Disertación del Dr. Gustave Decuadro Hansen Técnica de inseminación artificial en conejos 8 de setiembre de Primera parte

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1 Disertación del Dr. Gustave Decuadro Hansen Técnica de inseminación artificial en conejos 8 de setiembre de 2007 Primera parte Inicialmente dio a conocer la situación de la producción de conejos en Europa, siendo los principales países productores y consumidores, Italia, Francia y España. Para el caso de Francia, consume 3 Kg./hab./año, con 62 millones de habitantes y un costo del Kg vivo de conejo de 1.72 euros. El 95 % de la población de conejos esta inseminada con 6.5 millones de inseminaciones por año, mediante dos métodos: * Productores que realizan la inseminación * Productores que compran semen a centros de inseminación, los cuales existen 20 centros en el país. La inseminación pasó a ser una tecnología que aunque se inició en los años 80 actualmente forma parte del trabajo rutinario del criadero, entre los factores que permitieron la aplicación casi generalizada de la inseminación, se encuentran: la alta escala de producción ( el promedio es de 600 reproductoras), eficiencia en el uso de la mano de obra, ahorro de tiempo Cuestiones económicas. La técnica de la inseminación se ha perfeccionado y por ello actualmente los problemas de fertilidad y tamaño de camada tienen como causa el manejo y los aspectos sanitarios de la producción. Uno de los cambios que se ha aplicado en la producción es en el. Manejo de las bandas, antes se trabajaba con bandas a 33 días, pero actualmente se esta utilizando el sistema de banda única a 42 días mejorando el aspecto sanitario especialmente por el trabajo todo adentro-todo afuera. También el uso de hormonas ha decaído, especialmente por cuestiones de nuevas normas legales que están surgiendo en la comunidad. Aunque con las nuevas técnicas de manejo implementadas se obtienen resultados parecidos con respecto al uso de PMSG como: Lactancia controlada Foto período Aplicación de vitaminas Se debe considerar que la mayoría de los productores trabajan en ambiente controlado. Con respecto a las técnicas de inseminación, remarcó que el volumen y la calidad del semen dependen de la camisa utilizada en la vagina artificial, la cual debe estar seca y no se debe utilizar gel, además hay que realizar un cuarto de vuelta del látex dentro de la vagina, pues los pliegues que se forman permiten una estimulación al macho.

2 Se puede agregar gr. de glicerol en el agua para mantener la Tº de la misma en la vagina. Además se debe llenar con agua a temperatura de 55º-58º C y completar con una inyección de aire para favorecer la presión. Se debe tener muy en cuenta la temperatura del agua debido a que vaginas con temperaturas de 50º induce a la liberación de orina y a menos de 40º el animal no salta o se incrementa el volumen de gel y gránulos dificultando la manipulación del eyaculado y alterando su calidad. Una vez completa con agua y aire la vagina se deja en estufa a 50º hasta su uso, si no se tiene estufa, por ejemplo se puede realizar con una caja de vacunas y una bombilla de 100watts. Cada vagina debe estar en estufa con un termómetro en su interior con el fin de permitir observar la temperatura interna de la misma en cualquier momento. En el 100% de las granjas se realizan 2 colectas a cada macho con minutos de descanso y se puede usar la misma vagina para las dos recolecciones en el mismo macho. Antes de la extracción se agrega a la vagina el tubo colector y se protege con un tubo aislante de la luz y del frío. La extracción se realiza presentando una coneja al macho, la practica de colecta no es un problema grave, es común que si la calidad no es buena se puede favorecer una falsa monta lo que permite incrementar el volumen de eyaculado. Es importante realizar la extracción a primera hora de la mañana. En muchas granjas se realiza la recolección y preparación de las dosis y se insemina al día siguiente. Debe existir un intervalo corto entre colecta y predilución que no supere los minutos. Evaluaciones de semen: 1º) por peso (luego de retirar el gel) y por volumen El volumen obtenido entre ml que varia en función de la falsa monta, edad macho, ritmo de colecta, presencia de gel, etc. 2º) Color: siempre debe ser blanco traslucido. 3º) dilución, se debe remarcar que actualmente se trabaja con heterospermia ( pool de semen) lo que favorece a la prolificidad, favoreciendo a diluir factores de subfertilidad. Por lo tanto se incrementa la producción (75% de tasa de partos y más cantidad de gazapos. 4º) Motilidad masal: aquí cumple una función importante el microscopio. Es necesario que posea una platina caliente para observación. Si no se posee, se puede llenar un guante usado para realizar tacto, con agua a 40º C y apoyar las platinas sobre el mismo para su observación y evitar así el choque térmico.

3 Se toma una micro gota de 7 microlitros y se evalúa observando en la periferia la motilidad masal... La evaluación se debe realizar con el eyaculado puro, luego se diluye y mezcla y se observa nuevamente. Se deben usar materiales de vidrio o plástico no de caucho ya que es toxico para los espermatozoides. (evitar las jeringas cuyo embolo tenga caucho) Es importante observar en semen diluido no solo la motilidad masal sino también la individual El diluyente puede estar a temperatura ambiente por ej. a 25ºC (pudiendo llegar a 37ºC) pero se debe guardar el mismo en heladera a 4ºC. La jeringa para colocar el diluyente se puede hacer con la misma pajuela, y se debe hacer correr el mismo por las paredes del tubo. Para evitar el choque con los espermatozoides. De la misma manera, una vez colocado el diluyente se debe homogenizar la mezcla con movimientos lentos de inversión del tubo. Se puede incorporar antibióticos también. La concentración de espermatozoides puede ser considerando utilizable debe tener un termino de millones por eyaculado. Como concentración óptima se utilizan en el >o = 80% de las granjas una concentración de millones por dosis. Se puede relacionar la concentración con la receptividad, con vulva roja y turgente se pueden aceptar concentraciones de 2-3 millones pero al existir otros factores de riesgo en la granja se trabaja con millones. La receptividad influencia mucho la tasa de parto Tasa prudente de dilución: 1 de semen por 6 de diluyente. Aunque también se puede utilizar una tasa de 1:10, también con el conteo de espermatozoides en cámara de Toma, se puede regular la dilución. La preparación del diluyente es igualmente importante. El diluyente comercial, que viene en polvo para preparar el se puede mezclar con 1 lt. De agua destilada (no la que viene para usar en el auto, sino la medicinal.) con gr de diluyente (ver igualmente prospecto). Se debe tener cuidado con el agua que se utiliza, debe ser destilada y desionizada, no debe contener Calcio debido a que favorece la capacitación de los espermatozoides. (esto significaría que empiezan a trabajar antes de ser introducidos en la coneja) Para el caso de leche debe ser descremada, siendo un buen medio, a la misma también se le puede agregar antibióticos y en cuanto al uso de solución fisiológica, no se puede usar para conservación, solo con semen fresco. Una vez diluido tapar el tubo y moverlo girando el frasco para homogenizar.

4 Luego en una caja tipo conservadora y en una goma espuma con orificios se incorporan los tubos debiéndolos conserva a 18ºC. Manejo de los machos: A las semanas de edad se debe practicar la extracción con la vagina A las semanas realizar espermograma A las 25 semanas realizar la producción de semen Tipos de conservación y aplicación: Sistema Lapaiet: para incorporar el semen en la pajuela (0.5 ml/dosis) se aspira directamente. Pajuela = algodón 2= alcohol polivinilico que en contacto con el liquido se solidifica Una vez llenas las pajuelas se colocan dentro de la vaina y estas en bolsas en la conservadora. Todo lo que sea vidrio como los frascos de Erlenmeyer donde se realizo la mezcla y dilución se deben esterilizar en estufa a 180º C durante 1 hora. Sistema Vrac o en frasco: bien tapado con ausencia de oxigeno, si es frasco de plástico se puede apretar hasta que salga todo el aire y luego cerrar Sistema en gel Nota: no mantener el baño María a 37º pues baja la calidad del semen. ( ya que favorece el aumento del metabolismo y se cansan) Inseminación: Se utilizan pajuelas con un extremo curvado, acoplada con un látex con una jeringa de tuberculina para usar con Vrac o pajuela ya preparada. El tamaño aproximado es de 23 cm. La técnica en el 90 % de los casos, se realiza con dos personas, uno toma con una mano la coneja del cuello y orejas y la parte trasera con la otra, la da vuelta y apoya su brazo en un apoya brazos, es muy importante como se toma la coneja la otra persona insemina y posteriormente aplica 0.2 ml GnRh.. En esta técnica se trabaja con un mayor número de animales hembras por hora. También se insemina con el sistema de lordosis que es con un solo manipulador y generalmente en nulípara, debido a que es un menor número de animales y evita que se canse tanto el operador. Se acompaña con la bioestimulación con un corte de lactancia no mayor a 36 hs., más común hs.. Luego de inseminada y una vez ubicada la coneja en la jaula recién se abre la puerta del nidal para que amamante.

5 Un tiempo mayor produce una perdida de peso en los gazapos. Generalmente se cierra nido a las 8 hs. del día anterior y se insemina a las 10 hs.. con posterior abertura de nido. De esta manera se inhibe la secreción de prolactina que inhibe la ovulación e incrementa la hormona luteinizante. La cantidad de hembras que inseminan ronda en un promedio de hembras por hora. Con la bioestimulación se debe considerar el manejo del fotoperíodo, debido a que si se trabaja en banda única se debe realzar un tratamiento de luz durante 8 días de 16hs, y acompañar con un flushing durante 4 días antes de la inseminación con aplicación de un producto comercia con propilenglicol lo que aporta energía a la hembra y también un agregado en agua de vitamina E, selenio y Fósforo. En cuanto a la incorporación de productos en el agua evitar que tengan lactosa debido a la posibilidad que se tapen las cañerías. Se debe remarcar que en cada jaula debe estar la ficha de la hembra con toda la información necesaria. La inseminación es una práctica que se utiliza para incrementar la productividad del plantel. La Fertilidad y prolificidad es un problema causado en la mayor parte por la hembra. No conviene aplicar a la hembra volúmenes superiores a 0.5 ml para evitar el reflujo, subdiluyendo la dosis de semen y en el caso que orine volver a inseminar. Medidas a evaluar: A) Volumen: ml B) Concentración: espermatozoides por ml (se realiza indirectamente por la motilidad masal) C) Motilidad masal se observa el movimiento en la periferia de la microgota la calificación para su evaluación: 0= nada 1= temblor en el lugar 2= inicio de ondas 3= ondas rápidas 4= tornado 3 y 4 son los que deben considerarse aptos para inseminar D) Frotis de eosina-niosina (colorante que al teñir queda el semen muerto color rosa y el vivo transparente) Considerar más del 70% de espermatozoides vivos E) Cálculo de la concertación en la dosis a aplicar: en el centro de inseminación para evitar la infertilidad y dejar un testigo Con esta información se puede evaluar indirectamente a través de la calidad el semen la calidad del alimento. En el caso que deba vacunar la población con vacunas de mixo y VHRD (no en argentina) no se debe realizar en el 100 % de la misma solo vacunar por tercio por semana evitando así que la vacuna altere la producción. F) Test de Host: de resistencia osmótica

6 El eyaculado de un macho esta compuesto por espermatozoides con plasma seminal y una presión osmótica isotónica (en equilibrio con el plasma seminal), al incorporar agua estalla. Para su observación se mezcla 1 ml de diluyente en el frasco se deja 5 minutos y se agrega 2 ml de agua destilada. Se observa en lámina entre cubre y porta objeto: El espermatozoide muerto queda con cola derecha el vivo genera una burbuja con el flagelo debido a que se hincha 1= espermatozoide muerto HOST 2-3= espermatozoides vivos HOST+ Valoración: Excelente: >60 Bueno: Mediocre: <40-50 Malo: < Esta valoración conviene realizarla en la cuarentena, y/o dos veces por año (por ej. en picos de calor o factores de stress) Sirve para evaluar repuestas a la Tº, alimento, tratamientos con vacunas. Valores óptimos: 0.80 ml de volumen 3-4 motilidad masal 500 millones de espermatozoides > 60 % HOST Segunda parte La evaluación rutinaria es: Volumen motilidad masal y motilidad individual La evaluación complementaria es: Frotis-Host-Examen morfológico Con el examen morfológico sabemos cuales son los espermatozoides que van a fertilizar. Los espermatozoides deben combinarse con secreciones del útero de la hembra para tener la capacidad de estar listos para fecundar. Tipos de inseminación: I.A. inmediata: con semen hiperfresco, en menos de dos horas de la extracción I.A. diferida: el semen debe estar en diluyente fuerte y a temperatura de 18-20º y puede ser:

7 8-12 hs. 24 hs. Hasta 72 hs. Para el caso del semen congelado, la técnica ya esta a punto pero depende mucho de la receptividad de la hembra porque lo que no se utiliza aun en criaderos comerciales pero si para estudios genéticos. 45% granjas en Francia trabajan con semen local y 65% con semen proveniente del centro de inseminación Para el caso del GALAP, luego de abierto su duración puede ser una semana a 4 ºC (heladera) Es muy común en granjas comerciales diferir la colecta de la inseminación manteniéndolo a 18-20ӳC para evitar motilidad y crecimiento bacteriano. Para evaluar la motilidad el microscopio debe ser de 10*10= 100 (10 el ocular y 10 el objetivo). en una lamina precalentada de 18mmx18mm. Aunque existen dos clases de microscopios, seria importante poseer uno de contraste de fases porque el semen se ve negro y se pueden ver sus ondas de movimiento, además que posea platina caliente. La calificación es subjetiva, se estima un porcentaje y una valuación de 0 a 4, no quedarse solo con el porcentaje, pues es más importante la nota que el porcentaje. 1= temblor 2= espermatozoide que avanza recta o circular lento 3= espermatozoide que avanza recta o circular rápido. 4= espermatozoide que avanza recta o circular con desplazamiento lateral de la cabeza excelente Ventajas de la inseminación: Ganancia de tiempo < numero machos Mejora genética Menores costos No tener machos, menor consumo de alimentos, mayor espacio Mejor gestión en banda única Disminución enfermedades Desventajas de la inseminación Poseer equipamiento especial Training Equipamiento Pileta con agua caliente Estufa de 35 a 180ºC (incubadora al mismo tiempo) Microscopio con platina Refrigerador a 18ºC Refrigerador a 4ºC Materiales para extracción: el látex se lava con agua caliente y luego pasar por una mezcla preparada con ml de agua destilada y una pastilla de cloro (usadas para biberón de bebe) se deja media hora luego se saca y deja secar.

8 Caso de hembras de pseudo gestación: El día de la inseminación los animales no estos receptivos, la causa real no se conoce y se encuentra altamente ligado al manejo. Por lo que se inyecta prostaglandina. Se utiliza para la lisis del cuerpo lúteo en Pseudo gestación en Banda Única. Se puede usar 2-30 días antes de la inseminación. El uso de PMSG dependerá del tipo de categoría de animal, dar hs. Antes de la inseminación no en nulípara, pero si en primíparas. Y eventualmente en multíparas UI. Fertilidad Prolificidad Nulípara >75% Primíparas Baja Baja Multíparas >75% Factores de éxito en una granja de conejos ligados a la hembra. 1º Factor: Estructura de animales, Paridad: es importante considerar la cantidad de hembras nulíparas (fertilidad buena, prolificidad moderada 8.8 nacidos vivos), primíparas (problemas de fertilidad porque están creciendo) y multíparas lactantes y no lactantes: fertilidad alta 75-85%, tamaño de la camada grande. El problema de receptividad se da más en multíparas que nulíparas. 2º Factor: el estado fisiológico, la lactación afecta negativamente a la prolificidad 3º Factor la receptividad, en caso de la IA no se hace, como no se sabe si acepta o no el acoplamiento por no estar la hembra frente al macho, se observa el color y tamaño de la vulva y buscar así la relación receptividad/signos externos. Se pueden llegar a obtener diferencias muy grandes pudiendo llegar a ser más del 30% La receptividad depende: Del estado sanitario Manejo luz-alimentación N º gazapos amamantando (> número < receptiva) Medidas de manejo Métodos de inducción en momento de la Inseminación 1) Elegir el sistema de manejo adecuado para lograr alta fertilidad y prolificidad ( días de intervalo entre partos. El sistema de banda única tiende a ser el mejor porque no compromete tanto al animal en cuanto a su estado anatómico y fisiológico. 2) Tratamientos hormonales que se utilizan pre - IA como PMSG que genera un pico de estrógeno que mejora la receptividad-fertilidad y prolificidad 3) La hembra no produce anticuerpos anti -PMSG, las dosis deben ser pequeñas de 20 UI máx. 4) Bioestimulación: Tratamiento con 16 hs. De luz durante 8 días antes de la inseminación Separación puntual hembras de gazapos en lactación que sea durante hasta 36 hs. No más de ese tiempo porque afecta el crecimiento Flushing energético 4 días antes de la IA con propilenglicol y/o vit E-selenio- Fósforo a las hembras, también se puede usar glucosa La bioestimulación por lo tanto: Mejora la perfomance de la hembra Mejora la fertilidad Menor uso de hormonas

9 Es un método barato Factores de éxito en una granja de conejos ligados al macho. 1) Semanas 18-19º Buen training se acostumbra a la presencia del hombre 2) Semanas 20-24º realizar espermograma con extracciones 2 veces por semana con 15 minutos de intervalo entre cada una 3) Semanas 25-28º Comenzar con la producción de semen 1º Factor: Ritmo de recolección: ideal 2 veces por semana con dos eyaculaciones con 15 minutos de intervalo entre cada una. 2º Factor: Tº ambiente que influye en la Tº del animal y calidad del semen disminuyendo la 3º Factor: alimentación, para mejorar el volumen y concentración se incorpora al agua de bebida Vit E, Selenio favoreciendo el volumen y concentración, como Oxido de Zinc. También empíricamente resulto interesante aplicar en ritmo intensivo propilen glicol.