CITOMETRÍA DE FLUJO EN LAS GAMAPATÍAS MONOCLONALES

Transcripción

1 CITOMETRÍA DE FLUJO EN LAS GAMAPATÍAS MONOCLONALES Dra. Daniela Lens Laboratorio de Citometría y Biología Molecular. Hospital de Clínicas. Universidad de la República.

2 Gamapatías Monoclonales Clasificación OMS 2016 Swerdlow et al. Blood 2016; 127(20)

3 Utilidad de la CF en gamapatías monoclonales Clasificación OMS 2008 Investigación Diagnóstico diferencial de casos inusuales

4 Gamapatías monoclonales en el LCBM SMD 7% HPN 3% LA 17% GAMAPATIAS 17% LNH 56%

5 Caracterización inmunofenotípica de las CP Los plasmocitos se identifican fácilmente por citometría de flujo Las células plasmáticas en el mieloma son fácilmente distinguibles de los plasmocitos normales debido a las frecuentes aberrancias presentes en la primera

6 Correlación en cuantificación de CP entre morfología e IF Paiva et al. Haematologica : % CP x IF < %CP x CM (n = 765) HEMODILUCIÓN DE LAS MUESTRAS DE CF

7 Rawstron et al. Haematologica 2008;93: Report of the European Myeloma Net on multiparametric flow cytometry in multiple myeloma and related disorders

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9 Utilidad de la CF en gamapatías monoclonales DIAGNÓSTICO

10 Criterios Diagnósticos MGUS Componente M < 3 g/dl Células Plasmaticas clonales en MO < 10% Sin eventos que definan MM MM smoldering Componente M 3 g/dl (suero) or 500 mg/24 hrs (orina) Células Plasmáticas clonales en MO 10% - 60% Sin eventos que definan MM MM (sintomático) Gamapatía monoclonal + (1 o más): 1 CRAB* CP clonales en MO 10% - 60% Ratio de cadenas livianas en suero 100 > 1 lesion focal en RNM *C: Hipercalcemia(> 11 mg/dl o > 1 mg/dl por encima de ULN) R: Insuficiencia renal (CrCl < 40 ml/min o Creatinina> 2 mg/dl) A: Anemia (Hb < 10 g/dl o 2 g/dl < normal) B: Enfermedad ósea ( 1 lesión lítica por RX, TAC o PET/TC) Rajkumar SV, et al. Lancet Oncol. 2014;15:e538-e548.

11 MGUS MIELOMA MIELOMA QUIESCENTE RIESGO DE TRANSFORMACIÓN: 1% /año MGUS a MM 10% / año SM a MM

12 Caracterización inmunofenotípica de las CP Identificación de la CP Caracterización de la CP: Discriminación CP normal / CP patológica

13 Patrones aberrantes en MM

14 Marcadores más útiles para la detección de CP anormales

15 Estandarización en Citometría de Flujo MUESTRA DATOS PACIENTE Pregunta a responder TUBOS A REALIZAR PANELES Abs & PROTOCOLOS MARCACIÓN ADQUISICIÓN DATOS CITÓMETRO EUROFLOW ANÁLISIS DATOS INFORME RESULTADO

16 CF en discrasias plasmocitarias Identificación por CD138/CD38

17 tubo V450 V500 FITC PE PerCP Cy5.5 PECy7 APC APCH7 PCD1 CD45 CD138 CD38 CD56 CD19 CyIgK CyIgL PCD2 CD45 CD138 CD38 CD28 CD27 CD19 CD117 CD81 13%

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19 PORCENTAJE Marcadores aberrantes CD28 CD27 CD117 CD81 NORMAL N= 36 ABERRANTE Rawstron et al. EMN consensus. Haematologica 2008

20 Análisis de las CP en MO por CF Pictogram from Orfao A.

21 Porcentaje de PC en MO Perez Persona et al Blood 2007 Paiva et al Blood 2009

22 Riesgo de transformación en MGUS y SMM MGUS SMM Perez-Persona et al Blood 2007

23 SMM Impacto de índice pronóstico en PFS

24 Utilidad de la CF en gamapatías monoclonales PRONÓSTICO

25 Patrones aberrantes en MM

26 Progression free survival Overall survival Valor pronóstico de la expresión de CD19 1,0 PFS CD19 positive CD19 negative 1,0 OS 0,8 0,8 0,6 0,6 68 months n=655 0,4 26 months n=30 38 months n=655 0,4 40 months n=30 0,2 p= 0.04 p= ,2 0, Months from diagnosis , Months from diagnosis Mateo et al. J Clin Oncol; 2008; 26: 2737

27 Valor pronóstico de la expresión de CD81 PFS OS % % Median: NR % Median: NR Median: NR 40 30% Median: 20m 20 0 P < P = CD81 negative (n=139) CD81 positive (n=90) Paiva et al. Haematologica 2010; 95[suppl.2]:215, abs. 0528

28 Influencia pronóstica de perfiles IF Mateo et al. J Clin Oncol, 2008 Paiva et al. Leukemia 2012 Paiva et al. Leukemia 2014

29 Inmunofenotipo de PC: estudio de ploidía

30 Importancia pronóstica del estudio de ploidía

31 Tratamiento con Bortezomib

32 Utilidad de la CF en gamapatías monoclonales VALORACIÓN DE LA RESPUESTA AL TRATAMIENTO: ENFERMEDAD MÍNIMA RESIDUAL

33 Tratamiento en el MM Pacientes candidatos a trasplante - Pacientes Jóvenes Pacientes no candidatos a trasplante - Pacientes añosos Paiva B, USAL

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35 Orfao y col. ESCCA 2016

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37 Evaluación de la efectividad del tratamiento Cuantificación de la paraproteína e inmunofijación Cadenas livianas libres en suero Biopsia MO EMR: biología molecular / citometría de flujo IMWG. Rakjumar et al Blood 2011

38 CF vs. inmunofijación como predictor de respuesta

39 Técnicas para estudio de EMR

40 El estudio de EMR debe incorporarse a la valoración de la respuesta al tratamiento? Existe interés clínico: aparición de nuevos fármacos El criterio de RC / EMR NEGATIVA está siendo redefinido El concepto de RC en CF está consensuado La CF para el estudio de EMR debe ser altamente sensible, estandarizada y automatizada (EUROFLOW/IMF)

41 EMR Black Swan Research Initiative: Euroflow + International Myeloma Foundation

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43 Agregar como hacer una EMR

44 Next generation flow & Next generation sequencing son los métodos de elección para la valoración de la CF

45 Conclusiones La citometría de flujo ha demostrado ser relevante en las gamapatías monoclonales en: Diagnóstico diferencial entre MM y otras gamapatías Identificación de MGUS o MM quiescente de alto riesgo Pronóstico Investigación de Enfermedad Mínima Residual después del tratamiento

46 Laboratorio de Citometría y Biología Molecular Andreína Brugnini Natalia Trías Ana Inés Catalán Evangelina González Ana Inés Gruss Natalia Lluberas Dahiana Amarillo Leandro Moraes Matilde Boada Sofía Grille Daniela Lens Colaboradores Depto. Básico de Medicina Cátedra de Hematología Depto. Desarrollo Biotecnológico Cardiología, Oncología, Fisiopatología, CTI, Anestesia, Nefrología Servicio Trasplante Hepático Sanidad Militar.

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