Escherichia coli Productora de Toxina Shiga Escenario en chile

Transcripción

1 Escherichia coli Productora de Toxina Shiga Escenario en chile Dr. Juan Carlos Hormazábal O. Subdepto. Enfermedades Infecciosas Instituto de salud Pública de Chile

2 STEC en Chile Aspectos Microbiológicos Aspectos Epidemiológicos El Ambiente Los Alimentos y el Marco regulatorio Vigilancia y Detección STEC O104:H4

3 Aspectos Microbiológicos Escherchia coli Es un grupo heterogéneo, cuyos miembros son generalmente no patógenos y son parte de la flora normal del tracto intestinal de hombre y animales Ciertas poblaciones de esta especie han adquirido genes que les permiten causar enfermedad intestinal o extraintestinal E. coli que causan enfermedad se han agrupado en patotipos, basados en sus factores de virulencia y los mecanismos por los cuales causan enfermedad Uno de estos patototipos es el grupo STEC E coli que produce al menos un tipo de Toxina Shiga (Stx)

4 Aspectos Microbiológicos E. coli Diarreogénicos, Determinantes en su Diferenciación Factores de Virulencia Específicos Características Clínicas Asociadas a la Infección Características Epidemiológicas Tendencia a Agruparse en Serotipos Definidos Dra. V. Prado ICBM

5 Aspectos Microbiológicos Grupos diarreogénicos E. coli

6 Aspectos Microbiológicos Diagnóstico E. coli Diarreogénicos Cultivo Serotipificación Solo Orienta, es necesaria la determinación de factores de virulencia Determinación de Factores de Virulencia PCR Inmunoensayos

7 Aspectos Microbiológicos STEC Shigatoxina (Stx): similitud con citotoxina producida por Shigella dysenteriae Serotipo1 Verotoxina: Efecto citotóxico en células Vero STEC que causan colitis hemorrágica y SHU, se denominan Enterohemorrágicas EHEC Determinantes de Virulencia EHEC: Intimina (eae): Adhesinas bacterianas Tir: Receptor para Intimina Toxina shiga Gyles, J. Anim Sci 2007, 85:E45-E62 Bugarel et al. BMC Microbiol 2011,11:142

8 Aspectos Microbiológicos Muestra de deposición MacConkey + XLD Estudio de rutina con búsqueda dirigida de Salmonella spp, Shigella spp y Yersinia spp Dra. D. Benadof, Hosp. R del Río MacConkey sorbitol Colonias sorbitol negativo Bateria confirmar E.coli + inmunocromatogra fía para O157 y/o Seroaglutinación 0157 Hasta 48 horas De incubación

9 Aspectos Microbiológicos Detección de Toxina Shiga ImmunoCard STAT EHEC. Meridian Inmunoensayo cromatográfico en deposiciones Stx 1 / Stx 2 Elisa Premier EHEC (Meridian) Validados Solo en O157 Inmunoensayo enzimático en deposiciones y cultivos Stx1 / Stx2

10 Aspectos Microbiológicos STEC: Factores de Virulencia PCR stx2 eae stx1 bfp Sitio blanco gen Tamaño (pb) shiga toxina2 stx2 584 shiga toxina 1 stx1 348 Intimina (factor adhesión al epitelio intestinal) eae 482 Determinante de adherencia (Bundle Forming Pilus) bfp 300 Lab. Microbiología Molecular, Sección Bacteriología ISP

11 Aspectos Epidemiológicos Incidencia SHU en el Cono Sur respecto de otros Países Incidencia por 100,000 niños < 4 años. Laboratorio de Enteropatógenos (LEP). Universidad de Chile. Datos no publicados.

12 Aspectos Epidemiológicos STEC, Vigilancia de Laboratorio 1985: Implementación técnica Serológica y Biológica para E. coli Enterohemorrágico, confirmación voluntaria 1989: Primer caso confirmado de Serotipo O157:H7, toxina positiva. 1997: Implementación de técnicas moleculares para factores de virulencia 1999: Inicio de Sistema de vigilancia de Laboratorio para E. coli Verotoxigénico (O157 y otros)

13 Aspectos Epidemiológicos STEC: Objeto de Vigilancia de Laboratorio, Decreto Nº158 MINSAL 2004 Laboratorio de Referencia Confirmación Bioquímica de especie. Determinación de factores de virulencia por métodos moleculares Serotipificación: Somática O y Flagelar H. Estudio de clonalidad según estándar PulseNet CDC-OPS Informe de resultados a Autoridad Sanitaria y laboratorio local

14 Aspectos Epidemiológicos STEC, Serogrupos en Casos Confirmados por el Lab. de Referencia de Junio 2011 n=413 Casos

15 Aspectos Epidemiológicos Serogrupo STEC por Servicio de Salud, ISP NT O111 O117 O124 O157 O25 O26 O5 O

16 Aspectos Epidemiológicos Situación Epidemiológica STEC R. Metropolitana 2010 Se han confirmado 106 aislamientos. 81 (76 %) provienen de la RM Sólo 2, provienen del sistema público de salud 39 (O26) y 30 (O157) 5 % (4) han evolucionado a SHU Rango etareo: 1 a 6 años Comunas de residencia: Lo Barnechea, Huechuraba (2), La Reina, Peñalolen. Factores de riesgo más probable: hamburguesas, churrasco en carro ambulante, contacto con carne cruda.

17 Aspectos Epidemiológicos Situación Epidemiológica STEC R. Metropolitana 2011 (31 mayo 2011) Se han confirmado 42 aislamientos 25 provienen de la RM (14 O26 y 11 O157) 20 % (5) han evolucionado a SHU O157 1 por nexo epidemiológico O157 (brote familiar) Rango etareo: 2 a 6 años Comunas residencia: Las Condes (2), La Reina, Huechuraba, Lampa Factores de riesgo más probable: consumo de completos en restaurant, presencia de animales en el domicilio (bovinos, ovinos, animales domésticos), consumo de crudo de carne en restaurant

18 El Ambiente

19 El Ambiente STEC: Reservorio Rumiantes, especialmente ganado Bovino Ganadería Intensiva y la industria de la carne representan la principales potenciales fuentes de infección. Fundamental Procesos Industriales Faenamiento de animales Control ambiental y de la autoridad sanitaria Sistemas de control de riesgos

20 El Ambiente Presencia de ECEH aisladas de animales de abasto en Plantas Faenadoras de RM Tipo Ganado Total Muestras Presencia ECEH Bovinos (28.7%) Cerdos (68.3%) Fuente: Borie C,Arch. med. vet. v.29 n.2 Valdivia 1997 Tipo de Carne Nº muestras analizadas Presencia E. coli O157:H7 Bovino Equino 28 0 Cerdo 28 0 TOTAL Fuente: Laboratorio Microbiología Alimentos ISP 2008

21 El Ambiente En Chile, hemos descrito frecuencias de aislamiento de STEC, desde el contenido intestinal de cerdos y bovinos faenados, en un 7% y 17 % respectivamente. Así, si los protocolos o procesos de faenamiento para estos animales no son los adecuados, la carne se puede contaminar cuando, por error, su contenido intestinal tiene contacto con la materia muscular Comunicación Dr. Roberto Vidal, Microbiología ICBM, U. de Chile, 2011

22 Los Alimentos y el Marco regulatorio STEC, y el control en los alimentos en Chile El control de los alimentos que se elaboran y se consumen en Chile lo realiza la SEREMI de Salud Reglamento Sanitario de los Alimentos (RSA) DS 977/97: Indicadores de Higiene y detección de microorganismo patógenos, que se definen en el artículo Nº173 de este reglamento El laboratorio de Alimentos de la Región Metropolitana realiza la detección por PCR de Toxinas Shiga. El resto de los laboratorios no tiene implementadas técnicas de Biología Molecular

23 Los Alimentos y el Marco regulatorio De acuerdo al RSA, la detección de E.coli en los siguientes alimentos: Quesillo, queso fresco, queso chacra, queso de suero Caldos, sopas, cremas, salsas y puré de papas deshidratadas instantáneas Caldos, sopa, cremas, salsas y puré de legumbres deshidratadas que requieren cocción Cereales para desayuno Masas con relleno o coberturas Fórmulas deshidratadas para niños menores a 12 meses Fórmulas deshidratadas para niños mayores de 12 meses Preparaciones reconstituidas, listas para el consumo administradas exclusivamente por biberones o mamaderas Platos preparados y papillas listos para el consumo Cecinas cocidas Cecinas crudas acidificadas Pescados y mariscos crudos congelados Pescados y mariscos precocidos o cocidos congelados Pescados y mariscos ahumados Frutas y verduras frescas Frutas y otros vegetales comestibles pre-elaborados, listos para el consumo Frutos y otros vegetales comestibles congelados, que no requieren cocción Zumos, néctares, bebidas a base de frutas y verduras no pasteurizados Frutas y verduras desecadas o deshidratadas Comidas y platos cocidos, que se sirven en caliente, listos para el consumo. Excepto emparedados Comidas y platos mixtos con ingrediente (s) crudo (s) o cocido (s), incluidos emparedados. Aguas minerales y aguas envasadas.

24 Los Alimentos y el Marco regulatorio CODEX ALIMENTARIUS, FAO Sistemas de Calidad y Alimentos Inocuos Recomendaciones para la industria alimentaria: Hazzard Analytical Critical Control Point (HACCP)

25 Los Alimentos y el Marco regulatorio L. La Industria Alimentaria, Control Interno y Fizcalización Puntos Críticos Esencial Registros! Gentileza Cecinas Winter

26 O104:H4 Expansión Clonal en Europa

27 Vigilancia y Detección STEC O104:H4 Resist. Telurito Ausencia Intimina 2 Copias Stx2 Resist. Telurito Figure 1. Copy numbers variable regions of O104:H4 compared to DH10B if mapped to O157:H7. Red arrows: shiga toxin stx2 is amplified in O104:H4; Green arrows: tellurite gene cluster ter are present in O104:H4; Light blue arrow: intimin gene eae is missing in O104:H4. Violet arrow: copy number 2 region from 675kbp to 770kbp detected in DH10B. BGI/Univ. Medical Centre Hamburg-Eppendorf 2011

28 Vigilancia y Detección STEC O104:H4 Alta homología con EAEC (93%) Adquisición Stx por tranferencia horizontal E. coli Enteroagregativo Productor de toxina Shiga BGI/Univ. Medical Centre Hamburg-Eppendorf 2011

29 Dic e(o pt: 1.50 %) (Tol 1.5 %-1.5% )(H >0. 0% S>0.0%)[0.0%-98.3%] PF GE -X ba I PF G E- Xb ai B R E E E E E B R B R B R B R B R B R B R B R B R B R B R B R B R 8-06 B R B R E E E E E B R B R E E E E E E B R E E E P C E E E B R B R E B R B R B R B R B R B R B R B R B R E B R E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E - 05 E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E 8-06 E E P C E E E E E E E E E E E E E E E E E E E - 09 E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E 2-06 E E E E E E E E E P C E E E E E E E P C P C E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E /#1 E E E E E E CP T 08 E E E E E E E E E E E E E E E E E E P C E E E E E E E E P C1 E E S TA E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E CP O 5t -63 E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E B R B R 15-9 E E E E E E E E E E B R B R B R B R B R E E E E E 6-07 E E E E E E E E B R B R B R B R 8-10 E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E 5-08 E E /#1 E /#1 E E /#1 E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E B R B R E E E E E E E B R E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E 3-07 E E E E E E E E E E E E E E E E E B R E E E E E E E E E E E E E E E E B R E E N DA RD -e co li Vigilancia y Detección STEC O104:H4 Librería Genética E coli STEC PulseNet International CDC - OPS Protocolo O157

30 Vigilancia y Detección STEC O104:H4 PulseNet International: Genotipo 0104:H4 PFGE protocolo para E. coli no-o157 (switch inicial 6.76s - switch final: 35.38s).

31 Vigilancia y Detección STEC O104:H4 Robert Koch Institut

32 Vigilancia y Detección STEC O104:H4 caso sospechoso: Viajeros que ingresan a Chile provenientes de una zona de riesgo y que presenten diarrea acuosa con o sin sangre, con o sin fiebre, en los 10 primeros días siguientes a su arribo. Muestra de deposiciones para coprocultivo informando al laboratorio de la sospecha clínica Los cultivos con cepas sospechosas, deberán ser derivados rápidamente al Instituto de Salud Pública para su confirmación microbiológica. Las STEC son de vigilancia de laboratorio de acuerdo al DS 158/2004. Esta infección no es de notificación obligatoria (ENO) pero dado el contexto actual el caso sospechoso deberá ser reportado por la vía más expedita a Epidemiología de la SEREMI de Salud correspondiente. Depto. Epidemiología, MINSAL

33 Vigilancia y Detección STEC O104:H4 Conservación y Transporte Muestras La muestra de deposición debe colocarse en un frasco limpio y ser cultivada dentro de las 2 horas de recolección. Si el tiempo entre la recolección de la muestra y la siembra es mayor, poner la deposición en medio de transporte Cary-Blair, a temperatura ambiente. Nivel Local Coprocultivo Al día siguiente enviar al Laboratorio de Referencia, Sección Bacteriología del ISP la placa de coprocultivo debidamente sellada y rotulada. El envío se debe acompañar del formulario de envío de cepas de la sección Bacteriología Laboratorio de Referencia Seroagrupación O104 Determinación Stx PFGE, patrón O104:H4 Alemán

34 Aspectos Microbiológicos Revisión Métodos Diagnósticos STEC no O157 Inmunoensayos Stx Disponibilidad Métodos Moleculares Aspectos Epidemiológicos Notificación Casos SHU (MINSAL) Vigilancia Laboratorio El Ambiente Conclusiones Reservorio O104? Fisiopatología, Transmisión Potencial Epidémico Los Alimentos y el Marco regulatorio Educación del Consumidor Cumplimiento Reglamento Sanitario Alimentos Vigilancia y Detección STEC O104:H4 Estandarización de Métodos Confirmatorios O104 Caso Sospechoso y Notificación Inmediata

35 Agradecimientos: Dra. Valeria Prado, ICBM Univ. de Chile Dr. Roberto Vidal, ICBM, Univ. de Chile Dra. María Cristina Martínez, Subdepto. Microbiol. Alimentos ISP Dra. Verónica Solari, SEREMI Metropolitana Dra. Dona Benadof, Hosp. Roberto del Río Sección Bacteriología, Laboratorio ETA, ISP Subdepto. Genética Molecular ISP