CARACTERÍSTICAS MACRO- Y MICROSCÓPICAS DEL FANGO ACTIVO

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1 NEXO FOTOGRÁFICO

2 CRCTERÍSTICS MCRO- Y MICROSCÓPICS DEL FNGO CTIVO LÁMIN 1 ENSYO DE SEDIMENTILIDD EN PROET (11/V/05) t =, 15 min y C: Ensayo de sedimentabilidad t = 30en min probeta (11/V/05). () Ensayo t = 30de min sedimentabilidad en probeta a los 10 min (230 ml/l). () Ensayo de sedimentabilidad a los 20 min (180 ml/l). (C) Ensayo de sedimentabilidad a los 30 min sobre la muestra de fango activo (180 ml/l). ENSYO DE SEDIMENTILIDD EN PROET INSTNTES DESPUÉS DE L TOM DE MUESTRS (10/V/05), y C: Ensayo de sedimentabilidad en probeta (10/V/05). () Ensayo de sedimentabilidad en probeta a los 10 min (280 ml/l). () Ensayo de sedimentabilidad a los 20 min (220 ml/l). (C) Ensayo de sedimentabilidad a los 30 min sobre la muestra de fango activo (170 ml/l). EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 1

3 LÁMIN 2 ENSYO DE SEDIMENTILIDD EN PROET LS 48 H DE L TOM DE MUESTRS (12/V/05) Inversión de la manta de fangos a las 48 h de la toma de muestras (12/V/05). EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 2

4 ESTRUCTUR FLOCULR LÁMIN 3 C D microflóculos E F ZORNOZ ZORNOZ Estructura del fango activo. y : specto general del flóculo de fango activo, en el que se observa que no existe un núcleo bien mineralizado. 100x, contraste de fases.c: Filamentos desprendidos del flóculo. 100x, contraste de fases. D: Microflóculos en disolución. 100x, contraste de fases. E: Flóculo de fango activo de estructura "media" y tamaño "medio", en el que se observan filamentos sobresaliendo de su estructura (5-20 filamentos). 100x, contraste de fases. F: Flóculo de fango activo en el que se observa un núcleo más mineralizado ( ). 100x, contraste de fases. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 3

5 PROTOZOOS Y METZOOS LÁMIN 4 FLGELDOS C Coanoflagelados. : Coanoflagelados en tinción Gram. 1000x, campo claro. : Coanoflagelados en preparación en vivo. 4000x, contraste de fases. C: Coanoflagelados. Campo claro. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 4

6 FLGELDOS LÁMIN 5 Carlos Ferrer ZORNOZ Pequeños flagelados. : Pequeño flagelado. Campo claro, 400x. : odo sp. Contraste de fases, 400x. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 5

7 MES TESTÁCES (II) LÁMIN 6 C D ZORNOZ mebas testáceas. y : rcella sp. en vista de perfil. Campo claro. C y D: rcella sp. en vista oral. 200x y 400x (respectivamente), contraste de fases. Mientras que en C se observa una ameba de color pardo oscuro, probablemente inactiva, en D puede advertirse el interior de la teca, es decir, el citoplasma. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 6

8 MES DESNUDS LÁMIN 7 y. mebas desnudas. () Contraste de fases, 100x. () Contraste de fases, 400x. En se observa la presencia de pseudópodos. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 7

9 LÁMIN 8 CILIDOS CTERÍVOROS NDDORES* Ciliados nadadores. () cineria uncinata. en las proximidades de un flóculo de fango activo. 400x, campo claro. * Dadas las observaciones realizadas por algunos participantes y nuestra propia experiencia, hemos incluido a cineria uncinata en el grupo de los nadadores en este anexo fotográfico. No obstante, el cálculo del SI, siguiendo las indicaciones del Prof. Madoni, ha de realizarse incluyendo a este ciliado en el grupo de los reptantes. CILIDOS REPTNTES CTERÍVOROS (I) C ZORNOZ spidisca lynceus de perfil. 400x, contraste de fases. Obsérvese la superficie lisa de esta especie, distinta a la superficie abombada y con costillas de spidisca costata. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 8

10 LÁMIN 9 CILIDOS REPTNTES CTERÍVOROS (I) ZORNOZ Ciliados reptantes. () Euplotes sp. 400x, contraste de fases. () Euplotes patella 400x, contraste de fases. La longitud de este organismo es de µm, es decir, superior a la de E. affinis y E. moebiusi. No obstante, su identificación de forma precisa requiere de técnicas de impregnación argéntica. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 9

11 LÁMIN 10 CILIDOS SÉSILES CTERÍVOROS (I) C Ciliados sésiles. : Vorticella sp. 400x, contraste de fases. : Vorticella sp. en gemación. 400x, contraste de fases. C: Vorticella sp. en conjugación (se resalta en la fotografía el microconjugante). EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 10

12 LÁMIN 11 CILIDOS SÉSILES CTERÍVOROS (II) ZORNOZ Ciliados sésiles solitarios. Diversos individuos del Complejo Vorticella convallaria en una agrupación similar a una colonia (pseudocolonia). 100x, contraste de fases. : Individuo del complejo Vorticella convallaria. 400x, contraste de fases. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 11

13 LÁMIN 12 CILIDOS SÉSILES CTERÍVOROS (III) ZORNOZ Ciliados sésiles coloniales. : Epistylis sp. 400x, campo claro. : Opercularia microdiscum. 400x, contraste de fases. Obsérvese en esta especie el tamaño tan reducido del disco peristomial (1/5 ancho celular). En estas imágenes se observan claramente las diferencias entre los géneros Opercularia y Epistylis en cuanto a la región peristomial. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 12

14 LÁMIN 13 CILIDOS SÉSILES CTERÍVOROS (III) Ciliados sésiles coloniales. : Opercularia articulata. 100x, contraste de fases. : Opercularia articulata. 400x, campo claro. Destaca en este organismo su grueso pedúnculo (10 µm ancho) y el tamaño de sus zooides ( µm longitud). EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 13

15 LÁMIN 14 CILIDOS SÉSILES CTERÍVOROS (IV) Ciliados sésiles coloniales: Epistylis chrysemydis. 100x, contraste de fases. Esta especie se caracteriza por presentar zooides de gran tamaño ( µm), doble reborde peristomial y pedúnculo hueco. : Epistylis plicatilis. 100x, contraste de fases. Esta especie se caracteriza por presentar pedúnculo compacto estriado transversalmente y zooides de µm de longitud. El disco peristomial se presenta en un solo disco. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 14

16 LÁMIN 15 CILIDOS SÉSILES CRNÍVOROS Suctores. Probablemente, cineta sp. 400x, campo claro. METZOOS Metazoos. : Nematodo. 100x, contraste de fases. : Rotífero. 100x, contraste de fases. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 15

17 OTRS OSERVCIONES LÁMIN 16 lgas Otros restos en el fango activo. : Ácaro. 100x, contraste de fases. : lgas. 100x, contraste de fases. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 16

18 ORGNISMOS FILMENTOSOS ORGNISMOS FILMENTOSOS DE OSERVCIÓN FRECUENTE (I) LÁMIN 17 ZORNOZ Microthrix parvicella en tinción. : Microthrix parvicella en tinción Gram. Obsérvese que se trata de una reacción Gram + "fuerte", similar a la de Nocardia sp. 1000x, campo claro. : Microthrix parvicella en tinción Neisser. Se trata de una reacción negativa, aunque gránulo positiva. 1000x, campo claro. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 17

19 ORGNISMOS FILMENTOSOS DE OSERVCIÓN FRECUENTE (II) LÁMIN 18 Microthrix parvicella, Gram + Tipo 0041, Gram - Tipo 0041 C Tipo : Tipo 0041 en tinción Gram (reacción negativa). El crecimiento epifítico impide la distinción clara de los filamentos. La similitud morfológica y en cuanto a reactiva a tinciones hacen imprescindible la realización de mediciones para distinguir este morfotipo del x, campo claro. : Tipo 0041 en vivo. Detalle del crecimiento epifítico de este filamento. 400x, contraste de fases. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 18

20 ORGNISMOS FILMENTOSOS DE OSERVCIÓN FRECUENTE (III) LÁMIN 19 ZORNOZ ZORNOZ C Organismos de observación frecuente. : Tipo 0675 en preparación "in vivo". 1000x, contraste de fases. : Tipo 0041 en tinción Gram. 1000x, campo claro. Pese a que los reactivos de tinción alteran las dimensiones "normales" de los microorganismos, obsérvense las diferencias en cuanto a tamaño de estos dos morfotipos ( y ). C: Tipo 021N en tinción Gram (reacción negativa). 1000x, campo claro. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 19

21 ORGNISMOS FILMENTOSOS DE OSERVCIÓN POCO FRECUENTE (II) LÁMIN 20 Organismos de observación poco frecuente. : Nocardia sp. en tinción Gram. 1000x, campo claro. : Microthrix parvicella y Nocardia sp. en tinción Gram. Campo claro. Entendemos que el color poco convencional de esta foto se debe al equipo de microfotografía (videocámara), en la que el ajuste de los colores puede realizarse de forma manual. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 20

22 ORGNISMOS FILMENTOSOS DE OSERVCIÓN MUY POCO FRECUENTE (II) LÁMIN 21 ZORNOZ ZORNOZ Organismos de observación muy poco frecuente. : Hyphomicrobium sp. sobresaliendo de la estructura flocular. 1000x, campo claro. : Tipo 0092 en tinción Neisser (reacción positiva) junto a Microthrix parvicella. 1000x, campo claro. EJERCICIO INTERLORTORIO (Mayo 2005): nexo fotográfico 21

23 Laura Isac, Eva Rodríguez, Natividad Fernández y Mª Dolores Salas.

24 RESUMEN DE DTOS MÁS IMPORTNTES FNGO DE EDR INDUSTRIL MUESTREO PRTICIPNTE Filam. dominante No identificado Tipo 021N/ Thiothrix Tipo 021N Tipo 021N, Tipo 1702 (probablemente) Categoría asociada 5 5 a Filam. secundario Tipo 0675 Thiothrix Tipo 1701 (probablemente) Categoría asociada Otros filamentos observados Nostocoida limicola II, Tipo /1701 Thiothrix II (proba blemente) Filamentos en disolución --- Uronema nigricans Cyclidium glaucoma Cyclidium sp. Uronema sp., Coleps sp., Cyclidium sp. Microfauna Tetrahymena pyriformis y abundantes quistes El filamento dominante tiene una categoría Fango muy deteriorado, con alta Fango no floculado, Sistema en claro estado de deterioro, de 5, se encuentra en todas partes, es largo y concentración de filamentos, deteriorado. tanto por el estado de los filamentos enrrollado, Gram - pero teñido muy débilmente, muchos de ellos inactivos. (abundantes vainas vacías, cto epifítico), Neisser - y con gránulos de PH +. bundantes restos de vaina del como por la nula estructuración del fló- Está formado por células más o menos redondea Tipo culo, que se presenta como un conglomedas y algunas se tiñen más fuerte con Gram. usencia, prácticamente, de fló rado de formas bacilares, sin núcleo y OSERVCIONES Existen también bacterias helicoidales y una culo. La disgregación es total. desdibujado. gran cantidad de células bacilares, que se encuen El único protozoo que sobrevive ctividad biológica inexistente, en pro de tran aisladas o en grupo. se alimenta de crecimiento disper- organismos como Thiothrix con metaboso y probablemente aguante la lismos más propios de las condiciones deficiencia casi total de oxígeno. de anoxia reinantes y de septicidad. Mucho metabolismo endógeno. Pequeños nadadores libres que confir- Probablemente, el bulking original man el mal estado estructural del fango. era del Tipo 0675, para ser desplazado por bacterias con metabolismo del S. FNGO DE EDR INDUSTRIL MUESTREO PRTICIPNTE Filam. dominante Restos de filamentos Microthrix parvicella Categoría asociada 5 Filam. secundario Restos de filamentos Tipo 021N, categoría 2 Categoría asociada Haliscomenobacter h., categoría 1 Otros filamentos observados Quizás Tipo 0675 y 1702 No Filamentos en disolución parecen restos en disolución Presencia Cyclidium glaucoma como dominante, Tetrahymena pyriformis, Glaucoma sp. Microfauna abundantes quistes de ciliados. Coleps sp., Uronema sp. Licor mezcla en situación de abandono lteración en los filamentos, que apa- (sin oxígeno disuelto), como si la EDR recen vacíos de células, mostrando hubiera sufrido una parada larga en el sólo posibles gránulos de reserva. tiempo. En consecuencia, abundan los Pensamos en la presencia de algún filamentos "vacíos", apareciendo peque- tóxico que afecta a la población de filaños ciliados de gran movimiento. mentos, bien porque el fango se haya OSERVCIONES clorado como control de los MOF, bien porque el influente lo contenga de forma puntual. Todas las tinciones: Neisser (-) en tricoma y (+) en gránulos PH (+) Vaina (-) Gránulos de S (-) Inicialmente dudamos entre Microthrix, Nostocoida l. (I) y Thiothrix, pero el resultado de las tinciones, nos hizo decantarnos por la primera. INFORME "EJERCICIO INTERLORTORIOS DE Mayo 2005" 2

25 SITUCIÓN REL: Se trata de una muestra puntual de una industria láctea con un grave problema de bulking filamentoso. Como medida de control, se traslada parte del fango activado a otra línea y ésta queda abandonada. La muestra analizada es el fango activado abandonado, en cuba sin oxigenación ni agitación. En consecuencia, nos encontramos con una microfauna escasa, formada exclusivamente por ciliados nadadores de reducido tamaño, propios de la situación de pésima estructuración del fango observada (lámina 1). En cuanto a la identificación de la microfauna, han sido varias las especies identificadas por los participantes: Cyclidium glaucoma, Uronema sp., Uronema nigricans, Glaucoma sp., Tetrahymena pyriformis y Coleps sp. Frecuentemente, una observación recogida en los partes de resultados ha sido la presencia de estructuras de resistencia o quistes de paredes muy delgadas, atribuidos en la mayoría de los casos a la presencia de protozoos ciliados (lámina 3). Es cierto que algunos protozoos pueden segregar una cubierta resistente para formar un quiste. En la pared de algunos quistes se ha detectado celulosa y en las de otros quitina. Los quistes se forman en los protozoos de vida libre para superar fases de desecación del medio o en los parásitos para sobrevivir durante la transferencia de un huésped a otro a través del medio. Entre estos últimos se hallan las amebas, los ciliados y algunos flagelados, como Giardia, que son liberados con las heces desde el tubo digestivo; a pesar de la inactividad relativa del quiste, el núcleo puede dividirse produciéndose una rápida multiplicación tras la exquistación. nte esta observación, nos pusimos en contacto con dos expertas en la materia: las doctoras Pérez-Uz (Universidad Complutense de Madrid, área de Microbiología) y Serrano (Universidad de Sevilla, área de Ecología). Pese a la opinión generalizada de los participantes, estas especialistas nos advirtieron que el origen de estos quistes o estructuras de resistencia estaba en la población de metazoos y no en la de protistas. Sin embargo, el grupo que produjo estas estructuras (rotíferos, nematodos, etc.), no pudo ser identificado por dichas expertas, quienes hubieran necesitado un estudio más extenso de la muestra, objetivo que no había sido planteado para con la presente muestra. demás de las anteriores, entre las estructuras de resistencia, se observaron huevos de helminto, algunos de los cuales están recogidos como imágenes en la lámina 2. En cuanto a la identificación de bacterias filamentosas, podemos afirmar que los morfotipos más comúnmente observados han sido: Tipo 021N, Tipo 0675 y Tipo 1702 (lámina 2). En cualquier caso, es necesario recoger aquí la incertidumbre adoptada por la mayoría de analistas ante el gran deterioro de la muestra, quienes expusieron cierta reserva ante las identificaciones realizadas. INFORME "EJERCICIO INTERLORTORIOS DE Mayo 2005" 3

26 RECOPILCIÓN DE MICROFOTOGRFÍS LÁMIN 1 ESTRUCTUR FLOCULR Y OTRS OSERVCIONES C D E F Estructura flocular. : Estructura flocular prácticamente ausente y estructura de resistencia ( ). 200x, contraste de fases. : Cúmulo de algas que confirma el estado de "parada" del sistema. 400x, contraste de fases. C: Estructura flocular difusa y estructura de resistencia. 200x, contraste de fases. D: bundantes estructuras de resistencia en los espacios interfloculares ( ). 100x, contraste de fases. E: Fibra orgánica. 400x, contraste de fases. F: Estructura flocular y filamentos en disolución ( ). 200, contraste de fases. INFORME "EJERCICIO INTERLORTORIOS DE Mayo 2005" 4

27 ORGNISMOS FILMENTOSOS Y OTRS OSERVCIONES LÁMIN 2 C D E F G Organismos filamentosos y otras estructuras. : Filamento Tipo 021N (probablemente), en vivo. 1000x, contraste de fases. : Tipo 021N en tinción Gram. Obsérvese el abundante crecimiento disperso. 1000x, campo claro. C: Probablemente, filamentos del Tipo 1702 en tinción Gram. 1000x, campo claro. D: Probablemente, filamentos del Tipo 1702 en tinción PH. 1000x, campo claro. E: Filamentos en tinción Neisser (reacción positiva), sin identificar. 1000x, campo claro. F y G: Huevo de scaris sp. 200x, contraste de fases. INFORME "EJERCICIO INTERLORTORIOS DE Mayo 2005" 5

28 MICROFUN Y OTRS OSERVCIONES LÁMIN 3 C D ZORNOZ ZORNOZ Microfauna. : Cyclidium glaucoma en vivo. 400x, contraste de fases. : Cyclidium glaucoma en frotis fijo (tinción Gram). 1000x, campo claro. C: Cyclidium glaucoma en vivo. 1000x, contraste de fases. D: Estructura de resistencia, probablemente correspondiente a algún metazoo (sin identificar). Notas sobre Cyclidium sp.: Células de pequeño tamaño (15-60 micrómetros), ovoides, con un polo anterior plano sin ciliación. Presenta pocos cilios somáticos y menor ciliación en el tercio posterior de la célula. Cilio caudal claro. Área oral amplia desde la parte anterior celular al tercio posterior de la célula o debajo del ecuador celular con una membrana ondulante clara que extiende en forma de velo cuando se alimenta. Vacuola contráctil posterior. Filtrador bacterívoro. INFORME "EJERCICIO INTERLORTORIOS DE Mayo 2005" 6