Avances genéticos en diagnóstico prenatal. Dr. David Poyatos Andújar. Especialista de producto Área Molecular

Transcripción

1 Avances genéticos en diagnóstico prenatal Dr. David Poyatos Andújar. Especialista de producto Área Molecular

2 er trimestre 2º trimestre 3er trimestre 2

3 Test Prenatal No Invasivo Detección T13, T18, T21, monosomía X, Triploidía y sexo fetal en sangre materna

4 Estimación del riesgo basado en: FACTORES FENOTIPICOS 80-95% Tasa de detección >99% 90% Sensibilidad >99% 95% Especificidad >99% 5% Falsos positivos <0.1% 5-15% Falsos negativos < 0.1% DNA FETAL 4

5 Test Prenatal No Invasivo Obstet Gynecol Dec;120(6): doi: /01.AOG f4. 5

6 Indicaciones para Test Prenatal No Invasivo de aneuploidías fetales ACOG Committee Opinion Número 545, Diciembre 2012 Conclusiones Mujeres > 35 años. Antecedentes de aneuploidia Screening bioquímico en suero materno alterado. Hallazgos ecográficos de aumento de riesgo de aneupoloidía. Parejas con translocación robertsoniana del 13 o el 21. Casos de bajo riesgo: Ansiedad materna/ recomendación por ginecólogo 6

7 Test Prenatal No Invasivo basado en DNA fetal 7

8 Detección DNA fetal (cffdna) en sangre materna MÉTODO CONTAJE ANÁLISIS SNPs MPSS- Secuenciación masiva Secuenciación dirigida Secuenciación dirigida Sequenom Verinata BGI Ariosa Natera Regiones no polimórficas Polimórfismos (SNPs) 8

9 Detección DNA fetal Secuenciación masiva 9

10 Detección DNA fetal Secuenciación masiva 1.5% del genoma 10

11 Diferencias con otros métodos Competencia Harmony, Trisonim, Nace plus Echevarne Test Prenatal No Invasivo (PanoramaTM) Método de contaje Análisis de SNPs No diferencia ADN materno del fetal Separa y genotipa el ADN fetal Laboratorio Echevarne Tel

12 Algoritmo informático Método de contaje Análisis de SNPs Z-score 3.0 = abnormal 12

13 Importancia concentración de cffdna en sangre materna FP / FN 13

14 Impacto concentración de cffdna en sangre materna En el estudio de Palomaki : 12 casos con Tri21 tuvieron una fracción fetal de 4-8% 3 fueron reportados como normales = 25% falsos negativos En los datos de ISPD de Natera (Junio 2013): 18 casos con aneuploidía tuvieron una fracción fetal de 4-8 % 4 no tuvieron resultados = 22% nueva muestra Palomaki G, Kloza E, Lambert-Messerlian G, et al.dna sequencing of maternal plasma to detect Down syndrome: An international clinical validation study. Genet Med2011;11:

15 Impacto concentración de cffdna en sangre materna Número de Muestras % de casos tienen entre 4% y 8% de FF 4.8% de casos <4% FF 0 Fracción Fetal 15

16 Discordancias método de contaje 16

17 Ventajas análisis de SNPs Análisis de la distribución alélica No es necesaria la cuantificación de lecturas Detección de todos los cromosomas por igual (no influye el contenido GC) Células progenitoras No se necesita cromosoma de referencia Reduce el error por azar Cromosomas materno / paterno SNP Detecta triploidias PCR multiplex con 19,5k sondas Resultados exactos y fiables con fracciones bajas de ADN fetal. Realizar a partir de la semana 9 de gestación 17

18 Ratios de detección en diferentes estudios 18

19 Comparativa en diferentes estudios 19

20 Validación clínica Natera s Non-Invasive Prenatal Testing Technology Shows Unparalleled Specificity, Sensitivity in Clinical Data Presented at American Society of Human Genetics Data from Additional Patients Confirms High Accuracy in Detection of Trisomy 13, Trisomy 18, Trisomy 21, Sex Chromosome Abnormalities American Society of Human Genetics November 09, :00 AM Eastern Time 20

21 Validación clínica. Estudio ciego independiente 21

22 Test Prenatal No invasivo Resultado 22

23 NatalChip Citogenética humana: del microscopio al microchip

24 Razones para el cambio 24

25 Qué tipo de array escoger? 25

26 Aplicaciones Clínicas NatalChip Prenatal 750K y Postnatal Array HD Porqué 2 pruebas? NatalChip Prenatal 750K Interesa ofrecer resultados concluyentes que expliquen alteraciones genéticas con consecuencia conocida y de efecto patogénico bien establecido. NatalChip Postnatal HD Interesa conseguir la máxima resolución para detectar todas aquellas alteraciones que puedan tener un mayor o menor efecto en la sintomatología descrita, y con ello tomar futuras decisiones de seguimiento clínico y reproductivas. 26

27 NatalChip Tecnología Affymetrix (array CGH + SNP array) 27

28 Importancia de la Resolución La resolución es directamente proporcional al nº de sondas y a la distancia entre las sondas. 200,000 genotype-able SNPs 550,000 non-polymorphic probes. 28

29 Comparación cobertura distintas plataformas 29

30 NatalChip Tecnología Affymetrix (array CGH + SNP array) Ventajas Mayor resolución para detectar desequilibrios genómicos. Detecta síndromes de microdeleción y microduplicación >400Kb. Detecta disomías uniparentales, consanguinidad, LOH y triploidías. Más sensible para la detección de mosaicismos. Beneficios frente a técnicas convencionales: Rapidez: resultados en una semana, no cultivo celular Mayor resolución: permite la identificación de pequeñas alteraciones Mayor capacidad de interpretación diagnóstica, identificación >250 síndromes 30

31 Aplicación Arrays diagnóstico postnatal Aumenta entre un 15 y un 20% los casos diagnosticados DI-RD vs. cariotipo. Recomendaciones de ACMG& ISCA,(2010) Directrices ACMG(2011) 31

32 Aplicación Arrays diagnóstico prenatal 32

33 Aplicación diagnóstico prenatal Indicaciones Anomalías ecográficas Resultado de cariotipo ambiguo Sospecha de síndrome por deleción/duplicación Historia familiar de desequilibrio cromosómico Screening bioquímico alterado Indicado en malformaciones fetales NT >3 mm y/o TS elevado Tasa detección 3-10% Rápido y seguro

34 Aplicación diagnóstico prenatal Indicaciones Edad materna avanzada Ansiedad 3000 muestras Tasa de detección Alto riesgo 5,8% (7/120) Bajo riesgo.. 0,5% (6/1118) Ansiedad. 0,7% (11/1674) 34

35 Aplicación diagnóstico prenatal Increased detection rate of chromosomal imbalances, 3.6% when conventional karyotyping was normal 5.2% when indication was a structural malformation on ultrasound. Mayor tasa de detección 35

36 Aplicaciones Arrays en Diagnóstico prenatal Ultrasound Obstet Gynecol Apr;39(4): doi: /uog we recommended the application of a genome-wide, and not a targeted Human Mutat Jun;33(6): doi: /humu Epub 2012 Apr 16. It is preferable to use the same platform for both prenatal and postnatal settings. A highresolution array guarantees a minimum of false-negative results Mayor resolución 36

37 Indicaciones Arrays en Diagnóstico prenatal Conclusion: Based on the increased detection of clinically relevant abnormalities in both, structurally normal and abnormal pregnancies, chromosomal microarray analysis should be transitioned to become the first tier test for invasive prenatal cytogenetic diagnosis. 37

38 Preeclampsia Detección precoz

39 Diagnóstico clásico PE Estimación de riesgo de PE

40 Por qué marcadores angiogenicos?? 10-20% 80-90%

41 Estimación de riesgo en 1er trimestre semanas PlGF Factores maternos Doppler AUt PAPP-A PlGF Score Alto riesgo Bajo riesgo AAS dosis baja sensibilidad y una especificidad cercanas al 90% para la PE temprana Embarazo normal Preeclampsia PlGF hasta ½ 3er Trim Niveles más bajos

42 Diagnostico PE en 2º y 3er trimestre semanas sflt-1/pigf Doppler AUt +/- sflt-1/plgf Dx. Bajo riesgo Alto riesgo Seguimiento intensivo sensibilidad y especificidad > 95% para el diagnóstico de la PE temprana 4-5. Diagnostico y manejo Embarazo normal Preeclampsia PlGF hasta ½ 3er Trim Niveles más bajos sflt1 final embarazo Niveles + altos y antes 4. SunderjiS,. Am J ObstetGynecol. 2010;202:40.e VerlohrenS, Am J ObstetGynecol. 2010;202:161.e1 11.

43 Diagnostico PE en 2º y 3er trimestre

44 Aplicaciones de los marcadores angiogénicos en la práctica clínica Manejo Score Herraiz et al,. Diagn Prenat. (2011);22(2):32 40

45 Muchas gracias por su atención