Análisis Factor VIII Antibody Screen

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1 INSTRUCCIONES DE USO Análisis Factor VIII Antibody Screen REF F8S IVD TABLA DE CONTENIDOS PROPÓSITO DE EMPLEO... 2 RESUMEN Y EXPLICACIÓN... 2 PRINCIPIO... 2 REACTIVOS... 2 PRECAUCIONES... 3 ADVERTENCIAS... 3 TOMA DE MUESTRA... 4 PROCEDIMIENTO... 4 Materiales Suministrados... 4 Material Necesario Adicionalmente... 4 Procedimiento del Test... 4 INSTRUCCIONES DE CALIBRACIÓN... 6 CONTROL DE CALIDAD... 6 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS... 6 LIMITATIONES... 7 CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO ESPECÍFICO... 7 REFERENCIAS... 8 Análisis Factor VIII Antibody Screen IFUES REV D

2 PROPÓSITO DE EMPLEO El Factor VIII Antibody Screen es un ensayo cualitativo en fase sólida inmuno-enzimático (ELISA) para detectar anticuerpos IgG frente a Factor VIII humano recombinante (FVIII) en suero y plasma humanos. RESUMEN Y EXPLICACIÓN El desarrollo de anticuerpos contra Factor VIII humano (FVIII) es una de las mayores complicaciones en el tratamiento de la hemofilia A, así como en pacientes con hemofilia adquirida. Los anticuerpos se forman como resultado de una respuesta policlonal al FVIII y son mayoritariamente de tipo IgG. 1 Los anticuerpos anti-fviii pueden unirse al FVIII de forma que bloquean las interacciones necesarias para la actividad procoagulación del FVIII. Estos anticuerpos inhibitorios se desarrollan en aproximadamente el 25% de los pacientes con hemofilia. A de grado moderado y severo, y puede llevar a la neutralización directa de cualquier FVIII administrado en terapia. 1 Además se desarrollan anticuerpos frente a epítopos no asociados con la actividad del FVIII. Estos anticuerpos no inhibitorios pueden aumentar la eliminación del FVIII de la circulación, reducir la unión con su proteína transportadora (VWF) e incluso hidrolizar la molécula de FVIII. 2,3,4 El análisis de Factor VIII Antibody Screen utiliza placas ELISA cuyos pocillos contienen moléculas de FVIII humano recombinante inmovilizadas. Éstas sirven como moléculas captadoras para la detección de anticuerpos inhibitorios y no inhibitorios frente a FVIII. PRINCIPIO La muestra de suero o plasma del paciente se añade a los pocillos recubiertos por moléculas de FVIII recombinante permitiendo, si estuviera presente, que el anticuerpo se enlace. Los anticuerpos no ligados se eliminan por lavado. Se añade a los pocillos un reactivo anti-inmunoglobulina humana (Anti-IgG) marcado con fosfatasa alcalina y se incuba. La Anti-IgG no ligada se elimina por lavado y se añade el substrato PNPP (p-nitrofenil fosfato). Tras un período de incubación de 30 minutos, se para la reacción añadiendo una solución de hidróxido sódico. Con un espectrofotómetro se mide la densidad óptica del color desarrollado. El Factor VIII Antibody Screen utiliza tres sistemas diferentes de control. El control negativo es un suero recogido de un donante normal, sano y no hemofílico. El control negativo no contiene anticuerpos anti-fviii y muestra el nivel de reactividad esperado para una muestra negativa de un paciente. Además al control negativo se le asigna un rango admisible de valores de DO y se usa para asegurar que las condiciones del ensayo y el estado de los reactivos son correctos. El control positivo contiene suero de pacientes que tienen anticuerpos anti-fviii. Esta muestra altamente reactiva tiene un valor mínimo de DO aceptable y se usa para asegurar que las condiciones del ensayo y el estado de los reactivos usados son los adecuados. El punto de corte entre las muestras positivas y negativas se fija según la reactividad del control del kit. Las muestras con valores medios de DO superiores al valor medio de DO del control del kit son considerados positivos. Las muestras con valores medios de DO iguales o inferiores al valor medio del control del kit son considerados negativos. REAGENTS Número máximo de test por kit: F8S: 44 tests por kit Los reactivos deben conservarse según las instrucciones de la etiqueta. REF MS TCW SDB Microcubetas: placa o tiras de microcubetas low volume de fondo plano sobre las cuales se han inmovilizado moléculas completas de FVIII humano recombinante. La placa o tiras de microcubetas están dentro de una bolsa de embalaje. Listo para su uso Solución Concentrada de Lavado (10X): Solución tamponada de Tris (hidroximetil) aminometano conteniendo cloruro sódico y Tween 20. 1% azida sódica. Diluir con agua desionizada o destilada antes del uso. Almacenar la solución de trabajo de Lavado hasta 48 horas a temperatura ambiente o hasta siete días entre 2 y 8 C Diluyente de Muestra: Solución Tris tamponada conteniendo cloruro sódico, albúmina de suero bovino. 0,05% azida sódica. Lista para su uso. Análisis Factor VIII Antibody Screen IFUES REV D

3 SB Tampón Substrato: Esta solución contiene dietanolamina y cloruro magnésico. 0,02% azida sódica. Listo para el uso. Proteger de la luz. SS Solución de Paro: Hidróxido Sódico 3 M. Listo para su uso. Manipular con cuidado. AG Conjugado: Anticuerpo de cabra frente a inmunoglobulina G (IgG) conjugado con fosfatasa alcalina. 0,1% azida sódica. Diluir con Diluyente de Muestra antes del uso. PN PNPP Substrato: (p-nitrofenil fosfato) Polvo Cristalino. Reconstituir con agua desionizada o destilada y diluir en Tampón Substrato antes del uso. Proteger de la luz. PC1 KC NC Control Positivo: Suero Humano que contiene albúmina de suero bovino y 0,1% azida sódica. Diluir en diluyente de Muestra antes de usar. PRECAUCIÓN: Anti-HCV positivo (inactivado por calor) Control del Kit: Suero Humano que contiene albúmina de suero bovino y 0,1% azida sódica. Diluir en diluyente de Muestra antes de usar. PRECAUCIÓN: Anti-HCV positivo (inactivado por calor) Control Negativo: Suero Humano. 0,1% azida sódica. Diluir en diluyente de Muestra antes de usar. PS Tapas para placas. PRECAUCIONES No utilizar reactivos turbios o contaminados. SE DEBE tener cuidado para evitar la contaminación del Diluyente de Muestra y del Conjugado. La contaminación inadvertida de estos reactivos con plasma o suero humano provocaría la neutralización del Conjugado y el fallo de la prueba. No usar reactivos después de su fecha de caducidad. Las microcubetas y los reactivos contenidos en el kit no pueden usarse en otros kits de otros sistemas. La sustitución de los componentes suministrados en el kit por cualquier otro puede provocar resultados erróneos o inconsistentes. Después de cada serie de análisis desechar los restos no utilizados de Conjugado diluido, Controles diluidos, y reactivo PNPP diluido y reconstituido. Seguir las instrucciones del fabricante de las pipetas en cuanto a aspiración y dispensación para la preparación correcta de las diluciones. La reacción Enzima substrato de la última incubación es sensible a la temperatura y debería realizarse entre 22 y 25 C en la oscuridad. Puede ser necesario que el laboratorio establezca tiempos de incubación más largos o más cortos, debido a las variaciones en instrumentos o en la temperatura de la habitación para obtener resultados de controles consistentemente válidos. Debido a que la temperatura de la incubación final puede afectar a los valores de los controles, es importante monitorizar periódicamente la temperatura de la habitación. Debido al pequeño tamaño de los pocillos, es esencial verificar el lector de placas para que la alineación sea la adecuada. No usar una longitud de onda de referencia cuando se lee la placa en el lector. ADVERTENCIAS El Control Positivo y el Control del Kit son reactivos para Anti-HCV y no reactivos para anticuerpos frente a HbsAg y HIV-1. Estos reactivos han sido inactivados mediante tratamiento de calor. Sin embargo, estos materiales deberían ser manipulados como potencialmente infecciosos. Todos los sueros humanos utilizados en los Control Negativo para este producto han sido testados y encontrados negativos para los anticuerpos frente a HIV, HCV y HBsAg mediante métodos aprobados por la FDA. De todas formas ninguna prueba puede ofrecer completa seguridad de ausencia de virus de HIV, Hepatitis C, Hepatitis B u otros agentes infecciosos. Por tanto, estos materiales deberían manipularse como potencialmente infecciosos. Algunos de los reactivos del kit contienen azida sódica como conservante. ATENCIÓN: La azida sódica reacciona con las cañerías de cobre y plomo formando azidas metálicas altamente explosivas. Cuando se deseche en el fregadero deberá enjuagarse con gran cantidad de agua para prevenir el crecimiento de azidas. La azida sódica es un veneno y es tóxica si se ingiere. La solución de paro (NaOH) es corrosiva. Evitar el contacto con la piel y los ojos. Las salpicaduras deberían lavarse inmediatamente. Análisis Factor VIII Antibody Screen IFUES REV D

4 Al terminar desechar todos los componentes siguiendo la normativa local. TOMA DE MUESTRA Para muestras de plasma, la sangre se debe recolectar en ACD o citrato sódico utilizando la técnica aséptica. Para muestras de suero, la sangre se debe recolectar sin anticoagulante utilizando la técnica aséptica. Se recomienda que las muestras de sangre total se recolecten, transporten y procesen de acuerdo a la guía NCCLS H21-A4, Volumen 23, Número 35, Diciembre 2003, Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Coagulation Testing and General Performance of Coagulation Assays. Las muestras deberían analizarse frescas lo antes posible para minimizar la posibilidad de obtener reacciones falsos positivos o falsos negativos debido al deficiente almacenaje o contaminación de la muestra. Las muestras que no puedan analizarse de forma inmediata deberían almacenarse entre 2 y 8 C durante no más de 48 horas o congelarlas. Las muestras congeladas a 20 C o inferior, permanecen en buenas condiciones durante al menos 3 años. De todas formas, para evitar el efecto nocivo de repetidos ciclos de descongelación/congelación, se recomienda alicuotar las muestras en pequeños volúmenes y conservarlas congeladas. Evitar los congeladores antiescarcha. Las partículas o agregados en la muestra pueden provocar falsos positivos o poca repetibilidad. Las muestras que contienen partículas deberán aclararse por centrifugación antes de analizarlas. PROCEDIMIENTO Materiales Suministrados Los viales pueden contener más reactivo que el indicado en las etiquetas. Al preparar las soluciones, asegurarse de medir el reactivo con los instrumentos apropiados x 8 tiras de microcubetas con soporte 2. 1 x 50 ml Solución Concentrada de Lavado (10X) 3. 1 x 14 ml Diluyente de Muestra 4. 1 x 14 ml Tampón Substrato 5. 1 x 14 ml Solución de Paro 6. 1 x 30 μl Conjugado 7. 6 x 50 mg PNPP Substrato 8. 1 x 150 µl Control Positivo 9. 1 x 150 µl Control del Kit x 150 µl Control Negativo Tapas para Placas Material Necesario Adicionalmente 1. Tubos para la muestra del paciente y diluciones de controles y reactivos 2. Pipetas de transferencia 3. Micropipetas ajustables para dispensar 1 10 µl, µl y 100 1,000 µl y puntas desechables 4. Cronómetro 5. Lector de microplacas capaz de medir DO a 405 o Agua desionizada o destilada 7. Toallitas de papel absorbente 8. Lavador de microplacas o similar 9. Centrífuga capaz de separar suero o plasma de las muestras de paciente 10. Baño de agua de 37 C o incubador Procedimiento del Test 1. Atemperar los reactivos a temperatura ambiente. 2. Preparar la Solución de Lavado diluyendo el concentrado de lavado. Añadir 1 volumen de Concentrado de Lavado a 9 volúmenes de agua desionizada o destilada. Mezclar bien. 3. Determinar el número de muestras a testar. Utilizando la Tabla de Resultados, asignar a cada muestra una localización, reservando dos pocillos por muestra (duplicado en horizontal). Registrar la identidad de cada muestra en la Tabla de Resultados. Análisis Factor VIII Antibody Screen IFUES REV D

5 Preparación de Muestras y Controles 4. Diluir como sigue y mezclar bien: Volumen Diluyente de Muestra PC1 30 µl 10 µl KC 30 µl 10 µl NC1 30 µl 10 µl Muestra Paciente 30 µl 10 µl Volumen Muestra 5. Sacar el marco y las tiras que se van a utilizar y guardar el resto de las tiras no necesarias en la bolsa protectora. NOTA: Solo se suministra un marco con el kit. No desechar hasta haber utilizado todas las tiras. 6. Añadir 150 µl de Solución de Lavado de trabajo a todos los pocillos y dejar que alcance la temperatura ambiente en 5-10 minutos. 7. Aspirar o decantar la solución de lavado con un golpe seco e invertir sobre un papel absorbente para evitar que se seque. 8. Añadir 15 L del control apropiado o muestra en las cubetas, tal como se designe en la Tabla de Resultados. NOTA: No añadir ni muestras ni reactivos a las cubetas de Blanco. NOTA: Si se analizan múltiples muestras de pacientes solo se necesita un set de controles. PARA EVITAR ERRORES MARCAR CADA UNA DE LAS TIRAS. 9. Sellar las microcubetas con una tapa para placas e incubar por minutos en un baño de agua a 37 C. En caso de utilizar un incubador seco aumentar 10 minutos el tiempo de incubación. 10. Diluir el Conjugado 1 a 100 en Diluyente de Muestra. Utilizar un contenedor de polipropileno. Tiras 2 1 x x 8 AG8 4 µl 20 µl SDB 396 µl 1980 µl NOTA: El conjugado es viscoso. Mojar la punta de pipeta 2-3 veces en el Conjugado antes de dispensar y enjuagar después de la adición al Diluyente de Muestra. Mezclar bien. 11. PASO DE LAVADO a) Aspirar o decantar el contenido de cada pocillo y sacudir sobre papel absorbente. b) Añadir 150 µl de Solución de trabajo de Lavado. c) Aspirar o decantar. d) Repetir los pasos b + c para un total de 3 ó 4 lavados. e) Decantar vigorosamente para eliminar la solución de lavado residual. Invertir sobre papel absorbente para prevenir el secado. NOTA: Es importante eliminar completamente toda la solución de Lavado después del último lavado. Sin embargo, evitar que la placa se seque. 12. Añadir 15 µl de Conjugado diluido (preparado en el paso previo) a todos los pocillos EXCEPTO los designados como BLANCOS. 13. Sellar las microcubetas con una Tapa para placas e incubar minutos en un baño de agua a 37 C. Si se usa un incubador seco debe aumentarse en 10 minutos el tiempo de incubación. 14. Disolver el Substrato PNPP añadiendo 0,5 ml de agua desionizada o destilada al vial. Volver a tapar y mezclar bien. 15. Diluir el PNPP 1 a 100 en el Tampón de Substrato. Tiras 2 1 x x 8 PN 10 µl 60 µl SB 1 ml 6 ml Análisis Factor VIII Antibody Screen IFUES REV D

6 Mezclar bien. Proteger de la luz hasta su uso. 16. PASO DE LAVADO a) Aspirar o decantar el contenido de cada pocillo y sacudir sobre papel absorbente. b) Añadir 150 µl de Solución de trabajo de Lavado. c) Aspirar o decantar. d) Repetir los pasos b + c para un total de 3 ó 4 lavados. e) Decantar vigorosamente para eliminar la solución de lavado residual. Invertir sobre papel absorbente para prevenir el secado. Proceder rápidamente con los siguientes tres pasos. 17. Añadir 50 µl de la solución de PNPP diluida a todos los pocillos EXCEPTO a aquellos designados como BLANCOS. 18. Dejar atemperar las microcubetas en oscuridad durante minutos a TEMPERATURA AMBIENTE (22 y 25ºC). NOTA: Después de la adición de PNPP el tiempo de incubación y la temperatura son críticos. NO VARIAR el tiempo de incubación establecido o la temperatura. Para mayor consistencia empezar a medir el tiempo después de la adición del reactivo a la primera cubeta. 19. Parar la reacción añadiendo 50 µl de Solución de Paro a cada pocillo en la misma secuencia que la adición del substrato. Añadir 100 µl de solución de Paro a los pocillos de Blanco. 20. Leer la absorbancia (DO) de cada pocillo a 405 ó 410 nm. No usar un filtro de referencia. Si no se puede leer el resultado inmediatamente, volver a poner los pocillos en oscuridad hasta un máximo de 30 minutos. 21. Restar los valores obtenidos en los pocillos BLANCOS a todos los de las muestras y controles. Muchos lectores de ELISA están programados para realizar este paso automáticamente. 22. Registrar los Resultados en la Tabla de Resultados. INSTRUCCIONES DE CALIBRACIÓN No hay estándares reconocidos internacionalmente para utilizar en la medida de anticuerpos frente a Factor VIII. En el Factor VIII Antibody Screen, el punto de corte entre las muestras positivas y las negativas se determina según la reactividad del control del kit. Las muestras con valores medios de DO mayores que el valor medio de DO del control del kit se consideran positivos. Las muestras con valores de DO iguales o inferiores al valor medio de DO del control del kit son considerados negativos. El control del kit es específico del lote y ha sido ampliamente testado con los reactivos asignados a dicho kit para asegurar que se obtienen los resultados esperados en más de 90 muestras. CONTROL DE CALIDAD El Control de calidad del kit Factor VIII Antibody Screen está integrado en el sistema por la inclusión de los Sueros Control Negativo y Positivo. Estos controles deben incluirse en cada serie para ayudar a determinar si se han producido errores técnicos o fallos del reactivo. Criterios para un test válido: Control Negativo Media DO 0,03 0,200 0,800 Control Positivo Las lecturas de DO obtenidas de pruebas en duplicado deben quedar entre el 20% de la media de los dos valores. Las muestras cuyos resultados queden fuera de este límite deberán volver a determinarse. NOTA: La pobre repetitividad de resultados se puede deber a omisiones de muestra o reactivo, desigual adición de reactivos, temperatura desigual durante las incubaciones, luz durante la incubación final o contaminación cruzada. El fallo en el test en duplicado puede conducir a aceptarresultados erróneos. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS Los resultados con valores de DO mayores que la media de los pocillos del control del kit se consideran positivos. Los resultados con valores de DO menores o iguales a la media de los pocillos del control del kit se consideran resultados negativos. Análisis Factor VIII Antibody Screen IFUES REV D

7 LIMITACIONES Pueden obtenerse resultados erróneos por contaminación bacteriana o por otro tipo de contaminación del material, períodos de incubación inadecuados, lavado o decantado inadecuado de los pocillos, exposición del substrato a la luz, omisión de reactivos, exposición a temperaturas superiores o inferiores a las requeridas, u omisión de pasos. Los resultados de este análisis no deberían usarse como única base para una decisión clínica. CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO ESPECÍFICO Para asegurar la adecuada reactividad y especificidad, antes de comercializar cada lote del Factor VIII Antibody Screen se prueba con muestras conocidas en anticuerpos FVIII, tanto muestras positivas como libres de tales anticuerpos. Precisión Se ha determinado estudiando la imprecisión intraensayo, interensayo y la imprecisión total de Factor VIII Antibody Screen. Se testaron 8 muestras con reactividad variada (negativa; baja, media y altamente positiva) con el Factor VIII Antibody Screen, por duplicado, en 10 ensayos diferentes. Para obtener la falta de precisión de los valores de DO obtenidos, los datos se analizaron mediante ANOVA de acuerdo al Documento CLSI EP-5A2. Los cálculos se muestran en la tabla de abajo. Los resultados demostraron < 13% de cv (coeficiente de variación) para las muestras con valores de DO > 0,600 y cv < 24% para muestras con valores de DO < 0,600. Además, los resultados obtenidos fueron analizados de acuerdo con el Documento CLSI EP12-A. Hubo un 100% de concordancia entre los resultados obtenidos intra e interensayo para cada muestra testada. Muestra Valor DO Medio SD Intraensayo %cv Intraensayo SD Interensayo %cv Intraensayo SD Total Muestra 1 Positivo débil Muestra 2 Positivo débil Muestra 3 Positivo medio Muestra 4 Positivo medio Muestra 5 Positivo elevado Muestra 6 Negativo Muestra 7 Negativo Muestra 8 Negativo %cv Total Método Comparativo: Comparación de Factor VIII Antibody Screen frente al Factor VIII Inhibitor Assay de GTI Se llevaron a cabo dos estudios diferentes en los cuales el Factor VIII Antibody Screen se comparaba con un ensayo previamente autorizado por la FDA: GTI Factor VIII Inhibitor Assay. El Factor VIII Antibody Screen es una versión modificada del Factor VIII Inhibitor Assay. Se combinaron los resultados de los dos estudios. Se testaron 137 muestras, incluyendo suero y plasma. Se observó durante el estudio comparativo que 7 muestras procedentes de pacientes hemofílicos con un título no detestable por Bethesda y reactividad negativa en Factor VIII Antibody Screen mostraron reactividad positiva inesperada en el Factor VIII Inhibitor Assay. Se demostró que esta reactividad no era FVIII específica. El Factor VIII Antibody Screen utiliza un Diluyente de Muestra especialmente formulado para reducir la reactividad FVIII no específica. Cuando esas muestras encontradas negativas inespecíficamente fueron reanalizadas con Factor VIII Inhibitor Assay en presencia de este Diluyente de Muestra reformulado, la mayoría de las muestras mostraron una reducción global significativa en los valores de DO y otras muestras resultaron negativas. La tabla siguiente muestra los resultados de este estudio: Factor VIII Inhibitor Assay Factor VIII Antibody Screen Positivo Negativo Total Positivo Negativo Total Análisis Factor VIII Antibody Screen IFUES REV D

8 Acuerdo: 94.2% Co-positividad: 92.7% (95% Intervalo de Confianza = %) Co-negativdad: 97.6% (95% Intervalo de Confianza = %) El ensayo Factor VIII Antibody Screen muestra una sensibilidad excelente (co-positividad), especificidad (co-negatividad), y concordancia global cuando se compara con Factor VIII Inhibitor Assay. Método Comparativo: Comparación de Factor VIII Antibody Screen frente al ensayo Bethesda Se llevaron a cabo dos estudios diferentes en los que el Factor VIII Antibody Screen era comparado con el ensayo Bethesda. Se combinaron los resultados de los dos estudios. Se analizaron 206 muestras con kit Factor VIII Antibody Screen y el ensayo Bethesda o una modificación de éste (Bethesda Screen). Bethesda es considerado el ensayo estándar para la medida de anticuerpos inhibitorios frente a Factor VIII. En este estudio, cualquier muestra con un título Bethesda positivo se asignó como resultado positivo, y las muestras con un título Bethesda negativo se asignaron como negativas. La siguiente tabla muestra el resultado de este estudio: Factor VIII Antibody Screen Bethesda Assay Positivo Negativo Total Positivo Negativo Total Acuerdo: 92.2% Co-positividad: 95.8% (95% Intervalo de Confianza = %) Co-negatividad: 89.1% (95% Intervalo de Confianza = %) Las 4 muestras que resultaron positivas por Bethesda y negativas con el Factor VIII Antibody Screen daban un título en Bethesda entre 0,8 y 3 BU (Unidades Bethesda). Los valores obtenidos por Bethesda no fueron confirmados en un segundo laboratorio, sin embargo, los resultados de Factor VIII Antibody Screen fueron consistentemente negativos para estas muestras. Doce muestras resultaron negativas por Bethesda y positivas con Factor VIII Antibody Screen. La mayoría de estas muestras pertenecían a análisis consecutivos del mismo paciente, monitorizando el desarrollo de anticuerpos Factor VIII o su reducción durante una terapia de tolerancia inmune. En general, las discrepancias se encontraron en muestras tomadas del paciente inmediatamente antes de que el paciente resultase positivo por Bethesda o inmediatamente después de que éste resultase negativo para Bethesda, sugiriendo una sensibilidad incrementada frente a anticuerpos Factor VIII en el Factor VIII Antibody Screen. El Factor VIII Antibody Screen muestra una excelente sensibilidad (co-positividad), especificidad (co-negatividad) y una concordancia global cuando se compara con el método de referencia, el ensayo Bethesda. Sustancias que Interfieren en el Análisis Se ha demostrado que las siguientes sustancias no interfieren en el Factor VIII Antibody Screen a las concentraciones indicadas: Hemoglobina Bilirrubina Intralipid Gammagard (IVIG) Rituxan (rituximab) < 500 mg/dl < 20 mg/dl < 500 mg/dl < 200 µg/dl < 10 µg/dl REFERENCIAS 1. Shima M. Characterization of Factor VIII Inhibitors. International Journal of Heamatology 2006; 83: Dazzi F, et al. High incidence of anti-fviii antibodies against non-coagulant epitopes in haemophilia A patients: a possible role for the half-life of transfused FVIII. British Journal of Haematology 1996; 93(3): Ling M, et al. Low detection rate of antibodies to non-functional epitopes on Factor VIII in patients with hemophilia A and negative for inhibitors by Bethesda assay. Journal of Thrombosis and Haemostasis 2003; 1(12): LaCroix-Desmazes S, et al. Catalytic IgG from patients with hemophilia A inactive therapeutic Factor VIII. Journal of Immunology 2006; 177(2): Análisis Factor VIII Antibody Screen IFUES REV D

9 Immucor GTI Diagnostics, Inc Crossroads Circle Waukesha, WI USA EC REP Immucor Medizinische Diagnostik GmbH Adam-Opel-Strasse 26A Rodermark Germany US and International Contact Information: Technical Support : waukeshatechsupport@immucor.com INTRALIPID is a trademark of Fresenius Kabi AB. GAMMAGARD is a trademark of Baxter International, Inc. RITUXAN is a trademark of Biogen Idec Inc. Any other brand name that may appear in this package insert belongs to its respective owner Immucor GTI Diagnostics, Inc IFUES Rev D H - P Frases y redacción de Peligro Warning Danger H302 H314 H318 H412 EUH032 P260 P264 P270 P273 P280 P301 + P312 P301 + P330 + P331 P303 + P361 + P353 P304 + P340 P305 + P351 + P338 P310 P330 Atención Peligro Nocivo en caso de ingestión. Provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves. Provoca lesiones oculares graves. Nocivo para los organismos acuáticos, con efectos nocivos duraderos. En contacto con ácidos libera gases muy tóxicos. No respirar el polvo/el humo/el gas/la niebla/los vapores/el aerosol. Lavarse bien las manos concienzudamente tras la manipulación. No comer, beber ni fumar durante su utilización. Evitar su liberación al medio ambiente. Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección. EN CASO DE INGESTIÓN: Llamar a un CENTRO DE TOXICOLOGĺA o a un médico si se encuentra mal. EN CASO DE INGESTIÓN: Enjuagarse la boca. NO provocar el vómito. EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL (o el pelo): Quitarse inmediatamente las prendas contaminadas. Aclararse la piel con agua o ducharse. EN CASO DE INHALACIÓN: Transportar a la víctima al exterior y mantenerla en reposo en una posición confortable para respirar. EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Aclarar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir aclarando. Llamar inmediatamente a un CENTRO DE INFORMACION TOXICOLOGICA o a un médico. Enjuagarse la boca. Análisis Factor VIII Antibody Screen IFUES REV D