Leptocheck. WB Prueba Rapida para Anticuerpos IgM de Leptospira (Dispositivo)
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1 Leptocheck WB Prueba Rapida para Anticuerpos IgM de Leptospira (Dispositivo) INTRODUCCION Leptocheck-WB es un rápido inmunoensayo en sándwich, auto-ejecutable, cualitativo para la detección de anticuerpos IgM específicos de Leptospira en muestras de suero / plasma o sangre total humana. Es útil para el serodiagnóstico de leptospirosis reciente o recurrente. El género antigénico específico ampliamente empleado en la prueba permite la detección de infecciones por Leptospira causada por un amplio rango de cepas de diferentes serovars. RESUMEN Las Leptospiras son espiroquetas delicadas, activamente móviles teniendo una gran cantidad de espirales en una herida y unos característicos extremos enganchados. Existen varias especies de Leptospiras y ellos pueden ser saprofíticos o parasitarios. Pueden ser distinguidos solamente bajo iluminación de campo oscuro en el estado vivo o por microscopia electrónica. La Leptospirosis es una enfermedad zoonótica de prevalencia mundial. Los humanos son infectados cuando el agua contaminada por orina de animales portadores incorporan el cuerpo a través de cortes o de abrasiones en la piel o a través de la mucosa intacta de la boca, de la nariz o de la conjuntiva. Los síntomas clínicos incluyen fiebre, escalofrío, dolor de cabeza, conjuntivitis mialgia y síntomas relacionados con GI, la infección renal es una secuela común. El diagnostico puede ser hecho por demostración de Leptospiras microscópicas en sangre u orina, por su aislamiento en cultivos o por inoculación de conejos de laboratorio o por pruebas serológicas. Leptocheck-WB, detecta cuantitativamente la presencia de anticuerpos específicos de clase IgM de Leptospira en muestras de suero /plasma o sangre total humana. PRINCIPIO Leptocheck-WB utiliza el principio de inmunocromatografía, en un único inmunoensayo en dos sitios sobre una membrana. Como la muestra circula a través de la membrana ensamblada del dispositivo de prueba, el anti-igm humano-conjugado con oro coloidal forma u complejo con los anticuerpos IgM en la muestra. Este complejo se desplaza adelante sobre la membrana en la ventana de prueba T donde es inmovilizada por el antígeno genero especifico de Leptospira ampliamente reactivo cubriendo la membrana, destacando la formación de una banda coloreada roja o morada oscura en la región de prueba 'T' la cual confirma un resultado positivo para la prueba. La ausencia de esta banda coloreada en la región de prueba 'T' indica un resultado negativo para la prueba. El conjugado no PRODUCT: LEPTOCHECK WB Page 1 of 5 COLOMBIA
2 reaccionado y los complejos no encontrados si ninguno se desplaza sobre la membrana y son posteriormente inmovilizados por los anticuerpos anti-conejo cubiertos sobre la ventana control 'C' de la membrana ensamblada, formando una banda coloreada rojo o morada oscura. La banda control sirve para validar el resultado de la prueba. REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS Cada estuche contiene: A. Bolsas individuales, cada una contiene: 1.Dispositivo de prueba: Membrana de prueba ensamblada pre dispensada con Anti IgM Humano conjugado con oro coloidal, el antígeno genero especifico de Leptospira en la ventana de prueba 'T' y anti-suero de conejo pre dispensado en la ventana de control 'C'. 2. Desecante. 3. Asa curva de 5 l B. Tampón para corrida de muestra C. Inserto informativo. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Las bolsas selladas en las pruebas del estuche y los componentes del estuche pueden ser almacenados entre C para la duración de la vida media indicada en la. MATERIAL OPCIONAL REQUERIDO: Micropipetas de precisión 10 I. NOTA 1. Solo para uso en Diagnostico in vitro. NO PARA USO MEDICAMENTOSO. 2. No usar más allá de la fecha de vencimiento. 3. Leer las instrucciones cuidadosamente antes de desarrollar la prueba. 4. Manipule todas las muestras como potencialmente infecciosas. 5. Siga todas las pautas de calidad de bioseguridad para manipulación y eliminación de material potencialmente infeccioso. COLECCION Y PREPARACION DE LA MUESTRAN 1. No son necesarias preparaciones especiales del paciente a la colección de la muestra por técnicas apropiadas. 2. Aunque es preferible suero/plasma fresco, sangre total con anticoagulante pueden ser también usadas como muestra. Suero/plasma deben ser conservados a C por encima de 24 horas, en caso de demora en la prueba. Para periodos prolongados de almacenamiento, congelar a -20 C por 3 meses o -70 C para periodos más prolongados. Sangre total debería ser usada inmediatamente y no debería congelarse. 3. Muestras de sangre total obtenidas con anticoagulantes apropiados tales como EDTA, Heparina u Oxalato pueden ser usadas. 4. No usar muestras turbias, lipemias, ictéricas y hemolizadas. 5. Congelamientos y descongelamientos repetitivos de la muestra deben ser evitados. PRODUCT: LEPTOCHECK WB Page 2 of 5 COLOMBIA
3 6. Las muestras que contienen material precipitado o partículas deben ser centrifugadas y el sobrenadante claro solo debería ser usado para la prueba. 7. Por cada muestra una nueva asa curva debería ser usada. PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA E INTERPRETACION DE RESULTADOS 1. Llevar los componentes del estuche a temperatura ambiente antes de la prueba. 2. Abra la bolsa y retire el dispositivo de prueba. Una vez abierto, el dispositivo debe ser usado inmediatamente. 3. Marque el dispositivo de prueba con la identificación del paciente. 4. Adicionar 10 l de suero / plasma o sangre total con una micropipeta adentro del porta muestra A, o use la asa curva de muestra para 5 l simple suministrada con el estuche, moje el asa curva en la muestra y luego seque el asa curva adentro del porta muestra A. Repita este paso dos veces para cada muestra. Asegure que el asa curva no recupere coágulos o detritos de la muestra. 5. Adicione 5 gotas de tampón para corrida de muestra en el porta reactivo B. 6. Al finalizar 15 minutos lea la prueba como se describe. Resultado de Prueba Negativo: Solo una banda coloreada aparece en la ventana control 'C'. Resultado de prueba Positivo: Además a la banda en la ventana control 'C', aparece otra banda rojo/morada en la ventana de prueba 'T' indicando la presencia de Anticuerpos específicos IgM de Leptospira. Resultado de prueba invalido: La prueba debería ser considerada invalida si ni la banda control 'C' ni la banda de prueba 'T' aparece. La prueba se repite con un nuevo dispositivo. PRODUCT: LEPTOCHECK WB Page 3 of 5 COLOMBIA
4 CARACERISTICAS DE DESEMPEÑO Leptocheck-WB fue evaluada por el Royal Tropical Institute, Ámsterdam en paralelo con otras pruebas aceptadas para el serodiagnóstico de Leptospirosis. Los 47 sueros evaluados fueron de diversos serogrupos de Leptospira. Leptocheck-WB tuvo un desempeño comparable con otras pruebas. Observaciones 1. La intensidad de la línea de prueba depende sobre todo del estadio de la enfermedad y los títulos de anticuerpos en la muestra de prueba. 2. Como anticuerpos específicos alcanzan niveles detectables sobre una semana después del inicio de la enfermedad, una muestra recolectada muy temprano puede arrogar un resultado de la prueba negativo. 3. Si la prueba es negativo y la leptospirosis es aun sospechada la prueba debe ser repetida con una segunda muestra en una fecha después en consecución con la reexaminación clínica 4. En áreas endémicas bandas débiles pueden aparecer ocasionalmente debido a los títulos limite IgM presentado como un resultado de exposición previa. 5. Es recomendado que los resultados positives obtenidos deben ser reconfirmados usando un test confirmatorio tal como MAT (Microscópica aglutinación test). 6. Altos títulos de FR y anticuerpos heterófilos pueden interferir con la prueba, en tales casos el resultado debe ser interpretado con precaución. 7. El resultado debe ser correlacionado con los hallazgos clínico para llegar a un diagnóstico. 8. No use la prueba más allá de la fecha de vencimiento. BIBLIOGRAFIA 1. Evaluation report from Leptospirosis Reference Centre (WHO/FAO/O/E RIVM) at Royal Tropical Institute, Amsterdam. 2. International Multicentre Evaluation of the Clinical Utility of a Dipstick Assay for Detection of Leptospira-specific lmmunoglobulin M antibodies in Human Serum Specimens., Smits et al., Journal of Clinical Microbiology, Sept 1999, Vol. 37, No. 9, p LEPTO Dipstick, a Dipstick Assay for detection of Leptospira Specific lmmunoglobulin M antibodies in Human Sera., Gussenhoven et al, Journal of Clinical Microbiology, Jan 1997, Vol. 35, No. 1, p Leptospirosis: Chapter 3.1.4, Office International Des Epizooties. 5. An Urban Outbreak of Leptospirosis in Mumbai, India, Bharadwraj et al., Jpn. J. Infect. Dis, 55, , Leptospirosis, Joseph M. Virietz, Curr Opin. Infect Dis. 14: Two Methods for Rapid Serological Diagnosis of Acute Leptospirosis, Levett et. al., Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, Mar 2001, Vol. 8, No. 2, p PRODUCT: LEPTOCHECK WB Page 4 of 5 COLOMBIA
5 8. Leptospirosis in Kuala Lumpur and the Comparative Evaluation of Two Rapid Commercial Diagnostic kits against the MAT test for the detection of antibodies to Leptospira interrogans., Sekhar et. al., Singapore Med. J 2000, Vol 41 (8): Data on file:. PRODUCT: LEPTOCHECK WB Page 5 of 5 COLOMBIA
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