RESULTADOS DEL ENSAYO INTERLABORATORIO PARA FANGOS ACTIVOS (17/6/03)

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1 RESULTADOS DEL ENSAYO INTERLABORATORIO PARA FANGOS ACTIVOS (17/6/03) ORGANIZADO POR GBS Grupo Bioindicación Sevilla 1

2 ÍNDICE Introducción Participantes Resultados Análisis de datos Caracterización macroscópica y microscópica del fango activo ( IF) Identificación y cuantificación de bacterias filamentosas Caracterización protozoaria Conclusiones Generales Valoración de la muestra Anexo fotográfico ( Se adjunta en un documento aparte para evitar problemas de abertura debido al tamaño excesivo del informe) 2

3 INTRODUCCIÓN Con el objetivo de unificar criterios GBS organiza ejercicios interlaboratorio de fango activo con muestras de distintas características. Estos ejercicios de intercomparación entre laboratorios son una herramienta básica, sobretodo en análisis de tipo microbiológico, para unificar criterios debido a la alta densidad de microorganismos por mililitro y a la gran dispersión de valores que pueden ocasionar pequeñas diferencias en la metodología de análisis de los fangos activos. Así pues, estos ejercicios ofrecen la oportunidad de comparar los resultados y métodos con los demás laboratorios participantes, con objeto de detectar errores sistemáticos y eliminar este tipo de desviaciones. El ensayo del 17 de Junio de 2003 se realizó sobre una muestra puntual de Fango Activo, distribuida desde Huelva junto con los formatos de remisión de datos. La metodología de trabajo está descrita en el manual de trabajo de GBS disponible en PARÁMETROS ESTADÍSTICOS UTILIZADOS El cálculo de la media nos informa sobre el valor más probable de la variable a estudio. Se ve fuertemente afectada por los valores extremos de la población. La desviación estándar muestra como de agrupados o dispersos se encuentran los valores. Si la varianza tiende a cero, quiere decir que la dispersión de nuestros datos es muy baja. Los datos se encuentran muy concentrados en torno a la media. Los intervalos de confianza indican los valores aceptables para que los resultados se encuentren en torno a la media en una probabilidad determinada ( 95 % en la mayoría de los casos). Se ve afectado por la varianza y el número de datos disponibles. Dada la dispersión natural de los datos biológicos y más de este tipo de análisis que no presentan capacidad de control con un patrón, hemos preferido realizar una invalidación de medidas que se ha realizado mediante el test de la Q de Dixón, en el que tiene en cuenta la diferencia de los valores máximos y mínimos respecto a la media, inhabilitando aquellos que superen el valor preestablecido para este estimador. 3

4 PARTICIPANTES El número de participantes ha sido de 9, de los cuales 6 eran Laboratorios de Sevilla, 1 de Huelva, 1 de Valencia y 1 de Vigo. Los Laboratorios de Sevilla, Valencia y Vigo reciben la muestra, vía mensajería urgente, el día siguiente a su toma, con lo que algunos aspectos pueden alterarse con el tiempo e incluso con los problemas de transporte (pérdidas, temperatura,..). Para minimizar estos problemas, cada participante que no pueda recoger personalmente la muestra, envía una nevera para que se le remita con la muestra y se eviten al menos los problemas de estabilidad y pérdida de esta. De los nueve participantes, la experiencia en la aplicación de las técnicas descritas en el manual de GBS es bastante variable: - El 50 % de los participantes trabajan usualmente con esta metodología - El 12 % de los participantes tiene altos conocimientos en análisis biológicos de fangos activos, pero no específicos de esta metodología - El 38 % de los participantes se ha iniciado recientemente en esta metodología y no tiene prácticamente ningún conocimiento previo en análisis biológicos de fangos activos. A la hora de analizar los resultados hay que tener en cuenta que: Los participante 3, 6, 8 y 10 estudian la muestra después de 24 horas. El participante 1Y 5 estudian la muestra después de 48 horas. 4

5 RESULTADOS MUESTREO 10/07/03 PARTICIPANTE MACROSCOPIA 16, ,5 MICROSCOPIA INDICE DE FANGO 66, ,5 CATEGORIA DE FILAMENTOS FILAMENTO DOMINANTE MICROTHRIX TIPO 021 N HALISCO-MICROTHRIX TIPO 021 N FILAMENTO SECUNDARIO HALISCO HALISCO NOCARDIA HALISCO EFECTO FLOCULO PUENTES INTERFLOCULARES, DISGRAGACION FLOCULAR PUENTES INTERFLOCULARES DISGREGACION DISGREGACION POR 021 N OTROS FILAMENTOS NOCARDIA, TIPO 021 N, NOSTOCOIDA L. I Y III, 1701 NOCARDIA, MICROTHRIX, NOSTOCOIDA L. I Y III, CIANOFICEA NOSTOCOIDA- 021 N TIPO 0041, NOSTOCOIDA LIMICOLA II Y III. NOCARDIA, BEGGIATOA. CORTES DIAGONAL m/ml FILAMENTOS , ,94 - DENSIDAD ( org/l) 1,63,E+07 29,56,E+06 19,42,E+06 14,75,E+06 INDICE DE SHANON 1,68 1,42 1,42 1,02 INDICE DE MADONI CLASE MADONI NUMERO DE ESPECIES GRUPO DOMINANTE TECAMEBAS TECAMEBAS TECAMEBAS TECAMEBAS OBSERVACIONES MUESTRA OBSERVADA DESPUES DE 48 BASTANTES NATAS Y ESPUMA EN SUPERFICIE. SE HORAS DEL MUESTREO. CLARIFICADO TURBIO DETECTAMEJORIA DE LA DECANTACION CON EL TIEMPO. ZOOGLEA EN COLONIAS ABUNDANTES, DEBIDO A LA PRESENCIA DE ABUNDANTES CLARIFICADO MUY TURBIO DEBIDO A BACTERIA BACTERIAS LIBRES. PRESENTA NATAS Y COCALES Y BACILARES LIBRES. NO MEJORA EL ESPUMAS EN SUPERFICIE. ABUNDANCIA DE CLARIFICADO CON EL TIEMPO. ACUMULOS DE ZOOGLEA. PRESENCIA DE CUMULOS DE NITRIFICANTES DETECTADOS DE MANERA BACTERIAS NITRIFICANTES. MICROFAUNA ABUNDANTE. ESPIROUQETAS Y BASTANTES AMEBAS CARACTERISTICA DE PROCESOS DE DESNUDAS. LAS BACTERIA ENCONTRADAS SON NITRIFICACION. BUENA DIVERSIDAD. INDICADORAS POR UNA PARTE DE DEFICIENCIAS DE BACTERIA FILAMENTOSAS ASOCIADAS A OXIGENO (HALISCO Y SPIROQUETAS). LA DOMINANCIA DE 021 N CON CARACTERISTICAS BAJAS CARGAS MASICAS, BAJAS MORFOLOGICAS ESPECIALES LLEVA A PENSAR EN CONCENTRACIONES DE OXIGENO DISUELTOY LA EXISTENCIA DE ALGUN TIPO DE VERTIDO EN POSIBILIDAD DE VERTIDOS INDUSTRIALES. PLANTA, QUE PODRIA CORRESPONDER CON LOS CALIDAD PREVISIBLE DEL AGUA TRATADA: PROTOZOOS ENCONTRADOS. NITRIFICACION REGULAR. CONSISTENTE, ALTA DIVERSIDAD DE PROTOZOOS. PRESENCIA DE ESPUMAS EN SUPERFICIES. MEJORIA DEL CLARIFICADO AL AUMENTAR EL TIEMPO DE DECANTACION. CARACTERISTICAS MACROSCOPICAS ADECUADAS CON UN IVF BAJO. BUENA DIVERSIDAD PROTOZOARIA.. ORGANISMOS ASOCIADOS A CARGAS MÁSICAS BAJAS Y BAJO CONTENIDO EN O.D.. FANGO ESTABLE Y BIENCOLONIZADO. BUEN FUNCIONAMIENTO. ALTA CONCENTRACION DE TECAMENBAS ASOCIADO A PROCESOS DE NITRIFICACION. CALIDAD PRVISIBLE DEL AGUA: BUENA. MEJORABLE CON CAUDALES MAS BAJOS QUE AUMENTEN EL TIEMPO DE RESIDENCIA EN CLARIFICADORES. ANALISIS REALIZADO A LAS 48 HORAS DEL MUESTREO. BUENA SEDIMENTABILIDAD PERO CON CLARIFICADO CON ALTA TURBIDEZ ASOCIADO A PEQUEÑOS FLOCULOS EN SUSPENSION. ABUNDANTES BACTERIAS, TANTO LIBRES COMO EN AGLOMERACION.ESPECIES PROPIAS DE SITUACIONES CON ELEVADO TIEMPO DE RETENCION Y CARGA DEBIL. LAS ESPECIES FILAMENTOSAS ENCONTRADAS EN PRESENCIA SIGNIFICATIVA SON TIPICAS DE SISTEMAS CON BAJA CARGA MASICA Y ALTAS EDADES DEL FANGO, APORTE DE AGUAS INDUSTRIALES Y/O DEFICIENCIAS DE NUTRIENTES.CALIDAD PREVISIBLE DEL AGUA TRATADA: MALA O REGULAR. 5

6 MUESTREO 10/07/03 PARTICIPANTE MACROSCOPIA 21 16,5 16,5 25,5 21 MICROSCOPIA INDICE DE FANGO 68 63,5 50,5 84,5 73 CATEGORIA DE FILAMENTOS FILAMENTO DOMINANTE MICROTHRIX 1851/0803 NOSTOCOIDA L I Y II - NOCARDIA FILAMENTO SECUNDARIO 021 N / TIPO N TIPO N EFECTO FLOCULO DISGREGACION FLOCULAR FORMACION DE ENLACES Y PUENTES INTERFLOCULARES, DANDO LUGAR A ALTA TURBIDEZ DISGREGACION FLOCULAR - DISGRAGACION FLOCULAR OTROS FILAMENTOS NOCARDIA - NOCARDIA- TIPO 0961 MICROTHRIX SHAEROTILUS - CORTES DIAGONAL - - 3,7 - - m/ml FILAMENTOS 176, DENSIDAD ( org/l) 1,46,E+07 1,24,E+07 1,73,E+07 2,88,E+07 2,04,E+06 INDICE DE SHANON 1,39 2,07 1,14 1,198 1,67 INDICE DE MADONI CLASE MADONI NUMERO DE ESPECIES GRUPO DOMINANTE TECAMEBAS CARNIVORO NADADOR TECAMEBAS TECAMEBAS TECAMEBAS MUESTRA CON OLOR A SALOBRIDAD, FANGO DE ASPECTO LIGERO Y COLOR MARRON CLARO. SE OBSERVAN COLONIAS DE ZOOGLEAS EN ALTA PROPORCION Y MATERIAL REFRACTARIO. SE OBSERVACIONES OBSERVAN FILAMENTOS EN ESPACIOS INTERFLOCULARES, DISGREGACION FLOCULAR EN MEDIDA MEDIA. LOS FILAMENTOS DETECTADOS SE PUEDEN ASOCIAR A REACTORES DE AIREACION PROLONGADA QUE TRABAJAN A BAJAS CARGAS MASICAS.MICROBIOTA CARACTERISTICA DE FANGO MADURO Y ESTABLE DONDE SE PRODUCEN PROCESOS DE NITRIFICACION. BUENOS RENDIMIENTOS DE DEPURACION, AUNQUE LA EN LA V-30 QUEDAN FLOCULOS EN LA SUPERFICIE FANGO CON BUENA CAPACIDAD DE DECANTACION. BUENA SEDIMENTABILIDAD. ALTA EDAD DE FANGO PRESENCIA DE BURBUJAS EN (PRESENCIA DE NEMATODOS SUPERFICIE. CALIDAD DEL FANGO Y ROTIFEROS) Y ELEVADO BUENA. GRADO DE NITRIFICACION (TECAMEBAS) PRESENCIA DE FILAMENTOSAS PERJUDIQUE EL PROCESO POR FAVORECER LA PRESENCIA DE FLOTANTES EN DECANTADORES. BAJAS CARGAS MASICAS, PH BASICOS. 6

7 ANALISIS DE DATOS En este apartado se realizara un análisis estadístico de los valores obtenidos en cada uno de los apartados en los que está dividido el análisis de fangos activos: CARACTERIZACIÓN MACROSCÓPICA Y MICROCÓPICA DEL FANGO ACTIVO - MACROCOPÍA MACROSCOPIA 1 16, , ,5 8 16,5 9 25, MEDIA 19 VARIANZA 5,09 INTERV CONF CARACTERISTICAS MACROSCÓPICAS MACROSCOPIA MEDIA PARTICIP DESCARTADO 5 MEDIA CORREG 20 VAR CORREG 2,98 - MICROSCOPíA MICROSCOPIA MEDIA 48 VARIANZA 6, CARACTERISTICAS MICROSCÓPICAS MICROSCOPIA MEDIA 7

8 - ÍNDICE DE FANGO INDICE DE FANGO ( IF) 1 66, , ,5 8 50,5 9 84, MEDIA 66 VARIANZA 10, INDICE DE FANGO (IF) INDICE DE FANGO ( IF) MEDIA CATEGORIA BUENO BUENO BUENO REGULAR BUENO BUENO REGULAR BUENO BUENO % REPARTO CATEGORIAS IF buena regular - CATEGORIA BACTERIANA CATEGORIA BACTERIANA 1 3,5 3 3,5 4 3,5 5 3, MEDIA 3 VARIANZA 0,27 4,2 4,0 3,8 3,6 3,4 3,2 3,0 CATEGORIA BACTERIANA CATEGORIA BACTERIANA MEDIA 8

9 - DENSIDAD PROTOZOARIA DENSIDAD PROTOZOARIA ( EXP 6) 1 16,3 3 29, , , ,6 7 12,4 8 17,3 9 28,8 10 2,04 MEDIA 17,24 VARIANZA 8,36 INTERV CONF DENSIDAD PROTOZOARIA PARTICIP DESCARTADO 10 MEDIA CORREG 19 VAR CORREG 6,18 DENSIDAD PROTOZOARIA ( EXP 6) MEDIA - ÍNDICE DE SHANON INDICE DE SHANON 1 1,68 3 1,42 4 1,42 5 1,02 6 1,39 7 2,07 8 1,14 9 1,2 10 1,67 MEDIA 1,45 VARIANZA 0,32 2,5 2 1,5 1 0,5 0 INDICE DE SHANON INDICE DE SHANON MEDIA 9

10 - ÍNDICE DE MADONI INDICE DE MADONI MEDIA 9 VARIANZA 0,50 10,2 10 9,8 9,6 9,4 9,2 9 8,8 8,6 8,4 INDICE DE MADONI INDICE DE MADONI MEDIA CLASE % REPARTO CATEGORIAS ÍNDICE DE MADONI 1 10

11 - Nº ESPECIES PROTOZOARIAS Nº DE ESPECIES PROTOZOARIAS MEDIA 12 VARIANZA 3, Nº ESPECIES PROTOZOARIAS Nº DE ESPECIES PROTOZOARIAS MEDIA - GRUPO DOMINANTE GRUPO DOMINANTE 1 TECAMEBAS 3 TECAMEBAS 4 TECAMEBAS 5 TECAMEBAS 6 TECAMEBAS 7 CARNIVORO NAD 8 TECAMEBAS 9 TECAMEBAS 10 TECAMEBAS GRUPO DOMINANTE testacea cil carnivoro - IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS FILAMENTOSAS FILAMENTOS DOMINANTE SECUNDARIO OTROS 1 MICROTHRIX HALISCO NOCARDIA/021N/NOSTOCOIDA I Y II/ N HALISCO NOCARDIA/MICROTHRIX/NOSTOCOIDA I Y III/CIANOFICEA 4 HALISCO-MICOTRHIX NOCARDIA NOSTOCOIDA/021N 5 021N HALISCO 0041/NOSTOCOIDA II Y III/NOCARDIA/BEGGIATOA 6 MICOTHRIX 021N/1851 NOCARDIA / N/ NOSTOCOIDA I Y II TIPO 0041 NOCARDIA/ NOCARDIA 021N MICOTHRIX/1701/SPHAEROTILUS 11

12 FILAMENTO SECUNDARIO FILAMENTO DOMINANTE MICOTHRIX 021N OTROS HALISCO 021N/1851 TIPO 0041 NOCARDIA Nº TOTAL DE SP BAC DETERMINADAS MEDIA 5 VARIANZA 1, NºTOTAL DE SP BAC DETERMINADAS Nº TOTAL DE SP BAC DETERMINADAS MEDIA - LISTADO DE ESPECIES DE PROTOZOOS ESPECIES PROTOZOARIAS IDENTIFICADAS 1 3 SP AMEBAS/LITONOTUS/PODOPHRYA/TOKOPHRYA/ASPIDISCA/ACINERIA/EPISTYLIS/OPERCULARIA 3 PERANEMA, ARCELLA VULGARIS/ARCELLA GIBBOSA/ARCELLA HEMIESPHERICA/CENTROPYXIS/PYXIDICULA/LITONOTUS/PODOPHRYA/TOKOPHRYA/ ASPIDISCA/ACINERIA/ROTIFERO/NEMATODO/ OPERC MICRODISCUM/OPER MINIMA/V MICROSTOMA/2 SP OPERCULARIA 4 GRAN FLAGELADO/TESTACEA/LITONOTUS/PODOPHRYA/TOKOPHRYA/ CHILODONELLA/CARCHESIUM/OPERCULARIA/VORT CAMPANULA/VAGINICOLA/OPERC HEBEX 5 PERANEMA/OTRO GRAN FLAG/2 SP TESTACEAS/LITONOTUS/ACINERIA/TOKOPHRYA/ASPIDISCA/ACINETA/OPERCULARIA/ROTIFERO 6 ARCELLA/PERANEMA/LITONOTUS/TOKOPHRYA/ASPIDISCA/ACINERIA/EPISTYLIS/VORT SP/ROTIFERO/NEMATODO 7 PERANEMA/ARCELLA/LITONOTUS/ACINETA/PODOPHRYA/ASPIDISCA/ACINERIA/CARCHESIUM/VORT CAMPANULA/ROTIFERO 8 9 PERANEMA/ARCELLA/LITONOTUS/ACINETA/ASPIDISCA/ACINERIA/EPISTYLIS/ROTIFERO/NEMATODO 10 ARCELLA/LITONOTUS/TOKOPHRYA/ASPIDISCA/ACINERIA/OPERCULARIA 12

13 - RELACION DE PORCENTAJES DE PROTOZOOS PARTICIPANTE G FLAG AMEBAS T CAR NAD CARN SUCT B NADA B REPTANTE B SESIL METAZOO 1 5% 67% 2% 2% 6% 18% 3 3% 82% 1% 1% 3% 9% 1% 4 3% 75% 2% 1% 7% 12% 5 1% 85% 3% 1% 5% 4% 1% 6 10% 77% 1% 1% 6% 4% 1% 7 7% 66% 2% 10% 14% 1% 8 9 2% 79% 1% 1% 4% 12% 1% 10 59% 1% 1% 34% 5% 13

14 CONCLUSIONES * VALOR ESTIMADO DE LA MUESTRA ANALIZADA RESULTADOS MEDIOS ESTIMADOS DE LA MUESTRA ÍNDICE DE FANGO BUENO CATEFORIA BACTERIANA 3-4 IDENTIF DE FILAMENTOS 021N/MICOTHRIX/HALISCOMENOBACTER EFECTO DEL FILAMENTO DISGREGACION/PUENTES DENSIDAD PROTOZOARIA APROXIMADA 19 EXP 6 ÍNDICE DE MADONI 9 CLASE DE MADONI 1 Nº DE ESPECIES ENCONTRADAS 12 GRUPO DOMINANTE TECAMEBAS RENDIMIENTO SEGÚN MADONI OPTIMO - CONCLUSIONES GENERALES Estas conclusiones se han obtenido como compendio de las observaciones de los distintos participantes. Calidad previsible del agua tratada: buena/regular con tendencia a empeorar, cuando se acortan los tiempos de residencia en decantación secundaria. Tiempos de retención elevados y carga entrante débil Se trabaja con cargas másicas bajas Detección de posibles vertidos industriales y/o alteraciones de carga. Procesos de nitrificación aceptables. V30 estimada: 150 ml MLSS: en torno a 2200 mg/l MLVSS: Aproximadamente el 75 % de los MLSS. IVF: En torno a 70 Uno de los participantes apunta a la posible salobridad de la muestra debido a la tensión osmótica detectada. - INDICE DE FANGO En general, dado el carácter subjetivo de las características macroscópicas, se consideran aceptables los resultados obtenidos cuando se analiza el valor global dado para la MACROSCOPÍA. En este ejercicio es el parámetro que evalúa los flóculos en suspensión en el que aparece más dispersión, si bien la mayoría de los participantes (55 %) la valora como media. En el resto de los parámetros analizados existe una gran coincidencia en cuanto a su valoración: entre alta y media, variaciones que podrían achacarse a la comparación de esta muestra con las que habitualmente se observan. El tiempo transcurrido desde la toma de muestra hasta el momento del análisis modifica fundamentalmente la macroscopía de la muestra, sobre todo si excede a las 24 horas. Esta situación está muy clara en la calificación del participante 5, que queda descartado ( está practicamente al límite), debido a un análisis tardío ( 48 horas). El clarificado en general se observa turbio, debido a la presencia de numerosas bacterias libres, sin mejorar en el transcurso del tiempo Natas en superficie 14

15 En cuanto a la MICROSCOPÍA la coincidencia es grande (superior al 85 %) en todos los parámetros como excepto el tamaño y estructura, en los que existe algo más de dispersión detectándose valores extremos, aunque el 67 % de los participantes los evalúan ambos como medio. Es importante destacar que aunque la muestra era compleja, en cuanto a la diversidad de especies que presentaba se refiere, todos los participantes han encontrado una alta diversidad de protozoos (más de nueve especies) El análisis retrasado de la muestra no parece afectar sustancialmente a la microscopía. En general, la repetitividad del análisis macro y microscópico es buena, observándose una muy alta coincidencia en el Indice de Fango. DENSIDAD Y DIVERSIDAD DE PROTOZOOS. Es importante destacar que aunque la muestra era compleja, en cuanto a la diversidad de especies que presentaba se refiere, todos los participantes han encontrado una alta diversidad de protozoos (más de nueve especies) y la coincidencia en cuanto grupo dominante es muy grande. Ha sido compleja la identificación de protozoos sésiles, el número de especies identificadas es muy variable y está muy ligado a la experiencia en estudios de este tipo. Es importante anotar, que si bien para el índice de Madoni se contabilizan las distintas especies de flagelados y de metazoos como un único grupo, sin embargo la detección de diversas especies afecta al índice de Shanon y muestra la complejidad real del ecosistema. Es posible que debido a la diversa experiencia de los participantes no se determinen igual número de especies, pero es necesario, que si se detectan características morfológicas distintas, que puedan diferencia a dos especies se recojan en el parte como genero+sp. La densidad protozooaria ha sido bastante homogenea, salvo el participante 10 ( descartado), que seguramente se deba a un error de cálculo. Como guía de referencia nos parece acertado utilizar la siguiente documentación en las identificaciones de protozoos: - Curds, C.R. (1969).An illustrated key to the Brithish Freshwater ciliated protozoa commonly found in activated sludge. Water Pollution Technical. 12. London - Foissner, W., Berger, H y Kohmann, F ( 1991,1992, 1994). Taxonomische and okologische. Landesamtes fur Wasserwirstschaft. Munchen. - Madoni, P. (1988). I protozoi ciliati nel controllo di efficienza del fanghi attivi. Centro italiano Studi di Biologia Ambientale. Reggio Emilia. - Warren, A. ( 1986). A revision of the genus Vorticella (Ciliophora: Peritrichida). Bull. Br. Mus. Hist. (zool). 50. Respecto a los dos grupos más problemáticos para esta muestra a la hora de identificaciones son: Amebas testaceas: En este grupo nos hemos encontrado desde participantes que las han agrupado todas en una especie, hasta la determinación de 5 especies distintas, de las cuales 4 se pueden apreciar en el reportaje fotográfico. Las claves identificativas dentro de este grupo son: el tamaño, la forma de la teca y si presenta estructuras en esta. Centropyxis: Espinas características micras. Esta especie se ve muy afectada, incluso no se detecta con muestras de más de 24 horas. Pyxidícula: micras. Arcella vulgaris: micras Arcella Gibbosa: micras. Teca con abolladuras Arcella Hemiesphaerica: Muy parecida a vulgaris respecto al tamaño, micras, pero con la teca casi semiesférica. 15

16 Opercularia: La variación en este grupo ha sido notable, seguramente consecuencia de la dificultad que entraña la vista del opérculo, si la muestra ya se encuentra algo deteriorada, como es este caso. Más del 50 % de los participantes realizó la primera observación tras 24 horas. En ese caso siempre es recomendable tomar una alícuota de la muestra y oxigenarla previamente, con idea de mejorar el estado de los protozoos presentes. Nos hemos encontrado con varios participantes que no detectan su aparición, frente a otros que determinan hasta 3-4 especies. De las que parecen mas claras son: O. articulata: micras. Macronucleo en forma de salchicha corta. Peristoma sin reborde. Grandes colonias O mínima: 40 micras. Colonias de 2-4 individuos. Pedúnculo corto y estriado. O microdiscum: micras. Cuerpo en forma de barril. Pedúnculo estriado y no segmentado. Se detectan tambien dos especies más, que no se identifican claramente. De ellas una solitaria, O. Hebes, de hasta 100 micras, con un pedúnculo muy corto. Una curiosidad en esta muestra ha sido la determinación de un suctor, no muy común, probablemente del género Solenophrya, que presenta un cuerpo hexagonal, sin pedúnculo y con haces de fascículos en cada uno de los extremos del hexágono. La loriga es casi transparente y se puede observar el citoplasma interior en forma elipsoidal. Con idea de facilitar las identificaciones se aportan algunas tinciones de orgánulos ( colorantes vitales): -Verde de metilo acidulado al 1 %. -Azul de metileno al 5 % -nigrosina al 10 % -Ferroina 0.02N. En todas el procedimiento es similar. Mezclar una gota con el fango activo y observar in vivo. - INDICE DE MADONI Y SHANON Tanto el Índice de Madoni como el de Shanon presentan una repetitividad entre los participantes muy buena. Si bien las características de ambos Índices son de muy buena calidad, no se corresponden con la estabilidad total de la muestra, ya que si bien la diversidad y el reparto funcional de protozoos es muy bueno ( sectorizado hacia las testaceas), la concentración de filamentos provoca roturas floculares que empeoran las calidades del fango. - IDENTIFICACION DE ESPECIES BACTERIANAS. A pesar de la complejidad de la muestra, la mayoría de los participantes han identificado las mismas especies bacterianas ( de 5 a 7), el problema ha surgido a la hora de definir cual es la dominante. Las distintas especies encontradas generan dos tipos de problemas, disgregación ( Halicomenobacter) y puentes interfloculares (021N). 16

17 021N aparece con un tamaño un poco alterado, bastante más fino que lo normal, con tinción de Gram diferenciada, lo que ha podido llevar a problemas de identificación. Micothrix se diferenciaría claramente de esta por su reacción positiva a la tinción de Gram. Para esta muestra en concreto, parece que existiría una agrupación bacteriana de 021N/ Micothrix/Halisco, con abundancias parecidas, lo que ha llevado a confusión a la hora de definir dominantes y secundarios. Es curiosa la aparición de crecimiento epifítico sobre 0041 y el desarrollo de los esporangios en hongos, tras análisis posteriores a 24 horas. Acúmulos de bacterias nitrificantes y colonias de Zoogloea. Estas últimas de morfología extraña. Bacterias filamentosas asociadas a bajas cargas másicas, bajas concentraciones de oxígeno disuelto y posibilidad de vertidos industriales. Para concluir felicitar a todos los participantes y desearles unas buenas vacaciones. Esta muestra, muy interesante, hubiera necesitado una reunión posterior para aclarar algunas puntos dudosos de identificaciones tanto de protozoos como de bacterias, sin embargo esperamos que este informe os ayude a aclararlas. - INFORME DEL PARTICIPANTE 5 EJERCICIO INTERLABORATORIO JUNIO 2003 (Comentarios e impresiones) DEBIDO A QUE DESGRACIADAMENTE NO PUEDO ASISTIR A LAS REUNIONES QUE REALIZAIS DESPUES DEL INTERLABORATORIO (las cuales estoy seguro que deben ser muy interesantes), PIENSO QUE AL MENOS SERIA ACERTADO QUE OS PASARA UNOS COMENTARIOS QUE QUIZAS PUEDAN SER ÚTILES BIEN PARA APORTAR DISCREPANCIAS, OTRO PUNTO DE VISTA O UNIFICAR Y CORROBORAR LAS CONCLUSIONES QUE ALLI SE DIGAN. APROVECHO LA OCASIÓN PARA PLANTEAR LA POSIBILIDAD QUE ADEMÁS DE LA MUESTRA SE PUDIERA DISPONER DE OTROS DATOS DE LA PLANTA DEPURADORA QUE EXPONE A EXAMEN SU MUESTRA, ME REFIERO A DATOS COMO: CARGAS, EDADES, CARACTERISTICAS DEL AGUA RESIDUAL, TIPO DE PLANTA,... PROBLEMAS EN GENERAL O TODO AQUELLO QUE CONSIDERE OPORTUNO EL RESPONSABLE DE LA MUESTRA. COMPRENDO PERFECTAMENTE QUE ESTO RESULTE BASTANTE COMPLICADO POR NO DECIR IMPOSIBLE PARA ALGUNOS PARTICIPANTES...DEBIDO PRACTICAMENTE A LA CONFIDENCIALIDAD?? DE LOS QUE MANDAN EN ALGUNAS EMPRESAS EXPLOTADORAS (EN FIN TODOS SABEMOS DE SOBRA COMO SE EXPLOTAN LAS E.D.A.R... CREO QUE (ADEMAS DE LA TAXONOMIA Y EL PERFECCIONAMIENTO DE LOS INDICES DE CALIDAD) PODRIAN ENRIQUECER BASTANTE LAS CONCLUSIONES DE LOS INTERLABORATORIOS DE CARA A NO LIMITARNOS EXCLUSIVAMENTE A EVALUAR CON SITUACIONES YA CONOCIDAS BAJO EL CAMPO EMPIRICO. EN FIN ES TAN SOLO UNA OPINIÓN QUIZAS DEMASIADO AMBICIOSA. UN SALUDO Y FELICITAROS UNA VEZ MÁS POR EL GRAN TRABAJO QUE ESTAIS REALIZANDO DESDE GBS. La muestra, debido a un problema con la empresa de mensajería, se recibe el dia 18 de Junio tras 48 horas después de su toma de muestra y a temperatura ambiente. Por tanto es muy posible que la muestra haya sufrido alguna alteración tanto a nivel estructural como a nivel de especies. La muestra no presenta olor desagradable y su color es marrón oscuro. La decantación (V 30) es normal, con formación de flóculo y canales ascendentes. Pasado el tiempo del ensayo obtengo una 17

18 V 30 equivalente a 170 ml y el clarificado presenta una alta turbiedad debido a la gran cantidad de pequeños flóculos que no acaban de decantar. Otros datos de interés: S.S.L.M : 2060 mg/l S.S.V.L.V: 1740 mg/l % S.S.V.L.M : 72 % V 30: 170 ml I.V.F : 82 ml/g En el examen microscópico del floculo me encuentro con una porción elevada de flóculos de pequeño tamaño (una media de 100 um de diámetro), también aprecio flóculos de tamaño superior a 150 um en estado de disgregación tal como se puede apreciar en las Fotos 1 y 2. Es posible que pudiera haber aumentado la porción de pequeños flóculos en las 48 horas antes del examen, no obstante opto por establecer que el tamaño es pequeño ya que la porción de estos es mayor y es con lo que realmente me encuentro (foto 3). Otro aspecto que me llama mucho la atención es la elevada cantidad de aglomeraciones circulares de bacterias, ya que en esta forma nunca antes las había observado (la foto 5 lo refleja muy bien). Si observamos bajo más aumentos estas bacterias da la impresión de que son más bacilares que Zooglea spp. (foto 6). En el espacio interflocular aparecen gran cantidad de bacterias de vida libre. ANALISIS DE PROTOZOOS Y METAZOOS Una vez recibida la muestra y aislada una alicuota en refrigeración para el análisis de bacterias filamentosas y características macroscópicas del flóculo, procedo a la oxigenación de la misma para intentar recuperar en lo posible unas condiciones más normales, minimizar el estrés, y así facilitar la clasificación de especies en lo posible. En el análisis cualitativo de la muestra observo que en general los protozoos existentes no presentan signos importantes de alteración, tan solo la mitad aproximadamente de Opercularia spp. se encuentran sin actividad. Lo que más me sorprende es la gran cantidad de Rhizopodos tecameboides (protozoo claramente dominante) que se observan, nunca había visto tantos en una muestra. Incluso podrían haber hasta tres especies distintas; una de ellas pudiera ser del género Arcella spp. (foto 7) y la otra es muy similar a una que clasifica (Atlas de microorganismos de agua dulce. Pag. 225) como Pyxidicula operculata, las mediciones que he realizado del tamaño están entre17 y 20 um, dimensiones que coinciden con la antes mencionada (fotos 8,9 y 10). De manera frecuente aparece Opercularia spp., decantandome por O. Articulata (fotos 11 y 12). El análisis dimensional realizado es el siguiente: Pedúnculo grueso y liso: 13 um Longitud del zooide: um. Otro aspecto a destacar es la posición horizontal del macronucleo, rodeando la citofaringe en forma de S tal como se muestra en la imagen 13. Observo con frecuencia colonias con multitud de individuos (foto 14), aunque también es cierto que aparecen individuos solitarios que por el estado importante de deformación no puedo intentar clasificarlos; no descarto pues la posibilidad que hubiera otra especie de Opercularia, igual que creo que es muy probable que en el momento de la toma de muestra hubiera más que la que he podido observar (ya que con el paso de los dias tras la recepción he observado un detrimento importante de esta población). Otras especies que aparecen de forma frecuente son : Litonotus lamella, Tokophrya spp. (posiblemente T. Infusionum foto 15 ), Aspidisca cicada (foto 16), Trachelophylum pusillum / acineria uncinata (foto17), Peranema spp. (posiblemente P. Trichophorum foto 18 ), Entosiphon spp. (foto 19). De forma mas ocasional me encuentro con: amebas desnudas (foto 20), Rotiferos (foto 21) y Acineta spp. (quizás A. Cuspidata según R. C Curds foto 22). Por último destacar la presencia común de pequeños euglenófitos (foto 23). Conclusiones: En general aparecen especies propias de situaciones con un elevado tiempo de retención del fango y carga débil. Desde mi punto de vista, creo que esta muestra daría mucho pie para que habláramos del papel de las Tecas en la bioindicación y de su inclusión? en el índice de madoni como especies en procesos de optima calidad. En este ejercicio he obtenido un índice de Madoni de valor 9 y el cual establece que la actividad biológica es excelente, sin embargo, yo me decantaría por un 18

19 efluente regular-malo ( ojo si la muestra no ha sufrido alteración alguna). Se sabe por experiencia que las tecas tienen un fuerte carácter estacional y que necesitan largos periodos de retención así como buena oxigenación, estados que comparten las bacterias nitrificantes y las cuales podrían ser las aglomeraciones que tanto abundan en la muestra. En mi escasa experiencia en explotación he observado las Tecas como especie dominante en el fango y el efluente era de calidad mediocre y en ocasione malo. Si tuviera que dar una explicación a tan complicado asunto probablemente no lo haría por el poco tiempo que llevo en esto, pero como se trata de participar diría que las he observado en situaciones de buena calidad, pero cuando las condiciones han variado y el efluente a pasado a ser de mala calidad han continuado en dominancia (lo cual quizás me haría pensar que fueran capaces de resistir situaciones adversas). Me gustaría si fuera posible que en la reunión de este interlaboratorio se hablara sobre las tecas y que los participantes con más experiencia en este campo expusieran sus distintos puntos de vista. Otra especie que creo que merece especial atención y que seguramente abundara más en el momento de su toma, es Opercularia spp., la cual podría estar indicando algún aporte de residuos industriales (sustancias tóxicas) o choques de carga. Los pequeños flagelados y abundancia de bacterias libres refuerzan la teoría de una posible alteración en el proceso. IDENTIFICACION DE BACTERIAS FILAMENTOSAS En el análisis de bacterias filamentosas el primer problema con el que me encuentro es establecer la categoría numérica, ya que hay flóculos con 1-5 filamentos / floculo pero también se aprecian flóculos de mayor tamaño con una densidad de 5-20 por flóculo; es decir no hay una clara porción dominante con lo que al final opto por indicar una media entre los dos (3-4). La identificación de la bacteria dominante me ha resultado bastante complicada, al final he optado clasificarla como tipo 021 n (grupo bastante complicado para mi). Las características que me han hecho decantarme por este filamento son: - Diámetro del tricoma: aprox. 1 1,5 um - Forma del filamento: Curvados y enrollados formando una especie de lazos. Ver foto 24, 25 y Forma celular: Rectangular (foto 27). - Respuesta a tinciones: Gram (foto 28. Partes de las células quedan sin teñir dejando espacios blancos). Gránulos neisser + (foto 29). Tincion de vainas débil? (foto 30). Como filamento secundario establezco a Haliscomenobacter Hydrossis, el cual presenta un crecimiento epifito más bien escaso (foto 31 y 32). De forma bastante frecuente hace su aparición la tipo 0041, con escaso crecimiento epifito, en ocasiones libre en el espacio interflocular y ejerciendo algunas veces un efecto de disgregación flocular junto con la tipo 021 n. En las fotos 33 a 37 se muestra dicha filamentosa y en las fotografías 39, 40 y 41 la tinción de vainas. Ocasionalmente hace su aparición (posiblemente) Nostocoida limicola II apareciendo los filamentos curvados en forma irregular (fotos 42 y 43) De forma ocasional aparecen Nocardia spp. (foto 44), Nostocoida limicola III (foto 48), Beggiatoa spp. (con movimiento y gránulos de S in situ. Foto 45), algas filamentosas (foto 46) y (posiblemente) hongos (foto 47). Conclusiones: En general las especies de filamentosas en presencia significativa encontradas son típicas de sistemas de baja carga másica y altas edades de fango. Las condiciones más comunes entre ellas son el aporte de aguas industriales y /o deficiencia de nutrientes. Me ha llamado la atención el escaso y en bastantes ocasiones nulo crecimiento epifito de la tipo 0041 ya que no es una característica común en las visiones microscópicas de mi planta. Según el manual de EMASESA (y que tanto admiro) podría ser una consecuencia de aportes industriales. Como conclusión final decir bajo mi punto de vista que la calidad previsible del agua tratada la calificaría de mala a regular ( con gran cantidad de pequeños flóculos, disgregación en los de 19

20 mayor tamaño y con un análisis de especies encontradas (teniendo en cuenta los apuntes realizados sobre las Tecas) que podrían indicar desde aportes industriales, deficiencia de nutrientes hasta choques de carga (bien variaciones importantes de caudal, desigual reparto del licor mezcla en balsas de aireación...). Todo esto teniendo en cuenta que dicha evaluación puede venir sesgada por el tiempo tardado en recibir la muestra. ANEXO FOTOGRAFICO 1.- ESTADO DE FLOCULACION MACROSCOPIA Y MICROSCOPIA. Estado de floculación: 40 y 20X respectivamente. In vivo. Estructura flocular tras 48 horas: 10 X. In vivo 20

21 2.- BACTERIAS DISPERSAS Y FILAMENTOSAS 021 N: In vivo: 10X 021 N: In vivo: 40X 21

22 021N. In vivo. 100X 021N: Tinción Gram. 100X 22

23 021 N: Tinción Neisser: 100X 0041 : Tinción de Vainas. 100X; In vivo. 100X Haliscomenobacter hydrossis: In vivo. 40X 23

24 Filamento In vivo. 40 X Filamento Tincion de vainas. 100 X Acúmulos de bacterias: Probablemente Zoogloea. In vivo. 40X y 100 X respectivamente 24

25 Acúmulos de bacterias nitrificantes. Gram. 100X; In vivo. 20X Nocardia. 100X. In vivo Microtrhix. Tinción Gram. 100X 25

26 Esporangio de hongo. In vivo. 20 y 40X respectivamente. Desarrollo hongo tras 48 horas. 40X. In vivo Nostocoida limícola III. In vivo. 40X; Tinción de Neisser. 100X 26

27 Beggiatoa. In vivo. 40X. Tras 48 horas 27

28 3.- PROTOZOOS Y METAZOOS. Peranema sp ( P trichophorum?). In vivo. 40X Entosiphon sp. In vivo. 40X Ameba desnuda. In vivo. 40x 28

29 Aspidisca cicada. In vivo 40X Y Pyxidicula operculata. Acineria uncinata. In vivo. 40X Arcella vulgaris. In vivo. 20x y 40X. 29

30 Arcella junto con Pyxidicula. In vivo. 20X Arcella gibbosa. In vivo. 20X Centropyxis sp. In vivo. 40X 30

31 Pyxidicula sp. In vivo. 20X y 40X respectivamente. 31

32 Tokophrya sp. In vivo. 20X y 40X (T infusionum) Suctor no identificado. Probablemente género Solenophrya?. In vivo. 40X Opercularia articulata. In vivo.40x Opercularia articulata. In vivo. 10X 32

33 Opercularia articulata. In vivo. 40X Opercularia sp. In vivo. 40X Opercularia minima. In vivo. 40x 33

34 Opercularia sp y Opercularia microdiscum. In vivo. 40X Opercularia solitaria ( O. Hebes?). In vivo. 20X Rotífero. Rotaria sp. In vivo. 40 X 34

35 Ciliado nadador no identificado. In vivo. 20X 35

36 4.- VARIOS Grano de polen. 20 y 40X respectivamente. In vivo. 36