En Rosario y zona de influencia los pacientes son homocigotas o doble heterocigotas para alguna de las siguientes mutaciones:

Transcripción

1 Diagnóstico de th > Hemograma Morfología de los eritrocitos: Marcada anisocitosis con abundantes micro y macrocitos. Marcada poiquilocitosis. Marcada hipocromía. Targets cells, leptocitos. Policromatofilia. Regular cantidad de esquistocitos. Punteado basófilo.

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3 Anemia de Cooley

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5 Diagnóstico molecular anemia de Cooley En Rosario y zona de influencia los pacientes son homocigotas o doble heterocigotas para alguna de las siguientes mutaciones: IVS1-1 G A, IVS1-6 T C, IVS1-110 G A, IVS2-l G A, CD 39 C T, IVS2-745 C G, que son las más frecuentes en la zona del Mediterráneo.

6 Dosaje de Hb F Aumentada o disminuída MÉTODO DE DESNATURALIZACIÓN ALCALINA Singer y Chernoff Betke V.N: menor de 2% Ligeramente aumentada: menor de 5%(HPFH heterocelular),th menor, embarazo Muy aumentada: % heterocelular (Anemia de Cooley, βδ Th, RN, neonato. Muy aumentada pancelular: HPFH

7 Test de Kleihauer y Betke adulto normal

8 Test de kleihauer y Betke adulto normal HPFH heterocelular

9 Indices Hematimétricos en Beta-Talasemia Indices en sangre Normal COOLEY PORTADOR periférica Hombre Mujer ß-Tal Mayor ß-Tal Minor VCM fl 89.1± ± <79 HCM pg 30.9± ± <27 Hb g/dl 15.9± ±0.9 <7 : :

10 Talasemia intermedia Se sospecha en individuos que presentan anemia moderada a una edad mas tardía y que raramente requieren transfusiones. Los individuos con Talasemia Intermedia tienen riesgo de sobrecarga de hierro secundaria a absorción intestinal aumentada como consecuencia de la eritropoyesis inefectiva.

11 Talasemia intermedia Hb entre 7 y 10 g/dl

12 Talasemia intermedia Hb: 7-10g /dl VCM disminuído HCM disminuída Hb A2 aumentada (5%), para las doble heterocigosis u homocigosis de formas leves de beta+ Th, Hb F aumentada: 30-70% Si se trata de talasemias aumenta la Hb F pero no la Hb A2.

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14 Talasemia intermedia El genotipo puede ser variable: Beta+/beta+ (negros) Betaº/( Lepore) Otros

15 -Talasemia menor. Se caracteriza por eritrocitosis microcítica con anemia leve, rara vez se aprecia esplenomegalia, su diagnóstico suele ser casual y facilitado por el empleo de analizadores hematológicos que suministran de forma sistemática los valores de VCM y HCM.

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17 -talasemia menor

18 -talasemia menor. diagnóstico º Th: Hb: 8-10 g/dl GR: eritrocitosis VCM y HCM disminuídos Hb A2: 4,5-5,5% Hb F: 0,5-4% Hb A: 90-95%

19 Genetica molecular Análisis de mutaciones conocidas: las ß- talasemias pueden ser causadas por mas de 200 mutaciones en el gen beta. Comúnmente las mutaciones son detectadas por procedimientos basados en PCR. Los métodos mas usados son reverse dot blot o amplificación primer-específica con un set de primers complementarios a las mutaciones mas frecuentes en la población de la cual el individuo afectado es originario

20 Beta-Talasemia Genética Molecular: Métodos Clínicos PCR-ARMS Mutación 0 IVS-II-nt 1 (634 bp) 861 pb 634 pb Calle 1: blanco de H 2 O (control de contaminación). Calles 2 y 3: individuo normal ( A / A ) con primers normal y mutado respectivamente. Calle 4: marcador de peso molecular (100 bp ladder). La banda más brillante corresponde a 500 pb. Calles 5 y 6: individuo heterocigoto ( A / T ) con primers normal y mutado respectivamente.

21 δβ Talasemias δβ deleción δβ Lepore-fusión δβ HPFH

22 δβ Talasemias Las delta-beta talasemias heterocigotas presentan un cuadro hematológico y clínico similar a las beta Th heterocigotas. Presentan Hb F aumentada 5-15% (heterocelular), la Hb A2 está normal- Las delta-beta talasemias homocigotas o doble heterocigotas beta-delta/ beta Th presentan un cuadro clínico y hematológico de Th intermedia o mayor con Hb F muy aumentada y Hb A2 disminuída.

23 Persistencia hereditaria de Hb fetal- HPFH Es más frecuente en la etnia nergra, sólo el homocigota presenta Hb F de 100% pancelular y VCM disminuído. El heterocigota puede no presentar anemia pero presenta HB F de alrededor del 30% siempre de distribución pancelular.

24 δβ talasemias-lepore La Hb Lepore corre como la Hb S En el heterocigota la morfología yel hemograma son similares a la beta Th menor, pero presentan entre 8-15 % de Hb Lepore, Hb F algo aumentada 5-7%, Hb A2 disminuída. El homocigota clínica y hematológicamente es una Th mayor, con Hb Lepore de 25-30%, el resto es Hb F.

25 Alfa talasemias. La patología molecular de las alfa talasemias está determinada por una serie heterogenea de deleciones de diversa extensión: º elimina todo el complejo de genes alfa de uno o de los dos cromososmas + elimina uno de los genes alfa, parte de los mismos o puede ser una mutación puntual.

26 Deleciones causantes de -Talasemia - 70 kpb 0 kpb 10 kpb 20 kpb 30 kpb 5 HVR HS-40 2 inter HVR HVR MED -- SEA -- THI 60 kpb 35 kpb 230 kpb 30 kpb -- BO -- DUCH

27 Mutaciones Puntuales causantes de -Talasemia - 70 kpb 0 kpb 10 kpb 20 kpb 30 kpb 5 HVR HS-40 2 inter HVR HVR CAP Señal POLI A ' 3' CAT ATA box box Nco Hph CS T Saudí 1) Procesamiento del ARNm Mutaciones en el sitio de Splicing Señal de Poliadenilación 2) Traducción del ARNm Mutaciones en el codon de iniciación Mutaciones en el codon de terminació Cambio del marco de lectura Mutación sin sentido 3) Inestabilidad Postranscripcional

28 Secuenciación: GEN 2 nueva mutación IVS2-142 Patient: cctgggccgcactgaccctcttctctgcacaactc Normal sequence: cctgggccgcactgaccctcttctctgcacagctc

29 Alfa talasemias. Genotipo Hg Hties VCM HCM Hb H g/dl X10 12 /l fl pg % 15.5 / / / / / / / / / / / / / / / / / /

30 Alfa talasemias. Deleción alfa 3,7 ó 4,2

31 Talasemia alfa Sìndrome Genotipo Clínica RN Despues del 1 año Hidrops - - / - - Muerte fetal HbBart>80% Fetal Anemia grave HbH HbPortland Enfermedad por Hb H - - / -a Anemia Hemolitica crònica Hb Bart 20 a 40% HbH 5-20% Trazas de Bart Talasemia Menor -- /aa -a / -a Anemia leve O inexistente HbBart 2-20% Ninguna Portador silente -a /aa Sin alteraciones Clínicas ni hematologicas

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33 Enfermedad de la Hb H

34 Enfermedad de la Hb H

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36 Alfa Talasemias - -/- - Alfa talasemia mayor

37 Alfa Talasemias - -/- - Alfa talasemia mayor

38 Alfa Talasemias Diagnóstico Hemograma: cursan sin anemia pero el VCM está siempre disminuído, aún en la deleción 3,7 heterocigota. La morfología es variable y característica para algunas formas de Th. Sólo las formas -/ - y las - -/ presenten morfología más notoria, sin PB, y a veces es posible detectar un cuerpo de inclusión cada varios campos. En los casos leves es imprescindible efectuar la biología molecular, ya que el estudio de Hb generalmente es normal

39 Deleción ASO-PCR 1,76 kpb 0,5 kpb 1,76 kpb 0,5 kpb 1 y 2 control Heterocigosis y 8 marcador 100 bp ladder 4 y 5 Cordón homocigota y 7 Padre - 9 y 10 Madre.

40 Alfa Talasemias. -/ - homocigota + - -/ heterocigota º

41 Enfermedad Por Hb H

42 Enfermedad Por Hb H: --/- PARÁMETROS HEMATIMÉTRICOS Hb G.R. Hcto VCM HCM CHCM Hb H Hb F Hb A 2 g/dl mm 3 % (fl) (pg) (g/dl) % % % 6,6 3.68x , ,8 MORFOLOGÍA ERITROCITARIA 16 1,8 %

43 ENFERMEDAD POR Hb H

44 Beta-Talasemia ASOCIACIÓN DE -TALASEMIA HETEROCIGOTA CON DELECIÓN GR Hb Hto VCM HCM CHCM (10 12 /l) (g/dl) (%) (fl) (pg) (g/dl) , ,8 30, / - 3,7 1,76 KB

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46 Muñoz Rojas et. al. Protocolo diagnóstico anemias microcíticas Medicine 2008; 10(20):1363-5

47 ABORDAJE MÉDICO (Unidades de Atención a pacientes con Talasemia) Laboratorio Convencional Investigación HEMATÓLOGO Diagnóstico Tratamiento y Prevención Banco de Sangre Transfusión Tratamiento con Desferal u otros medicamentos Vacunas MEDICOS ESPECIALISTAS (Tratamiento y prevención) n) Endocrinólogo Cardiólogo Oftalmólogo logo Psicólogo Apoyo MédicoM Enfermeras Especializadas Dietista Dentista Genetista (Asesoramiento Genético) CIBO-GENETICA 2004

48 MUCHAS GRACIAS