Protección contra el estrés oxidante ANTIOXIDANTES Directos Ácido ascórbico
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- José Ramón Bustamante Villalobos
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2 Protección contra el estrés oxidante ANTIXIDANTES Directos Ácido ascórbico Indirectos Sulforafano Bifuncionales α- mangostina Curcumina Ácido alfa lipoico (ALA) Acido norhidroguayarético (NDGA) Resveratrol) Larrea tridentata
3 Antioxidantes directos Actividad redox Se consumen durante las funciones antioxidantes Necesitan ser regenerados Son de corta duración Pueden tener efectos pro-oxidantes
4 Antioxidantes indirectos Puede presentar o no actividad redox. Funcionan a través de la inducción de proteínas citoprotectoras que actúan catalíticamente (es decir, no se consumen). Tienen una vida media larga. Es poco probable que tengan efecto pro-oxidante.
5 α-mangostina Garcinia mangostana (GM). Árbol tropical de sudeste de Asia. Xantona H H α-mangostina Propiedades: antioxidante, antiinflamatoria, fungicida, antibacteriana, entre otras. H
6 ESTUDI DE LA CAPACIDAD ATRAPADRA DE ER Sistema generador Sistema detector - Fluorescencia - Absorbencia - Bioluminiscencia
7 Anión superóxido
8 CAPACIDAD ATRAPADRA DE α-mangstina
9 Peroxinitrito H 3 C Cl H Cl H CH 3 - H Medio b sico H Cl H H Cl H N - xidaciûn H Cl Cl H DCDHFDA DCDHF DCF Excitación: 488 nm Emisión: 525 nm
10 xígeno singulete HCl + H HCl + H difenilisobenzofurano (DFBF) o- dibenzoilbenceno Excitación 410 nm Emisión 455 nm
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12 EVALUACIÓN DE LA PRDUCCIÓN DE ER H 2 2, H, R Carboxi-DHFDA Carboxi-DCF λ exitación =488 nm, λ emisión = 530 nm
13 EVALUACIÓN DE LA PRDUCCIÓN DE ER 2 Dihidroetidio Etidio λ exitación = 488 nm λ emisión = 535 nm
14 EFECT PRTECTR DE LA α-mangstina EN EL DAÑ RENAL INDUCID PR CISPLATIN A nmoles/mg protein Renal MDA content * ** nmoles DNPH/mg protein B Renal protein carbonyl content * ** 0.0 Ct α- M CDDP CDDP+α- M 0 Ct α- M CDDP CDDP+α- M mmol/mg protein C Renal GSH content * ** nmol/24 h D Urinary H 2 2 excrehon * *, ** Ct α- M CDDP CDDP+α- M 0 Ct α- M CDDP CDDP+α- M
15 EFECT DE LA α-mangstina Daño renal (cisplatino) aumento ER 2 - N Insuficiencia renal atrapa H H H α-mangstina
16 La α-mangostina induce la expresión de H-1 de manera dependiente de la concentración y del tiempo
17 Protección contra el estrés oxidante ANTIXIDANTES Directos Ácido ascórbico Indirectos Sulforafano Bifuncionales α- mangostina Curcumina Ácido alfa lipoico (ALA) Acido norhidroguayarético (NDGA) Resveratrol) Larrea tridentata
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20 Citoprotección mediada por Nrf2
21 Inducción de enzimas Indirectos antioxidantes. Vía Nrf2 CYS 151
22 Enzimas inducibles vía Nrf2 NADPH quinona óxidorreductasa (NQ1) Glutatión peroxidasa (GPx) γ-glutamato cisteína ligasa (γgcl) Glutatión reductasa (GR) Glutatión S-transferasa (GST) Superóxido dismutasa Hemo oxigenasa-1 (H-1). Tiorredoxina reductasa (TrxR) Ferritina Superóxido dismutasa (SD) Catalasa (CAT) Peroxirredoxina (Prx) Tiorredoxina (Trx) 6-fosfogluconato deshidrogenasa (6PGD) Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH) Enzima málica
23 ESTUDIS IN VIV. MARCADRES DE DAÑ RENAL
24 ESTUDIS IN VIV. MARCADRES DE ESTRÉS XIDANTE
25 Respiración mitocondrial mitocondrias ADP Malato/glutamato Succinato xígeno (nmol) Estado 4 Estado 3 CCCP Tiempo (s)
26 ESTUDIS IN VIV. RESPIRACIÓN (SUSTRAT SUCCINAT)
27 ESTUDIS IN VIV. DAÑ MITCNDRIAL
28 El SFN previene la apoptosis inducida por CIS
29 El SFN disminuye la actividad y cantidad de caspasa 3
30 El SFN previene la respuesta inflamatoria
31 ESTUDIS IN VITR. Células LLC-PK1 Efecto protector del SFN en la muerte celular inducida por cisplatino Participación de las enzimas NQ1 y GCL en la protección por SFN
32 Control SFN 10 µm SFN 25 µm Campo claro Hoechst Nrf2 Fig. 2. Inducción de la traslación del factor transcripcional Nrf2 del citoplasma al núcleo de células LLCPK1 tratadas con SFN por 3 h. Guerrero- Beltrán et al., 2010
33 Disminución en la producción de ER por SFN
34 PTENCIAL DE MEMBRANA MITCNDRIAL: JC-1 (5,5,6,6 -tetracloro-1,1,3,3 yoduro de tetraetilbenzimidazolcarbocianina) Células sanas Mitocondria Agregados Fluorescencia roja Células dañadas, apoptóticas Citoplasma Monómero Fluorescencia verde
35 Potencial de membrana mitocondrial
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