LINEA DE INVESTIGACION APLICADA I. IDENTIFICACION DEL PROYECTO

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1 PROGRAMA DE SERVICIOS AGROPECUARIOS LINEA DE INVESTIGACION APLICADA I. IDENTIFICACION DEL PROYECTO Título del proyecto: Efecto del manejo del semen conservado y sincronización del celo sobre la fertilidad obtenida por inseminación intrauterina. Jefe de Proyecto: Daniel Fernández Abella Institución ejecutora : Universidad de la República, Regional Norte Sede Salto Dirección: Ruta 31 km 21. CC68136 Tel: / CP SALTO Fax: / silca@adinet.com.uy Programa Nacional INIA: OVINOS Otras instituciones participantes: Estación Experimental de la Facultad de Agronomía en Salto (EEFAS) Duración: Inicio: 20/03/2000. Final : 04/2003 EQUIPO TECNICO DEL PROYECTO NOMBRE Y APELLIDO PROFESION ESPECIALIDAD INSTITUCION Daniel Fernández Abella Ing. Agr. Fisiología & Reproducción Ovina Silvia Sterla Q.F. Reprod. Humana & Inmunología Parasit. Facultad Agronomía Regional Norte-Salto Oscar Irabuena Tec. Med. Inmunología Parasit. Regional Agronomía Firmas autorizadas: Jefe de Proyecto:. Responsable Institucional:. Fecha envío: / /. Proyecto Nº. Año:. Técnico contraparte INIA ( a designar):. RESPONSABLE TECNICO DE CADA INSTITUCIÓN PARTICIPANTE FORMULARIO PARA PRESENTACIÓN DE PROYECTOS PAG. 1

2 NOMBRE Y APELLIDO PROFESION ESPECIALIDAD INSTITUCION Alberto Nieto Dr. en Quím. Inmunología Lab Inmunología Regional Norte COMPLETAR ESTE CUADRO EN CASO DE QUE EISTAN DOS O MAS INSTITUCIONES EJECUTORAS. INCLUIR UN RESPONSABLE TÉCNICO POR INSTITUCIÓN. RUBROS Y CODIGOS Agris-Caris Rubro Rubro Rubro Rubro Rubro Rubro % Total s OV A Total rubros % INDICAR RUBROS Y CODIGOS PARTICIPANTES DEL PROYECTO COLOCAR SU ABREVIATURA EN LA FILA Y COLUMNA GRIS LOS CODIGOS Agris-Caris Y DE RUBROS FIGURAN EN EL ANEO AL INSTRUCTIVO DEL PRESENTE FORMATO EL TOTAL DEBERA SER SIEMPRE 100% CARACTERIZACION DE OBJETIVOS Y RESULTADOS A OBJETIVO PROPUESTO B - RESULTADOS ESPERADOS 1. DESARROLLO DE UNA METODOLOGÍA 1. TEORICOS 2. DESARROLLO DE UN CONOCIMIENTO 2. TEORICOS PRACTICO 3. DESARROLLO DE UN A TECNOLOGÍA 3. PRACTICOS 4. DESARROLLO DE UN PRODUCTO 4. DE INMEDIATA APLICACIÓN 5. OTRO TIPO DE OBJETIVO. (*) 5. OTRO TIPO DE RESULTADO (*) (*) Describir brevemente (*) Describir brevemente FORMULARIO PARA PRESENTACIÓN DE PROYECTOS PAG. 2

3 II. IDENTIFICACION DEL PROBLEMA En los ovinos, la inseminación (I.A.) con semen congelado se realiza por vía laparoscópica en ovejas sincronizadas con progesterona o progestágenos. La técnica de I.A. creada a principios de la década de los 80 (Killeen y Caffery, 1982), determina porcentajes de preñez entre un 30 a 65% según la calidad espermática (Azzarini y Valledor,1988; Tervit et al.,1994; Salamon y Maxwell, 1995b; Cueto y Gibbons, 1996). Valores inferiores y con una alta variabilidad, respecto a los obtenidos por la misma vía con semen fresco ( 75-80%) o refrigerado a 5 C durante 1-2 días (55-65%) (Maxwell et al., 1993; Fernández Abella et al., 1992a; 1998). La congelación y descongelación causan daños ultraestructurales, bioquímicos y funcionales a una significativa proporción de espermatozoides. Esos cambios están acompañados por una reducción en la motilidad, transporte dificultoso y disminución en la viabilidad en el tracto genital femenino, lo que reduce la fertilidad después de la inseminación, incrementándose aún más si la misma es por vía cervical (Eppleston y Maxwell, 1995; Salamon y Maxwell, 1995ª). Esto determina que en la práctica se desechen sémenes para congelar cuando presentan una baja movilidad (<70%). Por otra parte, se observan bajas fertilidades con sémenes con alta mortalidad espermática post-descongelado. Se ha reportado efectos negativos de las células espermáticas muertas sobre la viabilidad de los espermas motiles. Trabajos realizados con esperma humano han utilizado diferentes tratamientos pre y post-congelamiento para seleccionar los mejores espermatozoides: lavados consistentes en centrifugación y resuspensión a velocidad fija, lavados con velocidad de centrifugación oscilante, lavados con gradientes de densidad ( Percoll, Isolate) entre otros (Sharma et al 1997, Larson et al 1997, Ozornek et al 1998). Estos tratamientos eliminan los espermas muertos así como seleccionan aquellos con mejor motilidad a utilizar en los procedimientos de IA. La metodología de sincronización de celos utilizada (Progestágeno + ecg) no es precisa en la sincronización de las FORMULARIO PARA PRESENTACIÓN DE PROYECTOS PAG. 3

4 ovulaciones, lo que determina que un número variable de ovejas sea inseminado en un momento menos oportuno para lograr la fecundación (Cueto et al, 1994). Por lo expuesto, se determina que el incremento de la fertilidad de la I.A. por vía intrauterina, pasa por mejorar la calidad del semen inoculado, así como lograr una mejor sincronización de las ovulaciones en las ovejas. DEBERA DESCRIBIRSE EL PROBLEMA QUE DA ORIGEN AL PROYECTO, CON SUFICIENTE DETALLE COMO PARA JUSTIFICAR LAS ACCIONES A EMPRENDER.. EL PROBLEMA CONSTITUYE LA SITUACION INICIAL QUE EL PROYECTO SE PROPONE MODIFICAR III. ANTECEDENTES Y JUSTIFICACIÓN El desarrollo de sistemas de evaluación genética a través de Pruebas de Progenie utilizando carneros o padres de referencia, se ha incrementado en los últimos años, en las razas ovinas en el país y países limítrofes (Cardellino, 1997). Esto ha generado un aumento en el uso de la I.A., especialmente con semen congelado por vía intrauterina, para introducir nuevos materiales genéticos, así como para intercambiar sémenes de carneros referencia o de enlace entre pruebas. Existen actualmente en el ámbito mundial dos principales diluyentes de congelación, uno a base de leche descremada, puesto a punto por Colas et al. (1975) en Francia y otro a base de hidroximetil-amino-metano (Tris) por Salamon (1976) en Australia. Dichos métodos se utilizan en la región obteniéndose resultados similares, cuando son congelados en pajuelas (Fernández Abella et al., 1992b). Investigaciones más recientes tratando de mejorar los mismos no han determinado grandes avances (Maxwell y Stojanov, 1996; Maxwell y Watson, 1996; Söderquist, 1997; Guérin, 1998, c.p.). En los últimos años el uso de semen refrigerado (4-5 C) se ha incrementado, reduciendo los costos y mejorando la fertilidad (Maxwell y Salamon, 1993; Vishwanath y Shannon, FORMULARIO PARA PRESENTACIÓN DE PROYECTOS PAG. 4

5 1997), sin embargo la fertilidad por vía cervical no supera el 40-45% (Maxwell y Salamon, 1993; Fernández Abella et al., 1998a). Aunque existirían, formas de reducir la actividad espermática que podría mejorar su fertilidad (Fernández Abella y Villegas, a publicarse, 2000), así como diferentes tratamientos de las muestras de semen pre y post-conservación (Lavados, centrifugaci ón, gradientes de densidad). En la especie ovina, la mejora de la sincronización de las ovulaciones ha sido muy poco estudiada (Cognié, 1998, c.p.). Existen en la literatura 2 ensayos utilizando un número reducido de animales, donde se ha evaluado el efecto de distintos momentos de aplicación de GnRH en combinación con PMSG (ecg) sobre la fertilidad de semen congelado por vía intrauterina (Walker et al.,1989; Eppleston et al.,1991). En la Estación Experimental de la Facultad de Agronomía en Salto (EEFAS), se está realizando un ensayo similar pero inseminando por vía cervical. No obstante, hasta el presente no existe información del uso de GnRH sin PMSG por vía intrauterina, así como un análisis de diferentes dosis. El INRA Nouzilly (Francia) y en la EEFAS en forma coordinada se intenta mejorar la calidad y viabilidad del semen conservado a través del desarrollo de un diluyente, así como mejorar el transporte espermático a través del cuello uterino. Esto motivó la realización de una pasantía post-doctoral de Fernández Abella en el mencionado centro en Asimismo, la Q.F. Sterla ha realizado una pasantía (1998) en los laboratorios de Andrología y Fertilización in vitro (IVF) de la Eastern Virginia School of Medicine, Norfolk, EUA, especializándose en la preparación y conservación de semen humano. Dicha profesional ocupa un cargo técnico desde diciembre de 1997 en el Laboratorio de IVF del Centro Reproducción humana del Interior bajo la Dirección Técnico es el Dr Sergio Oëhninger. El presente Proyecto, complementa dichas líneas de trabajo, y facilita su desarrollo. La mejora de la fertilidad en el uso del semen conservado(refrigerado o congelado) reduciría los costos(mayor número de corderos/ovejas inseminadas), permitiendo incrementar los avances genéticos de los Centros de Pruebas de Progenie, como el uso de la I.A. con semen conservado de carneros elites por productores pequeños y FORMULARIO PARA PRESENTACIÓN DE PROYECTOS PAG. 5

6 medianos. IV. OBJETIVO GENERAL Mejora de la fertilidad obtenida (corderos nacidos / hembras tratadas) por inseminación vía intrauterina, utilizando semen conservado. ESTA ORIENTADO A RESOLVER EL PROBLEMA PRINCIPAL, Y DEBE SER ALCANZADO EN EL PLAZO PREVISTO, CON LOS RECURSOS DISPONIBLES. DEBE ESPECIFICARSE EN FORMA CLARA Y BREVE EL PROBLEMA A RESOLVER. V. OBJETIVOS ESPECIFICOS 1. Obtención de una metodología de mejoramiento de la calidad del semen pre y/o post-conservación. 2. Determinar el momento de ovulación y su sincronía, con distintos tratamientos de sincronización del celo. 3. Evaluar la fertilidad obtenida de distintos tratamientos en el semen conservado en interacción con los distintos métodos de sincronización evaluados. 4. Definir una metodología de trabajo con semen conservado en inseminación artificial, adaptada a las condiciones existentes en el país. SON LOS PRODUCTOS CONCRETOS QUE SE OBTIENEN POR LA EJECUCION DEL PROYECTO TODOS LOS OBJETIVOS ESPECIFICOS SON NECESARIOS PARA ALCANZAR EL OBJETIVO GENERAL I. RESULTADOS ESPERADOS O. Esp. Resultado Esperado : Año1 Año 2 Año 3 Año Recuperación de mayor número de espermas móviles por eyaculado a través de los ensayos de laboratorio 1y 2 2.Aumento del número de dosis inseminantes obtenidas por eyaculado 2 3.Diferencias en sincronización de las ovulaciones según método utilizado 2 4.Efecto de la época en T.O. y comienzo de la ovulación FORMULARIO PARA PRESENTACIÓN DE PROYECTOS PAG. 6

7 3 5.Diferencias en fertilidad según metodología utilizando semen refrigerado 3 6. Diferencias en fertilidad según metodología utilizando semen congelado 4 7. Evaluación final para definir la mejor metodología IDENTIFICAR CADA RESULTADOS ESPERADO Y EL AÑO EN QUE SE ESPERAN OBTENER Y A QUE OBJETIVO ESPECIFICO CORRESPONDE. DEBERA EISTIR AL MENOS UN RESULTADO ESPERADO POR OBJETIVO ESPECIFICO. FORMULARIO PARA PRESENTACIÓN DE PROYECTOS PAG. 7