RESULTADOS DEL ENSAYO INTERLABORATORIO PARA FANGOS ACTIVOS (21/4/03)

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1 RESULTADOS DEL ENSAYO INTERLABORATORIO PARA FANGOS ACTIVOS (21/4/0) ORGANIZADO POR GBS Grupo Bioindicación Sevilla 1

2 ÍNDICE Introducción Participantes Resultados Análisis de datos Caracterización macroscópica y microscópica del fango activo ( IF) Identificación y cuantificación de bacterias filamentosas Caracterización protozoaria Conclusiones Generales Valoración de la muestra Anexo fotográfico ( Se adjunta en un documento aparte para evitar problemas de abertura debido al tamaño excesivo del informe) 2

3 INTRODUCCIÓN Con el objetivo de unificar criterios GBS organiza ejercicios interlaboratorio de fango activo con muestras de distintas características. Estos ejercicios de intercomparación entre laboratorios son una herramienta básica, sobretodo en análisis de tipo microbiológico, para unificar criterios debido a la alta densidad de microorganismos por mililitro y a la gran dispersión de valores que pueden ocasionar pequeñas diferencias en la metodología de análisis de los fangos activos. Así pues, estos ejercicios ofrecen la oportunidad de comparar los resultados y métodos con los demás laboratorios participantes, con objeto de detectar errores sistemáticos y eliminar este tipo de desviaciones. El ensayo del 22 de Abril de 200 se realizó sobre una muestra puntual de Fango Activo, distribuida desde Sevilla junto con los formatos de remisión de datos. La metodología de trabajo está descrita en el manual de trabajo de GBS disponible en PARÁMETROS ESTADÍSTICOS UTILIZADOS El cálculo de la media nos informa sobre el valor más probable de la variable a estudio. Se ve fuertemente afectada por los valores extremos de la población. La desviación estándar muestra como de agrupados o dispersos se encuentran los valores. Si la varianza tiende a cero, quiere decir que la dispersión de nuestros datos es muy baja. Los datos se encuentran muy concentrados en torno a la media. Los intervalos de confianza indican los valores aceptables para que los resultados se encuentren en torno a la media en una probabilidad determinada ( 95 % en la mayoría de los casos). Se ve afectado por la varianza y el número de datos disponibles. Dada la dispersión natural de los datos biológicos y más de este tipo de análisis que no presentan capacidad de control con un patrón, hemos preferido realizar una invalidación de medidas que se ha realizado mediante el test de la Q de Dixón, en el que tiene en cuenta la diferencia de los valores máximos y mínimos respecto a la media, inhabilitando aquellos que superen el valor preestablecido para este estimador.

4 PARTICIPANTES El número de participantes ha sido de 9, de los cuales 6 eran Laboratorios de Sevilla, 1 de Huelva, 1 de Valencia y 1 de Vigo. Los Laboratorios de Valencia y Vigo reciben la muestra, vía mensajería urgente, el día siguiente a su toma, con lo que algunos aspectos pueden alterarse con el tiempo e incluso con los problemas de transporte (pérdidas, temperatura,..). Para minimizar estos problemas, de los que tenemos constancia que surgieron en el ejercicio anterior, propusimos para éste que cada participante que no pueda recoger personalmente la muestra, enviara una nevera para que se le remita con la muestra y se eviten al menos los problemas de estabilidad y pérdida de esta. De los nueve participantes, la experiencia en la aplicación de las técnicas descritas en el manual de GBS es bastante variable: - El 50 % de los participantes trabajan usualmente con esta metodología - El 12 % de los participantes tiene altos conocimientos en análisis biológicos de fangos activos, pero no específicos de esta metodología - El 8 % de los participantes se ha iniciado recientemente en esta metodología y no tiene prácticamente ningún conocimiento previo en análisis biológicos de fangos activos. A la hora de analizar los resultados hay que tener en cuenta que: Los participante 1 y 5 estudian la muestra después de 24 horas. El participante 6 estudia la muestra después de 48 horas. El participante 10 estudia la muestra después de 72 horas. 4

5 RESULTADOS FICHA INTERLABORATORIO GRUPO BIOINDICACION SEVILLA FECHA: 21/04/0 MUESTREO PARTICIPANTE MACROSCOPIA 21 16, ,5 MICROSCOPIA INDICE DE FILAMENTOS 46 50, ,5 44,5 CATEGORIA DE FILAMENTOS FILAMENTO DOMINANTE 186/BACILLUS 186/BACILLUS/ESTREPTOCOCOS 186/HALISCOMENOBACTER HALISCOMENOBACTER / FILAMENTO SECUNDARIO HALISCOMENOBACTER 1701/HALISCOMENOBACTER BACILLUS EFECTO FLOCULO DISGREGACION Y TURBIDEZ DISGREGACION Y TURBIDEZ DISGREGACION Y TURBIDEZ DISGREGACION Y TURBIDEZ TURBIDEZ OTROS FILAMENTOS BACTERIAS CON METABOLISMO DEL AZUFRE BACTERIAS CON METABOLISMO DEL AZUFRE SPHAEROTILUS-BACILLUS CIANOBACTERIA / BEGGIATOA - CORTES DIAGONAL (IRF) m/ml FILAMENTOS ,72-21,7 DENSIDAD ( org/l) 7,16,E+06,76,E+06 4,02,E+06 10,65,E+06,40,E+06 INDICE DE SHANON 1,99 1,69 2,27-1,4 INDICE DE MADONI CLASE MADONI 1 NUMERO DE ESPECIES GRUPO DOMINANTE B.SESILES B.SESILES B.SESILES B.SESILES B.SESILES OBSERVACIONES ABUNDANCIA DE BACTERIAS LIBRES. CLARIFICADO TURBIO.DEPURACION BIOLOGICA INSUFICIENTE.INDICADORES DE CARENCIA DE OXIGENO.(BACTERIA 186) ESPUMAS, CLARIFICADO TURBIO Y EN GENERAL ASPECTO GLOBOSO DEL FANGO.DEPURACION BIOLOGICA INSUFICIENTE.INDICADORES DE CARENCIA DE OXIGENO. METABOLISMODE INTERIORIZACION DE NUTRIENTES. CARACTERISTICAS ESTRUCTURALES DE FLOCULO UN TANTO DEFICIENTES, DANDO LUGAR A ELEVADO IVF. ORGANISMOS ASOCIADOS A DEFICIENCIA DE OXIGENO. ENTURBIAMIENTO PRODUCIDO POR 186.BUENA DIVERSIDAD PROTOZOARIA. FANGO ESTABLE, BIEN COLONIZADO, EXCELENTE ACTIVIDAD BIOLOGICA, BUEN FUNCIONAMIENTO. BUENA SEDIMENTACION. CLARIFICADO TURBIO ASOCIADO A PEQUEÑOS FLÓCULOS EN SUSPENSIÓN.LAS BACTERIA ENCONTRADAS INDICAN SITUACIONES DE BAJA CONCENTRACIÓN DE OXIGENO Y CHOQUES DE CARGA. ANALISIS REALIZADO A LAS 48 H. DE MUESTREO. LA PRESENCIA DE FILAMETOS INTERFLOCULARES COMO DOMINANTES APORTA TURBIDEZ AL CLARIFICVADO, SIN IMPEDIR LA SEDIMENTACIÓN. POSIBLE CONDICIONES DE BAJO OXIGENO O PRESENCIA DE SUSTANCIAS TÓXICAS. O BIEN FANGO JOVEN, PERO LA PRESENCIA DE A.CICADA NO CONFIRMA ESTE HECHO. 5

6 FICHA INTERLABORATORIO GRUPO BIOINDICACION SEVILLA FECHA: 21/04/0 MUESTREO PARTICIPANTE MACROSCOPIA 12 16,5 9 25,5 MICROSCOPIA INDICE DE FILAMENTOS 55 62,5 50 4,5 CATEGORIA DE FILAMENTOS FILAMENTO DOMINANTE 1701/ /STREPTOCOCOS FILAMENTO SECUNDARIO HALISCOMENOBACTER 1701 EFECTO FLOCULO DISGREGACION DISGREGACION FLOCULAR EFLUENTE TURBIO. NO AFECTA AL FLÓCULO. DISGREGACION OTROS FILAMENTOS - SPAEROTULUS/021 N/ HALISCOMENOBACTER/ MICROTHRIX 1701/ THIOTRIX II. HALISCOMENOBACTER CORTES DIAGONAL (IRF) 1,75 5, m/ml FILAMENTOS DENSIDAD ( org/l),40,e+06 7,16,E+06 9,82,E+06 1,92,E+06 INDICE DE SHANON 2,12 2,18 1,89 1,96 INDICE DE MADONI CLASE MADONI 1 NUMERO DE ESPECIES GRUPO DOMINANTE B.SESILES B.SESILES B.SESILES B.SESILES OBSERVACIONES CALIDAD DEL FANGO. BAJA SEDIMENTABILIDAD DEL FANGO. BUENA CLARIFICACION. MALA DECANTACIÓN DEL FANGO. LAS BACTERIAS EN DISOLUCIÓN DISMINUYEN LA CALIDAD DEL EFLUENTE Y LO ENTURBIAN. SITUACIÓN CLARA DE DEFICIT DE OXÍGENO. ESTUDIO DE LA MUESTRA DESPUES DE TRES DÍAS DE SU TOMA. 6

7 ANALISIS DE DATOS En este apartado se realizara un análisis estadístico de los valores obtenidos en cada uno de los apartados en los que está dividido el análisis de fangos activos: CARACTERIZACIÓN MACROSCÓPICA Y MICROCÓPICA DEL FANGO ACTIVO - MACROCOPÍA MACROSCOPIA , , , ,5 MEDIA 15,9 VARIANZA 5,05 INTERV CONF CARACTERISTICAS MACROSCÓPICAS MACROSCOPIA MEDIA PARTICIP DESCARTADO 10 MEDIA CORREG 14,7 VAR CORREG,78 7

8 MICROSCOPIA MICROSCOPIA MEDIA 4,6 VARIANZA 9,0 INTERV CONF CARACTERISTICAS MICROSCÓPICAS PARTICIP DESCARTADO 10,00 MEDIA CORREG 6,75 VAR CORREG 6,96 INTERV CONF CORREG +/-12 MICROSCOPIA MEDIA - ÍNDICE DE FANGO INDICE DE FANGO ( IF) , ,5 6 44, , ,5 MEDIA 50,5 VARIANZA 6, INDICE DE FANGO (IF) INDICE DE FANGO ( IF) MEDIA 8

9 CATEGORIA BUENO % REPARTO CATEGORIAS IF BUENO - CATEGORIA BACTERIANA CATEGORIA BACTERIANA MEDIA 4,2 VARIANZA 0, CATEGORIA BACTERIANA CATEGORIA BACTERIANA MEDIA - DENSIDAD PROTOZOARIA DENSIDAD PROTOZOARIA ( EXP 6) 1 7,16,76 4 4, ,65 6,4 7,4 8 7,16 9 9, ,92 MEDIA 5,7 VARIANZA, DENSIDAD PROTOZOARIA DENSIDAD PROTOZOARIA ( EXP 6) MEDIA 9

10 - ÍNDICE DE SHANON INDICE DE SHANON 1 1,99 1,69 4 2, ,4 7 2,12 8 2,18 9 1, ,96 MEDIA 1,975 VARIANZA 0,28 2,5 2 1,5 1 0,5 0 INDICE DE SHANON INDICE DE SHANON MEDIA - ÍNDICE DE MADONI INDICE DE MADONI MEDIA 4,4 VARIANZA 1, INDICE DE MADONI INDICE DE MADONI MEDIA CLASE 2 2 % REPARTO CATEGORIAS ÍNDICE DE MADONI 2 10

11 - Nº ESPECIES PROTOZOARIAS Nº DE ESPECIES PROTOZOARIAS MEDIA 8 VARIANZA 1, Nº ESPECIES PROTOZOARIAS Nº DE ESPECIES PROTOZOARIAS MEDIA - GRUPO DOMINANTE GRUPO DOMINANTE 1 VORT MICROSTOMA VORT MICROSTOMA 4 B SESILES 5 B SESILES 6 VORT MICROSTOMA 7 VORT MICROSTOMA 8 VORT MICROSTOMA 9 VORT MICROSTOMA 10 VORT MICROSTOMA GRUPO DOMINANTE VORT MICROST B SESIL - IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS FILAMENTOSAS FILAMENTOS DOMINANTE SECUNDARIO OTROS 1 186/BACILLUS HALISCOMENOBACTER BAC CON MET DEL S 186/BACLL/ESTREPT 1701/HALISCOMENOBACTER BAC CON MET DEL S 4 186/HALISCOM 1701 SPHAEROTILUS/BACILLUS 5 HALISCOM/ /CIANOBAT/BEGGIATOA 6 BACILLUS / SPHAEROTILUS/021N/HALISCO/MICROTRX HALISCOMENOBACTER 1701/THIOTRIX /ESTREPTOC 1701 HALISCOMENOBACTER 11

12 FILAMENTO DOMINANTE FILAMENTO SECUNDARIO 186 O SIMILAR HA LISCO/ / HALISCOM 1701/HALISCOM Nº TOTAL DE SP BAC DETERMINADAS MEDIA 4,22 VARIANZA 1, NºTOTAL DE SP BAC DETERMINADAS Nº TOTAL DE SP BAC DETERMINADAS MEDIA - LISTADO DE ESPECIES DE PROTOZOOS ESPECIES PROTOZOARIAS IDENTIFICADAS 1 euglena,uronema, aspidisca, trachelophyllum, opercularia, v microstoma, v convallaria, v sp aspidisca, trachelophyllum, epistylis, v microstoma, v convallaria, v infusiorum, v campanula 4 litonotus, cil carnivoro, tokophrya, paramecium, aspidisca, epistylis, v microstoma, v convallarina 5 centropysis, vort striata, vort campanula, vort convallaria, vort infusionum, epistylis, oper microdiscum, uronema tokophrya, aspidisca c, trachelophyllum p, oxitrichia 6 uronema, tetrahymena, aspidisca, trachelophyllum, bac nadador, v microstoma 7 ameba con teca, colpoda, colpidium, aspidisca, trachelophyllum, euplotes, epistylis, v microstoma, v convallaria, nematodo 8 flag grande, acineta, podophrya, bac nadador, aspidisca, trachelophyllum, epistylis, opercularia, v microstoma, v convallaria 9 tetrahymena, aspidisca, trachelophyllum, euplotes, v microstoma, v convallarina 10 acineta, aspidisca, trachelophyllum, v microstoma, v convallaria. V infusorium, v campanula - RELACION DE PORCENTAJES DE PROTOZOOS PARTICIPANTE G FLAG AMEBAS T CAR NAD CARN SUCT B NADA B REPTANTE B SESIL METAZOO 1 2% 15% 7% 76% 10% 90% 4 19% 6% 6% 69% 5 % 1% 25% 7% 64% 6 8% 21% 71% 7 1% 5% 18% 75% 1% 8 1% 1% 9% 89% 9 12% 11% 77% 10 29% 5% 66% 12

13 CONCLUSIONES * VALOR ESTIMADO DE LA MUESTRA ANALIZADA RESULTADOS MEDIOS ESTIMADOS DE LA MUESTRA ÍNDICE DE FANGO CATEFORIA BACTERIANA 4 IDENTIF DE FILAMENTOS FORMAS BACILARES Y COCALES/1701/HALISCO EFECTO DEL FILAMENTO TURBIDEZ Y DISGREGACION DENSIDAD PROTOZOARIA APROXIMADA 5,7 ( MUY VARIABLE) ÍNDICE DE MADONI 5 CLASE DE MADONI : DEPURACION INSUFICIENTE. Nº DE ESPECIES ENCONTRADAS 8 GRUPO DOMINANTE VORT MICROSTOMA RENDIMIENTO SEGÚN MADONI FUNCIONAMIENTO MEDIOCRE * CONCLUSIONES GENERALES - El tiempo transcurrido desde la toma de muestra hasta el momento del análisis modifica fundamentalmente los porcentajes de protozoos. - INDICE DE FANGO En general, dado el carácter subjetivo de las características macroscópicas, se consideran aceptables los resultados obtenidos cuando se analiza el valor global dado para la MACROSCOPIA. Al igual que en el ejercicio anterior, es la turbidez el parámetro con más dispersión, si bien el porcentaje mayor de participantes (44 %) la valora como media. En cuanto al los flóculos en suspensión y la sedimentabilidad el 50 % de los participantes los valora como bajo y media respectivamente, aunque de nuevo se dan valoraciones minoritarias extremas, que podrían achacarse a la comparación de esta muestra con las que habitualmente se observan. En cuanto a la MICROSCOPIA, al igual que en el anterior ejercicio, la coincidencia es grande en parámetros como textura, tamaño, forma y cobertura. En este caso, la valoración de filamentos en solución no presenta problemática y la coincidencia en estimarlo como alto es grande, un 89 %. En la valoración de filamentos asociados a flóculos y la estructura del mismo, se reparte la opinión entre las opciones media y alta para la primera y media y abierta para el segundo parámetro. En general, la repetitividad del análisis macro y microscópico es buena, observándose una muy alta coincidencia en el Indice de Fango. DENSIDAD Y DIVERSIDAD DE PROTOZOOS. - Se ha detectado un aumento en la dispersión de datos de densidad de organismos. - El conteo de pequeños flagelados es bajo en todos los participantes, salvo en el número 5 en el que se encuentra en rango medio. - El participante número seis ha identificado 6 especies de protozoos, ya que dado la dificultad de identificar los pequeños flagelados no se contabilizan como especies. 1

14 - Aunque se aprecia variación en el número de especies protozooarias, entre 6 y 10, el porcentaje de grupo dominante es muy similar para todos los participantes. - INDICE DE MADONI Y SHANON Ha sido necesario una revisión del cálculo de los Índices de Madoni: Participante 10: grupo dom Vort microstoma, 7 especies y densidad mayor de 10 6 Participante 9: grupo dominante Vort microstoma Participante 4: Podría ser correcto definir como grupo dominante B sésil, sin embargo V microstoma aparece en alta concentración, por lo que parece más lógico decantarse por esta última como dominante. - IDENTIFICACION DE ESPECIES BACTERIANAS. La mayoría de los participantes identifican como bacteria filamentosa dominante la especie 186 o similar y coinciden en el efecto producido por ellas en el clarificado: turbidez. Es necesario puntualizar que dentro de las bacterias creadoras de turbidez existe una similitud respecto a características morfológicas y de respuesta a las tinciones que hacen en algunos casos difícil su identificación correcta. BACTERIA GRAM GRANULOS DIAMETRO LONGITUD MORFOLOGIA LOCALIZAC ION NEISSER TRICOMA TRICOMA BACILLUS +/ CAD IRREG LIBRE ESTREPTOCO. + OCASIONAL <100 CAD IRREG LIBRE <150 CAD IRREG LIBRE RECTO / LIG CURVADO BORDE FLOC <100 RECTO/ LIG CURVADO LIBRE En el caso de 0411, su asociación al borde flocular puede permitir su identificación. El tamaño inferior y su morfología determinan a El grupo más conflictivo es el de Bacillus, Estreptococos y 186, que comparten una morfología entre cocal y bacilar y un rango de tamaños similares. Cuando la tinción de Gram es clara, no hay mucho material extracelular, Estreptococoss y 186 se diferencian claramente, este último presenta quiebros en su morfología más abruptos que Estreptococos. En la práctica esta distinción en cultivos mixtos puede plantearse dificultosa. Como contrapartida este grupo genera el mismo efecto sobre la muestra: Turbidez. El número de especies identificadas es muy variable y está muy ligado a la experiencia en estudios de este tipo, si bien insistimos, que a nivel de control de proceso es muy útil la identificación simplemente de la especie dominante y secundaria. 14

15 * ESTUDIO DE LAS PRINCIPALES DISCREPÁNCIAS Desde que iniciamos los interlaboratorios los integrantes del grupo bioindicación, uno de los puntos que nos ha planteado mayores problemas es el de la identificación de las distintas especies de ciliados peritricos. En este interlaboratorio en concreto, tenemos la duda de sí la Vorticella que aparece es V. striata o V. microstoma. De los 9 integrantes de este interlaboratorio, 8 de ellos la han identificado como V. microstoma, sin embargo el integrante nº 5 no solo la identifica como V. striata, sino que adjuntan fotografías que parecen corroborar su identificación. Por este motivo proponemos para el siguiente interlaboratorio que realicemos, dedicar una especial atención a este grupo de ciliados, tratando de hacer una identificación exhaustiva de todas las especies presentes aunque sea en escasa proporción, tratando de realizar fotografías de las mismas, siempre que se disponga de los medios apropiados. Según una recopilación de las distintas claves que posee el grupo, entre las vorticellas que podrían encontrarse en la muestra existen varias diferencias claras: V microstoma: Estriación suave, núcleo extendido longitudinalmente. Tamaño: 5-8 micras, micras de anchura y pedúnculo de hasta 400 micras. Peristoma claramente constreñido en la zona oral. Gran macronucleo que la diferencia de V. Striata. Una vacuola contráctil en la zona oral y muchas vacuolas digestivas esféricas. V Striata: Claramente estriada. Núcleo extendido transversalmente. Tamaño en torno micras, anchura de micras y pedúnculo de 20-0 micras. Macronucleo corto. Una única vacuola contráctil. V campanula: Región del peristoma muy ancha. Alta concentración de gránulos refringentes en el citoplasma. Tamaño entre micras, anchura entre micras y pedúnculo entre micras, este muy grueso y con contracción en espiral. Una sola vacuola contráctil. V convallaria: Labio oral igual o ligeramente superior al peristoma, más esbelto que v campanula. Núcleo en C en la base del peristoma. Tamaño en torno a 77 micras, anchura de 5-70 micras y micras de pedúnculo. No presenta gránulos de reserva, pero sí muchas vacuolas alimenticias. V infusionum: Forma de pera, con labio oral menor que la anchura máxima del peristoma. Myonema contráctil. Tamaño en torno a 0-90 micras. Macronucleo en C situado transversalmente. Una vacuola contráctil debajo de la zona oral. Otro punto conflictivo es la determinación de la bacteria filamentosa dominante. En general, en todos los interlaboratorios coincidimos en el listado de bacterias filamentosas presentes entre los distintos integrantes del interlaboratorio, salvo excepciones en las que debido a que las características de alguna bacteria filamentosa en particular, hace dificultosa su identificación. Pero lo que nos plantea más problemas es la identificación de aquella bacteria filamentosa de entre las dos o tres mayoritarias que clasificaríamos como dominante y cual como secundaria. En esta ocasión era particularmente difícil ya que teníamos que decidir entre una bacteria de localización libre en el espacio interflocular, con una que crece en el borde del flóculo. La mayor parte de los integrantes se ha decantado en este caso por 186, probablemente debido al mayor efecto sobre la calidad final del fango que estamos analizando de esta bacteria filamentosa (turbidez del clarificado), frente a 1701 y H. hydrossis (disgregación flocular). Por este motivo proponemos profundizar en la obtención de técnicas que nos permitan seleccionar a la bacteria dominante de entre el conjunto de bacterias filamentosas de la muestra. Finalmente, queremos constatar las diferencias observadas entre las muestras analizadas a las 24 horas de haberla tomado con aquellas otras que se han estudiado con posterioridad, por este motivo animamos a los integrantes del grupo a tratar de realizar este ensayo lo antes posible, indicando siempre en el informe emitido el tiempo transcurrido, de cara a la interpretación de posibles discrepancias ocasionadas por este motivo. Por el interes del informe aportado por el participante 5, se transcribe directamente, ya que aclara numerosas cuestiones muy interesantes respecto a la muestra. 15

16 * INFORME DEL PARTICIPANTE Nº 5 EVALUACION DE LA MICROFAUNA: IDENTIFICACION DE BACTERIAS FILAMENTOSAS Como bacteria dominante establezco a H. Hydrossis con abundante crecimiento epífito y en gran cantidad de ocasiones agrupada en manojos (tal como se muestra en la imagen adjunta). En principio, pienso que podría parecer una población dominante de la tipo 186 (gram -) sobre la antes mencionada debido fundamentalmente a lo llamativa que pudiera ser (grosor, longitud...), pero una vez realizada la observación a 100x aprecio multitud de filamentos cortos irradiando como agujas, característico de H. Hydrossis; el numero de filamentos rebasa en la mayoría de casos en número de 20 y es por ello que la sitúo en una categoría de 5 según el manual de Emasesa. Lo realmente difícil es establecer en una categoría a la tipo 186 debido a que no esta asociada al flóculo, de un modo subjetivo y orientativo opto por establecerla en una categoría de 4, ya que parece que si dividiéramos el número de filamentos entre el número de flóculos (vistos en la muestra del porta) podría englobarse entre 5 20/ flóculo. Establezco pues la codominancia del fango de las mencionadas bacterias pero especificando la dominancia de H Hydrossis frente a la 186. Como bacteria secundaria observo la tipo 1701 con abundante crecimiento epífito (el cual dificulta en muchas ocasiones la morfología celular característica) como se puede apreciar en las imágenes adjuntas. Aparece con una densidad media de 1-5 filamentos por flóculo. Otros filamentos de interés que aparecen de forma frecuente son: 1. Beggiatoa spp.: De este género me parece observar 2 especies, una de ellas (la cual aparece de forma muy ocasional) es de grosor y longitud considerable observando el movimiento por flexión. En las ocasiones que la observo (4 o 5) aparecen gránulos de azufre pero de manera aislada. Tan solo en una de ellas la aparece multitud de gránulos. La otra supuesta aparece con frecuencia en el espacio interflocular, en un principio me había parecido la tipo 0914 ya que es muy similar a simple vista cuando se encuentra recta, pero al seguir observando mas ejemplares detecto movimiento por deslizamiento observando para ello una posición como la de una serpiente, es decir, haciendo curvas. Termino observando que la morfología celular es rectangular apareciendo tan solo unos pocos gránulos gruesos de azufre (color verde brillante). He de señalar que esta especie de Beggiatoa no la he observado en ninguna ocasión, lo que me desconcierta es la longitud del tricoma ya que en la mayoría de los casos no supera los 100 um y según la bibliografía suele ser mayor. Como conclusión no se si se trata de este género pero por sus características (sobre todo de movimiento) opto por Beggiatoa spp. He de señalar que el movimiento tan solo lo he apreciado en el día de la recepción de la muestra, en los siguientes no se aprecia. 2. Tipo 0411: Este tipo de bacteria no he tenido la ocasión de observarla, en un principio según las características me ha parecido muy similar a Bacillus spp. (la cual tampoco he tenido ocasión de observarla). Lo que me ha hecho decantarme por la 0411 es la forma de las células (varillas), que aparece en el borde de los flóculos (normalmente los filamentos aparecen rectas o algo curvadas) lo cual creo que podrían diferenciarla de Bacillus spp.. Esta clasificación no es muy fiable debido a mi escasa experiencia, pero como se trata de arriesgar y sobre todo de aprender la dejo clasificada como tipo 0411 (ejemplar muy similar al que aparece en Biocontrol E.D.A.R y en D. Jenkings). En las imágenes del fichero se puede apreciar: gram -, tincion de vainas (se aprecian muy bin las células). A modo de curiosidad en una de las observaciones aparece una cianoficea (aunque no se se aprecia mucho debido al contraste de fases, posee color verde). 16

17 Otro aspecto importante a destacar es la gran abundancia de bacterias libres de pequeño y gran tamaño, las cuales aparecen en el espacio interflocular y podrían estar de alguna forma contribuyendo a una proliferación inadecuada de las bacterias floculantes debido fundamentalmente a la competencia por el sustrato soluble. No obstante, es posible que en el momento de la toma hubieran menos en población y podrían haber proliferado hasta la recepción (se ha notado una proliferación importante, mucho más en la muestra refrigerada que en la oxigenada, a lo largo de los días posteriores a la recepción). CONCLUSIONES: Las bacterias dominantes encontradas indican situaciones de baja concentracion de oxigeno disuelto, probablemente momentos de alta carga con mala regulación del mismo, igual que la tipo 1701, la cual ejerce un efecto de disgregación flocular y por tanto mala sedimentabilidad de los flóculos de pequeño tamaño que al final quedan en suspensión, esto contribuye junto con 186 a la turbiedad del clarificado. Beggiatoa y 0411 (corroborando lo antes señalado) suelen ser habituales en condiciones de alta carga. El análisis de S.S.L.M (1190 mg/l), % S.S.V.L.M (87 %) la abundancia de bacterias de vida libre el color marrón claro podrían reforzar la teoría sobre las posibles condiciones de alta carga. EVALUACION DE LA MICROFAUNA: IDENTIFICACION DE PROTOZOOS Y METAZOOS El análisis de protozoos en el fango activo cuando no se realiza inmediatamente después de la toma de muestras puede resultar realmente complicado, sobre todo cuando se intenta diferenciar especies cuya morfología es muy similar, tal es el caso de las Vorticellas. Una vez llegada la muestra bajo condiciones de refrigeración ( ) y aislada una alicuota para el análisis macroscopico y de filamentosas, procedo a la oxigenación de la misma para intentar recuperar en lo posible su habitat natural y minimizar el estrés. No obstante, en el primer análisis cualitativo me encuentro que aprox. el 70 % de los ciliados sésiles se encuentran sin actividad y completamente hinchados, el otro 0 % restante están activos pero con ciertos síntomas de deformación que en breves minutos tras iniciar la observación terminan por hincharse. El resto de protozoos mantienen su morfología lo que permite diferenciarlos. Volviendo al tema de ciliados sésiles opto por intentar clasificarlos: podría haber dos especies que predominan bastante, una de ellas podría ser Vorticella Striata (por su forma, costillas convexas entre estrias macronucleo en C transversal, largo pedúnculo, se encuentra dentro de las dimensiones según Warren...) aun así da muy poco tiempo para su correcta clasificación. La otra especie con la que me encuentro en abundancia podría ser Vorticella campanula (dimensiones también según Warren, forma del zooide, anchura zona del peristoma, la situación de la vacuola pulsatil, macronucleo en J, grueso pedúnculo, abundantes gránulos de reserva, abundantes contracciones...). Es posible que hubiera visto alguna Vorticella convallaria e incluso Banatica pero lo cierto es que no estoy nada seguro. Es muy probable que hubieran V. Infusionum (aparecen unas vorticellas las cuales tienen las costillas cóncavas). No obstante dado el estado de estrés de las mismas opto por establecer la existencia de dos especies de vorticellas de cara al calculo del índice biotico. Intento asegurarme que no existen vorticellas con el macronucleo longitudinal y así establecer que al menos no existe V. Microstoma; las que no son V campanula? al menos lo tienen transversal. La pregunta que me hago es V. Microstoma puede cambiar la posición del macronucleo cuando se encuentra deformada e hinchada? Si es así cabe la posibilidad de haber pasado de largo a V. Microstoma y no sería fiable el índice de Madoni. Los Epystilis prácticamente se encuentran sin actividad, tan solo en una ocasión consigo verlos y aprovecho mas que nada para fotografiarlos y dejar constancia que al menos son de este género. Las opercularias con las que me encuentro se mantienen un poco mas y aunque no consigo medirlas me da tiempo de observarlas, podrían tratarse de O. Microdiscum (forma de barril con ancha abertura, pedúnculo estriado longitudinalmente y no segmentado...). En el análisis encuentro abundante a Uronema spp. (creo que U. Nigricans). Otras especies que aparecen son : Tokophrya spp. (podría ser T. Lemnarum según Omega ), Aspidisca cicada, Trachelophyllum pusillum. 17

18 Por otro lado encuentro un hipotrico de tamaño medio,el cual podría ser del género Oxitrichia, pero debido a su estado de deformación me resulta imposible clasificarlo. También aparece un holotrico de gran tamaño en el que se aprecia una forma completamente redonda y en movimiento, otro holotrico también aparece con forma ovalada con mucho movimiento (imposible fotografiarlo). De cara pues al índice biotico opto por al menos establecer una especie en el apartado otros de reptantes Encuentro gran cantidad de amebas de pequeño tamaño inactivas y con vacuolas. Pienso que habría que dejar claro si en este estado se tienen en cuenta para el recuento total de individuos. Opto por no incluirlas según conversación mantenida con un componente de GBS. CONCLUSIONES: En general, aparecen especies predadoras de Bacterias libres (Vorticellas antes descritas). Destacar que aunque existe una cierta biodiversidad bien es cierto que los representantes de algunas especies están en muy escaso numero (1 o 2 individuos por visu). Destacar la presencia importante de Uronema spp., que aunque compatible con una buena depuración, se encuentra ligado a bajo tiempo de retención del licor mezcla o sobrecarga con escasa aireación, condiciones estas relacionadas con la presencia de las bacterias filamentosas descritas en el anterior apartado. Por último y a modo de curiosidad comentar la necesidad de conservación de la muestra de licor mezcla y sobre todo el rápido examen de la muestra, ya que en mi caso he observado que una vez pasado dos dias después de la recepción de la muestra la población de Vorticellas y Uronema spp. había desaparecido en un 90 % de la muestra mantenida a temperatura ambiente y en oxigenación, apreciándose un aumento de suctorios. La muestra refrigerada conserva Vorticellas, desaparece Uronema spp. Y aumenta muchísmo las bacterias de vida libre. 18