Para uso diagnóstico In Vitro. Revisado por: Fecha Revisado por: Fecha
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- Ana Isabel Suárez Hidalgo
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1 Sistemas SYNCHRON LX Información química Copyright 2003 Beckman Coulter, Inc. Fosfatasa alcalina Estuche referencia (200 anà lisis/cartucho) Estuche referencia (400 anà lisis/cartucho) Para uso diagnóstico In Vitro REVISION ANUAL Revisado por: Fecha Revisado por: Fecha PRINCIPIO USO INDICADO El Reactivo, junto con el Calibrador Conjunto Verificador de Enzimas SYNCHRON y el Sistema Sistemas SYNCHRON LX, se usa para la determinación cuantitativa de la actividad de Fosfatasa alcalina () en suero o plasma humanos. El uso de este producto con el Calibrador Conjunto Verificador de Enzimas SYNCHRON producirá valores de ensayo compatibles con los métodos recomendados por la Federación Internacional de Químicas Clínicas (IFCC) y la Sociedad Alemana de Químicas Clínicas (DGKCh). IMPORTANCIA CLINICA La medición de fosfatasa alcalina se usa en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades hepáticas, ó seas, paratiroideas e intestinales. METODOLOGIA El Reactivo se usa para medir la actividad de fosfatasa alcalina mediante un método cinético que usa un tampón de 2-amino-2-metil-1-propanol (AMP).1,2,3,4,5,6 En la reacción, la fosfatasa alcalina cataliza la hidrólisis del sustrato éster de fosfatasa orgánico, incoloro, el p- nitrofenilfosfato, que se transforma en el producto de color amarillo p-nitrofenol, y fosfato. Esta reacción ocurre a un ph alcalino de El Sistemas SYNCHRON LX dispensa en forma automática los volúmenes apropiados de muestra y reactivo en una cubeta. La proporción es una parte de muestra a 50 partes de reactivo. El sistema controla el cambio de absorbancia a 410 nanómetros. Este cambio de absorbancia es directamente proporcional a la actividad de en la muestra y es usado por el sistema para calcular y expresar la actividad de. September 2003 Pgina 1 de 13
2 ESQUEMA DE LA REACCION QUIMICA MUESTRA TIPO DE MUESTRA Las muestras de líquidos corporales se deben obtener siguiendo los mismos procedimientos que para cualquier otro análisis de laboratorio. 7 Son preferibles las muestras de suero o plasma recién obtenidas. Los anticoagulantes aceptables se listan en la sección NOTAS DE LOS PROCEDIMIENTOS de esta hoja de información química. No se recomienda el uso de muestras de sangre entera. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DE LA MUESTRA 1. Los tubos de sangre deben guardarse tapados en todo momento y en posición vertical. Se recomienda separar el suero físicamente de las células dentro de las dos horas de recogida la muestra El suero o el plasma separados no deben permanecer a temperatura ambiente más de 8 horas. Si los análisis no se completan dentro de 8 horas, las muestras se deben almacenar entre +2 C y +8 C. Si los análisis no se completan en 48 horas, o las muestras separadas se deben almacenar más de 48 horas, se deben congelar entre -15 C y -20 C. Las muestras deben descongelarse sólo una vez. Puede haber deterioro del compuesto en muestras congeladas y descongeladas repetidamente. 8 REQUISITOS ADICIONALES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DE LAS MUESTRAS ESPECí FICOS AL LABORATORIO: VOLUMEN DE MUESTRA El volumen óptimo, para una copa de 0.5 ml, es de 0.3 ml de muestra. CRITERIOS PARA EL RECHAZO DE MUESTRAS En la sección NOTAS SOBRE LOS PROCEDIMIENTOS de esta hoja de información química o en la sección de REQUISITOS PARA LA MUESTRA de este manual hallará información sobre las muestras que deben ser rechazadas. CRITERIOS DEFINIDOS POR EL LABORATORIO PARA EL RECHAZO DE MUESTRAS: PREPARACION DEL PACIENTE INSTRUCCIONES ESPECIALES PARA LA PREPARACIóN DE PACIENTES ESPECíFICAS AL LABORATORIO: September 2003 Pgina 2 de 13
3 MANIPULACION DE LA MUESTRA INSTRUCCIONES ESPECIALES PARA LA MANIPULACIóN DE MUESTRAS, ESPECíFICAS DEL LABORATORIO: REACTIVOS CONTENIDO Cada estuche contenido lo siguiente: Dos cartuchos de Reactivo (2 x 200 anàlisis) o (2 x 400 anàlisis) VOLUMENES POR ENSAYO Volumen de muestra 5 µl Volumen de muestra ORDAC 3 µl Volumen total del reactivo 250 µl Volúmenes del cartucho A 228 µl B 22 µl C INGREDIENTES DEL REACTIVO COMPONENTES REACTIVO p-nitrofenilfosfato 2-amino-2-metil-1-propanol 15 mmol/l 350 mmol/l Además, otras substancias no reactivas necesarias para el funcionamiento óptimo del sistema. MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS CON EL ESTUCHE DE REACTIVOS Conjunto Verificador de Enzimas SYNCHRON Al menos dos niveles de material de control Solución salina PREPARACION DEL REACTIVO No requiere preparación. RENDIMIENTO ACEPTABLE DEL REACTIVO La aceptabilidad de un reactivo está determinada asegurando que los resultados de control de calidad cumplen con los criterios de aceptación de su laboratorio, según se define en la sección PROCEDIMIENTOS DE CONTROL de este manual. September 2003 Pgina 3 de 13
4 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DEL REACTIVO El Reactivo sin abrir, almacenado entre +2 C y +8 C, permanece estable hasta la fecha indicada en la etiqueta del cartucho. Una vez abierto y almacenado entre +2 C y +8 C, el reactivo permanece estable 30 días, o hasta la fecha de caducidad, si ésta es anterior. NO CONGELAR. LUGAR DE ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO: CALIBRACION CALIBRADOR NECESARIO Conjunto Verificador de Enzimas SYNCHRON PREPARACION DEL CALIBRADOR No requiere preparación. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DEL CALIBRADOR El Validador de Enzimas SYNCHRON sin abrir se debe almacenar entre -15 C y -20 C hasta la fecha de caducidad impresa en la botella del calibrador. Una vez abiertos, cerrados nuevamente y almacenados entre -15 C y - 20 C, los calibradores permanecen estables 60 días, o hasta la fecha de caducidad, si é sta es anterior. LUGAR DE ALMACENAMIENTO DE LOS CALIBRADORES: INFORMACION SOBRE LA CALIBRACION 1. El sistema debe tener una calibración válida en la memoria antes de poder procesar controles o muestras de pacientes. 2. En condiciones de funcionamiento típicas, el cartucho de Reactivo debe calibrarse cada 10 días, y también cuando se cambien ciertas piezas o realicen procedimientos de mantenimiento según se describe en el manual de Instrucciones Operativas SYNCHRON LX20. Este ensayo tiene disponible calibración dentro del mismo lote. Consulte el manual de Instrucciones Operativas SYNCHRON LX20 para información sobre esta característica. 3. Para instrucciones detalladas sobre la calibración, consulte el Manual de Operación SYNCHRON LX El sistema ejecutará en forma automática pruebas de verificación de la calibración y producirá datos al fin de la calibración. En el caso de una calibración fallida, los datos se imprimirán con códigos de error y el sistema avisará al operador del fallo en la calibración. Para información sobre los códigos de error, consulte el Manual de Diagnósticos y Localización de Fallos SYNCHRON LX20. September 2003 Pgina 4 de 13
5 TRAZABILIDAD Para información sobre la trazabilidad consulte las instrucciones de uso del calibrador. CONTROL DE CALIDAD Se debe analizar diariamente un mínimo de dos niveles de material de control. Además, estos controles deben procesarse con cada cartucho de reactivo nuevo y después de procedimientos específicos de mantenimiento o localización de fallos, según se describe en el Manual de operación del SYNCHRON LX20. El uso más frecuente de controles se deja al juicio del usuario, basándose en la carga y el flujo de trabajo. Los siguientes controles deben ser preparados y utilizados de acuerdo con las instrucciones de los prospectos del paquete. Se pueden encontrar ejemplares de estos prospectos en la sección de PROCEDIMIENTOS DE CONTROL de este manual. Los resultados de control de calidad que presenten discrepancias deben ser evaluados y tratados tal como se describe en la sección PROCEDIMIENTOS DE CONTROL de este manual. TABLA 1 MATERIAL DE CONTROL DE CALIDAD NOMBRE DEL CONTROL TIPO DE MUESTRA ALMACENAMIENTO PROTOCOLO ANALITICO 1. Si es necesario, cargue el reactivo en el sistema según se indica en el Manual de Operación del SYNCHRON LX Después de cargar el reactivo, es necesario calibrar. Consulte el Manual de Operación SYNCHRON LX20 para detalles sobre el procedimiento de calibración. 3. Programe las muestras y los controles para análisis como se describe en el Manual de Operación SYNCHRON LX Después de cargar las muestras y los controles en el sistema, siga los protocolos de operación del sistema según se indica en la Guía de Referencia Rápida, o consulte el Manual de Operación del SYNCHRON LX20. September 2003 Pgina 5 de 13
6 CALCULOS El Sistemas SYNCHRON LX hará todos los cálculos internamente para producir el resultado final presentado. El sistema calculará el resultado final para diluciones de muestras realizadas por el operador cuando se introduce un factor de dilución en el sistema durante la programación de muestras. INFORME DE RESULTADOS INTERVALOS DE REFERENCIA Cada laboratorio debe establecer sus propios intervalos de referencia en base a la población de pacientes. Los intervalos de referencia listados a continuación provienen de la literatura.9,10 TABLA 2 RANGOS DE REFERENCIA INTERVALOS TIPO DE MUESTRA UNIDADES CONVENCIONALES Literatura (IFCC) Literatura (DGKCh) Suero o plasma (hombres) Suero o plasma (mujeres) Suero o plasma (hombres) Suero o plasma (mujeres) INTERVALOS TIPO DE MUESTRA UNIDADES CONVENCIONALES Laboratorio UNIDADES S. I UI/L 0,90 2,18 µkat/l UI/L 0,71 1,67 µkat/l UI/L 0,75 2,64 µkat/l UI/L 0,63 2,47 µkat/l UNIDADES S. I. Consulte la Bibliografía (11,12,13) para las instrucciones sobre cómo establecer los intervalos de referencia específicos para su laboratorio. Los procedimientos para presentar los resultados al personal correspondiente se encuentran en la secció n INFORME DE RESULTADOS de este manual. INFORMACIóN ADICIONAL SOBRE EL INFORME DE RESULTADOS, ESPECíFICA AL LABORATORIO: NOTAS SOBRE EL PROCEDIMIENTO RESULTADOS DE ANALISIS CON ANTICOAGULANTES Basándose en un estudio de 20 voluntarios sanos, se ha determinado que cuando se utilizan muestras de plasma, los siguientes anticoagulantes son compatibles con este método: September 2003 Pgina 6 de 13
7 TABLA 3 ANTICOAGULANTES COMPATIBLES ANTICOAGULANTE NIVEL ANALIZADO DE INTERFERENCIA IN VITRO Heparina de amoní aco 29 Unidades/mL NIS b Heparina de litio 29 Unidades/mL NIS Heparina de sodio 29 Unidades/mL NIS LIMITACIONES No se ha identificado ninguna limitación. INTERFERENCIAS DESVIACION PROMEDIO PLASMA- SUERO (UI/L) a 1. Las siguientes sustancias fueron analizadas para determinar su interferencia en esta metodología: TABLA 4 INTERFERENCIASLOS DATOS EXPUESTOS SE RECOLECTARON UTILIZANDO SISTEMAS SYNCHRON CX. SE DETERMINó LA EQUIVALENCIA ENTRE LOS SISTEMAS SYNCHRON CX Y LOS SISTEMAS SYNCHRON LX MEDIANTE UN ANáLISIS POR REGRESIóN DEMING SUSTANCIA FUENTE NIVEL ANALIZADO Bilirrubina conjugada) Hemoglobina (no Bovina 30 mg/dl NIS e Hemolizado de eritrocitos EFECTO OBSERVADO d 300 mg/dl 34 UI/L 400 mg/dl 170 UI/L 500 mg/dl 901 UI/L Lipemia Intralipid f 500 mg/dl NIS 2. Los inhibidores de la actividad de la fosfatasa alcalina incluyen: oxalatos, Hg ++, exceso de fosfato inorgánico, ácidos biliares, algunos aminoácidos (por ejemplo, fenilalanina) y urea. 3. Consulte la Bibliografía (14,15,16) para obtener información sobre otras interferencias causadas por drogas, enfermedades y variables preanalíticas. CARACTERISTICAS OPERATIVAS RANGO DE MEDIDA El método Sistemas SYNCHRON LX para la determinación de Fosfatasa alcalina proporciona el siguiente rango analítico: September 2003 Pgina 7 de 13
8 TABLA 5 RANGO ANALíTICO TIPO DE MUESTRA UNIDADES CONVENCIONALES UNIDADES S. I. Suero o plasma UI/L 0,1 16,7 µkat/l Suero o plasma (ORDAC) g UI/L 13,3 27,5 µkat/l Las muestras con actividades que excedan el límite superior del rango analítico se deben volver a procesar con ORDAC activado o diluirse con solución salina y volverse a analizar. RANGO ANALÍTICO (DETERMINADO EN LA SEDE): TABLA 6 RANGOS ANALíTICOS TIPO DE MUESTRA UNIDADES CONVENCIONALES UNIDADES S. I. SENSIBILIDAD La sensibilidad se define como la menor concentración medible que se puede distinguir de cero con un grado de confianza del 95%. La sensibilidad para la determinación de es de 5 UI/L (0,08 µkat/l). EQUIVALENCIA La equivalencia se determinó mediante análisis de regresión de Deming de las muestras de pacientes con métodos clínicos aceptados. Suero o plasma (en el rango de 15 a 872 UI/L): Y (Sistemas SYNCHRON LX) = 0,929X - 1,19 N = 72 MEDIA (Sistemas SYNCHRON LX) = 135,4 MEDIA (Método IFCC de SYNCHRON CX7 DELTA) = 147,1 Coeficiente de correlación (r) = 0,9980 Suero o plasma (en el rango de 113 a 804 UI/L): Y (Sistemas SYNCHRON LX) = 1,022X - 14,02 N = 67 MEDIA (Sistemas SYNCHRON LX) = 374,1 MEDIA (Método DGKCh de SYNCHRON CX4 ) = 379,8 Coeficiente de correlación (r) = 0,9981 Suero o plasma (en el rango de 10 a 995 UI/L): Y (Sistemas SYNCHRON LX, método IFCC) = 1,019X - 1,95 September 2003 Pgina 8 de 13
9 Suero o plasma (en el rango de 15 a 872 UI/L): N = 79 MEDIA (Sistemas SYNCHRON LX, método IFCC) = 186,6 MEDIA (SYNCHRON LX, método no calibrado) = 185,0 Coeficiente de correlación (r) = 0,9998 Suero o plasma (en el rango de 73 a 572 UI/L): Y (Sistemas SYNCHRON LX, método DGKCh) = 1,426X + 3,34 N = 67 MEDIA (Sistemas SYNCHRON LX, método DGKCh) = 374,1 MEDIA (SYNCHRON LX, método no calibrado) = 260,0 Coeficiente de correlación (r) = 0,9999 Consulte la Bibliografía (17) para las instrucciones sobre cómo realizar la prueba de equivalencia. PRECISION Un Sistemas SYNCHRON LX en buen estado de funcionamiento debe exhibir valores de precisión inferiores o iguales a los siguientes: TABLA 7 VALORES DE PRECISIóN TIPO DE PRECISIÓN Intraserie Total TIPO DE MUESTRA 1 D.S. VALOR DE TRANSICION h UI/L µkat/l UI/L µkat/l Suero/Plasma 3,0 0,05 85,7 1,43 3,5 Suero/Plasma (ORDAC) % C.V. ND i ND ND ND 10,0 Suero/Plasma 4,5 0,08 85,7 1,43 5,3 Suero/Plasma (ORDAC) ND ND ND ND 15,0 Los datos del desempeño comparativo para el Sistema SYNCHRON LX evaluados con la directiva EP5- T2 aprobada por el NCCLS se presentan la tabla a continuación.18 Para propósitos de comparación, cada laboratorio debe determinar las características de desempeño de su instrumento. TABLA 8 MéTODO DE CáLCULO DE PRECISIóN EP5-T2 NCCLS TIPO DE IMPRECISION Intraserie TIPO DE MUESTRA No. de sistemas No. de datos j Valor medio del aná lisis (UI/L) Cálculo de datos conforme a EP5-T2 D.S. %CV Suero Control ,6 1,77 4,49 Suero Control ,9 2,68 1,81 Suero Control ,1 1,92 0,75 September 2003 Pgina 9 de 13
10 TIPO DE IMPRECISION Total TIPO DE MUESTRA No. de sistemas No. de datos j Valor medio del aná lisis (UI/L) Cálculo de datos conforme a EP5-T2 D.S. %CV Suero Control ,6 2,24 5,66 Suero Control ,9 3,10 2,10 Suero Control ,1 2,85 1,10 AVISO Estos grados de precisión y equivalencia se obtuvieron en procedimientos de análisis tí picos en el Sistema SYNCHRON LX y no intentan representar las especificaciones de rendimiento para este reactivo. INFORMACION ADICIONAL Para obtener información más detallada sobre el manejo de los Sistemas SYNCHRON LX, consulte el manual del SYNCHRON LX correspondiente a su sistema. September 2003 Pgina 10 de 13
11 REFERENCIAS 1. Kay, H. D., J. Biol. Chem., 89:235 (1930). 2. King, E. J., Armstrong, A. R., Can. Med. Assoc. J., 31:376 (1934). 3. Kind, P. R. N., King, E. J., J. Clin. Path., 7:322 (1947). 4. Bessey, O. A., Lowry, O. H., Brock, M. J., J. Biol. Chem, 164:321 (1947). 5. Babson, A. L., et al., Clin. Chem., 12:482 (1966). 6. Bowers, G. N., McComb, R. B., Clin. Chem., 12:70 (1966). 7. Tietz, N. W., "Specimen Collection and Processing; Sources of Biological Variation", Textbook of Clinical Chemistry, 2nd Edition, W. B. Saunders, Philadelphia, PA (1994). 8. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens, Approved Guideline, NCCLS publication H18-A, Villanova, PA (1990). 9. Tietz, N. W., Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd Edition, W. B. Saunders, Philadelphia, PA (1995). 10. "Working Group on Enzymes", Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 30: (1992). 11. National Committee for Clinical Laboratory Standards, How to Define, Determine, and Utilize Reference Intervals in the Clinical Laboratory, Approved Guideline, NCCLS publication C28-A, Villanova, PA (1995). 12. Tietz, N. W., ed., Fundamentals of Clinical Chemistry, 3rd Edition, W. B. Saunders, Philadelphia, PA (1987). 13. Henry, J. B., Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 18th Edition, W. B. Saunders Company, Philadelphia, PA (1991). 14. Young, D. S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 4th Edition, AACC Press, Washington, D. C. (1995). 15. Friedman, R. B., Young, D. S., Effects of Disease on Clinical Laboratory Tests, 3rd Edition, AACC Press, Washington, D.C. (1997). 16. Young, D. S., Effects of Preanalytical Variables on Clinical Laboratory Tests, 2nd Edition, AACC Press, Washington, D. C. (1997). 17. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples, Approved Guideline, NCCLS publication EP9-A, Villanova, PA (1995). 18. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Precision Performance of Clinical Chemistry Devices, Tentative Guideline, 2nd Edition, NCCLS publication EP5-T2, Villanova, PA (1992). Beckman Coulter Ireland Inc., Mervue Business Park, Mervue, Galway, Ireland ( ) September 2003 Pgina 11 de 13
12 Beckman Coulter, Inc., 4300 N. Harbor Blvd., Fullerton, CA September 2003 Pgina 12 de 13
13 ENDNOTES a Los datos expuestos se recolectaron utilizando Sistemas SYNCHRON CX. Se determin la equivalencia entre los Sistemas SYNCHRON CX y los Sistemas SYNCHRON LX mediante un anlisis por regresin Deming b NIS = No hay interferencia significativa (dentro de 6,0 UI/L o 7%). d Los signos ms (+) o menos (-) en esta columna indican interferencia positiva o negativa. e NIS = No hay interferencia significativa (dentro de 6,0 UI/L o 7%). f Intralipid es una marca registrada de KabiVitrum Inc., Clayton, NC g Deteccin y correccin de valores por encima del rango analtico. Consulte el Manual de operacin del SYNCHRON LX20 para detalles adicionals sobre esta funcin. h Cuando la media de la prueba de precisin es inferior o igual que el valor de transicin, compare la DS del ensayo a la DS gua indicada anteriormente para determinar la aceptabilidad de la prueba de precisin. Cuando la media de la prueba de precisin es mayor que el valor de transicin, compare el % de CV del ensayo al % de CV gua indicado anteriormente para determinar la aceptabilidad de la prueba. Valor de transicin = (DS gua/cv gua) x 100. i ND = No disponible. j El clculo de valores se basa en datos de 1 sistema, funcionando 20 das, 2 veces al da, con 2 observaciones en cada procesamiento, en un instrumento manejado y mantenido de acuerdo con las instrucciones del fabricante. September 2003 Pgina 13 de 13
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