PRUEBAS DE DIAGNOSTICO Hospital Roosevelt Laboratorio Clínica de Enfermedades Infecciosas Septiembre 2013
DIAGNÓSTICO DE LA INFECCIÓN POR EL VIH El diagnóstico definitivo de la infección por el VIH sólo puede establecerse por métodos de laboratorio. El correcto y oportuno dx ya sea directo o indirecto ha permitido: Reconocer a las personas infectadas Establecer medidas preventivas adecuadas, Ayuda esencial en el seguimiento de los pacientes para conocer el pronóstico de la enfermedad y la eficacia del tratamiento utilizado. 2 Laboratorio de enfermedades infecciosas - Hospital Roosevelt
Métodos empleados para el diagnóstico Métodos directos Detectan al propio virus o alguno de sus componentes proteínas ácidos nucleicos Métodos indirectos Reconocen los anticuerpos específicos Tamizaje (EIA, ELISA) Confirmación (Western blot) 3 Laboratorio de enfermedades infecciosas - Hospital Roosevelt
Oraquick Pruebas de laboratorio validadas en Guatemala Instanscreen Determine Laboratorio de enfermedades infecciosas -Hospital Roosevelt 4
Diagnóstico de casos positivos para VIH 2 Pruebas de tamizaje de diferente principio inmunológico Prueba Rápida + ELISA ELISA + Prueba Rápida ELISA + ELISA Prueba Rápida + Prueba Rápida 5 Recomendación en: Protocolo Nacional para el Tratamiento Antirretroviral del VIH-SIDA. Comisión de acceso a tratamiento, Programa Nacional de SIDA, Ministerio de Salud Pública y Laboratorio Asistencia Social, de enfermedades Guatemala, Junio infecciosas 2002 y OMS - Hospital Roosevelt
Pruebas confirmatorias Inmunofluorescencia indirecta (IFI) Radioinmunoprecipitación (RIPA) Western blot (WB) Resultado indeterminado Seroconversión reciente, hijos de madres seropositivas, embarazo, enf. autoinmunes 6 Laboratorio de enfermedades infecciosas - Hospital Roosevelt
7 Western blot Prueba de confirmación Principio: Ensayo inmunoenzimático Detecta anticuerpos contra proteínas específicas del VIH Interpretación: visual Muestras: suero y plasma Volumen: 20 µl Tiempo: 3.5 hrs Sensibilidad: 100% Especificidad: 100% Laboratorio de enfermedades infecciosas - Hospital Roosevelt
Nomenclatura de las bandas en Western Blot Gen Proteína Denominación CDC OMS env Precursora de la gp160 gp160 Al menos 2 envoltura bandas Glucoproteína externa gp120 gp120 Glucoproteíina transmembrana gp41 gag Precursora del core p55 Precursora del core p40 Proteína principal p24 p24 Proteína de la matriz p17 8 pol Transcriptasa inversa p66 Transcriptasa inversa p51 Endonucleasa p32 Laboratorio de enfermedades infecciosas - Hospital Roosevelt
Causas de resultado falso-positivo Relativas al suero: Tiempo y forma de almacenamiento a temperatura no adecuadas. Característcas del suero ( lipemia o turbidez) Errores de extracción o identificación. Relativas a la presencia de auto anticuerpos: (Enf.autoinmunes, procesos malignos) Relativas a otras condiciones: (Vacunas) 9 Laboratorio de enfermedades infecciosas - Hospital Roosevelt
Causas de resultado falso- negativo Periodo de ventana Tratamiento con inmunosupresores Procesos malignos Trasplante de médula ósea Disfunciones de las Células B Factores reumatoides Pérdida de estabilidad de los reactivos Reactivos que detectan principalmente p24 Pobre respuesta inmune 10 Laboratorio de enfermedades infecciosas - Hospital Roosevelt
Consideraciones Especiales Niños < de 18 meses hijos de madre VIH positiva: Todas las pruebas de anticuerpos dan resultados Positivos. Un resultado positivo con pruebas de anticuerpos no siempre indica infección por VIH. El diagnostico se establece con métodos directos de diagnóstico y sospecha clínica. Se debe dar seguimiento con pruebas de anticuerpos hasta los 18 meses 11 Laboratorio de enfermedades infecciosas - Hospital Roosevelt
Carga Viral y diagnostico de VIH La sensibilidad es alta La especificidad: Primoinfección 97(%2-4 sem) Neonato: < 97%: (4 sem) Tomar en consideración cargas virales > 30,000 Y no se deben tomar decisiones medicas con una sola determinación de CV 12 Laboratorio de enfermedades infecciosas - Hospital Roosevelt
DIAGNOSTICO DE SIFILIS
DIAGNOSTICO DE SÍFILIS METODOS DIRECTOS Observación de los treponemas Microscopia de campo oscuro Técnicas moleculares METODOS INDIRECTOS Diagnóstico serológico: Detección de anticuerpos. Pruebas treponémicas Pruebas no treponémicas
Métodos directos Identificación del T. pallidum Examen directo del exudado de la lesión Campo obscuro y/o fluorescencia directa (DFA-TP) Prueba definitiva para asegurar el diagnóstico en la fase primaria de la infección Ventajas Inmediatez y bajo costo. Resultado previo a la positivización de las pruebas serológicas
Métodos indirectos Diagnóstico Serológico: Es el más utilizado en la actualidad. Reactividad después de 14 a 20 días de aparecido el chancro. La sensibilidad y especificidad varían según el estadio de la enfermedad. No Treponémicas Pruebas Treponémicas
Pruebas no treponémicas V.D.R.L. (Venereal Research Disease Laboratory) Utiliza solamente suero Antígeno no particulado La reacción que se obtiene con la muestra positiva es de floculación Lectura microscópica. R.P.R. (Rapid Plasma Reagin) Puede emplearse con suero y plasma. Es un antígeno con partículas de carbón.
Falsos positivos No superan por lo general los títulos de 1/4 Pueden ser transitorios o permanentes según persistan o no más de seis meses. Muestras hemolizadas o lipémicas. La prueba RPR tiende a dar títulos más elevados que la prueba VDRL. colagenosis, edad avanzada, uso de drogas por vía parenteral, enfermedad crónica hepática, infecciones crónicas graves (VIH, TB). En estudios poblacionales todos los sueros reactivos deberán confirmarse con una prueba treponémica.
Pruebas treponémicas FTA-ABS Es una prueba compleja Sometida a múltiples causas de error si no se estandarizan previamente todos los reactivos entre si. Lectura menos objetiva Presenta aproximadamente un 1% de falsos positivos
Pruebas treponémicas TPHA Método sencillo de realizar ensayándose la muestra a una dilución de 1/80. No está demostrada la utilidad de cuantificar el resultado. No validada para su empleo en LCR. Produce menos falsos positivos que FTA-ABS (< 1%)
Características de la pruebas treponémicas Si son positivas, a menudo siguen siéndolo de por vida, a pesar del tratamiento de la enfermedad o de su actividad. Los títulos de anticuerpos no están relacionados con la actividad de la enfermedad. Deben comunicarse como negativos o positivos.
Algoritmo para diagnóstico de sífilis
HEPATITIS B
Diagnóstico Requiere de evaluación: Clínica: Signos y Síntomas (La mayoría asintomáticos). Bioquímica. Serológica. Histológica. Virológica.
Antígeno de superficie (HBsAg) o Diagnóstico de infección aguda o crónica. o Primer antígeno que aparece en el torrente sanguíneo durante una infección aguda. o Su desaparición indica que el paciente se ha recuperado de una infección. o Su persistencia por más de seis meses indica infección crónica.
Anticuerpos contra el core total (anti-hbc) o Indica una infección pasada: HBsAg (-) + anti-hbc (+) o Por lo general persiste de por vida después de la infección. o No se presenta en individuos que son inmunes por haber sido vacunados: HBsAg (-) + anti-hbc (-) o En casos aislados la infección puede transcurrir sin que los anticuerpos anti-hbc puedan detectarse. pacientes inmunodeprimidos
Anticuerpos contra el core de clase IgM (HBcIgM) o Presente de 2 a 16 semanas después de la infección antígeno de superficie detectable anticuerpos contra el antígeno de superficie aún no son detectables o HBsAg (+) + HBcIgM (+) = infección reciente o Detectable generalmente durante un período de seis meses Infección crónica con reactivación de la multiplicación viral
Antígeno e (HBeAg) y anticuepos contra el antígeno e (anti-hbe) o El HBeAg es una proteína producida por el virus. o Indica que hay gran cantidad de virus en la sangre. La persona debe considerarse contagiosa o Primer marcador serológico que resulta negativo al concluir la fase aguda. Es sustituido por los anticuerpos correspondientes (anti-hbe) o HBsAg (+) + HBeAg (-) + Anti-HBe (+) = todavía infecciosa y con capacidad para transmitir la enfermedad.
Anticuerpos contra el antígeno de superficie (Anti-HBs) o Consecuencia de haber sufrido de hepatitis B o Determina si hay una protección inmunitaria después de la inmunización con la vacuna. Inmunidad = >10 UI/L o Resultados >10 UI/L en personas con infección aguda de hepatitis B reciente indican que la recuperación es completa. o No es detectado cuando el antígeno de superficie también está presente. o HBsAg (+) + Anti-HBs (+) = raros casos de infección crónica La persona se considera infecciosa
Marcadores de VHB y su interpretación Infección crónica con replicación HBsAg (+) + Anti-HBc (+) + Anti-HBc IgM (-) + HBeAg (+) Infección crónica sin replicación HBsAg (+) + Anti-HBc (+) + Anti-HBc IgM (-) + HBeAg (-) Precore Mutante HBsAg (+) + anti-hbc (+) + HBeAg (-) + DNA VHB (+) Hepatitis B oculta HBsAg (-) + HBeAg (+/-) + DNA VHB (+) sospecha por clínica
Posibilidad con pacientes con Anti-HBc positivo aislado y manejo HBsAg (-) + Anti-HBc (+) Tres posibilidades: Anti-HBs (+): Infección pasada inmunidad. y resuelta con Anti-HBs ( ) y Carga viral (-): Infección pasada sin inmunidad. Anti-HBs ( ) y Carga viral (+): DNA positivo: 2-5% de pacientes.
Antígeno de superficie negativo y core total positivo Adaptado: Mejía, C. et al. Uso de cargas virales y marcadores de hepatitis virales en el laboratorio: indicaciones principales. Clin Enf Inf 2008;1:154-159
GGRACIAS racias