PCR TURBIQUEST PLUS Instrucciones de Uso
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- Esteban Alcaraz Soto
- hace 6 años
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1 PCR TURBIQUEST PLUS Instrucciones de Uso Ref.:331 Proteína C reactiva Finalidad. Sistema para la determinación cuantitativa de proteína C- reactiva (PCR) en muestras de suero por inmunoturbidimetría. [Solamente para uso diagnóstico in vitro.] Principio. Partículas de látex estabilizadas y recubiertas con anticuerpo anti-proteína C-reactiva (PCR) son aglutinadas cuando la PCR está presente en la muestra. La intensidad de la aglutinación, medida en absorbancia, es proporcional a la cantidad de PCR. Características del sistema. El producto PCR Turbiquest Plus es un método inmunoturbidimétrico fácilmente aplicable a analizadores automáticos capaces de medir absorbancias a 540 nm (530 a 550 nm), permitiendo la realización de la medición junto con los demás exámenes bioquímicos, sin necesidad de utilización de instrumentos especiales. La medición inmunoturbidimétrica presenta un excelente desempeño operacional y permite la evaluación de un gran número de muestras en un corto intervalo de tiempo. Además, el producto PCR Turbiquest Plus presenta versatilidad debido a la posibilidad de ser utilizado tanto en formato birreactivo cuanto monorreactivo. Todas estas características agregan mayor practicidad y seguridad al usuario, además de propiciar una mayor agilidad al proceso analítico. El Calibrador PCR es una preparación liofilizada trazable al Material de Referencia CRM 470/RPPHS (Institute for Reference Materials and Measurements, IRMM). Metodología. Inmunoturbidimetría. Reactivos Reactivo 1 - Listo para su uso. Almacenar entre 2-8 ºC. No congelar. Contiene tampón tris mm ph 8,2 y azida sódica 14,6 mmol/l Reactivo 2 - Listo para su uso. Almacenar entre 2-8 ºC. No congelar. Suspensión de partículas de poliestireno recubiertas con anticuerpo (IgG) anti-pcr humana y azida sódica 14,6 mmol/l Calibrador PCR - Almacenar entre 2-8 ºC. Verificar la concentración en el rótulo del frasco. Preparación liofilizada que contiene PCR en material de origen humano y azida sódica 14,6 mmol/l. Los reactivos deben permanecer fuera de la temperatura de almacenamiento solamente por el tiempo necesario para obtenerse el volumen a ser utilizado. Los reactivos no abiertos, almacenados en las condiciones indicadas, son estables hasta la fecha de caducidad impresa en el rótulo. Durante la manipulación, los reactivos y el calibrador están sujetos a contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden causar reducción de su estabilidad. Precauciones y cuidados especiales Homogeneizar los reactivos con suavidad por inversión antes de utilizarlos. Evitar formación de espuma. El Calibrador PCR está preparado a partir de derivados de sangre humana y fue ensayado para determinar la presencia de HBsAg, anticuerpos anti- HCV y anti-hiv presentando resultados negativos. A pesar de haber sido utilizados tests validados y aprobados, ninguno de ellos puede asegurar que productos derivados de la sangre humana estén libres de agentes infectivos. Por lo tanto, los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados en la manipulación del producto, que no debe ser pipeteado con la boca. Se recomienda manipularlo como siendo potencialmente infectivo. El congelamiento de los reactivos 1 y 2 altera irreversiblemente la funcionalidad de los mismos. Los cuidados habituales de seguridad deben ser aplicados en la manipulación de los reactivos, los que no deben ser pipeteados con la boca. Los reactivos contienen azida sódica que es tóxica. Se debe tener cuidado para evitar la ingestión y en caso de contacto con los ojos lavar inmediatamente con gran cantidad de agua y buscar auxilio médico. La azida sódica puede formar compuestos altamente explosivos con las cañerias de plomo y de cobre. Por lo tanto, utilizar grandes volúmenes de agua para descartar los reactivos. Materiales necesarios y no provistos 1. Analizador capaz de medir con exactitud absorbancia entre 530 y 550 nm. 2. Controles de la serie Qualitrol Plus - Labtest. Muestra Usar solamente suero. El analito es estable por 2 días entre 2-8ºCyhasta 30 días en temperatura igual o inferior a ºC negativos, almacenado en recipiente apropiado para congelamiento. Asegurar que las muestras estén descongeladas y homogeneizadas antes de su utilización. No usar muestras con señales de contaminación o muestras congeladas y descongeladas repetidas veces. 01 Español - Ref.: 331
2 Se debe crear un Procedimiento Operacional Estándar (POE) que establezca procedimientos adecuados para la recolección, preparación y almacenamiento de la muestra. Destacamos que los errores debidos a la muestra pueden ser mucho mayores que los errores ocurridos durante el procedimiento analítico. Como ningún ensayo conocido puede asegurar que las muestras de sangre no transmitan infecciones, todas ellas deben ser consideradas como potencialmente infectivas. Por lo tanto, al manipularlas se debe seguir las normas establecidas para bioseguridad. Para descartar los reactivos y el material biológico, sugerimos aplicar las normas locales, estatales o federales de protección ambiental. Interferencias Concentraciones de bilirrubina hasta mg/dl, triglicéridos hasta 1000 mg/dl, hemoglobina hasta 500 mg/dl y factor reumatoide hasta 300 UI/mL no producen interferencias significativas. Preparo del reactivo de trabajo Para aplicación monorreactivo. El conjunto de un frasco de Reactivo 1 y un frasco de Reactivo 2 permite preparar el Reactivo de Trabajo. Transferir el contenido de un frasco de Reactivo 2 a un frasco de Reactivo 1 y homogeneizar con suavidad. Identificar el frasco de Reactivo de Trabajo y anotar la fecha de caducidad. Estable 30 días entre 2-8ºC,mantenidoen recipiente cerrado, cuando no haya contaminación química o microbiana. Opcionalmente, se puede preparar un menor volumen del Reactivo de Trabajo, utilizando la proporción de 4 volúmenes de Reactivo 1 y 1 (un) volumen de Reactivo 2. Para preservar su desempeño, el reactivo debe permanecer fuera del refrigerador solamente el tiempo necesario para obtenerse el volumen a ser utilizado. Preparo del calibrador. Utilizando una pipeta volumétrica calibrada, añadir 1,0 ml de agua calidad grado reactivo al contenido del frasco. Recolocar el tapón de caucho, reposar durante 10 minutos y homogeneizar por inversión, con suavidad, hasta completa disolución del material. Evitar la formación de espuma. Después de la reconstitución, el Calibrador PCR es estable 30 días, almacenado entre 2-8 ºC bien cerrado, cuando no hubiera contaminación química o microbiana. Estable 90 días a ºC negativos cuando almacenado en recipiente apropiado para congelamiento. Para evitar congelamientos y descongelamientos repetidos, se sugiere separar el material en partes. Procedimiento Ver el Protocolo de Automación para el Sistema Labmax 240. Están disponibles aplicaciones para otros sistemas automáticos y semiautomáticos. Calibración. La concentración del analito en el material Calibrador PCR es trazable al Material de Referencia CRM 470/RPPHS (Institute for Reference Materials and Measurements, IRMM). Calibración de 2 puntos Punto 0: NaCl 150 mmol/l (0,85%) Punto 1: Calibrador PCR - Ref Intervalo de calibraciones Cuando el control de calidad lo indique; Cuando se utilice un nuevo lote de reactivos; Cuando se utilicen nuevos frascos de reactivos de un mismo lote, en caso de que una nueva calibración haya sido realizada durante la utilización del frasco anterior. Linealidad. El sistema es lineal entre 2 y 100 mg/l. Para concentraciones mayores, diluir la muestra con NaCl 150 mmol/l (0,85%), realizar nueva determinación y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución. Para concentraciones inferiores a 2 mg/l se recomienda la utilización del producto PCR Ultra Turbiquest Plus (Ref. 335) - Labtest. Controle interno de calidad. El laboratorio debe mantener un programa de control interno de calidad que defina claramente los reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para especificaciones de calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de las actividades. Deben utilizarse materiales de control para monitorear la imprecisión de la medición y los desvíos de la calibración. Se recomienda utilizar los productos de la línea Qualitrol Plus - Labtest para control interno de calidad en ensayos de inmunoturbidimetría. Valores deseables o recomendados. Cuando la proteína C-reactiva es utilizada para evaluación de proceso inflamatório en evolución, es deseable que el valor 6,0 mg/l sea utilizado como punto de corte. En la evaluación de riesgo para eventos coronarianos, los valores deseables sustituyen los valores referencia y fueron determinados a partir de datos epidemiológicos tratados estadísticamente con el objetivo de establecer la concentración de PCR como factor de riesgo independiente 9 para eventos coronarianos. Antes de utilizar, homogeneizar suavemente y retirar la cantidad necesaria a emplear. Tapar inmediatamente y almacenar entre 2-8 ºC. La existencia de burbujas en el calibrador o cualquier muestra presente en la cubeta de muestras del equipo es causa común de errores en la determinación del analito. Bajo Moderado Alto Riesgo PCR (mg/l) Inferior a 1,0 1,0 a 3,0 Superior a 3,0 02 Español - Ref.: 331
3 Características de desempeño 10 Estudios de recuperación. En una muestra con concentración de PCR igual a 13,6 mg/l se añadió diferentes cantidades del analito, obteniéndose los siguientes resultados: Concentración (mg/l) Inicial Añadida Esperada Encontrada 13,6 13,6 Los errores sistemáticos proporcionales obtenidos en valores de 6 mg/l y 25 mg/l son 0,3 mg/l y 1,2 mg/l, respectivamente. El error sistemático medio (4,75%) cumple con la especificación óptima para Error Sistemático Total ( 12,4%) basada en los componentes de la variación biológica (VB). Estudios de comparación de métodos. El método propuesto fue comparado con método de tecnología semejante, habiéndose obtenido los siguientes resultados: Utilizando la ecuación de regresión, el error sistemático (bias) fue igual a,2% en la concentración de 25,0 mg/l. Los resultados del estudio comparativo cumplen con la especificación deseable para Error Sistemático Total ( 24,9%) basada en los componentes de la VB. Estudios de precisión. Los estudios de precisión fueron realizados utilizando muestras con concentraciones iguales a 9,2 mg/l, 16,8 mg/l y 58 mg/l. Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 6,8 27,2 Número de muestras Ecuación de regresión Coeficiente de correlación N,4 40,8 Media 9,2 16, ,6 40,5 Método Comparativo DE 0,26 0,52 1,68 Recuperación (%) 91,1 99,4 Método Labtest 50 Método Labtest (mg/l) = 1,102 x Comparativo + 2,518 0,999 CV (%) 2,8 3,1 2,9 El error total (error aleatorio + error sistemático) estimado en los niveles de decisión iguales a 6,0 mg/l y 25 mg/l es igual a 64,1% e 31,6%, respectivamente. Los resultados indican que el método cumple con la especificación deseable para Error Total ( 68,3%) basada en los componentes de la VB. Efecto prozona. No fue observado efecto prozona en muestras con concentración de PCR hasta 400 mg/l para aplicaciones manuales. Para aplicaciones automáticas no fue observado efecto prozona en muestras con concentración de PCR hasta 0 mg/l. Sensibilidad metodológica. Utilizándose la absorbancia mínima detectable como parámetro, la sensibilidad fotométrica en Labmax 240 es 0,11 mg/l que corresponde a una diferencia de absorbancia igual a 0,001. Efectos de la dilución de la matriz. Una muestra de concentración de PCR conocida fue utilizada para evaluar la respuesta del sistema en las diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/l. Se encontró una recuperación de 106,8 %. El error sistemático medio (6,8%) cumple con la especificación óptima para Error Sistemático Total ( 12,4%) basada en los componentes de la VB. Significado clínico. La proteína C-reactiva es, probablemente, el ensayo más sensible para evaluar la reacción inflamatoria o necrosis tisular. La PCR tiene una vida media de 5 a 7 horas y por esta razón sus valores caen a los niveles de referencia mucho más rápidamente que otras proteínas de fase aguda. En el 70% de los pacientes con infección, la elevación de la PCR precede en por lo menos 12 horas la elevación de otros marcadores de infección como la leucocitosis, hemosedimentación y, aún, la fiebre. Cuando la respuesta inflamatoria es mediada primariamente por neutrófilos o monocitos, la síntesis hepática de la PCR está aumentada y la concentración sérica, habitualmente, alcanza valores de 100 mg/l o más. Pacientes portadores de agranulocitosis acompañada de septicemia pueden presentar niveles de PCR dentro de los valores de referencia, lo que demuestra el papel esencial de los neutrófilos para iniciar la síntesis de esta proteína. Cuando la respuesta inflamatoria es mediada primariamente por linfocitos (característica de las infecciones virósicas), la síntesis de la PCR no se altera o puede estar ligeramente aumentada y los valores séricos raramente sobrepasan los 26 mg/l. La síntesis de la PCR no es afectada directamente por drogas antiinflamatorias o inmunosupresoras incluyendo esteroides, y una disminución de los niveles séricos de la PCR, aún con el uso de estas drogas, es un indicador seguro de la involución del proceso inflamatorio. Reproducibilidad - Imprecisión total Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3 N Media 9,2 16,8 58 DE 0,67 1,16 3,42 CV (%) 7,3 6,9 5,9 Concentraciones séricas iguales o mayores a 0 mg/l tienen una sensibilidad del 70% y especificidad del 100% para diagnosticar infección, siendo el valor predictivo del test positivo igual a 100%. En la pielonefritis, la PCR es generalmente mayor a 100 mg/l, mientras que en los pacientes portadores de cistitis ella es usualmente menor a 13 mg/l. Las tres muestras evaluadas cumplen con la especificación óptima para Coeficiente de Variación ( 13,1%) basada en los componentes de la variación biológica (VB). En el infarto agudo del miocardio pueden ser encontrados niveles de hasta 350 mg/l con un pico en torno de la 50ª hora. 03 Español - Ref.: 331
4 La persistencia de valores elevados después de 100 ó 150 horas del episodio agudo puede ser considerada sugestiva de isquemia en progresión o de la asociación con otra enfermedad. Condiciones clínicas que presentan concentración sérica de PCR muy elevada: infecciones bacterianas, enfermedad de Still, espondilitis anquilosante, artritis asociada a la anastomosis yeyuno-ileal, enfermedad de Crohn, infarto agudo del miocardio, artritis psoriática, síndrome de Reiter, fiebre reumática, artritis reumatoide, amiloidosis secundaria, complicaciones trombo-embólicas pos-quirúrgicas y vasculitis. Condiciones clínicas que presentan pequeñas elevaciones de PCR: hepatitis crónica activa, la mayoría de las virosis, dermatomiositis, polimiositis, dolencia mixta del tejido conectivo, esclerodermia, lupus eritematoso sistémico, leucemias y colitis ulcerativa. En estas condiciones, niveles séricos de PCR iguales o mayores a 100 mg/l son un indicador seguro de infección bacteriana intercurrente o de agudización en casos de leucemia. La proteína C-reactiva puede ser usada para distinguir la enfermedad de Crohn de la colitis ulcerativa. En la colitis ulcerativa la concentración sérica de la PCR es generalmente menor a 26 mg/l aún cuando la enfermedad es sintomática y extensa y el paciente no tenga infección intercurrente. En contraposición, en la enfermedad de Crohn, la PCR está elevada y los niveles séricos se correlacionan con la extensión y actividad de la dolencia. Observaciones 1. La limpieza y el secado adecuados del material utilizado son factores fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de resultados correctos. 2. El laboratorio clínico tiene por objetivo proveer resultados exactos y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa potencial de errores analíticos. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así, para preparar reactivos, utilizar en mediciones y para el uso en el enjuague final de la vidriería, el agua debe tener resistividad 1 megaohm.cm o conductividad 1 microsiemens/cm y concentración de silicatos <0,1 mg/l. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad saturada ocurre liberación de varios iones, silicatos y sustancias con gran capacidad de oxidación y reducción que deterioran los reactivos en pocos días o incluso en horas, modificando los resultados de forma imprevisible. Por ello es fundamental establecer un programa de control de calidad del agua. 3. Varios factores alteran los resultados obtenidos con el Calibrador PCR. Entre estos factores están los errores de reconstitución, homogeneización, contaminación del agua o de la vidriería, el control inadecuado de la temperatura y los errores técnicos asociados al instrumento. Sugerimos el cumplimento de las buenas prácticas de laboratorio y la verificación de las instrucciones del fabricante del instrumento y de los reactivos utilizados, relacionadas con las limitaciones del procedimiento. 4. El valor del calibrador PCR fue establecido utilizándose el procedimiento y el sistema PCR Turbiquest Plus (Ref. 331) según descripto en las instrucciones de uso. La exactitud de la calibración podrá no ser adecuada cuando se use reactivo de otro fabricante. Referencias 1. Angerman NS, Evan MI, Moravec WD, Schumacher GF, Hajj SN. J Reprod Med 1980;25: Becker GJ, Waldburger M, Heghes GRV, Pepys MB. Ann Rheum Dis 1980;39: Gambino R. Lab Rep for Physicians 1982;4: Singer JM, Plotz CM, Pader E, Elster SK. Am J Clin Path; 1957;28: Whicher JT, Bell AM, Southall PJ. Diagnostic Medicine 1981;4: Price CP, Trull AK, Berry D, Gormann FG, J Immunol Methods 1987;99: Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular, Base de Datos de Variación Biológica. Disponible en:< (acceso en 04/06). 8. Basques JC. Especificações da Qualidade analítica. Labtest Diagnóstica Pearson TA, Mensah GA, Alexander RW, ET al. Circulation 03, 107: Labtest: Datos de archivo. Presentación Producto Referencia Contenido PCR Turbiquest Plus 331-1/ X 40 ml 1 X 10 ml 1 X 1 ml El volumen de reactivo por ensayo en aplicaciones automáticas depende de los parámetros de programación de cada equipo. Están disponibles aplicaciones para sistemas automáticos y semiautomáticos. Informaciones al consumidor [Términos y Condiciones de Garantia] Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto dentro de las especificaciones hasta la fecha de caducidad indicada en los rótulos, siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en los rótulos y en estas instrucciones sean seguidos correctamente. Labtest Diagnóstica S.A. CNPJ: / Av. Paulo Ferreira da Costa, Vista Alegre - CEP Lagoa Santa. Minas Gerais Brasil - Servicio de Apoyo al Consumidor sac@labtest.com.br Edición: Febrero, 11 Ref.: Copyright by Labtest Diagnóstica S.A. Reproducción bajo previa autorización 04 Español - Ref.: 331
5 PROTOCOLO DE AUTOMACIÓN PARA EL LABMAX 240 Item Name DATA INFORMATION # PCRTP CALIBRATION UNITS mg/l TYPE Linear DECIMALS 1 STANDARD #4 ANALYSIS #2 #5 TYPE END #3 #6 1 Main W.Length Sub W.length 2 METHOD Turbidimétrico CORR. SLOPE INTER Y = 1 X + 0 NORMAL RANGE Serum Urine Plasma CSF Dialysis Other LOW MALE HIGH LOW FEMALE HIGH # Posición de 1 a 77 en el panel de la concentración del analito que figura en el material Calibrador PCR (Ref ) Item Name ASPIRATION KIND SAMPLE REAGENT1 VOL REAGENT2 VOL MONITOR Single # PCRTP Double VOLUME Third Mix. OFF ON L L L R1 Blank Water Blank R1-Blank1 0 LEVEL POINT 1 SPAN 3 DATA PROCESS READ MAIN SUB FACTOR Blank correction PROZONE CHECK FIRST SECOND THIRD START END ABSORBANCE LIMIT LOW HIGH ENDPOINT LIMIT LINEAR CHECK(%) START END LIMIT(%) Low Low 2 3 High High Item Name AUTO RERUN SW # PCRTP AUTO RERUN CONDITION (ABSORBANCE) 3 ON OFF Absorbance Range AUTO RERUN RANGE (RESULTS) Serum Urine Plasma CSF Dialysis Other Lower Higher Lower Higher Prozone Range 05 Español - Ref.: 331
6 06 Español - Ref.: 331
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