b) Métodos automáticos: basados en variaciones en la conductividad o resistencia, basados en la difracción Células: TEMA 8: HEMATOLOGÍA Hematíes: < Anemia, > Policitemia Leucocitos:<Leucopenia,>Leucocitosis Plaquetas: <Trombocitopenia, > Trombocitosis Análisis sistemático de sangre: recuento de células sanguíneas, fórmula leucocitaria, concentración de hemoglobina y hematocrito. Recuento de células sanguíneas = citometría hemática o hemocitometría a) Métodos ópticos
Fórmula leucocitaria: proporción presente en la sangre de cada tipo de leucocito Métodos: a) Extensiones sanguíneas b) Métodos automáticos ej. mediante sistemas de citoquímica celular. Fundamento: tamaño y tinción. Utiliza dos canales: 1. canal de la peroxidasa y 2, canal de basófilos /lobularidad. Canal de la peroxidasa: A: Linfocitos B: Monocitos C: Neutrófilos D: Eosinófilos E: LCU, células de gran tamaño
Células sanguíneasneas Plaquetas, linfocito Monocito Neutrófilo Eosinófilo Basófilo Neutrófilos: 3.500-7.000/mm 3, 60-70% Eosinófilos: 150-400/ mm 3, 2-4% Basófilos: 50-100/ mm 3, < 1% Linfocitos: 1.500-2.500/ mm 3, 20-25% Monocitos: 200-800/ mm 3, 3-8% Eritrocitos: 4,5-5 millones/ mm 3 Plaquetas: 200.000-300.000/ mm 3
EXPLORACIÓN DE LA FASE DE COAGULACIÓN DEFINICIÓN: Medición in vitro del tiempo que tarda la sangre en formar un coágulo. ASPECTOS PRÁCTICOS: Extracción de la sangre: punción limpia para que no se contamine con el factor tisular Muestra: normalmente se utiliza plasma, debe obtenerse lo antes posible. Si se forma algún coágulo la muestra no es válida Anticoagulante: Citrato sódico al 3,8% en proporción 1:10 (ej. 1 ml de anticoagulante por 9ml de sangre)
DETERMINACIONES: TIEMPO DE COAGULACIÓN: tiempo que tarda en coagular la sangre sin anticoagulantes a 37ºC depositada en un tubo de cristal. V.N. 8-12 minutos Valoro la vía intrínseca Método de Lee-White TIEMPO DE CEFALINA PARCIALMENTE ACTIVADA (TTPA): tiempo de coagulación de un plasma citratado pobre en plaquetas al que se añade Ca+2 un fosfolípido (cefalina) que sustituye al factor plaquetario III y un activador. V.N. 30-40 segundos (no debe exceder en 8 segundos al patrón) Valoro vía intrínseca salvo el factor plaquetario TIEMPO DE PROTROMBINA O TIEMPO DE QUICK: Mide el tiempo de coagulación de un plasma al que se añade calcio y tromboplastina tisular V.N. 10-15 segundos Valoro la vía extrínseca de la coagulación TIEMPO DE TROMBINA: tiempo de coagulación de un plasma al que se le añade trombina V.N. 15-20 segundos. Diferencias de 5 segundos con el tiempo de un plasma testigo son significativas Valoro: 1) cantidad y calidad de fibrinógeno presente 2) Presencia o no de antitrombinas
EXPLORACIÓN DE LA FASE DE COAGULACIÓN-METODOLOGÍA- TIEMPO DE COAGULACIÓN Método de Lee-White: Partimos de dos tubos de cristal introducidos en un baño a 37ºC Depositamos aproximadamente 1 ml de sangre sin anticoagulante en cada tubo y ponemos en marcha el cronómetro Uno de los tubos se saca del baño cada 30 segundos y se inclina para ver si fluye la sangre Cuando la sangre no fluya se saca el segundo tubo del baño cada 15segundos, cuando la sangre no fluya se para el cronómetro y se anota el tiempo. TIEMPO DE CEFALINA PARCIALMENTE ACTIVADA (TTPA) Recoger la sangre sobre citrato sódico y centrifugar 10 min a 3000rpm para obtener el plasma En un tubo de hemólisis calentado depositar 0.1ml de plasma + 0.1ml de cefalina con activador Mezclar e incubar 3 min a 37ºC Añadir 0.1ml de Cl2Ca 0.025M y poner en marcha el cronómetro Agitar sin sacar el tubo del baño Sacar el tubo a los 30 segundos y anotar el tiempo de coagulación El ensayo se debe realizar por duplicado, en las 3 horas siguientes a la extracción y comparando con un patrón TIEMPO DE PROTROMBINA O T DE QUICK Esta determinación se utiliza para el control del tratamiento con anticoagulantes orales En un tubo de hemólisis se depositan 0.1 ml de plasma y se incuba 2 minutos a 37ºC Transcurrido ese tiempo se añade 0.2 ml de tromboplastina cálcica previamente precalentada (15 minutos a 37ºC) y se pone en marcha el cronómetro anotándose el tiempo de coagulación El ensayo se hace por duplicado y comparando los resultados con los de un patrón. Debe llevarse a cabo en las 4horas siguientes a la extracción. TIEMPO DE TROMBINA Se incuban 0.2 ml de plasma durante 2 minutos a 37ºC Se añade 0.2 ml de trombina cálcica, se pone en marcha el cronómetro y se anota el tiempo de coagulación El ensayo se realiza por triplicado, obteniéndose el valor medio. Los resultados se comparan con los de un patrón.