Boletín Técnico. Pfizer Sanidad Animal. Vanguard 7 Ayuda a Proteger frente al Desafío Con Parvovirus Canino Virulento Antigénico Tipo 2c (CPV-2c)
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- Rodrigo Ponce Quiroga
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1 Pfizer Sanidad Animal Boletín Técnico Marzo de 2008 Vanguard 7 Ayuda a Proteger frente al Desafío Con Parvovirus Canino Virulento Antigénico Tipo 2c (CPV-2c) E.M. Siedek, MV, Doctor en Filosofía, Miembro del Real Colegio de Cirujanos Veterinarios P. Munyira, MV, Doctor en Filosofía, Veterinario Especializado en Virología Pfizer Sanidad Animal, Investigación & Desarrollo en Medicina Veterinaria, Ramsgate Road, Sandwich, CT13 9NJ, Reino Unido H. Schmidt, MV, Doctor en Filosofía Bioservicio Harlan para Ciencias GMBH, Suedkampen 31, Walsrode, Alemania Nota: En los Estados Unidos, las vacunas Vanguard Plus contienen la misma cepa atenuada CPV-2 NL-35-D que en Vanguard 7, cuya fórmula es apenas diferente.
2 ANTECEDENTES El parvovirus canino tipo 2 (CPV-2) es un patógeno importante en la vida de los perros domésticos debido a que causa gastroenteritis aguda severa y, muy extrañamente, miocarditis fatal en perros jóvenes. El CPV-2 fue aislado por primera vez en el año 1978, y su diseminación ocurrió rápidamente en todo el mundo (Appel et al, 1979). Desde el principio de los 80, se han presentado diferentes mutaciones en CPV-2, dando como resultado los tipos antigénicos más recientes CPV-2a, CPV-2b y CPV-2c (Truyen, 2006). Se cree que la mejor unión a un receptor condujo a la selección de aquellos mutantes (Hueffer y Parish, 2003). En la actualidad, la cepa CPV-2 original parece haberse extinguido a campo (Battilani et al, 2002). Vanguard 7 (Pfizer Ltd.), una vacuna multivalente para uso en perros, comercializada en los Estados Unidos contiene, entre otros antígenos, el CPV-2 vivo atenuado. La vacuna se desarrolló a fines de los 70 y demostró ayudar en la prevención de los signos clínicos y la reducción de la eliminación por heces debido a infección por CPV-2 (Estudio Pfizer Número V7E6, 1980). El objetivo de este estudio fue demostrar que la cepa viva atenuada CPV-2 NL-35_D en Vanguard 7 puede ayudar a la protección de perros jóvenes versus un desafío con una más reciente cepa de campo virulenta CPV-2c (Estudio Pfizer Número 9161R ). METODO De acuerdo a la monografía de la Farmacopea Europea, se utilizaron siete perros Beagle puros de entre 8 y 9 semanas de edad y Libres de Patógenos Específicos (SPF). El estudio fue de tipo controlado, al azar y de laboratorio con dos grupos de prueba compuestos por 2 ó 5 perros machos o hembras. El Grupo 1, conformado por 2 perros (1 macho y 1 hembra) fue vacunado dos veces con el compuesto de control (agua estéril), con tres semanas de diferencia, el Día 0 y el Día 21. El Grupo 2, compuesto por 5 perros (2 machos y 3 hembras) fue vacunado dos veces con Vanguard 7, con una diferencia de tres semanas, el Día 0 y el Día 21. Tres semanas posteriores a la segunda vacunación, el Día 42, ambos grupos fueron desafiados por vía oral con la cepa virulenta alemana CPV-2c de campo CPV-7/97 (105 TCID50 por dosis). Las muestras de sangre se tomaron para determinación serológica a través de pruebas de inhibición (IHA) de la hemoaglutinación (HA) 8 días previo a la primera vacunación (Día 8), el día de la segunda vacunación (Día 21), el día del desafío (Día 42) y a la finalización del estudio (Día 56). Las muestras tomadas el Día 42 también se analizaron por pruebas de neutralización sérica a fin de determinar anticuerpos neutralizantes para CPV-2c. Los pesos corporales se determinaron 8 días previo a la primera vacunación (Día -8), el día de la primera vacunación (Día 0) y a la finalización del estudio (Día 56). Durante las observaciones clínicas se registraron las temperaturas rectales a diario, desde el día de la primera vacunación (Día 0) y hasta la finalización del estudio 14 días posteriores al desafío (Día 56). Las evaluaciones del sitio 2
3 de inyección se realizaron en todos los animales vacunados desde el día de la primera vacunación (Día 0) hasta el momento del desafío (Día 42). El enrojecimiento se evaluó en una escala de 1 a 4, la hinchazón entre 1 y 5, el grado de ardor entre 1 y 3 y el dolor entre 1 y 2. El conteo de glóbulos blancos (GB) se llevó a cabo 3 veces previo al desafío, los días 38, 40 y 42, y varias veces posterior al desafío los días 45, 47, 49, 52 y 56. Las muestras fecales individuales se recolectaron a diario desde el día del desafío y hasta la finalización del estudio y luego se analizaron por prueba de HA. Todos los procedimientos experimentales, realizados en cumplimiento con la legislación alemana, fueron evaluados desde el punto de vista ético. RESULTADOS Serología Los 7 animales del estudio fueron seronegativos (<10) para CPV previo a la vacunación, verificando así su condición SPF (Tabla 1). Al momento de la segunda vacunación, los 5 animales en el grupo vacunado presentaron títulos IHA de 640, muy por encima del título protector 80 (Tizard, 1998). Posterior a la segunda vacunación y al desafío, los títulos IHA en los animales vacunados se mantuvieron elevados a niveles mayores a 320. Los animales del grupo control presentaron títulos entre 20 y 40 hasta el día 42, confirmando así la falta de exposición a CPV previo al desafío. Los títulos de anticuerpos neutralizantes fueron 320 para el grupo vacunado, con un rango de 320 hasta 640 frente a CPV-2c. PESOS CORPORALES El peso corporal de todos los animales se incrementaron durante la semana previa a la vacunación en consistencia con el normal crecimiento a esta edad (Tabla 2). Al finalizar el estudio, 56 días posteriores a la primera vacunación, los animales vacunados presentaron más del doble de su peso corporal, lo que sugiere que su desarrollo no había resultado afectado por el desafío con CPV-2c virulento. Observaciones Clínicas y Rectal Luego de la vacunación ninguno de los animales vacunados evidenció reacción en el sitio de inyección (enrojecimiento, ardor, dolor y/o hinchazón). La salud de los animales de control y de los vacunados no presentó anormalidades luego de la administración de agua para inyección o Vanguard 7, respectivamente. Posterior al desafío el Día 42, los animales de control evidenciaron signos clínicos típicamente asociados a Parvovirus. Los signos aparecieron 4 días luego del desafío. Debido a ellos, los animales de control fueron retirados del estudio 7 y 9 3
4 El objetivo del estudio fue demostrar que la cepa viva atenuada CPV-2 NL-35-D en Vanguard 7es capaz de ayudar a proteger perros jóvenes frente a desafío con la cepa virulenta a campo CPV-2c recientemente identificada. días posteriores al desafío (Día 49 y 51), respectivamente. Por el contrario, los animales vacunados no evidenciaron signos clínicos anormales luego del desafío. Previo al estudio y posterior a la administración del agua de inyección o de Vanguard 7, la temperatura rectal de todos los animales fluctuó dentro de los límites normales entre 37,9 y 38,18 C (Gráfico 1 y Gráfico 2). Posterior al desafío, la temperatura rectal de todos los animales se mantuvo normal durante 3 días (Gráfico 1 y Gráfico 2). Cuatro días posteriores al desafío (Día 46), se observó pirexia en los animales de control, con temperaturas de >39,5 C durante un día. A partir de entonces, la temperatura rectal en los animales de control disminuyó nuevamente por debajo de 39,4 C. Un animal del grupo control evidenció un segundo incremento en su temperatura rectal 8 días después de producido el desafío (Día 50). Por el contrario, la temperatura rectal de todos los animales vacunados se mantuvo entre 38,3 C y 39,2 C hasta la finalización del estudio 14 días posteriores al desafío. Conteo de Glóbulos Blancos El conteo de glóbulos blancos posteriores al desafío en cada perro del grupo vacunado varió entre el 75% y el 110%, en comparación con los valores de conteos promedio individuales previos al desafío, calculados los Días 38, 40 y 42 (Tabla 3). Por el contrario, ambos perros del grupo control evidenciaron un incremento en los conteos GB >154%, 3 días posteriores al desafío (Día 45), seguido por una disminución de 65% el Día 47 y al 22% el Día 49. Eliminación de CPV por heces Posterior al desafío, los títulos HA de CPV detectados en las muestras fecales individuales provenientes de los perros del grupo vacunado fueron siempre iguales o menores a 160 (Gráfico 3). Sin embargo, dos perros del grupo control evidenciaron un pico de eliminación del virus 4 días después de producido el desafío (Día 46), con un título HA de y , respectivamente. CONCLUSION A partir de este estudio se concluye que la vacunación con Vanguard 7, con una cepa CPV-2, ayuda a proteger a los perros versus una infección virulenta con CPV-2c. Todos los perros vacunados desarrollaron títulos anti-cpv-2 muy por encima del nivel de protección 80 posterior a la vacunación. Los pesos corporales se duplicaron y aún 4
5 superaron ese nivel en animales vacunados durante el estudio a pesar del desafío virulento con CPV-2c. Los animales vacunados no evidenciaron signos clínicos anormales o pirexia ya sea luego de la vacunación o el desafío con CPV-2c. Los conteos GB en animales vacunados no disminuyeron de manera notoria posterior al desafío. La eliminación del virus por heces se redujo con la vacunación. Por consiguiente, quedó demostrado que Vanguard 7 puede utilizarse para ayudar a la protección de los perros frente a infección por CPV-2c. RECONOCIMIENTOS Agradecemos a Uwe Truyen del Instituto de Higiene Animal y Salud Pública Veterinaria de la Universidad de Leipzig por sus consejos, las cepas provistas para el desafío y la realización de todos los ensayos virológicos. 5
6 GRAFICO 1: Grupo Control rectal ( C) en perros vacunados con solución acuosa posterior al desafío con CPV-2c. 40,5 40,0 39,4 rectal (ºC) 38,8 38,3 37,7 37,2 36,6 elevada baja promedio Animal hallado muerto por la mañana 36,1 Primera vacunación 2da. vacunación Día de estudio Desafío GRAFICO 2: Grupo Vacunal rectal ( C) en perros vacunados con Vanguard 7 posterior al desafío con CPV-2c. 40,5 40,0 39,4 rectal (ºC) 38,8 38,3 37,7 elevada baja 37,2 promedio 36,6 36,1 Primera vacunación 2da. vacunación Día de estudio Desafío 6
7 GRAFICO 3: Títulos CPV por prueba de hemoaglutinación en muestras fecales de perros vacunados con Vanguard 7 o solución acuosa posterior al desafío con CPV-2c. Vacunación Día pos-desafío elevada baja promedio Elevado control Bajo control TABLA 1: Las respuestas serológicas a CPV, detectadas por pruebas de inhibitorias de hemoaglutinación en perros jóvenes posterior a la vacunación con Vanguard 7 y el consecuente desafío con la cepa a campo CPV-2c. Cantidad de grupos/animales Tiempo de estudio Día de estudio Control Vacunados Pre-vacunación 3 semanas post-primera vacunación 3 semanas post-segunda vacunación 2 semanas pos-desafío Títulos de anticuerpo neutralizante versus CPV-2c (Día 42) NE: No efectuado debido a que los animales abandonaron el estudio previo al Día 56. 7
8 TABLA 2: Los pesos corporales (kg) en perros jóvenes previo a la vacunación el día de la primera vacunación con Vanguard 7 y a la finalización del estudio. Cantidad de grupos/animales Tiempo de estudio Día de estudio Control Vacunados Pre-vacunación Primera vacunación Finalización del estudio NE: No efectuado debido a que los animales abandonaron el estudio previo al Día 56. TABLA 3: Los conteos de glóbulos blancos (109/1) en perros vacunados con Vanguard 7 posterior al desafío con CPV-2c. Cantidad de grupos/animales Tiempo de estudio Día de estudio Control Vacunados 4 días pre-desafío 2 días pre-desafío Días de desafío Promedio aritmético (Días 38 y 42) 3 días pos-desafío 5 días pos-desafío 7 días pos-desafío 10 días pos-desafío 2 semanas pos-desafío NE: No efectuado debido a que los animales abandonaron el estudio previo al Día 56. 8
9 REFERENCIAS Appel MJG, Scott FW, Carmichael LE. Isolation and immunization studies of canine parvo-like virus from dogs with hemorrhagic enteritis. Vet Rec 1979;105: Battilani M, Ciulli S, Tisato E, Prosperi S. Genetic analysis of canine parvovirus isolates (CPV-2) from dogs in Italy. Virus Res 2002;83: Hueffer K, Parish CR. Parvovirus host range, celltropism and evolution. Curr Opin Microbiol 2003;6: Tizard I. Use of serological testing to assess immune status of companion animals. J Am Vet Med Assoc 1998;213: Truyen U. Evolution of canine parvovirus A need for new vaccines? Vet Microbiol 2006;117:9-13. Data on file, Study Report No. 9161R , Pfizer Inc. Data on file, Study Report No. V7E6, Pfizer Inc. Vanguard es marca registrada de Pfizer Inc Pfizer Inc. Todos los derechos reservados. SAB
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