del ser humano al ESBO es por ingestión de alimentos contenidos en tarros de vidrio con tapas que contengan ESBO como plastificante. Si el alimento contiene grasa y hay contacto de ésta con la junta, existe el riesgo de una migración del ESBO al alimento.
10 Métodos acreditados en el laboratorio: Método por LC-MS/MS para alimentos Método por CG/MS para aceites y juntas
11 MÉTODO POR LC-MS/MS Curvas de calibración Preparación y extracción de la muestra Análisis cromatográfico Cuantificación Validación Criterios de Aceptación y Rechazo de los resultados
12 MÉTODO POR LC-MS/MS Centro CURVAS DE CALIBRACIÓN: por método de adición de patrones Rango de 5 a 120 mg/kg: 2 g de muestra + xx µl de sol madre de ESBO de 1000 µg/ml Rango de 5 a 1200 mg/kg para concentración de ESBO > 120 mg/kg: 0,2 g de muestra + xx µl de sol madre de ESBO de 1000 µg/ml
13 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA: MÉTODO POR LC-MS/MS Extracción del analito del alimento con diclorometano por agitación Evaporación a sequedad en corriente de nitrógeno Redisolución del extracto en acetonitrilo
14 MÉTODO POR LC-MS/MS ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO: Configuración del Cromatógrafo : Columna cromatográfica: Sunfire C18; 150 x 2,1 mm, 3,5 µm (Waters) Temperatura de la columna: 30 ºC Volumen de inyección: 20 µl Flujo fase móvil: 0,3 ml/min Fase móvil A: Acetonitrilo + 15 mm ácido acético, (v/v) Fase móvil B: Acetona Run time: 25 min Gradiente fase móvil: Tiempo (min) % A % B Centro
15 MÉTODO POR LC-MS/MS ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO: CONDICIONES DEL DETECTOR DE MASAS (QQQ) Detector de espectrometría de masas Agilent 6410 Triple Quad o similar Ionización: Tª Gas: 250ºC Flujo gas: Nebulizador: Capilar: ESI *positivo 6 L/min 45 psi 4000 V *Método de Ionización por Electro spray
16 MÉTODO POR LC-MS/MS IONES MONITORIZADOS (MRM*) Precursor Target Cualificador Tiempo de retención (min) Fragmentador (V) Energía de colisión (V) (T)**-70 (Q)*** *Monitorización de reacciones múltiples **Ión Target ***Ión cualificador
17 TIC* de un patrón de ESBO *Representación gráfica de la suma total de iones
18 ESBO Ión (Tr = 9,5 min) Cualificador : > Target : > 699.1
19 ESBO Ión (Tr = 14,1 min) Cualificador: > Target: > 685.2
20 ESBO Ión (Tr = 16,6 min) Cualificador: > Target: > 671.2
21 ESBO Ión (Tr = 18,3 min) Cualificador: > Target: > 671.2
22 ESBO Ión (Tr = 18,1 min) Cualificador: > Target: > 629.2
23 CUANTIFICACIÓN Curva de calibrado por adición de patrones Recta de regresión lineal representando la suma de las áreas de los 5 picos correspondientes a transiciones de cuantificación, frente a las concentraciones de ESBO añadidas en mg/kg. y = ax+b y = respuesta cromatográfica a = pendiente de la recta b = ordenada en el origen La concentración de ESBO en las muestras en mg/kg se extrapola de la recta de calibrado C = -b/a. C = concentración de ESBO en el alimento a = pendiente de la recta de regresión b = ordenada en el origen MÉTODO POR LC-MS/MS Centro
24 MÉTODO POR LC-MS/MS VALIDACIÓN La validación se llevó a cabo en tres tipos de matrices diferentes: Vegetal (salsa de tomate) Pescado (Atún en aceite) Carne (Relleno de empanadillas)
25 VALIDACIÓN EN ALIMENTO VEGETAL Centro PARÁMETRO RESULTADO OBSERVACIONES Intervalo trabajo 5,0-120,0 mg/kg Selectividad/Especificidad Satisfactorio Conc. Teórica = 5,0 mg/kg Linealidad/Función respuesta Linealidad 1,4% R 0,9995 Límite de cuantificación 5,0 mg/kg alimento Precisión (reproducibilidad intralaboratorio) (% CV) Exactitud % Recuperación CV r % = 3,5; CV R % = 10,2 CV r % = 4,1; CV R % = 10,9 CV r % = 3,5; CV R % = 6,8 % R = 96,4 % R = 96,2 % R = 89,6 Conc. Teórica = 5,0 mg/kg Conc. Teórica = 30,0 mg/kg Conc. Teórica = 120,0 mg/kg Conc. Teórica = 5,0 mg/kg Conc. Teórica = 30,0 mg/kg Conc. Teórica = 120,0 mg/kg Incertidumbre U % = 21,2 U % = 23,0 U % = 19,6 Conc. Teórica = 5,0 mg/kg Conc. Teórica = 30,0 mg/kg Conc. Teórica = 120,0 mg/kg
26 VALIDACIÓN EN CONSERVA DE PESCADO PARÁMETRO RESULTADO OBSERVACIONES Intervalo trabajo 5,0 120,0 mg/kg Selectividad/Especificidad Satisfactorio Conc. Teórica = 5,0 mg/kg Linealidad/Función respuesta Linealidad 2,51 % R 0,9987 Límite de cuantificación 5,1 mg/kg alimento Precisión (reproducibilidad intralaboratorio) (% CV) Exactitud % Recuperación CV r % = 6,4; CV R % = 18,9 CV r % = 2,9; CV R % = 16,2 CV r % = 6,4; CV R % = 14,7 % R = 108,1 % R = 104,1 % R = 103,9 Conc. Teórica = 5,1 mg/kg Conc. Teórica = 30,6 mg/kg Conc. Teórica = 122,4 mg/kg Conc. Teórica = 5,1 mg/kg Conc. Teórica = 30,6 mg/kg Conc. Teórica = 122,4 mg/kg Incertidumbre U % = 39,3 U % = 33,3 U % = 30,6 Conc. Teórica = 5,1 mg/kg Conc. Teórica = 30,6 mg/kg Conc. Teórica = 122,4 mg/kg
27 VALIDACIÓN EN CONSERVA DE CARNE PARÁMETRO RESULTADO OBSERVACIONES Intervalo trabajo 5,0 120,0 mg/kg Selectividad/Especificidad Satisfactorio Conc. Teórica = 5,0 mg/kg Linealidad/Función respuesta Linealidad 3,64% R 0,9973 Límite de cuantificación 4,8 mg/kg alimento Precisión (reproducibilidad intralaboratorio) (% CV) Exactitud % Recuperación CV r % = 13,4; CV R % = 13,4 CV r % = 2,8; CV R % = 3,9 CV r % = 2,0; CV R % = 3,2 % R = 92,6 % R = 94,6 % R = 97,4 Conc. Teórica = 4,8 mg/kg Conc. Teórica = 30,6 mg/kg Conc. Teórica = 122,4 mg/kg Conc. Teórica = 4,8 mg/kg Conc. Teórica = 30,6 mg/kg Conc. Teórica = 122,4 mg/kg Incertidumbre U % = 33,4 U % = 8,1 U % = 6,8 Conc. Teórica = 4,8 mg/kg Conc. Teórica = 30,6 mg/kg Conc. Teórica = 122,4 mg/kg
28 CRITERIOS DE ACEPTACIÓN Y RECHAZO DE LOS RESULTADOS Blanco de reactivos: En el cromatograma del blanco de reactivos no deben aparecer picos interferentes, a los tiempos de retención de los picos de ESBO, con una respuesta superior a 1/3 del LC. Función respuesta : Coeficiente de correlación de la regresión lineal, r 0,99. Linealidad: Desviación Estándar Relativa de la pendiente 5 %. Muestras cargadas por el analista o materiales de referencia con o sin certificación externa: Dos controles de recuperación con cada serie de muestras que se analicen, añadiendo patrón de ESBO. Las recuperaciones obtenidas se representarán en el gráfico de control de calidad obtenido a partir de los datos de validación. Centro
29 CRITERIOS DE ACEPTACIÓN Y RECHAZO DE LOS RESULTADOS Repetibilidad: Muestras cargadas por el analista o bien materiales de referencia, por duplicado en condiciones de repetibilidad: La diferencia entre duplicados será 2,8 S r o 2,8 CV r obtenidos en la validación para el nivel de concentración más próximo a la media de los duplicados. Ensayos de intercomparación: Los propuestos por el organizador, y en su defecto serán satisfactorios cuando: ІZ score І 2 En todos los casos se evaluará según requisitos de la G-ENAC-14.
30 BIBLIOGRAFÍA Para LC/MS-MS: Liquid Chomatography- electrospray Ionization-Tandem Mass Spectrometry Method for the determination of epoxidized soybean oil in food products. M. Suman, S. La Tegola; D. Catellani, U. Bersellini. J. Agric. Food Chem., 53, , 2005 Para CG/MS: Gas Chomatographic Mass Spectrometric determination of Epoxidized Soybean Oil. Contamination of Foods by Migration from Plastic Packaging. Laurence Castle, Matthew Sharman and John Gilberte, J.Assoc. off Ana. Chem. Vol 71, nº 6, 1988
31 MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCIÓN Elvira Ruiz Mª Isabel Santillana Mª Teresa Nieto Juana Bustos
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