Guatemala, 19 23 marzo 2007 Norma Binsztein Jefa Departamento Bacteriología INEI-ANLIS Carlos G Malbran Argentina
Red Internacional para la Subtipificación de Patógenos Transmitidos por Alimentos CDC: 1995 Objetivo: Reducir las Enfermedades de Transmisión Alimentaria promoviendo la utilización de Técnicas Moleculares para el diagnóstico y tipificación de patógenos a fin de fortalecer la vigilancia y el sistema de respuesta.
Tipificación Métodos de laboratorio: Biotipificación Serotipificación Perfiles de Resistencia a Antimicrobianos Fagotipia Diagnóstico y caracterización n por técnicas t de biología molecular Tipificación n molecular-subtipos huella identificatoria del DNA ( fingerprinting DNA / huella digital del DNA)
Epidemiología Molecular Herramienta poderosa para la Vigilancia Basada en Laboratorio ETA = Vigilancia Integral
Cómo ayuda la SUBTIPIFICACIÓN N a la DETECCIÓN INVESTIGACIÓN N y CONTROL de BROTES? Identifica al microorganismo causal del brote - lo diferencia de otros/s - reduce errores de identificación Relaciona casos aparentemente esporádicos - dispersos en el espacio y/o tiempo - reconoce brotes Confirma asociación n con el vehículo o fuente - identifica fuente de contaminación - traza rutas de diseminación Permite la comparación n simultánea de resultados análisis interpretación CONTROL investigación
Subtipificación Ejemplos paradigmáticos 1993: E.coli O157:H7. Contaminación n de hamburguesas en restaurant de comida rápida. r PFGE a aislamientos clínicos y de alimentos (Barrett TJ & al, J Clin Microbiol 33:3013-3017, 3017, 1994) 1995: Salmonella Stanley.. Un brote en USA (Arizona y Michigan) ) y en Finlandia. Por PFGE igual perfil, causado por brotes de alfalfa provenientes de semillas contaminadas, de Holanda. (Mahon B E & al, J Infect Dis 175: 876-882, 882, 1997)
PulseNet (I) Gold standart = Electroforesis en campo pulsado (PFGE) Salmonella Typhi: estudio de un brote en Argentina SB 1 2 3 SB 4 5 6 7 SB SB: Salmonella Braenderup H9812, Cepa Standard de PulseNet 1, 2 y 3: Aislamientos asociados a brote 4, 5, 6 y 7: Aislamientos esporádicos PFGE con la enzima XbaI, aplicando el protocolo estandarizado de la Red PulseNet Internacional
PulseNet (II) Relación genética entre aislamientos de S. Typhi: estudio de un brote en Argentina Dendograma, utilizando el coeficiente de Dice, de los aislamientos de S. Typhi, (enzima XbaI). Análisis realizado con el programa BioNumerics versión 4.0 (Applied Maths). Aislamientos Buenos Aires, Agosto 2004 Bs. As., Julio 2004 Salta, 2003 Cap. Fed., 2003 Misiones, 2003
PulseNet Red Internacional PulseNet Internacional Coordinación = CDC - USA - Canadá - Europa - Asía Pacífico - América Latina
PulseNet Objetivos Específicos Reforzar la Nacional e Internacional de las s ETA Mejorar el reconocimiento, diagnóstico e investigación n de Detectar tempranamente Establecer Nacionales y Regionales Fortalecer la entre países Utilizar cuidadosamente la Nacional y Regional en Consolidar la colaboración entre Laboratorio Clínica y Epidemiología
PulseNet Internacional Elementos de la Red Protocolos estandarizados y validados Software adecuado para el análisis de datos Bancos de Datos Nacionales Bancos de Datos Regionales Programa de calidad de procedimientos: certificación n y convalidación n periódica Comunicación: n: reuniones / forum / list server Intercambio de información Capacitación n continua Incorporación n de nuevos patógenos teniendo en cuenta necesidades de país/regi s/región
PulseNet y Patógenos Transmitidos por Alimentos E.coli O157:H7 Salmonella Listeria Shigella sonnei Clostridium perfungens Campylobacter jejuni Vibrio para hemolyticus Vibrio cholerae Clostridium botulinum Otros E.coli Yersinia enterocolitica Patógenos priorizados por: a) Disponibilidad de un método m de subtipificación n adecuado b) Severidad de la enfermedad c) Capacidad de causar brotes d) Evaluación n de la subtipificación n de rutina para el reconocimiento temprano de brotes
OPS-OMS Grupo Técnico de Inocuidad de Alimentos Centers for Disease Control and Prevention INEI-ANLIS Carlos G. Malbran PulseNet América Latina Red de Subtipificación Molecular para Vigilancia de Enfermedades Transmitidas por los Alimentos
PulseNet América Latina Actividades (I) Acuerdo en constituir la Red Pulse AL: 1ª 1 reunión n microbiólogos y epidemiólogos Documento regulatorio de derechos y obligaciones de los miembros de la Red 1er curso teórico práctico en la metodología estandarizada para subtipificación n de Salmonella a y Escherichia coli O157 (Laboratorios Nacionales de Referencia: Brasil, Uruguay, Chile, Venezuela, Colombia, México M y Argentina)
PulseNet América Latina Actividades (II) Certificación n del Laboratorio Regional de Referencia en Salmonella y E. coli O157 2do curso teórico práctico: incorporación n de nuevos miembros a la Red PulseNet AL: LNR de Bolivia, Paraguay, Perú,, Nicaragua, Costa Rica y Cuba) Prueba piloto Colaboración n en la implementación: n: Venezuela y Uruguay Certificación n del Laboratorio Regional de Referencia en Shigella, Campylobacter y Listeria. Comienzo del proceso de Certificación n (Uruguay, Chile, Brasil, Venezuela y Colombia) Colaboración n en la implementación: n: México M y Perú 20 23 julio: Taller BioNumerics y y 4ta Reunión n Anual de la Red PulseNet AL
PulseNet: estudios realizados en América Latina Salmonella spp. Shigella spp. Escherichia coli productor de toxina Shiga Vibrio cholerae
PulseNet América Latina: primeros estudios a nivel Regional Diversidad genética de S.. Typhi (Colombia - Argentina) Diversidad genética de S. Typhimurium (Costa Rica Colombia Argentina)
Análisis por PFGE de cepas de V. cholerae O1 aisladas en Argentina 75 80 85 90 95 100 Clon epidémico CT+ 1992-1998 Aislamiento año 2005 CT+ Aislamientos año 2000 CT+ Variante Tucumán CT- 1992-1998 M. Pichel y col, J Clin Microbiol 41: 124-134, 2003
PulseNet AL Participantes 2004 (Argentina, Brasil, Chile, Colombia, Uruguay y Venezuela) Participantes 2005 (Bolivia, Costa Rica, Cuba, Nicaragua, Paraguay, Perú) Laboratorio de Referencia Regional Base de Datos Regional (OPS)
PulseNet AL Coordinación OPS / OMS CDC Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas ANLIS Carlos G Malbran Base de datos Nacional: cada país Base de datos Regional: OPS
PulseNet AL Quiénes participan? Interés s del país s y del Laboratorio Nacional de Referencia (LNR) Importancia para la Vigilancia, Control y Prevención n de las ETA Activa participación n en la Vigilancia de Patógenos de Transmisión n Alimentaria Enviar solicitud al Comité Ejecutivo de PulseNet AL Equipamiento y Software Disponible -Proyectos -Brotes Base de Datos Nacional Centro Regional Base de Datos Regional - OPS No disponible en el corto plazo -Proyectos -Brotes Centro Regional (CR) PFGE Análisis Base de Datos Nacional Acuerdo con LNR Base de Datos Regional - OPS