Obtención de Agentes de Control Biológico.

Transcripción

1 Obtención de Agentes de Control Biológico. Métodos de aislamiento y selección Objetivos: de ACB Transmitir la importancia de los procesos de búsqueda y selección de ACB como base del éxito de un programa de CB. Analizar las diferentes vías o caminos posibles en el proceso de búsqueda y selección. Discutir los factores que condicionan estos procesos. Comprender como los resultados finales pueden estar condicionados por las técnicas o métodos utilizados. Analizar posibles objetivos y estrategias de búsqueda y selección de ACB de ACB Dónde encontrar ACB? Cómo aislar? Cualquier antagonista? Qué características deseamos encontrar? Importancia del aislamiento y selección El aislamiento y la selección de microorganismos antagonistas sustentan a todo Programa de Control Biológico determinando las chances de éxito. (Bettiol 1991) El número de microorganismos en una comunidad microbiana es inmenso. En la rizosfera de un árbol de roble se calcula que existen 45 mil billones de m. o. (45 x 10 15) Dónde encontrar ACB En cualquier lugar puede existir algún microorganismo antagonista. Muchos m.o. valiosos se encuentran en forma azarosa. 1

2 Penicillium rugulosum Dónde se puede encontrar un ACB En cualquier lugar puede existir algún microorganismo antagonista pero. Existe algún lugar donde sea más probable hallarlo? En aquellos sitios donde, coincidiendo la presencia del patógeno, la planta huésped y el ambiente favorable al desarrollo de la enfermedad ésta no ocurre, es posible que allí esté funcionando naturalmente algún tipo de biocontrol. Dónde encontrar ACB cont.. Selección de ACB para Monilinia Esto puede suceder naturalmente: suelos supresivos Podemos forzar la situación: Colocamos plantas o frutos en situaciones favorables al desarrollo de la enfermedad y seleccionamos aquellos individuos que se mantuvieron sanos. Monilinia fructicola en duraznos. Penicillium expansum en manzana. Selección de ACB para P. expansum Algunos lugares Suelos supresivos Sobre las partes aéreas de las plantas (m.o. epifíticos, o del filoplano) Sobre la superficie de las raíces (rizoplano) Colonizando a patógenos Dentro de la planta (endofitos) Fitopatógenos (razas leves o avirulentas) 2

3 Algunos Objetivos Efectividad antagónica. Adaptación al lugar de acción. (hojas, frutos, heridas) Adaptación al ambiente. (Cámara de frigorífica) Espectro de acción. Ausencia de producción de antibióticos Resistencia a fungicidas. Porque se ha demostrado que sobre la planta viven numerosos m.o. entre los cuales existen antagonistas de los patógenos y promotores de las defensas de las plantas. En el agua de lavado concentrada crecen solamente bacterias y levaduras Porque se supone que si están allí es porque están adaptados a vivir en esas condiciones. Si queremos controlar a un patógeno que ingresa por heridas nos interesa que nuestro antagonistas sea un buen colonizador de heridas. Chalutz, E., and Wilson, CL "Postharvest biocontrol of green and blue mold and sour rot of citrus fruit by Debaryomyces hansenii". Plant Disease. 74(22): a partir de la flora epifítica del fruto Porque existe mayor aceptación por parte de los consumidores a admitir a los m.o. que naturalmente viven sobre la planta que a otros extraños. 3

4 a partir de la flora epifítica del fruto de colonizadores de heridas de cepas adaptadas al frío de cepas adaptadas al frío y heridas. Agar jugo de manzana 5 ºC Colonizadores de patógenos Colonizadores de esclerotos Se pueden encontrar antagonistas colonizando naturalmente a los patógenos de plantas. Se pueden utilizar a los patógenos como cebo para capturar a sus antagonistas. 4

5 Endófitos Endófitos Microorganismos que habitan en el interior de los tejidos vegetales sin causar aparentemente ningún daño a su hospedero. Para superar una de las limitantes mayores del CB. Obtener antagonistas con capacidad curativa. Control de patógenos vasculares. Endófitos Lavado de los frutos con agua destilada estéril 1 min. En alcohol 96% Hipoclorito al 3% por 4 min. 3 lavados con agua destilada estéril Trozos se Siembran en medio Sabouraud Endófitos Endófitos de frutos Hipoclorito de Sodio al 1% + Tween 80 por 3 min. Enjuaga con agua destilada estéril Secado y siembra de discos de fruta en medio de cultivo. Camatti-Sartori et al. VII Reuniao de controle biologico de fitopatogenos de novembro de Bento Goncalvez, RS. Selección En medio generales Selectivamente Hongos Bacterias Capaces de digerir al patógeno In vitro Cultivos duales In vivo Inoculación en plantas Intermedios utilizando trozos de vegetal Buscando alguna característica especial 5

6 Cultivos duales Consiste en sembrar en una misma placa enfrentados al antagonista y al patógeno Selección in vitro Fácil de realizar Rápida Menor costo relativo. Solamente selecciona por algunos mecanismos de acción, descartando antagonistas que podrían funcionar sobre la planta. Tiene baja correlación con la performance a campo. Selección in vivo Selección sobre frutos Consiste en inocular plantas con el patógeno y al antagonista Selección in vivo Selecciona independientemente de los mecanismos de acción antagónica. Selección combinada Consiste en inocular tejidos vegetales en el laboratorio. Implica un mayor trabajo Mayor tiempo Mayor costo relativo. Mayor equipamiento (Plantas, invernáculo, personal, etc) 6

7 Selección de levaduras productoras de sideróforos Selección de cepas resistentes a fungicidas Selección de cepas no productoras de antibióticos Selección de cepas de con amplio espectro X X X Otras consideraciones A quién debe enfrentar nuestro antagonista? En qué condiciones? Elección de la cepa más agresiva Elección de la cepa más resistente a fungicidas Resumen final El aislamiento y selección de antagonistas es un proceso fundamental en cualquier programa de control biológico. Las técnicas utilizadas pueden sesgarnos los resultados. No existe una única estrategia de trabajo. El arte está en diseñar aquella estrategia que nos conduzca en la forma más directa hacia nuestro objetivo final. 7