Las proteínas. Dra. Nardy Diez García Investigadora

Transcripción

1 Las proteínas Dra. Nardy Diez García Investigadora

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3 Son la clave de la vida

4 Glicina o glicocola R=H Grupo Carboxilo Grupo Amino

5 Es importante comprender estas propiedades porque son la clave de la estructura y función de una proteína.

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7 Enlace peptidico

8 Enlace peptidico Los péptidos presentan en un extremo un grupo amino sin reaccionar (amino terminal o N-terminal) y en el otro un carboxilo sin reaccionar (carboxilo terminal o C-terminal)

9 Propiedades de las Proteínas Macromoléculas más abundantes Presentes en todas las células Polímeros compuestos por monómeros (aminoácidos) Estructuras y Funciones diversas Organización jerárquica

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12 Estructura Primaria Sucesión de residuos de aminoácidos en la cadena polipeptídica, que a su vez esta determinada por la secuencia de bases en el gen Incluye la ubicación de los Puntes disulfuro La secuencia es única para cada proteína Determina la estructura tridimensional de las proteínas y por lo tanto su función La estructura es estabilizada por: Enlace Peptídico

13 Estructura Secundaria Conformación de los residuos de aminoácidos adyacentes en la cadena polipeptídica, es decir el plegado regular local de la estructura primaria

14 Estructura Terciaria Plegamiento tridimensional de la cadena polipeptídica en una forma compacta y globular, describiendo las relaciones espaciales entre los AA de la cadena Acerca residuos distantes en la estructura primaria

15 ph Factores que afectan el plegado Desnaturalización: proceso por el cual se pierde la estructura nativa de una proteína junto con la mayoría de sus propiedades específicas Temperatura Moléculas orgánicas Alcohol, acetona Urea Cloruro de Guanidino Detergentes Agentes reductores (mercaptoetanol) Los enlaces peptidicos y puentes disulfuro no suelen ser afectados (a menos que se use un agente reductor en el caso de los puentes disulfuro)

16 Estructura Cuaternaria Arreglo espacial de las subunidades de proteínas formadas por dos o más cadenas polipeptídicas. La estructura es estabilizada por Interacciones no covalentes

17 Clasificación de las Proteínas Según su Composición química: Simples Albúmina Conjugadas Nucleoproteínas Ribosomas Lipoproteínas HDL Hemoproteínas Hemoglobina Flavoproteínas Succinato Deshidrogenasa Glicoproteínas Inmunoglobulinas Metaloproteínas Ceruloplasmina Fosfoproteínas Caseina

18 Según su Forma: Clasificación de las Proteínas Fibrosas Colágeno Globulares Enzimas Quimotripsina

19 Clasificación de las Proteínas Según el Número de subunidades: Monoméricas Mioglobina Oligoméricas Hemoglobina

20 Clasificación de las Proteínas Según su Función: Estructural Queratina, Elastina Enzimática DNA polimerasa III Defensa Inmunoglobulinas Hormonal Insulina Transporte Transferrina Reserva Ferritina

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34 Estudios omics

35 Proteómica Agronomía Parasitología Biomedicina

36 Proteómica comparativa Geles bidimensionales Análisis de la imagen y estadístico Análisis de los spots por espectrometría de masas MALDI-TOF Análisis de los resultados, distribución ontológica y estadística

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45 Caracterización bioquímica de la vitelogenina en especies de interés para Venezuela

46 Caracterización bioquímica de la vitelogenina en especies de interés para Venezuela Intensity / a.u

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48 Condylactis gigantea Búsqueda de moléculas bioactivas en organismos marinos (Convenio Venezuela-Cuba)

49 Caracterización de proteínas y moléculas de interés Condylactis gigantea

50 Toxina CgNa (Ständker et al.,2006; Salceda et al., 2007) Prolongación del potencial de acción en neuronas DGR de ratas Efecto de la sub-fracción sfp-1b de C. gigantea sobre los potenciales de acción en neuronas DGR de ratas. En la figura se muestran los trazos de corriente en ausencia (control) y presencia de la sub-fracción sfp-1b obtenido de la anémona marina C. gigantea (Anémona), registrado durante 10 milisegundos luego de un impulso de 25 mv. La gráfica es representativa de 7 experimentos independientes

51 Espectro de masas de la sub-fracción sfp-1b obtenida C. gigantea. En el análisis se muestra de los dos iones monoisotópicos mayoritarios obtenidos por espectrometría demasas de tipo MALDI- TOF.

52 Efecto de iones divalentes y sus agentes quelantes en el proceso de activación de las proteínas con actividad proteolítica de la fracción FP-2 obtenidas de la anémona marina C. gigantea. 1.- Sin iones añadidos. Solución de activación: 2.- CaCl 2, 3.-NaCl 2, 4.- ZnCl 2, 5.-Todos los iones. B.- Efecto de agentes quelantes de iones divalentes sobre la activación de las proteínas con actividad proteolítica de la fracción FP-2 obtenidos de la especie de anémona marina C. gigantea. Las muestras fueron incubadas a 37 C por 90 min posterior a la corrida en las siguientes condiciones: 1.-Con azul de coomassie, para la condición sin activación. Solución de activación: 2.- Sin iones añadidos, 3.- Todos los iones, 4.- EDTA, 5.- EGTA. Resultados representativo de 2 geles.

53 Caracterización de proteínas y moléculas de interés Cromatografía en capa fina de los extractos orgánicos obtenidos de la especie de C. gigantea.

54 Extractos y Fracciones No proteicas de Condylactis gigantea con actividad citotóxica en la línea celular de cáncer de próstata PC-3 Cambios morfológicos de los cultivos de la línea celular de cáncer de próstata PC-3 por efecto de la actividad citotóxica de los extractos y fracciones no proteicas de la especie de anémona marina C. gigantea. A.- Cultivo control. B.-Vehículo: etanol (2.5%). C.- EET (200µg/mL). Concentración máxima evaluada 500 µg/ml de: D.- ESE. E.- F1-1. F.- F1-2. G.- F2-1. H.- F2-2 I.- F3-1. J.- F3-2. El registro fotográfico se realizó a las 24 horas posteriores al tratamiento, en cámara de luz blanca con aumento 10X.

55 Callyspongia vaginalis Aplysina fistularis

56 Preguntas?