Dra. Derly Liseth Castro Rojas, MD Especialista en Genética Clínica - IGH PUJ / UNAB Directora Dto. Genética Clínica FOSCAL- Lab. Higuera Escalante Docente Asociado Facultad de Medicina UNAB
Medicina fetal objetivo largamente anhelado Obtención de material genético fetal de manera no invasiva Tipos de obtención de material genético fetal Detección de células nucleadas fetales en sangre materna Aislamiento de elementos celulares del trofoblasto fetal desde el canal endocervical Análisis de material genético del feto presente en plasma materno [REV. MED. CLIN. CONDES - 2014; 25(6) 887-893] http://www.rapid.nhs.uk/
Células fetales en la sangre materna Poco éxito en su uso utilización en clínica ha sido decepcionante Pequeña proporción de la población total de células en sangre materna Semana 12 gestación 1 célula fetal en circulación por cada 10.000 a 1.000.000 de células maternas +/- 20 células fetales en 20 ml de sangre materna Difícil separación de las células maternas Obstet Gynecol Clin N Am 42 (2015) 193 208 [REV. MED. CLIN. CONDES - 2014; 25(6) 887-893]
Células trofoblásticas en muestras de cuello uterino Detección de células trofoblásticas en canal endocervical o en moco cervical por medio de irrigación o aspiración Utilización con éxito para el Dx prenatal fetal del genotipo Rh (D), talasemia y anemia falciforme Dificultad cantidad de células fetales encontradas en canal endocervical es variable Oscila entre 4-80% operador dependiente [REV. MED. CLIN. CONDES - 2014; 25(6) 887-893]
Ácidos nucleicos fetales libres en sangre materna (cffdna) Moléculas presentes en el plasma materno desde 4º -5º semana Placenta es la principal fuente de cffdna apoptosis de células trofoblásticas, con la consecuente liberación de cffdna a la circulación materna ADN fetal circulante se elimina rápidamente de la sangre materna a las pocas horas de ocurrido el parto Utilidad clínica Predicción del fenotipo Rh fetal en plasma materno estudios realizados identificando Rh fetal desde semana 12 Predicción del sexo fetal en plasma materno identificación de secuencias específicas del cromosoma Y desde los 14 días postconcepcionales [REV. MED. CLIN. CONDES - 2014; 25(6) 887-893] http://www.rapid.nhs.uk/guides-to-nipd-nipt/introduction/
Utilidad clínica Enfermedades genéticas monogénicas / cromosómicas Herencia AD Distrofia miotónica, enfermedad de Huntington, Acondroplasia, talasemia, displasia tanatofórica, síndrome de Apert Herencia AR fibrosis quística : previo conocimiento de mutación parental Aneuploidías 13, 18, 21, cromosoma X [REV. MED. CLIN. CONDES - 2014; 25(6) 887-893] http://www.rapid.nhs.uk/guides-to-nipd-nipt/introduction/
Técnicas utilizadas para NIPD Massively Parallel Shotgun Sequencing (MPSS): secuencia fragmentos de DNA del genoma completo se obtienen alrededor de 10 millones de secuencias cortas de ADN tags (25 36 bp) Se categorizan por cromosomas mapa de reads con los cromosomas de interés Comparación con referencias de cromosomas normales Excede el límite de lo normal (disomía) existe una trisomía Esta técnica no entre material genético fetal y materno evaluar la diferencia, aunque sea pequeña, que genera la trisomía fetal (%) [REV. MED. CLIN. CONDES - 2014; 25(6) 887-893] http://www.rapid.nhs.uk/guides-to-nipd-nipt/introduction/
Técnicas utilizadas para NIPD Targeted Sequencing (secuenciación dirigida) Enfoca en regiones específicas del genoma Aumenta cobertura de región seleccionada Literatura reporta buenos resultados para predicción de trisomía 21 y 18 (sensibilidad y especificidad cercanas al 100%) Entre 1 10% casos (dependiendo del proveedor del servicio) no se obtienen resultados segunda secuenciación [REV. MED. CLIN. CONDES - 2014; 25(6) 887-893] http://www.rapid.nhs.uk/guides-to-nipd-nipt/introduction/
Limitaciones NIPD Diagnóstico Prenatal No invasivo Gestaciones múltiples: no es posible definir de cuál feto es cffdna Mujeres tiene IMC elevado (obesidad): bajo % cffdna resultados inconclusos Mosaicismo placentario presencia de trisomía de células placentarias pero con fetos normales Anormalidades cromosómicas maternas, incluyendo moisaicismos o enfermedades malignas pueden también alterar los resultados Puede requerir test Invasivo confirmatorio posterior al reporte NIPD Clin Perinatol 34 (2007) 287 297 http://www.rapid.nhs.uk/guides-to-nipd-nipt/introduction/
Beneficios NIPD Diagnóstico Prenatal No invasivo Reducción del número de test invasivos No incrementa riesgo de abortos Requiere menos experiencia en la realización del test NIPD Test invasivo es considerado más molesto que el test en sangre periférica materna Se puede realizar más temprano (Edad Gestacional 10 semanas) que los test invasivos Clin Perinatol 34 (2007) 287 297 http://www.rapid.nhs.uk/guides-to-nipd-nipt/introduction/
Recomendaciones para su implementación ACOG 2012 Estudio de cffdna materno no debe ser ofrecido a mujeres de bajo riesgo Edad materna mayor a 35 años Riesgo aumentado de aneuplodía por ultrasonido Embarazo previo con trisomía Test de screening positivo Traslocación parental balanceada que signifique un riesgo aumentado de trisomía fetal American College of Obstetricians, Gynecologists Committee on Genetics, Society for Maternal-Fetal Medicine Publications Committee. Committee Opinion No. 545: Noninvasive prenatal testing for fetal aneuploidy. Obstet Gynecol. 2012; 120:1532-4.
http://www.rapid.nhs.uk/guides-to-nipd-nipt/nipt-for-down-syndrome/
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http://www.illumina.com/clinical/reproductive-genetic-health.html?sciid=2014243ibn1
Gracias dlcastrogenetista@gmail.com